专利名称：含苯甲酰胺的医药组合物的制作方法
发明范围本发明涉及含苯甲酰胺的医药组合物及其治疗或预防神经退化性病症的用途。
背景技术：
神经退化性疾病的范围包括严重致虚弱的病症，包括巴金森氏症、ALS(“Lou Gehrig′s症)、多发性硬化症、杭廷顿氏症、阿耳茨海默氏病等。这些病症的特征为病人情况随时逐步但可怕的恶化，随着对这些疾病的机制及原因的进-步了解，已提出多种不同的治疗方法。
最近，Marsden，C.D.在巴金森氏病综述性文章(“Review Article-Parkinson′s Disease”Lancet)柳叶刀(1990年4月21日)948-952中提出目前对巴金森氏症的了解概况。正如该篇综述指出，多巴胺缺乏是巴金森氏症的主要特征而且多巴胺能黑质纹状体途径的破坏也与巴金森氏症病人的多巴胺缺乏相-致。
关于加州圣荷西地区少数毒品使用者快速发展的类似巴金森氏症的症状，有人认为其与家庭合成药物中的少量毒性杂质有关。随后对动物模型，包括猴子的研究，正如J.W.Langston等。在由于哌替啶类似物合成产物引起的人慢性巴金森氏症(“Chronic Parkinsonism in Humans Dueto a Product of Meperidine-Analog Synthesis”Science)科学(1983年2月25日)219，979-980中所报告，其显示1-甲基-4-苯基-1，2，5，6-四氢吡啶(MPTP)是该类毒品使用者发展成类巴金森氏症的原因。这些早期发现及许多其激发导致发展成可靠的巴金森氏症模型正如Heikkila，R.E.等在1-甲基-4-苯基-1，2，5，6-四氢比啶在大鼠中的多巴胺样神经毒性(“Dopamihergic Neurotoxicity of1-Methyl-4-Phenyl-1，2，5，6-Tetrahydropyridine in Mice”Science)科学(1984年6月29日)2241451-1453；Burns，R.S.等在巴金森氏症的原始模型(“A Primate Model ofParkinsonism...”)Proc.Natl.Acad.SciUSA(1983)4546-4550；Singer，T.P.等在巴金森氏症发展中的生化进程(“Biochemical Events in the Development of Parkinsonism...”)J.Neurochem.(1987)1-8；及Gerlach，M.等在神经毒性的MPTP机制及其对巴金森氏病的意义(“MPTP Mechanisms of Neurotoxicity and theImplications for Parkinson′s Disease”)欧洲药理杂志(Eurorean JoumalofPharmacologv)(1991)273-286中所报告。这些文献及其他文献说明那些有助于解释如何给动物施用MPTP启动巴金森氏症的特征性缺陷的机理的研究，他们清楚地指出MPTP是那些使用污染毒品者发生类巴金森氏症状的原因而且在直接施用MPTP的其他灵长类及其他实验动物身上亦可发现相似的运动功能障碍。他们进一步指出施予受测对象MPTP会诱导其多巴胺浓度显著降低。脑的某些部位多巴胺的丧失与巴金森氏症密切相关。
这些发现导致了抗巴金森氏症药物的分析法的形成。在该分析中，给予受测动物足以严重抑制其多巴胺含量的MPTP的量，以确定试验化合物是否能防止实验动物多巴胺之丧失。若其可达维持多巴胺量的程度，便认为该化合物可减缓或延迟巴金森氏症的病程。
