一种胃、胰蛋白酶处理的知柏地黄复合微生态口服液的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种胃、胰蛋白酶处理的知柏地黄复合微生态口服液的制备方法，特 别涉及一种利用生物技术处理经典知柏地黄丸组方的方法，属于生物医药技术领域。
【背景技术】
[0002] 知柏地黄丸是一种常用中成药，是由补阴经典代表方剂六味地黄丸（熟地黄山萸 肉山药泽泻牡丹皮和茯苓）加知母黄柏而成，加强了滋肾阴清相火的作用。传统应用于阴 虚火旺，潮热盗汗，口干咽痛，耳鸣遗精，小便短赤等症。近年来经中医辨证后灵活使用，对 慢性咽炎、急性尿路感染等几种疾病也有较好疗效。由于知母和黄柏具有清热的功效，所以 知柏地黄丸较六味地黄丸在养阴的基础上，加入了清热的功效。
[0003] 但由于知柏地黄丸属甘温性，偏于补阴的药，主治肾阴虚，其配方中阴柔的药多一 些，所以吃后有时候会妨碍消化的副作用，因此不仅脾胃功能弱、消化不良者慎吃，而且长 期服用会导致腹满、便溏、食欲不振等不适症状。
[0004] 中国专利文献CN1709488A (申请号200510031759. 7)公开了本发明公开了滋阴 降火的中药制剂及其制备方法，它是主要组成成分为知母、黄柏、熟地黄、茯苓、山茱萸、牡 丹皮、山药、泽泻（盐水蒸）的知柏地黄滴丸或微丸或软胶囊。本发明的制备方法是：取山 药、山茱萸、泽泻（盐水蒸）等三味粉碎成细粉，备用；取牡丹皮粉碎成细粉，备用；取其 余知母、黄柏、熟地黄、茯苓等四味加水煎煮二次，合并煎液，滤过，滤液浓缩至稠膏；加 入山药等三味细粉，混匀，干燥，粉碎成细粉，再加入牡丹皮细粉，混匀，加入适当辅料 后，制成滴丸或微丸或软胶囊。
[0005] 虽然上述专利能够将知柏地黄丸中的药效成分提取浓缩制得浓缩知柏地黄丸，但 知柏地黄丸妨碍消化的副作用并没有减弱。
[0006] 双歧杆菌Bifidobacterium是1899年由法国学者Tissier从母乳营养儿的粪便 中分离出的一种厌氧的革兰氏阳性杆菌，末端常常分叉，故名双歧杆菌。双歧杆菌具有以下 治疗效果：1、维护肠道正常细菌菌群平衡，抑制病原菌的生长，防止便秘，下痢和胃肠障碍 等；2、抗肿瘤；3、在肠道内合成维生素、氨基酸和提高机体对钙离子的吸收；4、降低血液中 胆固醇水平，防治高血压；5、改善乳制品的耐乳糖性，提高消化率；6、增强人体免疫机能， 预防抗生素的副作用，抗衰老，延年益寿。
[0007] 植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum)是乳酸杆菌中的一种，常存在于发酵的 蔬菜和果汁中。植物乳杆菌作为人体胃肠道的益生菌群，具有维持肠道内菌群平衡、提高机 体免疫力和促进营养物质吸收等多种功能。植物乳杆菌在食品工业中应用十分广泛。由于 对食盐、亚硝酸盐具有良好的耐受性，对蛋白质、脂肪无明显直接的分解作用等特点，在发 酵肉制品中应用很多。同时，也广泛用于发酵植物性食品，此外利用植物乳杆菌还可以生产 共轭亚油酸。
【发明内容】
[0008] 本发明针对现有技术的不足，提供一种胃、胰蛋白酶处理的知柏地黄复合微生态 口服液的制备方法。
[0009] 术语说明
[0010] 胃蛋白酶的活力单位（U):采用中国药典1977年版制定的检测方法检测的活力单 位。
[0011] 胰蛋白酶的活力单位（U):采用中国药典1990年版制定的检测方法检测的活力单 位。
[0012] 本发明技术方案如下：
[0013] 一种胃、胰蛋白酶处理的知柏地黄复合微生态口服液的制备方法，步骤如下：
[0014] (1)将知柏地黄丸原料中的八味原料药经粉碎后，制得原料粉末，然后按每百克原 料粉末加入200~600克水和炼蜜，混合均匀，制得原料浆液；
[0015] (2)向步骤（1)制得的原料浆液中加入酸调pH值为1.5~2. 2,按每百克知柏地 黄丸原料加入20~60活力单位的胃蛋白酶，在温度36~38°C，处理2~3小时，碱调pH 值为7. 8~8. 2,制得胃蛋白酶处理的浆液；
[0016] (3)向步骤（2)制得的胃蛋白酶处理的浆液中，按每百毫升加入20~50活力单位 的胰蛋白酶，在温度36~38°C，处理2~3小时，酸调pH值至5. 5~6,制得胃、胰蛋白酶 处理的浆液；
