金雀异黄酮防治根尖周病的新用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于根尖周病的防治技术领域，具体涉及金雀异黄酮防治根尖周病的新用 途。
【背景技术】
[0002] 根尖周病是口腔的常见病、多发病，主要病理特征是根尖周牙槽骨的破坏吸收。根 尖周病的主要致病因素来自根管内厌氧菌和兼性厌氧菌的感染，所以临床上多采用根管治 疗以除去根管内感染物质。近年来CT检测显示，约63%的患牙虽经过完善的根管治疗，其 根尖周骨破坏仍难痊愈，最后可能需要采取根尖切除或将患牙拔除。因此，寻找有效防治根 尖周病的潜在药物已成为根管治疗的重要辅助策略。
[0003] 金雀异黄酮，又称染料木黄酮，其化学名为4'，5, 7-三羟基异黄酮，是广泛存在于 豆科植物中的一类异黄酮类化合物，其结构与雌激素十分相似，除了能与破骨细胞上的雌 激素受体α结合直接发挥作用外，还可以影响相关细胞因子的产生、抑制炎症并调控破骨 细胞的活性与功能。有文献报道金雀异黄酮可抑制蛋白酪氨酸激酶，从而对哮喘豚鼠肺部 炎症有预防作用；并且，金雀异黄酮对二硝基氟苯诱发的小鼠变应性接触性皮炎有显著的 抑制作用。同时，金雀异黄酮可通过提升骨质疏松大鼠股骨骨小梁体积、厚度和密度，减少 去势所导致骨量的丢失。
[0004] 金雀异黄酮以其突出的优点越来越受到人们的关注。目前，涉及到金雀异黄酮的 报道有防治骨质疏松，预防干眼症，治疗癌症和改善肥胖症等。但是，迄今为止，金雀异黄酮 防治根尖周病的应用没有被公开或使用。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供金雀异黄酮在防治根尖周病中的应用。
[0006] 为达到上述目的，本发明采用了以下技术方案：
[0007] 金雀异黄酮可通过改善根尖周病灶骨质破坏，达到防治根尖周病的作用。
[0008] 金雀异黄酮可通过减缓根尖周病灶炎症细胞浸润，达到防治根尖周病的作用。
[0009] 金雀异黄酮可通过降低根尖周病灶核因子kappaB受体激活剂配体（Receptor activator of nuclear factor kappaB ligand, RANKL)表达水平，达到防治根尖周病的作 用。
[0010] 金雀异黄酮可通过促进根尖周病灶骨保护素（Osteoprotegrin, 0PG)表达，达到 防治根尖周病的作用。
[0011] 金雀异黄酮的上述作用表明其可用于制备防治根尖周病的药物，具体为金雀异黄 酮可用于制备改善根尖周病灶骨质破坏、减缓根尖周病灶炎症细胞浸润、降低根尖周病灶 RANKL表达水平或促进根尖周病灶OPG表达的药物。
[0012] 本发明的有益效果主要体现在：提供了金雀异黄酮用于防治根尖周病的新用途， 该用途表明金雀异黄酮可用于制备防治根尖周病的药物。金雀异黄酮为纯天然物质，用药 较安全，毒副作用小。
【附图说明】
[0013] 图1是金雀异黄酮（25mg/kg)对开髓14天和28天导致小鼠下颁第一磨牙远中根 根尖区骨破坏的三维图。
[0014] 图2是HE染色观察金雀异黄酮（25mg/kg)对开髓14天导致小鼠下颁第一磨牙远 中根根尖区骨破坏的干预效果图，A :HE荧光模式，14天模型对照组；B :HE荧光模式，14天 金雀异黄酮给药组；C :HE光学模式，14天模型对照组；D :HE光学模式，14天金雀异黄酮给 药组。
[0015] 图3是HE染色观察金雀异黄酮（25mg/kg)对开髓28天导致小鼠下颁第一磨牙远 中根根尖区骨破坏的干预效果图，A :HE荧光模式，28天模型对照组；B :HE荧光模式，28天 金雀异黄酮给药组；C :HE光学模式，28天模型对照组；D :HE光学模式，28天金雀异黄酮给 药组。
[0016] 图4是TRAP染色观察金雀异黄酮（25mg/kg)对开髓导致小鼠下颁第一磨牙远中 根根尖区破骨细胞的影响图，A :14天对照组；B :14天金雀异黄酮给药组；C :28天模型对照 组；D :28天金雀异黄酮给药组，黑色箭头示为破骨细胞。