本发明涉及11种苯甲酰胺及其作为活性药物的应用，这些苯甲酰胺N-(羧甲基)-4-硝基苯甲酰胺(CPI37)，N-苯基三甲基乙酰胺(CPI1009)，N-异丁基3，5-二硝基苯甲酰胺(CPI1064)，N-叔丁基苯甲酰胺(CPI1010)，N-叔丁基4-硝基苯甲酰胺(CPI1020)，N-叔丁基4-溴苯甲酰胺(CPI1036)，N-叔丁基4-甲基苯甲酰胺(CPI1039)，N-叔丁基4-氰基苯甲酰胺(CPI1043)，N-叔丁基3，5-二硝基苯甲酰胺(CPI1049)，N-叔丁基-N-甲基4-硝基苯甲酰胺(CPI1052)，及N-叔丁基4-硝基苯甲硫代酰胺(CPI1057)都是已知的化合物。他们的结构列於表1。在该表及本专利说明书之其他部份，各种苯甲酰胺都附随内部化合物登记号。这些号码用以帮助直观辨认这几种密切相关的化合物。表1亦列出化学文摘或BeilsteinRegistrv识别号码。
表1内部辨识号码 结构化学文摘号码1010 5894-65-51020 42498-30-61043 Beilstein Reg.No.3250293103642498-38-437 2645-07-0105254284-31-0
表1(续)内部辨识号码 结构化学文摘号码1057 34496-27-010096625-74-71049 56808-99-21064 1039 42498-32-8
尽管这些化合物都是已知的，此前其用法通常只是做化学合成的中间产物或用于与本发明无关之领域。微小的结构变化可产生极大的效力及毒性差异。所测试的绝大多数苯甲酰胺化合物在筛选中都只有很低，甚或无活性。然而，亦有一些对其他结构不同的苯甲酰胺具有的生物活性的报告。这些报告包括E1 Tayar等，神经抑制药物与大鼠纹状体D-1和D-2多巴胺受体的相互作用定性结构-亲合力关系研究(“Interaction of neuroleptic drugs with rat striatal D-1 and D-2dopamine receptorsa quantitative structure-affinity relationship study”)欧洲药物化学杂志(Eur.J.Med.Chem.)(1988)23173-182；Monkovic等，一系列取代苯甲酰胺中潜在的非多巴胺样胃肠道前动力药物(“Potential non-dopaminergic gastrointestinal prokinetic agents in theseries of substituted benzamides”)，欧洲药物化学杂志(Eur.J.Med.Chem)(1989)24233-240；Banasik等，聚(ADP-核糖)合成酶和单(ADP-核糖基)转移酶的特异性抑制剂(“Specific inhibitorsof poly(ADP-Ribose)synthetase and mono(ADP-ribosyl)-transferase”)生化杂志(J.Biol.Chem.)(1992) 2671569-1575；Bishop等，2，3-二甲氧基-5-(氟烷基)取代的苯甲酰胺的合成及体外评价中枢神经系统多巴胺D2受体的高亲合力酰基(“Synthesis and in vitroevaluation of 2，3-dimethoxy-5-(fluoroalkyl)-substitutedbenzamideshigh-affinity ligands for CNS dopamine D2receptors”)药化杂志(J.Med.Chem.(1991)34.1612-1624；Hgberg等，潜在抗精神病药物。