专利名称：抗柯萨奇b病毒中药制剂有效部位的组合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种复方中药制剂的有效部位的组合物及其制备方法，特别是抗柯萨 奇B病毒中药制剂有效部位的组合物及其制备方法。
背景技术：
柯萨奇病毒是一种在自然界比较常见的病毒，可经呼吸道和消化道感染人体，常 导致呼吸道感染、肠道感染、无菌性脑膜炎、心肌炎、心包炎等疾病。同时，宫内柯萨奇病毒 感染也是诱发先天性心脏病的高危因素之一。本世纪国内外数次柯萨奇病毒大流行中小儿 和青壮年易感，尤其是婴幼儿，且多累及心脏。西医对病毒性心肌炎无特异性治疗，一般大 剂量高浓度维生素C缓慢静脉推注，促进心肌病变恢复。多年来常用的如极化液、能量合剂 及ATP等促进缺血心肌细胞的能量合成，稳定受损心肌细胞膜，改善心肌泵功能，减少脂质 过氧化物生成，改善心肌缺血，减轻心肌所致的组织损伤。但均因难进入心肌细胞，不能充 分发挥保护心肌的作用。尽管多种单味中药具有抗柯萨奇病毒B的作用，但是现供临床使 用的均为中药原药材，没有固定处方制剂，导致服用剂量较大，药材浪费。中国发明专利 ZL200310101631.4、名称“抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊及其制备方法”解决了上述问题， 其中药组分重量百分比如下西洋参15—30%、莱菔子5 —15%、王不留行4一10%、五味子4一 15%、麦冬5—20%、丹皮10—25%、黄芪30— 40%。但是背景技术存在如下问题中药服用剂 量大，贮存不便，储存时间短。
发明内容
本发明目的是提供一种抗柯萨奇B病毒中药制剂有效部位的组合物及其制备方 法，既保留复方中各药材成分的综合作用，有利于发挥中药的多效性，又去除了组织物质和 部分无效成分，延长了储存期、提高了纯度、减小了服用量，质量控制的再现性提高，解决背 景技术存在的上述问题。本发明目的是通过下面的技术方案实现的
一种抗柯萨奇B病毒中药制剂有效部位的组合物，包含总多糖部位、总黄酮部位、总皂 苷部位之一或相互组合；选择中药西洋参、五味子、麦冬、黄芪、丹皮、莱菔子、王不留行，洗 净，粉碎成粗粉，可全部通过20目的二号药筛，但能通过65目的四号药筛的量不超过40%; 按重量百分比配制，各中药组分的重量百分比如下西洋参30-40%、五味子4-15%、麦冬 5-20%、黄芪30-40%、丹皮10-25%、莱菔子5_15%、王不留行4-10% ；中药粗粉按下列三 种方式，分别提取总多糖部位、总黄酮部位、总皂苷部位；
①提取总多糖部位中药粗粉加入6-10倍量90-95%乙醇浸泡0. 5-1小时后，回流1_2 小时，6-10层纱布过滤，药渣用6-10倍水煎煮2-4次，每次2-4小时，合并煎液浓缩至 1-0. 5:1 ；将浓缩液用90-95%乙醇调含醇量至60-80%，过滤，干燥沉淀得到粉末，为总多糖部位；
②提取总黄酮部位中药粗粉加入6-10倍量70-80%乙醇浸泡0.5-1小时后，回流2_4 小时，6- 10层纱布过滤，药渣用4-8倍80%乙醇回流2-3次，每次2_4小时。旋转蒸发浓缩 提取液至1-0. 5:1，用沸程30-60° C石油醚等体积萃取3-6次脱脂，用乙酸乙酯等体积萃 取3-6次，旋转蒸发萃取液，干燥后得到粉末，为总黄酮部位；
③提取总皂苷部位中药粗粉加入6-10倍量70-80%乙醇浸泡0.5-1小时后，回流2_4 小时，6- 10层纱布过滤，药渣用4-8倍80%乙醇回流2-3次，每次2_4小时；旋转蒸发浓缩 提取液至1-0. 5:1，用沸程30-60° C石油醚等体积萃取3-6次脱脂，用水饱和正丁醇等体 积萃取3-6次，旋转蒸发萃取液，干燥后得到粉末，为总皂苷部位。所得粉末组合成有效部位群与适宜的辅料制备成临床所需剂型使用。—种抗柯萨奇B病毒中药制剂有效部位的组合物制备方法，包括如下步骤选择 中药西洋参、五味子、麦冬、黄芪、丹皮、莱菔子、王不留行，洗净，粉碎成粗粉，可全部通过 20目的二号药筛，但能通过65目的四号药筛的量不超过40%;按重量百分比配制，各中药 组分的重量百分比如下西洋参30-40%、五味子4-15%、麦冬5-20%、黄芪30_40%、丹皮 10-25%、莱菔子5-15%、王不留行4-10% ；中药粗粉按下列三种方式，分别提取总多糖部 位、总黄酮部位、总皂苷部位，总多糖部位、总黄酮部位、总皂苷部位之一或相互组合为抗柯 萨奇B病毒中药制剂有效部位的组合物；
