flex AVC来自科莱恩（Clariant)(美国）。悬浮介质是Tris 缓冲液（10mM，pH = 7. 5)。通过在Tris缓冲液中在RT混合胶凝剂（Aristoflex AVC)来 制备水凝胶。在溶解后形成水凝胶。通过在Tris缓冲液中以适当浓度混合嗜热菌蛋白酶 制得活性相。将活性相添加到水凝胶中。将最终混合物在RT搅拌至少2h。获得乳状水凝 胶。嗜热菌蛋白酶活性在该制剂中被抑制，如通过酪蛋白消化法所测量。
[0077] 表10-嗜热菌蛋白酶/Ultragel-300水凝胶
[0078]
[0079] 过程：所用的Ultragel-300 (聚季铵盐-37)从科宁（美国）获得。悬浮介质是 Tris缓冲液（lOmM，pH = 7. 5)。通过在Tris缓冲液中在RT混合胶凝剂（Ultragel-300) 来制备水凝胶。在溶解后形成水凝胶。通过在Tris缓冲液中以适当浓度混合嗜热菌蛋白 酶制得活性相。将活性相添加到水凝胶中。将最终混合物在RT搅拌至少2h。获得乳状水 凝胶。嗜热菌蛋白酶在该制剂中不稳定。在室温下储存1个月后，通过酪蛋白消化法测量 发现，活性损失约80%。
[0080] 表11-嗜热菌蛋白酶/结冷胶（Gellan Gum)水凝胶
[0081]
[0082] 过程:所用的结冷胶从斯比凯可（C. P. Kelco)(美国）获得。悬浮介质是Tris缓 冲液（lOmM，pH = 7. 5)。通过在Tris缓冲液中在RT混合胶凝剂（结冷胶）来制备水凝胶。 在溶解后形成水凝胶。通过在Tris缓冲液中以适当浓度混合嗜热菌蛋白酶制得活性相。 将活性相添加到水凝胶中。将最终混合物在RT搅拌至少2h。获得乳状水凝胶。嗜热菌蛋 白酶在该制剂中不稳定。在室温下储存1个月后，通过酪蛋白消化法测量发现，活性损失约 50%〇
[0083] 表12-嗜热菌蛋白酶/Cosmedia Guar水凝胶
[0084]
[0085] 过程：所用的Cosmedia guar (瓜尔轻丙基三甲基氯化按（guar hydroxypropyltrimonium chloride))从科宁（美国）获得。悬浮介质是Tris缓冲液 (IOmM, pH = 7. 5)。通过在Tris缓冲液中在RT混合胶凝剂（Cosmedia Guar)来制备水凝 胶。在溶解后形成水凝胶。通过在Tris缓冲液中以适当浓度混合嗜热菌蛋白酶制得活性 相。将活性相添加到水凝胶中。将最终混合物在RT搅拌至少2h。获得乳状水凝胶。嗜热 菌蛋白酶在该制剂中不稳定。在室温下储存1个月后，通过酪蛋白消化法测量发现，活性损 失约60%。
[0086] 表13-嗜热菌蛋白酶/黄原胶水凝胶
[0087]
[0088] 过程:所用的黄原胶从TIC胶体（TIC Gums)(美国）获得。悬浮介质是Tris缓冲 液（10mM，pH = 7. 5)。通过在Tris缓冲液中在RT混合胶凝剂（黄原胶）来制备水凝胶。 在溶解后形成水凝胶。通过在Tris缓冲液中以适当浓度混合嗜热菌蛋白酶制得活性相。 将活性相添加到水凝胶中。将最终混合物在RT搅拌至少2h。获得乳状水凝胶。嗜热菌蛋 白酶在该制剂中不稳定。在室温下储存1个月后，通过酪蛋白消化法测量发现，活性损失约 70%〇
[0089] 表14-嗜热菌蛋白酶/CMC Ticalose水凝胶
[0090]
[0091] 过程：所用的CMC Ticalose (羧甲基纤维素钠-阴离子型）从TIC胶体（美国） 获得。悬浮介质是Tris缓冲液（lOmM，pH = 7. 5)。通过在Tris缓冲液中在RT混合胶凝剂 (CMC Ticalose)来制备水凝胶。在溶解后形成水凝胶。通过在Tris缓冲液中以适当浓度 混合嗜热菌蛋白酶制得活性相。将活性相添加到水凝胶中。将最终混合物在RT搅拌至少 2h。获得乳状水凝胶。嗜热菌蛋白酶活性在该制剂中受到抑制。
[0092] 表15-嗜热菌蛋白酶/PolyOx WSR水凝胶
[0093]