9.一类高活性的取代(R)-N-[苄基-2-(吡咯烷基)甲基]-苯甲酰胺的合成以及对多巴胺D-2受体的立体选择性阻断。与其它侧链同族元素的关系(“Potential antipsychotic agents.9.Synthesis andstereoselective dopamine D-2 receptor blockade of a potent class ofsubstituted(R)-N-[benzyl-2-pyrrolidiny1)methyl]-benzamides.Relations to other side chain congeners”)药化杂志(J.Med.Chem)(1991)34948-955；Katopodis等，肽基甘氨酸α-酰胺化单氧化酶的新型底物及抑制剂(“Novel substrates and inhibitors ofpeptidylglycine α-amidating monooxygenase”)生物化学(Biochemistrv)(1990)294541-4548；与Rainnie等，中脑桥胆碱能神经元的腺苷抑剂对EEG唤起的意义(“Adenosine inhibition of mesopontinecholinergic neuronsimplications for EEG arousal”)科学(Science)(1994)263689-690。
发明概述目前已发现有一组11种苯甲酰胺化合物经测定其具有防止MPTP诱导的多巴胺水平降低的能力，展现出很强的抗巴金森氏症活性。
这11种化合物为N-(羧甲基)-4-硝基苯甲酰胺，N-苯基三甲基乙酰胺，N-异丁基3，5-二硝基苯甲酰胺，N-叔丁基苯甲酰胺，N-叔丁基4-硝基苯甲酰胺，N-叔丁基4-溴苯甲酰胺，N-叔丁基4-甲基苯甲酰胺，N-叔丁基4-氰苯甲酰胺，N-叔丁基3，5-二硝基苯甲酰胺，N-叔丁基-N-甲基4-硝基苯甲酰胺，及N-叔丁基4-硝基苯甲硫代酰胺。
这些化合物的第一种具有酸官能基，其可以该形式存在或以医药可接受盐的形式存在。当指向该“化合物”时，应理解为包括这些盐类。
根据其他结构密切关联的化合物不具备此活性的事实，这些化合物显现的活性令人难以预料且无法预测。
本发明可表现为-种或多种这些化合物的医药组合物形式。亦可表现为治疗神经退化病症的方法形式。
因此，本发明-方面提供在医药可接受载体中包括下列一种或多种苯甲酰胺化合物的医药组合物N-(羧甲基)-4-硝基苯甲酰胺，N-苯基三甲基乙酰胺，N-异丁基3，5-二硝基苯甲酰胺，N-叔丁基苯甲酰胺，N-叔丁基4-硝基苯甲酰胺，N-叔丁基4-溴苯甲酰胺，N-叔丁基4-甲基苯甲酰胺，
N-叔丁基4-氰苯甲酰胺，N-叔丁基3，5-二硝基苯甲酰胺，N-叔丁基-N-甲基4-硝基苯甲酰胺，及N-叔丁基4-硝基苯甲硫代酰胺。该载体优选是口服用载体，也可以是注射用载体。这些医药组合物可为散装形式但更典型为单位剂量形式。
本发明在另一方面向神经退化症患者提供一种治疗方法。该方法包括向患者施用一或多种上述有效治疗神经退化症剂量的药物成分。
另一方面本发明向患以中枢神经系统功能持续丧失为特征的病症患者提供一种治疗方法。该方法包括向丧失中枢神经系统功能的患者施用一种或多种含有效量药物成分的医药组合物。
