步骤，"基本 上由其组成"或"由其组成"。关于连接词"基本上由……组成"，在一个非限制性方面，本说 明书中所公开的组合物和方法的基本和新颖的特性包括所述水凝胶的使嗜热菌蛋白酶稳 定的能力。
[0018] 预期本说明书中所讨论的任何实施方案均可针对本发明的任何方法或组合物实 施，反之亦然。此外，本发明的组合物可用于实现本发明的方法。
[0019] 根据下文详细描述将明了本发明的其它目标、特征和优点。然而，应当理解，尽管 【具体实施方式】和具体实施例显示了本发明的具体实施方案，但其仅以举例方式给出，因为 本领域技术人员根据此详细描述将明了属于本发明精神和范围内的各种变化和修改。 【附图说明】
[0020] 图1.显示本发明的水凝胶（HEC)中和不包含非离子型纤维素醚的水凝胶中表示 为靶％的1个月的嗜热菌蛋白酶活性的图。
[0021] 图2.显示当嗜热菌蛋白酶被提供于本发明的含水水凝胶中并且储存在4°C、室温 (20-25°C )和40°C时在24个月里的表示为靶％的嗜热菌蛋白酶活性的图。用于图2中的 制剂提供于表1中。
[0022] 图3.显示在用SANTYL?胶原酶软膏、木瓜蛋白酶/尿素软膏（具有2. 5%木 瓜蛋白酶和10%尿素）、本发明的稀（约50, OOOcps)嗜热菌蛋白酶含水水凝胶和本发明的 稠（约70, OOOcps)嗜热菌蛋白酶含水水凝胶处理后，猪焦痂伤口中随时间的清创百分比的 图。稀水凝胶和稠水凝胶的制剂分别提供于表2和3中。 【具体实施方式】
[0023] 有效的伤口清洗和清创有助于促进愈合过程。伤口床（wound bed)中存在失活组 织是不期望的一它充当细菌生长的储库（reservoir)，含有促进伤口部位慢性炎症的升高 水平的炎症介质，并且损害细胞迀移。4种用于对伤口进行清创的最常见的方法包括手术清 仓1J、自溶清创、酶促清创和机械清创。
[0024] 关于酶促清创，目前的SANTYL?胶原酶软膏是在美国市场唯一被批准的酶促 清创药品。该产品是利用胶原酶作为清创剂的疏水性软膏。尽管他人已经尝试使用不同清 创剂和多种制剂，但所面临的问题之一是其稳定性问题。具体来说，清创剂的不稳定性限制 了它们对伤口进行有效地清创的用途。
[0025] 本发明人已经发现与清创剂嗜热菌蛋白酶密切相关的不稳定性问题的解决方案。 具体来说，本发明人发现通过使用非离子型纤维素醚来产生含有嗜热菌蛋白酶并且使嗜热 菌蛋白酶稳定的水凝胶使嗜热菌蛋白酶在含水环境中稳定的方式。本发明的这些和其它非 限制性方面描述于以下小节中。
[0026] A.水凝胶
[0027] 本发明的组合物被配制成水凝胶，其中所述制剂的连续介质是已用非离子型纤维 素醚胶凝的含水环境。嗜热菌蛋白酶可悬浮或溶解于所述凝胶内。它还可部分地溶解和部 分地悬浮于所述凝胶内。此外，还可将其它添加剂添加到本发明的水凝胶中。
[0028] 1.嗜热菌蛋白酶
[0029] 嗜热菌蛋白酶是在疏水性残基亮氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、丙氨酸和甲 硫氨酸的N末端切割的热稳定的金属蛋白酶。最佳消化温度范围是40-80°C。嗜热菌蛋白 酶活性在pH 5. 0-8. 5下最佳。术语"活性嗜热菌蛋白酶"意指表现蛋白水解活性的嗜热菌 蛋白酶。Amano Japan是嗜热菌蛋白酶的一个制造商和供应商。从称为六甲嗜热溶蛋白芽 抱杆菌（Bacillus thermoproteolyticus rokko)的菌种获得Amano嗜热菌蛋白酶。嗜热 菌蛋白酶的CAS编号是9073-78-3。用于本说明书的实施例中的嗜热菌蛋白酶来自Amano。
[0030] 2.非离子型纤维素醚
[0031] 非离子型纤维素醚是可通过用烷基或羟烷基替代纤维素的葡萄糖单元中的羟基 的氢原子制得的高分子量化合物。非离子型烷基纤维素醚的非限制性示例包括甲基纤维素 (MC)、乙基纤维素（EC)和乙基甲基纤维素（EMC)。非离子型羟烷基纤维素醚的非限制性示 例包括羟乙基纤维素（HEC)、羟丙基纤维素（HPC)、羟甲基纤维素（HMC)、羟丙基甲基纤维素 (HPMC)、乙基羟乙基纤维素（EHEC)、羟乙基甲基纤维素（HEMC)、甲基羟乙基纤维素（MHEC)、 甲基羟丙基纤维素（MHPC)和羟乙基羧甲基纤维素（HECMC)。这些纤维素醚中的每一种都有 广泛的商业来源（例如，陶氏化学公司（Dow Chemical Company)(美国）、亚什兰（Ashland) (美国）、三星精密化学（Samsung Fine Chemicals)(美国））。这些非离子型纤维素醚的 另外的商业来源可在国际化妆品成分词典和手册（International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook)(第 12 版（2008 年），第 1-3 卷）中找到。