[0017] (4)向步骤（3)制得的胃、胰蛋白酶处理的浆液中，按每百毫升接种0. 5~2g的经 活化的双歧杆菌和1. 5~3g的经活化的植物乳杆菌，制得胃、胰蛋白酶处理的知柏地黄复 合微生态口服液。
[0018] 根据本发明优选的，所述步骤（1)的知柏地黄丸原料如下，均为重量份：
[0019] 知母40份、黄柏40份、熟地黄160份、制山茱萸(酒萸肉）80份、牡丹皮60份、山 药80份、茯苓60份、泽泻60份、炼蜜7~10份。
[0020] 根据本发明优选的，所述步骤（1)的知柏地黄丸原料如下，均为重量份：
[0021] 知母40份、黄柏40份、熟地黄160份、制山茱萸(酒萸肉）80份、牡丹皮60份、山 药80份、茯苓60份、泽泻60份、炼蜜16~22份。
[0022] 根据本发明优选的，所述步骤（2)、（3)中的酸为盐酸。
[0023] 根据本发明优选的，所述步骤（1)的碱为碳酸钠。
[0024] 根据本发明优选的，所述步骤（4)中经活化的双歧杆菌是指将双歧杆菌接种于 TPY液体培养基中，在36~38°C培养至对数生长期的双歧杆菌。
[0025] 根据本发明进一步优选的，所述TPY液体培养基每升组分如下：
[0026] 蛋白胨15. 0g、酵母粉2. 0g、葡萄糖20. 0g、可溶性淀粉0· 5g、氯化钠5. 0g、5wt% 半胱氨酸溶液10.0 mL、西红柿浸出液400.0 mL、吐温801. 0g、肝提取液80.0 mL、蒸馏水 520.0 mL、pH7. 0。
[0027] 所述西红柿浸出液的制备为本领域常规方法，步骤如下：
[0028] 将新鲜西红柿洗净称重后切碎，加等量蒸馏水在KKTC水浴中加热，搅拌90min， 然后用纱布过滤，调pH7. 0。
[0029] 所述肝提取液的制备为本领域常规方法，步骤如下：
[0030] 称取新鲜猪肝l〇〇〇g，切成小块或绞碎，加蒸馏水至2000mL，混匀，置冰箱中过夜， 第二天煮沸15min，纱布过滤并挤压收集滤液，加水定容至2000mL。
[0031] 所述双歧杆菌为肠道益生菌，本领域技术人员可以根据需要进行选择，如中 国专利文献CN102946891A中的菌种保藏号为NCMB41676的双歧杆菌，中国专利文献 CN101679938A中的菌种保藏号为NCMB41387的长双歧杆菌等。
[0032] 根据本发明优选的，所述步骤（4)中经活化的植物乳杆菌是指将植物乳杆菌接种 于MRS液体培养基中，在30~35°C培养至对数生长期的植物乳杆菌。
[0033] 根据本发明进一步优选的，所述所述MRS液体培养基每升组分如下：
[0034] 蛋白胨 lO.Og、牛肉膏 lO.Og、酵母膏 5.0g、柠檬酸氢二铵[(NH4)2HC6H50 7]2.0g、 葡萄糖（C6H12O6 · H2O) 20. 0g、吐温 801. OmL、乙酸钠（CH3COONa · 3H20) 5. 0g、磷酸氢二钾 (K2HPO4 · 3H20) 2. 0g、硫酸镁（MgSO4 · 7H20) 0· 58g、硫酸锰（MnSO4 · H2O) 0· 25g、琼脂 18. 0g、 蒸馈水定容至1000 mL, ρΗ6· 2~6· 6。
[0035] 所述植物乳杆菌为肠道益生菌，本领域技术人员可以根据需要进行选择，如中国 专利文献CN102597214A中的菌种保藏号为KCTC11403BP的植物乳杆菌CJLP133,中国专利 文献CN102597215A中的菌种保藏号为KCTC11401BP的植物乳杆菌CJLP55等。
[0036] 有益效果
[0037] 本发明通过将传统知柏地黄丸原料经胃、胰蛋白酶分解处理，得到了副作用较小 的胃、胰蛋白酶处理的知柏地黄复合微生态口服液，该品酸甜适口，且经实际应用，长期服 用该胃、胰蛋白酶处理的知柏地黄复合微生态口服液不仅能够达到服用知柏地黄丸治疗效 果，并且导致胃寒、阻碍消化的副作用也得到极大的降低。
【具体实施方式】
[0038] 下面结合实施例，对本发明的技术方案做进一步说明，但本发明所保护范围不限 于此。
[0039] 实施例中的TPY液体培养基每升组分如下：
[0040] 蛋白胨15. 0g、酵母粉2. 0g、葡萄糖20. 0g、可溶性淀粉0· 5g、氯化钠5. 0g、5wt% 半胱氨酸溶液10.0 mL、西红柿浸出液400.0 mL、吐温801. 0g、肝提取液80.0 mL、蒸馏水 520.0 mL、pH7. 0 ;
[0041] 所述西红柿浸出液的制备步骤如下：
[0042] 将新鲜西红柿洗