二甲双胍用于制备治疗柯萨奇病毒b3所致病毒性心肌炎药物的用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药领域，特别涉及一种二甲双胍用于制备治疗柯萨奇病毒B3所致 病毒性心肌炎疾病的药物的用途。
【背景技术】
[0002] 柯萨奇病毒（CVB)属于小RNA病毒科（Picornaviridae)肠道病毒属 (Enterovirus)，病毒颗粒为二十面体，立方对称呈球形，无包膜，直径约25_30nm，病毒衣壳 包绕着一条单股正链RNA。柯萨奇病毒B组（coxsackievirusB)具有高度亲心肌性和流行 性，共包括6种血清型（CVB1-CVB6)，其中柯萨奇病毒B3被认为是引起心肌炎和扩张型心肌 病最为常见的病原体，回顾性研宄表明50%以上的病毒性心肌炎和25 %的心肌病与之有 关。
[0003] 病毒性心肌炎（viralmyocarditis)是指嗜心性病毒感染引起的以心肌炎性病变 为主的疾病，可引起急性心功能不全，且约有1/3的患者进一步发展为慢性心肌炎和扩张 型心肌病，是引发心力衰竭的常见病因之一。近年来该病发病率呈上升趋势，已成为危害青 少年健康的常见疾病之一，但迄今尚无有效的疫苗以及特异性治疗方法。
[0004] 目前对于病毒性心肌炎的临床治疗，还存在诸多不足。现临床主要采用抗病毒和 调节细胞免疫功能疗法。其中临床抗病毒药物包括阿昔洛韦、病毒唑和更昔洛韦等，在感 染早期，这些抗病毒药物能有效抑制病毒复制，减轻心肌损伤，提高生存率，但是，在感染后 期，其疗效有限，因此，目前临床应用的抗病毒药物的疗效均不够满意。在细胞免疫功能调 节方面，目前临床上使用的药物包括：丙种球蛋白、人白细胞干扰素等，虽然这些药物能减 弱免疫反应，清除病毒，改善左心室功能，提高生存率，但仍存在个体疗效差异大，有一定副 作用，成本过高等问题。因而，筛选和研制治疗病毒性心肌炎的新药具有重要意义。
[0005] 二甲双胍（Metformin，其分子式为C4H11N5 ?HC1，分子量为165. 62)作为临床上广 泛应用的治疗2型糖尿病的降糖药物，近年来不断有研宄表明其还具有一定的保护心血管 及抗肿瘤的作用，但对于抗柯萨奇病毒B3及所致病毒性心肌炎的活性尚未见报道。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种二甲双胍用于制备治疗柯萨奇病毒B3所致病毒性心肌 炎疾病药物的用途。采用本发明所述药物，治疗柯萨奇病毒B3所致病毒性心肌炎疾病，具 有抗CVB3病毒复制的作用，抑制心肌炎症及纤维化效果明显，可用于制备治疗病毒性心肌 炎的药物，该副作用小，疗效高，在目前临床上治疗CVB3所致病毒性心肌炎尤其是在感染 后期，治疗的疗效不够满意的情况下，应用前景良好。
[0007] 本发明的技术方案是：
[0008] 二甲双胍在制备治疗柯萨奇病毒B3所致病毒性心肌炎疾病的药物中的用途。
[0009] 本发明所述药物采用口服方式给药，对于成人而言，用药量为每公斤体重每天 5 ~IOmg0
[0010] 本发明的有益效果是：
[0011] (1)药理活性方面
[0012] 申请人的动物实验证明，二甲双胍显著改善CVB3所致病毒性心肌炎小鼠生存率， 心脏组织实验方面，二甲双胍能明显的抑制炎症细胞浸润和组织坏死，具有抗CVB3作用和 抑制其复制的作用，血清样本用全自动生物分析仪进行检测，结果表明，二甲双胍具有抑制 心肌酶活性的作用、保护心肌功能的作用，体外抗CVB3活性作用表明二甲双胍具有显著的 抑制病毒蛋白表达水平的作用。
[0013] ⑵药学方面
[0014] 二甲双胍为双胍类口服降血糖药，其本身理化性质稳定，药理作用广泛，毒性和副 作用较小。
【附图说明】
[0015] 图1为二甲双胍改善CVB3所致病毒性心肌炎小鼠生存率的曲线；
[0016] 图2为二甲双胍改善CVB3所致病毒性心肌炎小鼠心脏功能（EF为射血分数，LV mass为左心室质量），*表示p〈0. 05 ;
[0017] 图3为二甲双胍抑制CVB3感染所致炎症细胞浸润的结果；
[0018] 图4为小鼠心肌组织切片H&E染色结果，图中Mock为正常对照组，CVB3为CVB3感 染组，CVB3+Met为二甲双胍治疗组；
[0019] 图5为小鼠心肌组织切片Masson染色结果；
[0020] 图6为二甲双胍抑制CVB3在心肌组织中的复制，图为dsRNA染色结果；
[0021] 图7为二甲双胍抑制小鼠心肌组织中CVB3衣壳蛋白VPlRNA表达量（注表示 p<0. 05)；
[0022] 图8为Westernblot检测二甲双狐体外抗CVB3的作用，其中A图为Westernblot 检测条带结果，0-actin为内参对照；B图为对A图条带进行灰度扫描定量分析结果（注： * 表示p〈〇. 05);
[0023] 图9为qRT-PCR检测二甲双胍体外抗CVB3作用（注表示p〈0. 05)。
【具体实施方式】
[0024] -、材料和试剂
[0025] 1.动物、病毒株
[0026] BALB/c小鼠，雄性，4-6周龄，购买于第三军医大学大坪医院动物中心；
[0027] 柯萨奇病毒B3(Nancy株）购买于中国科学院武汉病毒研宄所；
[0028] Hela细胞株购于中国科学院上海生命科学研宄院细胞资源中心。
[0029] 2?主要试剂
[0030]
[0035] 二、实验方法
[0036] 1.病毒性心肌炎模型的建立
[0037]BALB/c小鼠，雄性，4-6周龄，适应性喂养3天。实验分为正常对照组、病毒性心肌 炎模型组、二甲双胍治疗组。小鼠腹腔注射0.1mlCVB3病毒液（3X105PFU/ml)，次日分别 给予灌胃PBS(正常对照组、病毒性心肌炎模型组）、二甲双胍（50mg/kg)(转算成人每日适 应剂量是：5-10mg/kg)。连续灌胃7天，7天后每周灌胃3次，21天时进行心功能检测，28天 处死小鼠，收集心肌组织和血液标本。
[0038] 2.小鼠心肌功能检测
[0039] 小鼠给药21天（感染CVB3后连续给药7天，7天后每周给药3次），小鼠用7% 水合氯醛按3ml/kg经腹腔注射麻醉，固定，用Vev〇2100高分辨率超声系统经小鼠胸廓进行 超声心动图（30MHz，100帧/秒），经测量计算得到射血分数（EF)和左心室质量（LVmass) 的数值。
[0040] 5.免疫组化染色方法
[0041] 小鼠心脏组织用4%多