本发明的一个最重要方面是向患与巴金森氏症有关的中枢神经系统功能持续性丧失的患者提供一种治疗方法。该方法包括向患中枢神经功能持续丧失的患者施用(优选口服)有效量的一种或多种上述药物成份。发明详述化合物本发明医药组合物使用一或多种发明概述中所列的11种苯甲酰胺作为有效成份。根据他们相对较高的活性，可使用这11种化合物中的任何一种或其混合物，优选N-叔丁基苯甲酰胺(CPI1010)，N-叔丁基4-硝基苯甲酰胺(CPI1020)，N-叔丁基3，5-二硝基苯甲酰胺(CPI1049)，N-叔丁基4-硝基苯甲硫代酰胺(CPI1057)，及N-异丁基-3，5-二硝基苯甲酰胺(CPI1064)。其中，更优选N-叔丁基苯甲酰胺(CPI1010)及N-叔丁基4-硝基苯甲酰胺(CPI1020)，最优选N-叔丁基4-硝基苯甲酰胺(CPI1020)。
使用CPI37化合物时可使用其盐类，其中是以医药可接受的阳离子取代其羧酸氢。该阳离子最常见为一价的，诸如钠、钾或铵但其亦可为多价阳离子加上医药可接受之一价阴离子，例如，钙加上氯、溴、碘、羟基、硝酸根、磺酸根、甲磺酸、乙酸根、酒石酸根、草酸根、琥珀酸根、棕榈酸根或类似的阴离子；镁加上此类阴离子；锌加上此类阴离子等。
在这些化合物中，最优选游离酸及简单的钠、钾或铵盐，也优选钙及镁盐但较差些。医药组合物将苯甲酰胺化合物配制成适於口服或其他适当途径施用的医药组合物。
口服的组合物可呈散装溶液或悬浮液或散装粉末形式。然而，更通常地，组合物呈单位剂量形式以促进正确剂量使用。典型的剂量形式包括预充填、预测定的安瓶或注射器中的液体组合物或者固体组合物的丸剂、片剂、胶囊等。只要是固体。
在该类组合物中苯甲酰胺化合物通常是小量的成份(重量之0.1～约50％，优选由约1～约40％)剩余为各种载体或赋型剂及加工助剂，帮助形成所需剂型。液体形式可包括适合的水性或非水性载体加上缓冲剂、悬浮分散剂、著色剂、矫味剂及类似物。
固体形式可包括，例如，任何下列成份或类似特性的化合物粘合剂，如微结晶纤维素、黄耆胶或明胶；赋型剂、如淀粉或乳糖；崩解剂，如藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂，如硬脂酸镁；滑动剂，如胶态二氧化硅；甜味剂，诸如蔗糖或糖精或矫味剂，诸如薄荷、水杨酸甲酯或柑橘香料。
在注射用组合物的情况下，通常以本领域已知的可注射无菌盐液或磷酸缓冲盐液或其他注射用载体。再者，活性苯甲酰胺是典型的小量成份、通常占其余注射用载体等重量的0.05～10％。
这些口服或注射组合物仅是代表性的。其他材料以及制备方法等均列於Remington′s Pharmaceutical Sciences，第17版，第8部分，(1985，Mack出版公司，Easton，Pennsylvania，)其一并引入本文以供参考。
也可以持续释放形式或由持续释放药物的输送系统施用本发明的化合物。在引入本文的Remington′s Pharmaceutical Sciences中可发现代表性的持续释放物质之说明。治疗适应症及治疗服法通常将可以含苯甲酰胺的医药组合物治疗的适应症划分为退化性神经病症。这包括以对中枢神经系统的长期低度紧迫及中枢神经系统功能逐渐进行性丧失为特征的病症。这些适应症包括阿耳茨海默氏病、巴金森氏症、多发性硬化症、杭廷顿氏症、肌萎缩性脊椎侧索硬化症(ALS)、多发性栓塞痴呆症、黄斑变性、视网膜病等。这些适应症均以功能的进行性丧失为特征。当口服或注射，诸如静脉注射施用本发明的含苯甲酰胺的医药组合物时可减缓与延迟甚且可能在一定程度上逆转功能的丧失。
治疗这些适应症的注射剂量的范围是约0.1毫克/公斤/小时至最少10毫克/公斤/小时，总时间为1～约120小时，尤其是24～96小时，为达到足够稳定状态，亦可预先快速浓注施用约10～约500毫克或更多的剂量。
