黄连素在制备治疗t细胞淋巴瘤的药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及黄连素的一种新用途，具体地说，涉及黄连素在制备治疗T细胞淋巴 瘤的药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 黄连素（berberine，C2tlH18ClNO4)是一种古老的中药，能对抗多种病原微生物，临床 上主要用于治疗细菌性痢疾及肠胃炎。现在越来越多的研宄表明，黄连素对免疫系统、心血 管系统、神经系统等方面的疾病可以起到不同程度的改善作用，例如，相关研宄报道黄连素 具有抗心律失常、降低血压、正性肌力、保护缺血性脑损伤、降血糖、抗炎、抑制血小板聚集、 抗溃疡、解热等作用。由于黄连素还具备毒副作用轻、可长期使用的优势，提示其具有广阔 的临床应用前景。
[0003] T细胞淋巴瘤是一种罕见的非霍奇金病，致病因素如HTLV-和EB病毒在亚洲国家 多见，用免疫的方法测定细胞表型表现为T细胞免疫表面标记。
[0004] 目前关于黄连素在治疗T细胞淋巴瘤方面的作用还未见报道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供黄连素的新用途，以拓展黄连素的应用范围。
[0006] 为实现上述目的：
[0007] 本发明提供了黄连素在制备治疗T细胞淋巴瘤的药物中的应用。
[0008] 作为本发明的一个优选例，所述的T细胞淋巴瘤是T淋巴母细胞淋巴瘤或皮肤T 细胞淋巴瘤。
[0009] 本发明提供了黄连素在制备药物中的应用，所述的药物用于抑制动物体内T细胞 淋巴瘤的生长。
[0010] 本发明提供了黄连素在制备药物中的应用，所述的药物用于抑制动物体内T细胞 淋巴瘤体积的增大。
[0011] 本发明还提供了黄连素在制备药物中的应用，所述的药物用于抑制T细胞淋巴瘤 细胞株的增殖。
[0012] 作为本发明的一个优选例，所述的T细胞淋巴瘤细胞株是人T-LBL细胞株Jurkat 或CTCL细胞株H9。
[0013] 本发明优点在于：
[0014] 1、提供了黄连素在制备治疗T细胞淋巴瘤的药物中的应用。本发明通过体外细胞 实验以及动物体内实验证实了黄连素有抑制T淋巴瘤细胞株增殖及荷瘤小鼠淋巴瘤生长 的作用，且抑制作用十分显著，提示黄连素可作为治疗T细胞淋巴瘤的有效药物，且其药物 安全性已经受到了长期的验证，因此本发明为临床T细胞淋巴瘤的治疗提供了一种新的方 案。
[0015] 2、提供了黄连素用于制备抑制动物体内T细胞淋巴瘤生长的药物中的应用，尤其 是抑制动物体内T细胞淋巴瘤体积的增大。
[0016] 3、提供了黄连素在制备抑制T细胞淋巴瘤细胞株增殖的药物中的应用，可用于研 宄T细胞淋巴瘤细胞株的筛选和耐药性等研宄。
【附图说明】
[0017] 图I.Berberine对小鼠移植肿瘤的抑制率。横坐标为时间，纵坐标为肿瘤体积，单 位mm3 〇
【具体实施方式】
[0018] 下面结合附图对本发明提供的【具体实施方式】作详细说明。
[0019] 1、材料和方法
[0020] I. 1 试剂
[0021] Berberine 购自 Sigma-Aldrich 公司。
[0022] 1. 2细胞培养
[0023]人T-LBL细胞株Jurkat、CTCL细胞株H9均购自美国标准生物品收藏中心 (AmericanTypeCultureCollection)，以 3X105/ml密度接种于 10%热灭火胎牛血清的 RPMI1640培养基中，置37°C、5%CO2，95%湿度的培养箱中培养，每48h换液，试验采用对数 生长期细胞。
[0024] 1. 3细胞增殖毒性检测
[0025] 将密度为3XIO5Ail的对数生长期细胞悬液接种于96孔板中。Berberine终浓 度分别设置为1，5,10,50,100yM处理细胞，设置不加药空白组，每个药物浓度设置三组复 孔。48h后每孔加入20yIMTT(5mg/ml)，继续培养4h后，2000rpm/min离心5min，弃上清。 每孔加入200ylDMSO使结晶充分溶解。酶标仪测定在490nm波长下吸光光度值。计算 Berberine处理细胞的增殖抑制率：生长抑制率=(1 一药物处理组吸光度值/对照组吸光 度值）X100%。
[0026] 1. 4淋巴瘤小鼠模型的建立
