在其整个长度上与SEQ ID NO: 1中所示的氨基酸序列具有至少至少60%、至少 70 %、至少80 %、至少85 %、至少90 %、至少95 %、至少97 %、至少98或至少99 %的序列一 致性的氨基酸序列；和（iii)在其整个长度上与SEQ ID NO: 1中所示的氨基酸序列具有至 少70,.至少80 %、至少85 %、至少90 %、至少95 %、至少97 %、至少98或至少99的序列同 源性的氨基酸序列；（iv) (i)至（iii)的任一项的功能性片段。
[0068] 优选地，血管生成素样4(ANGPTL4)多肽的C末端区的多肽或其功能片段包含：（i) SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列：或（ii)在其整个长度上与SEQ ID NO:2中所示的氨基 酸序列具有至少60 %、至少70 %、至少80 %、至少85 %、至少90 %、至少95 %、至少97 %、至 少98或至少99%的序列一致性的氨基酸序列；和（iii)在其整个长度上与SEQ ID NO: 2中 所示的氨基酸序列具有至少70%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、 至少98或至少99的序列同源性的氨基酸序列。
[0069] 在本发明的说明书中，同源序列被认为包括这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列 在氨基酸水平上在至少20、50、100、200、300或400个氨基酸上与SEQ ID. N0:1所示的氨 基酸序列或SEQ ID. NO: 2所示的氨基酸序列具有至少60%、70、80或90%，优选至少95或 98%的同一性。特别地，通常应当考虑已知是蛋白质的功能所必需的那些序列区域而非非 必需相邻序列的同源性。本发明的优选多肽包含连续序列，所述序列与SEQ ID NO: 1的氨 基酸的一个或多个或与SEQ ID N0:2的氨基酸的一个或多个具有大于50、60或70%的同源 性，更优选大于80或90 %的同一性。
[0070] 其它优选多肽包含连续序列，所述序列与SEQ ID No: 1具有40、50、60或70%的 同源性，并且能够结合SEQ ID No: 1。其它优选多肽包含一个连续序列，所述序列与SEQ ID No:2具有大于50、60、70或80%的同源性，并且能够结合SEQ ID N0:2,对伤口愈合具有类 似的效果。虽然也可根据序列相似性（即，具有相似的化学性质/功能的氨基酸残基）来 考虑同源性，但在本发明的说明书中，优选地根据序列一致性来表达同源性。术语"大体上 的同源"或"大体上的同一性"，当指多肽时，表示所述多肽或蛋白质显示与整个天然存在的 蛋白质或其部分至少约70%的同一性，通常至少约80%的同一性，优选至少约90或95%的 同一性。
[0071] 同源性比较可通过眼来进行，或者更通常地，借助于容易获得的序列比较程序来 进行。这些商购可得的计算机程序可计算两个或多个序列之间的百分比同源性。
[0072] 可对连续序列计算百分比（％)同源性，即将一个序列与其它序列对齐并一次一 个残基地将一个序列中的每个氨基酸与另一个序列中的对应氨基酸直接比较。这被称为 "无缺口 "比对。通常，这种无缺口比对仅对相对短的数目的残基（例如少于50个连续氨基 酸）进行。
[0073] 尽管这是非常简单而一致的方法，但它没有考虑到的是，例如，在另外的相同的一 对序列中，一个插入或缺失将使随后的氨基酸残基脱离对齐，从而当进行全局比对时有可 能导致10%的同源性的巨大降低。因此，大多数序列比较方法被设计来产生最佳比对，所 述比对考虑可能的插入和缺失而不过度地惩罚整体同源性评分。这通过在序列比对中插入 "缺口"以试图最大化局部同源性来实现。