对於这些神经退化性适应症，服用时间常长达数月或数年，因此优选对患者方便及易于接受的口服药剂。在口服的施用时，每天口服1至5次，尤其是2～4次，更典型的代表性服用法为3次。采用这些服药类型时，每次剂量提供约1～约15毫克/公斤的苯甲酰胺，优选的剂量为每次剂量提供约1～约10毫克/公斤，特别是约1～约5毫克/公斤。
当然，可将苯甲酰胺作为唯一的活性药物或将其与其他药物混合施用。
实施例将用下列实施例进一步说明本发明。这些实施例提供了说明本发明的几个优选的具体实施方案，不应视为是对本发明范围的限制，其范围应以附带的权利要求书定义。实施例1-11说明使用每种苯甲酰胺化合物制备组合物及本发明的方法。实例12～15说明基于化合物的医药组合的制备。其后之生物试验结果说明本发明的组合物所提供的活性。
实施例1N-叔丁基苯甲酰胺(CPI1010)的制备将叔丁胺(14.6克，0.200摩尔)搅拌入乙酸乙酯(150毫升，以5％碳酸钠溶液、饱和氯化钠溶液洗，经无水硫酸镁干燥并滤过折过的滤纸加以纯化)并以冰浴冷却至5℃。以可维持温度於10℃以下的速率将溶於纯化的乙酸乙酯(75毫升)的苯甲酰氯(14.0克，0.100摩尔)逐滴加入其中。在完全加完苯甲酰氯溶液后使移开冰浴并搅拌该反应物4小时。然后将反应混合物滤过布氏漏斗，滤液以5％HCI洗3次、饱和氯化钠洗1次，通过无水硫酸镁干燥、滤过折过的滤纸、除去溶剂后剩下白色结晶产物。将产物在24毫米汞柱，45℃於真空烘箱干燥14小时。该方法制得目的产物N-叔丁基苯甲酰胺(CPI1010)15.46克(收率87％)，熔点133～135℃。质子核磁共振(89.55MHz)显示其吸收在7.75ppm(多峰，2H，2，6-芳香H)；7.45ppm(多峰，3H，3，4，5-芳香H)；5.97ppm(宽峰，1H，N-H)；1.47ppm(单峰，9H，叔丁基H)。
实施例2N-叔丁基4-硝基装甲酰胺(CPI1020)的制备重复实施例1的方法，但将起始反应物改成叔丁胺(14.6克，0.200摩尔)及4-硝基苯甲酰氯(18.6克，0.100摩尔)。此反应生成17.3克结晶目的产物(收率77％)，熔点162-163℃。质子核磁共振(89.55MHz)显示其吸收在8.257ppm(双峰，8.8Hz，2H；3，5-芳香H)；7.878ppm(双峰，8.8Hz，2H；2，6-芳香H)；6.097ppm(宽峰，1H；N-H)；1.500ppm(单峰，9H；叔丁基H)。
实施例3N-叔丁基4-溴苯甲酰胺(CPI1036)的制备重复实施例1的方法，但将起始反应物改成叔丁胺(4.02克，0.055摩尔)与4-溴苯甲酰氯(6.04克，0.0275摩尔)并以苯为反应介质。此反应生成6.24克结晶(收率89％)，熔点130-133℃。质子核磁共振(89.55MHz)显示其吸收在7.562ppm(单峰，4H；芳香H)；5.910ppm(宽峰，1H；N-H)；1.464ppm(单峰，9H；叔丁基H)。
实施例4N-叔丁基4-氰苯甲酰胺(CPI1043)的制备重复实施例1的制法，但将起始反应物改成叔丁胺(4.38克，0.060摩尔)及4-氰苯甲酰氯(5.08克，0.030摩尔)、并在苯中进行反应以生产5.58克目的产物(收率92％)的结晶、熔点146-148℃。质子核磁共振(89.55MHz)显示其吸收在7.829ppm(双峰，8.4Hz，2H；3，5-芳香H)；7.690ppm(双峰，8.4Hz，2H；2，6-芳香H)；5.996ppm(宽峰，1H；N-H)；1.477ppm(单峰，9H；叔丁基H)。