[0017] 图5是免疫组织化学染色观察金雀异黄酮（25mg/kg)对开髓导致小鼠下颁第一磨 牙远中根根尖区RANKL表达的影响图，A :14天模型对照组；B :14天金雀异黄酮给药组；C : 28天模型对照组；D :28天金雀异黄酮给药组，黑色箭头示为RANKL阳性细胞。
[0018] 图6是免疫组织化学染色观察金雀异黄酮（25mg/kg)对开髓导致小鼠下颁第一磨 牙远中根根尖区OPG表达的影响图，A :14天模型对照组；B :14天金雀异黄酮给药组；C :28 天模型对照组；D :28天金雀异黄酮给药组，黑色箭头示为OPG阳性细胞。
【具体实施方式】
[0019] 下面结合实施例，对本发明作进一步详细的说明，但不应理解为对本发明的限制。 在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属 于本发明的范围。
[0020] 实施例1
[0021] 1.实验动物及材料：
[0022] I. 1实验动物
[0023] 所有的实验程序符合武汉大学口腔医学院伦理委员会的指导原则。SPF级6-8周 C57BL雄性小鼠（购于武汉大学动物实验中心，许可证号：SCXK (鄂）2008-0004) 20只，体重 20克左右，分笼饲养，每笼5只。
[0024] 1.2实验材料
[0025] 金雀异黄酮购置于Cayman公司（分子式C15HltlO 5，分子量270. 2,纯度兰98% )。参 考相关文献及药物说明书，于给药前一天将粉剂金雀异黄酮溶于DMSO(Biosharp公司），母 液浓度30mg/mL，用PBS制备成药物工作浓度2. 5mg/mL。
[0026] 2.动物分组及小鼠根尖周病模型的建立：
[0027] 2. 1动物分组
[0028] 随机分成14天模型对照组、14天金雀异黄酮给药组、28天模型对照组、28天金雀 异黄酮给药组，每组5只。常规饲养、称体重并做标记。
[0029] 2. 1小鼠根尖周病模型的建立
[0030] 0.4%水合氯醛（0. lmL/10g)腹腔注射麻醉小鼠后，用1/4号球钻（瑞士登士柏公 司）在小鼠双侧下颁第一磨牙远中窝处开髓，开髓深度为0. 5个球钻直径并能探及穿髓点； 将髓腔直接暴露于口腔环境，常规饲养14天或28天。
[0031] 3.实验方法：
[0032] 3. 1给药方案
[0033] 金雀异黄酮给药组于模型建立后隔天腹腔注射金雀异黄酮（25mg/kg);模型对照 组进行PBS腹腔注射处理。所有小鼠预定时间颈椎脱白处死并分离下颁骨组织。
[0034] 3. 2标本的采集和MicroCT扫描
[0035] 分离的下颁骨用4%多聚甲醛4°C固定24h，每组取出5个下颁骨标本，0.5%的多 聚甲醛作为介质，进行MicroCT扫描。将载样管置于MicroCT扫描，扫描参数为：片层厚度 15 μ m，电压70千伏，电流114毫安，重建图像分辨率为1024 X 1024像素。
[0036] 3. 3切片制备
[0037] 分离的下颁骨用4%多聚甲醛4°C固定24h，所有标本流水冲洗24h后转入10%的 乙二胺四乙酸（EDTA)中，隔天换液，室温脱钙2-3周，以ImL注射器无阻力通过第三磨牙牙 冠为标准，终止脱钙。修整标本，保留下颁第一磨牙周围l_2mm组织。标本流水冲洗24h， 50%、60%、70% (可过夜）、80%、90%、95%1(可过夜）、95%11上行梯度酒精脱水，每个 梯度2h，正丁醇继续脱水透明3d。随后置入含正丁醇：石蜡（比例为1:1，v/v)的蜡缸中 浸蜡3h，再置入含纯低熔点石蜡的蜡缸中浸蜡3h，再用高熔点石蜡进行包埋，使下颁骨颊 面朝下。行4 μπι近远中向连续切片，展片后用表面黏附有多聚赖氨酸的载玻片捞片，倾斜 控水后，将切片编号装入烤片架，60°C烤箱烤片2-3h后取出常温保存。
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