[0094] 过程：所用的PolyOx (PEG) WSR从TIC胶体（美国）获得。悬浮介质是Tris缓冲 液（10mM，pH = 7. 5)。通过在Tris缓冲液中在RT混合胶凝剂（PolyOx WSR)来制备水凝 胶。在溶解后形成水凝胶/稠液体。通过在Tris缓冲液中以适当浓度混合嗜热菌蛋白酶 制得活性相。将活性相添加到水凝胶中。将最终混合物在RT搅拌至少2h。获得乳状水凝 胶/稠液体。嗜热菌蛋白酶在该制剂中不稳定。
[0095] 在室温下储存1个月后，通过酪蛋白消化法测量发现，活性损失约80%。
[0096] 表16-嗜热菌蛋白酶/水包油乳液乳膏
[0097]
[0098]
[0099] 过程：乳化赌（Polowax)从禾大（Croda)(美国）获得。悬浮介质是KH2PO 4 (I %，w/ w, pH = 7. 5)。通过在缓冲液中在70°C溶解甘油和防腐剂来制备乳膏。在溶解（澄清溶液） 后，添加乳化剂（乳化蜡）和油（肉豆蔻酸异丙酯）。在混合（在70°C Ih)后，将混合物冷 却到RT。获得乳状白色乳膏。发现在室温下4个月后，嗜热菌蛋白酶在该制剂中不稳定，如 通过酪蛋白消化法所测量。
[0100] 表17-嗜热菌蛋白酶/卡波普Aqua SF-I水凝胶
[0101]
[0102] 过程：所用的卡波普Aqua SF-I从留勃里佐尔（美国）获得。悬浮介质是DI水。 通过将胶凝剂（卡波普Aqua SF-1)与防腐剂和甘油一起在70°C混合于DI水中来制备水凝 胶。在溶解后将溶液冷却到RT。在用IM NaOH中和所述溶液后形成水凝胶。通过在DI水 中以适当浓度混合嗜热菌蛋白酶制得活性相。将活性相添加到水凝胶中。将最终混合物在 RT搅拌至少2h。获得半透明水凝胶。嗜热菌蛋白酶活性在该制剂中受到抑制。
[0103] 表18 -嗜热菌蛋白酶/泊洛沙姆-407 (Poloxamer-407)基水凝胶
[0104]
[0105] 过程：所用的泊洛沙姆-407从BASF(美国）获得。悬浮介质是1% KH2POjl冲液。 通过将胶凝剂（泊洛沙姆-407)与防腐剂一起在4°C混合于缓冲液中来制备水凝胶。在溶 解后将溶液平衡到RT。在温度从4°C到RT后形成水凝胶。获得澄清水凝胶。嗜热菌蛋白 酶活性在该制剂中受到抑制。
[0106] 表19 -嗜热菌蛋白酶/泊洛沙姆基亲水性分散液
[0107]
[0108] 过程：所用的泊洛沙姆-407/泊洛沙姆-124和泊洛沙姆-188从BASF (美国）获 得。通过在70°C加热并且混合所述泊洛沙姆直到均匀制得所述分散液。通过将所述酶悬浮 于泊洛沙姆-124中并且将它添加到先前冷却（到RT)的主相中来制备活性相。获得白色 乳膏。嗜热菌蛋白酶被发现在室温下6个月后在该制剂中不稳定，如通过酪蛋白消化法所 测量。
[0109] 实施例2
[0110](嗜热菌蛋白酶稳定性数据）
[0111] 在一个月时期里在室温（20°C到25°C )下储存的同时测试嗜热菌蛋白酶在表1的 嗜热菌蛋白酶/HEC水凝胶中的稳定性。为了比较目的，还利用除非离子型纤维素醚以外的 胶凝剂制备多种嗜热菌蛋白酶水凝胶。所述胶凝剂包括聚季按盐-HKUltragel 300、结冷 胶、cosmedia guar、黄原胶、阴离子型纤维素醚、卡波普、泊洛沙姆、polyox WSR和其它胶凝 剂。另外的水凝胶也被储存在室温（20°C到25°C )下。
[0112] 图1供了稳定性结果的概述。水凝胶（例如，HEC水凝胶）中的嗜热菌蛋白酶活 性可由于制剂赋形剂对酶活性的有利的或不利的影响而略微不同于预期活性。
[0113] 图1中呈现的数据表明，令人惊讶地，表1的嗜热菌蛋白酶/HEC水凝胶的嗜热菌 蛋白酶活性在一个月储存期里保持相同/没有降低。比较起来，不包含非离子型纤维素醚 胶凝剂的水凝胶中的嗜热菌蛋白酶活性在该时期里显著地降低（活性降低超过50%)。不 希望受理论限制，认为作为用于水凝胶的胶凝剂的纤维素醚的非离子结构和弱两亲（即， 纤维素醚的极性部分和非极性部分两者）特征产生有利于嗜热菌蛋白酶的稳定性的环境。
[0114] 对表1、表4和表5中例示的每种水凝胶进行进一步的稳定性研宄并且与多种嗜 热菌蛋白酶制剂进行比较，所述嗜热菌蛋白酶制剂包括乳膏（水包油乳液）、无水凝胶（泊 洛沙姆）、水凝胶（聚丙烯酸酯-卡波普）和多种其它水凝胶基质（例如，聚季铵盐-10)。 该研宄的结果提供于表1和表4-19的描述中。作为