实施例5N-叔丁基4-甲基苯甲酰胺(CPI1039)的制备重复实施例1的制法，但将起始反应物改成叔丁胺(4.72克，0.065摩尔)及4-甲基苯甲酰氯(5.02克，0.0325摩尔)，反应在苯中进行，该反应生成5.54克目的产物(收率89％)的结晶、熔点114-116℃。质子核磁共振(89.55MHz)显示其吸收在7.615ppm(双峰，8Hz，2H；2，6-芳香H)；7.193ppm(双峰，8Hz，2H；3.5-芳香H)；5.970ppm(宽峰，1H；N-H)；2.377ppm(单峰，3H；4-CH3)；1.461ppm(单峰，9H；叔丁基H)。
实施例6N-叔丁基3，5-二硝基苯甲酰胺(CPI1049)的制备重复实施例1的制法，但将起始反应物改成叔丁胺(7.3克，0.100摩尔)及3，5-二硝基苯甲酰氯(7.92克，0.050摩尔)，该反应在苯中进行并生成7.24克目的产物(收率54％)的结晶、熔点158-159℃。质子核磁共振(89.55MHz)显示其吸收在9.124ppm(三峰，2.2Hz，1H；4-芳香H)；8.888ppm(双峰，2.2Hz，2H；2，6-芳香H)；6.02ppm(宽峰，1H；N-H)；1.525ppm(单峰，9H；叔丁基H)。
实施例7N-叔丁基-N-甲基4-硝基苯甲酰胺(CPI1052)的制备重复实施例1的制法，但将起始反应物改成N-叔丁基-N-甲胺(3.36克，0.0386摩尔)及4-硝基苯甲酰氯(3.58克，0.0193摩尔)、该反应在苯中进行，该产物以冷乙醇结晶，目的产物为3.31克结晶(收率28％)、熔点119-121℃。质子核磁共振(89.55MHz)显示其吸收在8.252ppm(双峰，8.8Hz，2H；3，5-芳香H)；7.569ppm(双峰，8.8Hz，2H；2，6-芳香H)；2.838ppm(单峰，3H；N-CH3)；1.526ppm(单峰，9H；叔丁基H)。
实施例8N-苯基三甲基乙酰胺(CPI1009)的制备重复实施例1的制法，但将起始反应物改成苯胺(24.18克，0.260摩尔)及三甲基乙酰氯(15.06克，0.0125摩尔)、反应在苯中进行并生成13.24克目的产物结晶(收率60％)、熔点132-132.5℃。质子核磁共振(89.55MHz)显示其吸收在7.568-7.078ppm(多峰，5H；芳香H)；1.310ppm(单峰，9H；叔丁基H)。
实施例9N-叔丁基4-硝基苯甲硫代酰胺(CPI1057)的制备重复实施例1的制法，但将起始反应物改成N-叔丁基4-硝基苯甲酰胺(3.00克，0.0135摩尔)及2，4-双(4-甲氧苯基)-1，3-二硫-2，4-二磷烷基(diphosphetane)-2，4-二硫化物(3.28克，0.0081摩尔)，反应在50毫升无水甲苯溶液中回流3小时。此外，在真空中去除溶剂留下黄色黏稠油。溶该油於乙酸乙酯并将溶液滤过硅胶。真空中去除溶剂，溶残渣於乙醇，并将混合物滤过折过的滤纸。由乙醇再结晶生成2.20克目的产物的金黄色结晶(收率68％)、熔点136-138℃。质子核磁共振(89.55MHz)显示其吸收在8.21ppm(双峰，8.0Hz，2H；3，5-芳香H)；7.76ppm(双峰，8.0Hz，2H；2，6-芳香H)；1.67ppm(单峰，9H；叔丁基H)。
实施例10N-(羧甲基)4-硝基苯甲酰胺(CPI37)此化合物系购自Aldrich化学公司。
实施例11N-异丁基3，5-二硝基苯甲酰胺(CPI1064)一般方法是将异丁胺(14.6克，0.200摩尔)与3，5-二硝基苯甲酰氯(23.0克，0.100摩尔)在乙酸乙酯中反应。生成7.28克(26％)结晶，熔点149-155℃。质子NMR(90MHz)显示其共振在9.68ppm(多峰，1H；4-芳香H)；8.955ppm(双峰，2Hz，2H；2，6-芳香H)；6.526(宽峰，1H；N-H)；3.378ppm(三峰，6.4Hz，2H；N-CH2)；2.050ppm(七峰，7Hz，1H；CH)；1.021ppm(双峰，6.2Hz，6H；CH3)。