[0027] 4周龄雌性BALB/c裸鼠购买自上海实验动物中心，饲养于屏障设施动物层流室， 饲养条件为：温度24~26°C，相对湿度40~60%。室内采用人工照明，自由采食，饲料和 水均经高温消毒处理。每只裸鼠的右侧肩部皮下接种4XIO7Jurkat细胞，接种细胞后每两 天观察肿瘤生长情况，约10天左右在注射部位可见肿瘤形成。根据实验设计将荷瘤小鼠进 行随机分组，分为两组即对照组及berberine治疗组，其中对照组注射相同量的生理盐水， berberine治疗组腹腔注射相同量的berberine，剂量为10mg/kg/2day。所有小鼠均观察 21天，肿瘤的体积计算公式为V= 0. 5ab2。
[0028] 2、结果
[0029] 2.IBerberine显著抑制淋巴瘤细胞增殖
[0030] 用MTT法分别检测不同浓度berberine(1，5,10, 50,100yM)单药对T-LBL细胞株 JurkatXTCL细胞株H9的抑制率，结果提示随着药物浓度增加，berberine对以上淋巴瘤细 胞株增殖的抑制作用逐渐增强。
[0031] 表I.Berberine对淋巴瘤细胞株的抑制率
[0032]
[0033] 2. 2Berberine显著抑制小鼠移植肿瘤的生长
[0034] 我们进一步通过小鼠移植肿瘤模型对berberine在体内抗淋巴瘤的作用机制进 行深入研宄。接种Jurkat细胞后，裸鼠接种部位形成皮下移植肿瘤。实验共分为两组，分 别为对照组和berberine处理组。从肿瘤直径约为0. 5cm时予以测量并且记录（图1)，发 现对照组与berberine处理组相比肿瘤体积增长快，至21天时对照组与berberine处理组 肿瘤体积大小相比具有显著性差异（P〈〇. 05)。以上结果提示berberine可以显著抑制小鼠 移植瘤的生长。表2Con和Berberine组淋巴瘤小鼠模型的肿瘤体积（单位：mm3)
[0035]
[0036] 以上细胞实验和动物实验表明berberine有显著的抑制T淋巴瘤细胞株增殖及荷 瘤小鼠淋巴瘤生长的作用，可作为临床上治疗T细胞淋巴瘤的有效药物。T细胞淋巴瘤对现 有化疗方案经常耐药，治疗效果不理想。寻找新的有效的治疗药物和方法显得尤为的重要。 况且，berberine是已经上市几十年的老药，药物的安全性已经受到了长期的验证。我们的 研宄拓展了berberine的应用范围，结果提示berberine极有潜力会成为临床上有效并且 安全的新的抗T细胞淋巴瘤的治疗药物，具有极大的社会价值和经济价值。
[0037] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人 员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为 本发明的保护范围。
【主权项】
1. 黄连素在制备治疗T细胞淋巴瘤的药物中的应用。2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的T细胞淋巴瘤是T淋巴母细胞淋巴 瘤或皮肤T细胞淋巴瘤。3. 黄连素在制备药物中的应用，其特征在于，所述的药物用于抑制动物体内T细胞淋 巴瘤的生长。4. 黄连素在制备药物中的应用，其特征在于，所述的药物用于抑制动物体内T细胞淋 巴瘤体积的增大。5. 黄连素在制备药物中的应用，其特征在于，所述的药物用于抑制T细胞淋巴瘤细胞 株的增殖。6. 根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的T细胞淋巴瘤细胞株是人T-LBL细 胞株Jurkat或CTCL细胞株H9。
【专利摘要】本发明涉及黄连素在制备治疗T细胞淋巴瘤的药物中的应用。本发明应用两种T细胞淋巴瘤细胞株进行体外实验，另外建立了T细胞淋巴瘤小鼠模型并进行了体内实验，证实了黄连素有抑制T淋巴瘤细胞株增殖及荷瘤小鼠淋巴瘤生长的作用，且抑制作用十分显著，提示黄连素可作为治疗T细胞淋巴瘤的有效药物，且其药物安全性已经受到了长期的验证，因此本发明为临床T细胞淋巴瘤的治疗提供了一种新的方案。
【IPC分类】A61P35/00, A61K31/4375
【公开号】CN104906088
【申请号】CN201510083058
【发明人】王黎, 赵维莅, 熊杰, 郑重, 纪濛濛
【申请人】上海交通大学医学院附属瑞金医院
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年2月16日