[0032] 3.添加剂
[0033] 除嗜热菌蛋白酶、非离子型纤维素醚和水外，水凝胶还可包含另外的成分。例如， 可使用水溶性溶剂，例如丙二醇或其它二元醇。三元醇和多元醇也可用于水凝胶中。三元 醇的非限制性示例是甘油。所述溶剂的量可在1% w/w到20% w/w的范围，虽然可添加更 多或更少以实现水凝胶的所需结果。可使用例如似(：12或CaCl2的金属盐作为稳定剂。盐 的量可在〇. 01% w/w到1% w/w的范围，虽然可添加更多或更少以实现水凝胶的所需结果。 可使用例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯和苯氧乙醇的防腐剂来保存水凝胶。所 述防腐剂的量可在〇. 01 % w/w到1 % w/w的范围，虽然可添加更多或更少以实现水凝胶的 所需结果。可使用具有适于嗜热菌蛋白酶的pH范围（例如，6. 5到9、或7到8、或约7. 5) 的缓冲液。所述缓冲液的一个示例是Tris缓冲液（lOmM, pH = 7. 5)。水凝胶的水源可来自 缓冲溶液。因此，可添加的缓冲液的量是填满所述制剂的量（例如，适量到100%)。可添 加其它添加剂以实现给定的触觉性质或为水凝胶增加另外的功能方面（例如，可进一步帮 助伤口愈合过程的药剂，例如疗创剂（vulnerary agent)、抗微生物剂、抗炎剂、疼痛缓解剂 等）。
[0034] 4.水凝胶的制备
[0035] 可通过在去离子（DI)水或Tris缓冲液（pH = 7. 5)中在70°C混合丙二醇和防腐剂 (例如，对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯）来制备本发明的水凝胶。在溶解（即，获得 澄清溶液）后，可将溶液冷却到室温（RT)并且可添加胶凝剂（例如，羟乙基纤维素-HEC)。 然后可搅拌所述混合物直到均匀（即，没有可见的胶凝剂HEC粒子），由此形成水凝胶。可 通过在DI水或Tris缓冲液（pH = 7. 5)中以适当浓度混合嗜热菌蛋白酶、NaCl和CaCl^iJ 得活性相。在均质化（将获得白色浆料）后，然后可将活性相添加到水凝胶中（以适当浓 度）。然后可在RT搅拌最终混合物。然后获得乳状水凝胶。
[0036] B.使用水凝胶的方法
[0037] 本发明的水凝胶可用于多种方法中。例如，它们可用于对例如慢性伤口的伤口进 行清创。所述方法包括对伤口施用包含嗜热菌蛋白酶的组合物（例如，通过局部施用）。在 施用后，伤口可被伤口敷料（例如纱布垫）覆盖。可首先将水凝胶施用到敷料（例如纱布 垫）并且随后施用到伤口表面。施用量取决于伤口的严重程度和类型以及个体的性质。
[0038] 在某些方面，水凝胶可根据需要被周期性地（例如，每日一次、每日两次、隔日一 次、一周一次）施用到伤口。可使用治疗方案，所述治疗方案包括周期性地更换敷料，并在 更换之间进行伤口清洗并施用新鲜组合物，直到完成对坏死组织的清除。
[0039] 可用本发明的水凝胶处理众多种伤口。示例包括烧伤、急性伤口或慢性伤口。慢 性伤口的非限制性示例包括糖尿病性足部溃疡、静脉性腿部溃疡、动脉性腿部溃疡，褥疮性 溃疡、淤积性溃疡、皮肤溃疡、烧伤和压力性溃疡。
[0040] α试剂盒
[0041] 还考虑在本发明的某些方面中使用试剂盒。例如，本发明的水凝胶可包含在试剂 盒中。试剂盒可包括容器。容器可包括瓶、金属管、层压管、塑料管、分配器、加压容器、阻隔 容器、包、室或其它类型的容器，例如在其中保留水凝胶的注塑或吹塑塑料容器。试剂盒可 包括其表面上的标记。标记例如可为词语、短语、缩写、图片或符号。
[0042] 容器可分配预定量的组合物。在其它实施方案中，可挤压容器（例如，金属管、层 压管或塑料管）以分配所需量的组合物。组合物可作为喷雾剂、发泡剂（foam)、气溶胶、液 体、流体或半固体分配。容器可具有喷雾、泵送或挤压机构。容器可被设计用于单剂量或多