实施例12医药组合物的制备将实施例1的化合物以干粉状与干明胶粘合剂以1∶2重量比例混合。加入少量的硬脂酸镁作为润滑剂。以片剂压模将混合物制成250毫克的片剂(80-90毫克活性苯甲酰胺)。若将这些片剂以每天三次的方法给予神经退化症患者，便可减缓患者疾病发展。
实施例13将实施例2的化合物以干粉状与淀粉稀释剂以1∶1的重量比混合。将混合物填充成250毫克胶囊(125毫克活性苯甲酰胺)。若将这些胶囊以每天两次或三次的方法施予神经退化症患者，便可减缓病人疾病的发展。
实施例14将实施例3的化合物悬浮於甜香味的水性介质至浓度成50毫克/毫升。若将每次5毫升该种液体以每天2次或3次的方法施予例如巴金森氏症的神经退化性病症患者便可延缓此疾病所带来的功能丧失的发展。
实施例15将实施例4的化合物溶於注射用的磷酸缓冲盐溶液达浓度10毫克/毫升。若将50毫升此种液体以每天一次方法施予例如巴金森氏症的神经退化性病症患者便可延缓此疾病所带来的功能丧失的发展。
应认识到可将这11种化合物的任一种应用于上述任一代表性制剂，而且可将所述的任一种制剂以上述方式施用以治疗在本说明书中所述的任一神经退化性病症。巴金森氏症筛选法多巴胺耗尽研究在以MPTP处理C57BL/6J小白鼠前30分钟先以盐液或药物(100毫克/公斤，腹腔注射)预处理。溶MPTP於盐水中并以30毫克游离硷/公斤体重的单一剂量皮下注射，以使纹状体中的多巴胺减少80％。将不溶性药物溶解或悬浮於10％之羟丙基-β-环糊精的盐水中各组小鼠(每组n＝6)或给予载体加盐水、载体加MPTP、药物加盐水或给予药物加MPTP。小鼠在起始处理后24及48小时再接受额外剂量的药(与先前相同的浓度及途径)。接受MPTP后72小时采用头部脱离法处死小鼠并切下纹状体。以0.4N高氯酸均化该组织，离心，并以高效液相色谱/电化学测定法(HPLC/ED)分析上清液的多巴胺含量。在采样与分析的间隔，将上清液保存在-90℃冷冻箱中。
采类似上述的方法以口服测试所选药物。不是将药物溶於盐水或羟丙基-β-环糊精中，而是将该药物与等量甲基纤维素混合并在水中均化。剂量(100毫克/公斤)及其他全部的实验参数均与先前者同。
这些实验的结果列于表2。这些结果显示本发明的组合物可有效防止施以MPTP后的多巴胺耗尽。为进行比较，对用密切关连的苯并酰胺化合物制成之组合物进行测试，只发现很弱的活性，甚至无活性。多巴胺耗尽及单胺氢化酶抑制研究采用本发明的数种组合物进行进一步确任实验。设计这些实验以确认初始结果并评估药物对幼龄(60-70天)(57BL/6小鼠纹状体单胺氧化酶活性的作用。每种药皆进行两项研究1)以MPTP处理6天后定纹状体组织中的多巴胺及多巴胺代谢物，2)在施用MPTP后整两小时时测定纹状体组织中MPTP对MPP+之比值。将母体化合物对代谢物的比值做为单胺氧化酶活性的标志。
实验方案如下
对多巴胺的研究，在MPTP处理前30分钟及处理后24及48小时以单一剂量100毫克/公斤(腹腔注射，溶於盐水或10％羟丙基-β-环糊精的盐水)形式施用药物。以40毫克/公斤(以游离硷计算)单次剂量皮下注射MPTP(其盐酸盐溶液)。给药6天后处死动物(n＝5)，取出脑并切下纹状体且立即冻於液氮中。用HPLC/ED分析纹状体多巴胺及多巴胺代谢物。对MPTP/MPP+研究，在施药后2小时处死小鼠(n＝5)并切除纹状体组织并如上述方法贮存。除只给予单次剂量药物外，所给予的药物与MPTP都与多巴胺研究中相同。采用气相层析/质谱(GL/MS)同位素稀释分析法定MPTP及MPP+浓度。