[0074] 然而，这些更加复杂的方法为每一个存在于比对中的缺口分配"缺口罚分"，以便 对于相同数目的相同氨基酸，具有尽可能少的缺口的序列比对-反映两个比较序列间的较 高相关性-将实现比具有许多缺口的序列比对更高的评分。通常使用"仿射缺口成本"， 其对于缺口的存在而索取相对较高费用，并对于缺口中每一个随后的残基而索取较小的罚 分。这是最常用的缺口评分系统。当然，高缺口罚分将产生具有更少缺口的最优化的比对。 大多数比对程序允许缺口罚分被修改。然而，当使用这样的软件进行序列比较时，优选地使 用默认值。例如当使用GCG Wisconsin Bestfit程序包时，氨基酸序列的默认缺口罚分对 为-12 (对于缺口）和-4 (对于每一个延伸）。
[0075] 最大同源性百分比的计算因而首先需要产生考虑到缺口罚分的最佳比对。用于进 行这样的对比的合适的计算机程序是GCG Wisconsin Bestfit程序包以及在本领域是已知 的其它软件。可进行序列比较的其它软件的实例包括但不限于BLAST包和GENEW0RKS成套 比较工具。BLAST和FASTA均可用于离线和在线搜索。
[0076] 尽管最终的同源性百分比是根据同一性测量的，但其自身的比对过程通常不基于 全有或全无对比较。相反，通常使用缩放相似性得分矩阵，其基于化学相似性或进化距离将 评分赋予每一个配对比较。这种常用矩阵的实例是BL0SUM62矩阵-BLAST成套程序的默认 矩阵。GCG Wisconsin程序通常使用公共默认值或者提供自定义符号比较表（关于进一步 的细节参见用户手册）（如果提供的话）。优选使用GCG软件包的公共默认值的GCG软件 包，或在其他软件的情况下默认矩阵，如BL0SUM62。
[0077] -旦软件已产生最佳比对，就可能计算百分比同源性，优选百分比序列一致性。软 件通常将此作为序列比较的一部分来进行，和产生数字结果。
[0078] 多肽同源物包括具有氨基酸序列的那些同源物，其中一个或多个氨基酸被另一种 氨基酸置换，所述置换大体上不改变分子的生物活性。根据本发明的ANGPTL4或CANGPTL4 同源物优选与SEQ ID NO: 1或SEQ ID N0:2所示的多肽氨基酸序列具有80%或更大的氨基 酸序列一致性，并且对伤口愈合具有相似作用。本发明的范围内的多肽同源物的实例包括 SEQ ID N0S:1或2的氨基酸序列，其中：（a) -个或多个天冬氨酸残基被谷氨酸置换；(b) 一个或多个异亮氨酸残基被亮氨酸置换；（c) 一个或多个甘氨酸或缬氨酸残基被丙氨酸置 换；（d) -个或多个精氨酸残基被组氨酸置换；或（e) -个或多个酪氨酸或苯丙氨酸残基被 色氨酸置换。
[0079] 优选地，〃蛋白质〃或〃多肽〃是指由表达SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO:2所示的 氨基酸序列的核酸序列、其变体或片段编码的蛋白质或多肽。还包括的是由在高或低严格 条件下与所述编码核酸杂交DNA编码的蛋白质。还可包括被针对SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO:2的多肽的抗血清获得的密切相关的多肽或蛋白质。
[0080] 本发明提供了针对多肽或其片段的"蛋白质修饰或片段"，其与一级结构序列大 体上同源但包括例如体内或体外化学和生物化学修饰，或掺入罕见氨基酸。这样的修饰包 括例如乙酰化、羧化、磷酸化、糖基化、泛素化、标记，例如，利用放射性核素，以及各种酶促 修饰，这对于本领域技术人员将是很容易理解的。多种用于标记多肽的方法和用于此类 目的取代物或标记物在本领域中是公知的，包括放射性同位素例如 32P，结合标记的抗配体 (例如，抗体）的配体、荧光团、化学发光剂、酶和可用作标记配体的特异性结合对成员的抗 配体。标记的选择取决于所需的灵敏度、与引物缀合的容易性、稳定性要求和可用的仪器。 标记多肽的方法在本领域中是众所周知的。