分析其资料的统计学意义时，采用ANOVA随之采用学生t测验及其它所需的后续统计方法做组别比较。
表2
a在给予30毫克/公斤MPTP之前和之后给药，3天后测多巴胺。仅接受MPTP的对照组小鼠消耗80％。
b在给予40毫克/公斤MPTP之前和之后给药，6天后测多巴胺。
c单胺氧化酶(MAO)的抑制作用是基于MPTP/MPP+比值。
权利要求
1.一种医药组合物，其包括在医药上可接受的载体中包含选自下列的苯甲酰胺化合物N-(羧甲基)-4-硝基苯甲酰胺，N-苯基三甲基乙酰胺N-异丁基3，5-二硝基苯甲酰胺，N-叔丁基苯甲酰胺，N-叔丁基4-硝基苯甲酰胺，N-叔丁基4-溴苯甲酰胺，N-叔丁基4-甲基苯甲酰胺，N-叔丁基4-氰苯甲酰胺，N-叔丁基3，5-二硝基苯甲酰胺，N-叔丁基-N-甲基4-硝基苯甲酰胺，及N-叔丁基4-硝基苯甲硫酰胺。
2.根据权利要求1医药组合物，其中该载体为口服载体。
3.根据权利要求2医药组合物，它是呈单位剂量形式的。
4.根据权利要求1医药组合物，其中该载体为注射用载体。
5.一种治疗神经退化性病症的方法，包括向所述病症的患者施用治疗神经退化性病症有效量的权利要求1的医药组合物。
6.一种治疗中枢神经系统功能进行性丧失的方法，包括向所述病症的患者施用治疗中枢神经系统功能进行性丧失有效量的权利要求1的医药组合物。
7.一种治疗中枢神经系统功能进行性丧失的方法，包括给所述病症的患者口服治疗中枢神经系统功能进行性丧失有效量的至少约1mg/kg的权利要求1医药组合物的苯甲酰胺化合物。
8.一种治疗与巴金森氏症有关的中枢神经系统功能进行性丧失的方法，包括给所述病症的患者口服治疗中枢神经系统功能进行性丧失有效量的至少约1mg/kg的权利要求1医药组合物的苯甲酰胺化合物。
9.根据权利要求1医药组合物，其中该苯甲酰胺化合物是N-(羧甲基)4-硝基苯甲酰胺。
10.根据权利要求1医药组合物，其中该苯并酰胺化合物是N-苯基三甲基乙酰胺。
11.根据权利要求1医药组合物，其中该苯并酰胺化合物是N-叔丁基苯甲酰胺。
12.根据权利要求1医药组合物，其中该苯并酰胺化合物是N-叔丁基4-硝基苯甲酰胺。
13.根据权利要求1医药组合物，其中该苯并酰胺化合物是N-叔丁基4-溴苯甲酰胺。
14.根据权利要求1医药组合物，其中该苯并酰胺化合物是N-叔丁基4-甲基苯甲酰胺。
15.根据权利要求1医药组合物，其中该苯并酰胺化合物是N-叔丁基4-氰苯甲酰胺。
16.根据权利要求1医药组合物，其中该苯并酰胺化合物是N-叔丁基3，5-二硝基苯甲酰胺。
17.根据权利要求1医药组合物，其中该苯并酰胺化合物是N-叔丁基-N-甲基4-硝基苯甲酰胺。
18.根据权利要求1医药组合物，其中该苯并酰胺化合物是N-叔丁基4-硝基苯甲硫代甲酰胺。
19.根据权利要求1医药组合物，其中该苯并酰胺化合物是N-异丁基3.5-二硝基苯甲酰胺。
全文摘要
本发明揭示一种苯甲酰胺化合物。这些物质可制成医药组合物，给患如巴金森氏症出现中枢神经系统功能进行性丧失病症的病人进行经口或经静脉内投药。该医药组合物可阻止或延缓该进行性功能丧失。
文档编号A61K31/165GK1151695SQ95193579
公开日1997年6月11日 申请日期1995年4月7日 优先权日1994年4月14日
发明者W·D·弗里特, K·R·梅普斯, R·E·佩勒, A·L·韦科斯, H·陈 申请人:仙陶尔药品公司