[0081] "多肽"可包括按照本领域已知的方法，例如在原核或真核细胞中例如在CHO细胞 中进行的重组生产，或通过合成方法例如本领域中已知的tBoc或Fmoc产生的本文中描述 的任何多肽。或者，组合物可包括在伤口部位增加 ANGPTL4的天然表达的激动剂。已知低 氧条件诱导ANGPTL4表达。缺氧诱导因子α (HIF-?)诱导ANGPTL4的表达。类似地，过氧 化物酶体增殖物-活化的受体（PPAR)蛋白是激活ANGPTL4表达的转录因子。这样组合物 就可包括PPAR蛋白或HIF-?蛋白质。
[0082] 本发明的另一个方面包括用于增进个体的伤口愈合的药物组合物，其包含血管生 成素样4 (ANGPTL4)多肽或其治疗活性片段；和药学上可接受的载体。
[0083] 本发明的组合物
[0084] 可以以药物组合物的形式施用根据本发明的产生的多肽以治疗伤口。
[0085] 因此，本发明还涉及组合物，其包括：
[0086] 包含有效量的（a)针对血管生成素样4蛋白（ANGPTL4)的激动剂和，或（b)针对 血管生成素样4蛋白（ANGPTL4)的C末端区的激动剂和载体。如本文中所用，如果组合物 能够影响伤口愈合，则其在治疗上是有效的。
[0087] 适于局部施用的本发明的药物剂型包括无菌水溶液例如无菌磷酸盐缓冲盐水 (其中水可溶的）或分散体和无菌粉剂（用于局部溶液的临时制备）和/或一种或多种载 体。或者，可将局部溶液封装在脂质体中进行递送，以帮助它们转运穿过细胞膜。可选择地 或另外地，这样的制剂可含有自组装孔结构的成分，以有利于跨细胞膜转运。它必须在生产 和贮存条件下是稳定的，并且必须进行防微生物例如细菌和真菌的污染/破坏性作用的保 存。
[0088] 以纯净形式存在的本发明的组合物可以是直接地局部施用于需要治疗的皮肤区 域。在各种实施方式中，将直接施用所得的活性化合物而无需稀释，或可选择地，可用水稍 微稀释组合物，随后用于局部施用。或者，可配制本发明的活性组合物，通过添加药学上可 接受的载体或赋形剂将其作为喷雾剂、肥皂、凝胶、乳膏、洗剂、软膏等局部施用。优选载体 包括去离子水、植物油或矿物油、白矿脂、支链脂肪或油、动物脂肪和高分子量醇。还可包括 乳化剂、稳定剂和抗氧化剂以及着色剂和精油（以赋予香味）。
[0089] 常见地，可将本发明的组合物配制成洗剂或补品，其中将它们直接施用，或用水稀 释后施用。还可将组合物配制成乳膏或软膏。在这样的制剂中，可以以10%至60% w/w的 基础保湿霜的量添加活性多肽，将其混合在基础霜中。例如，山梨醇烯（sorbolene)乳膏或 其它保湿剂可具有以10%至60% w/w的量添加至其中的本发明的组合物。或者，澳洲坚果 油、霍霍巴油、杏仁油或其它坚果和种子油可具有以10% >至60% >w/w的量添加至其中的 本发明的活性多肽。
[0090] 其它其中可配制本发明的组合物的局部产品包括皮肤产品例如乳膏剂、凝胶剂、 糊剂、乳剂、软膏、喷雾剂、面膜和果皮（peels)等。
[0091] 与本发明的组合物一起使用的合适的局部媒介物在制药领域中是公知的，包括 水、脂质基质材料，包括油和脂肪、皂类、表面活性剂、润肤剂、皮肤调理剂和乳化剂。这些媒 介物的实例于马丁代尔大药典（Martindale-The Extra Pharmacopoeia) (Pharmaceutical Press)中进行了描述。很显然，合适的媒介物的选择取决于制剂的递送模式。通常以制药 领域中公知的常规方式将活性组合物通常掺入在皮肤病学上可接受的媒介物/载体。
[0092] 有效量的本发明的组合物至需要治疗的皮肤区域的局部施用提供从各种伤口的 症状例如溃疡、慢性非愈合创面和痤疮的快速有效的愈合。处理的皮肤的区域需要改善，因 为伤口表面积在尺寸上减小为组合物的第一次施用的百分比，优选其中真皮已重新生长的 区域可具有表现光滑和紧绷的皮肤色调。
[0093] 通常，将本发明的组合物局部施用于动物，优选人，以用于所有表皮伤口的治疗或 预防，包括溃疡、昆虫叮咬、第一、第二和第三度烧伤，溃疡、伤口和皮肤感