①提取总多糖部位中药粗粉加入6-10倍量90-95%乙醇浸泡0.5-1小时后，回流1_2 小时，6-10层纱布过滤，药渣用6-10倍水煎煮2-4次，每次2-4小时，合并煎液浓缩至 1-0. 5:1 ；将浓缩液用90-95%乙醇调含醇量至60-80%，过滤，干燥沉淀得到粉末，为总多糖 部位；
②提取总黄酮部位中药粗粉加入6-10倍量70-80%乙醇浸泡0.5-1小时后，回流2_4 小时，6- 10层纱布过滤，药渣用4-8倍80%乙醇回流2-3次，每次2_4小时。旋转蒸发浓缩 提取液至1-0. 5:1，用沸程30-60° C石油醚等体积萃取3-6次脱脂，用乙酸乙酯等体积萃 取3-6次，旋转蒸发萃取液，干燥后得到粉末，为总黄酮部位；
③提取总皂苷部位中药粗粉加入6-10倍量70-80%乙醇浸泡0.5-1小时后，回流2_4 小时，6- 10层纱布过滤，药渣用4-8倍80%乙醇回流2-3次，每次2_4小时；旋转蒸发浓缩 提取液至1-0. 5:1，用沸程30-60° C石油醚等体积萃取3-6次脱脂，用水饱和正丁醇等体 积萃取3-6次，旋转蒸发萃取液，干燥后得到粉末，为总皂苷部位。较佳的实施方式
提取总多糖部位中药粗粉加入8倍量95%乙醇浸泡0. 5小时后，回流1. 5小时，8层 纱布过滤，药渣用8倍水煎煮2次，每次2小时，合并煎液浓缩至0. 5 1。将浓缩液用95%乙 醇调含醇量至60%，过滤，干燥沉淀得到总多糖部位。提取总黄酮部位中药粗粉中药粗粉加入8倍量80%乙醇浸泡0. 5小时后，回流2 小时，8层纱布过滤，药渣用6倍80%乙醇回流2次，每次2小时；旋转蒸发浓缩提取液至 0. 5:1，用沸程30-60° C石油醚等体积萃取3次脱脂，用乙酸乙酯等体积萃取3次，旋转蒸 发萃取液，干燥后得到总黄酮部位。提取总皂苷部位中药粗粉中药粗粉加入8倍量80%乙醇浸泡0. 5小时后，回流2 小时，8层纱布过滤，药渣用6倍80%乙醇回流2次，每次2小时；旋转蒸发浓缩提取液至0. 5:1，用沸程30-60° C石油醚等体积萃取3次脱脂，用水饱和正丁醇等体积萃取3次，旋 转蒸发萃取液，干燥后得到总皂苷部位。本发明将西洋参、五味子、麦冬、黄芪、丹皮、莱菔子、王不留行配伍，可制备成抗柯 萨奇B病毒的各种剂型，使药物有效成分利用率明显提高。西洋参性寒，味甘微苦，人肺、脾经。具有补气养阴，清火除烦，养为生津之功效。五味子味酸、甘，性温，归肺，心、肾经。具有收敛固涩，益气生津，补肾宁心之功 效。麦冬味甘微苦，性微寒，归心、肺、胃经。具有养阴生津，润肺清心之功效。黄芪味甘，性微温，归肺、脾、肝、肾经。有益气固表，敛汗固脱，托疮生肌，利水消肿 之功效。丹皮味苦、辛，性微寒，归心、肝、肾经。具有清热凉血，活血散瘀之功效。莱菔子味辛、甘，性平。归肺、脾、胃经。具有消食除胀，降气化痰之功效。王不留行味苦，性平。归肝，胃经。有活血通经，下乳消痈，利尿通淋之功效。全方可降低心肌对病毒的敏感性，提高机体免疫力和抗病毒能力有强心、降低氧 耗、纠正心律失常等作用。本发明具有疗效明确、高效低毒、服用方便等特点，抗柯萨奇B病毒效果显著。本发明克服现有的胶囊服用剂量大、贮存不便、时间短的缺点，通过对全方原料药 材用适宜的溶剂提取分离并筛选出药效最高部位组合，既保留复方中各药材成分的综合作 用，有利于发挥中药的多效性，又去除了组织物质和部分无效成分，活性明显提高，而且可 减少服用量，增强药物顺应性，质量控制的再现性提高，方便贮藏和运输。本发明的方法工 艺简单安全，所得有效部位组合药效强于原方生产成本低，适于工业化生产，制备出的有效 部位为活性成分可制成各种药物剂型，如软胶囊剂、片剂、滴丸、注射剂、缓控释剂等等。
具体实施例方式以下通过实施例对本发明作进一步说明。在实施例中，抗柯萨奇B病毒中药制剂选择中药西洋参、五味子、麦冬、黄芪、丹 皮、莱菔子、王不留行，洗净，粉碎成粗粉(可全部通过二号药筛，但能通过四号药筛的量不 超过40%)；按重量百分比配制，各中药组分的重量百分比如下西洋参30-40%、五味子 4-15%、麦冬5-20%、黄芪30-40%、丹皮10_25%、莱菔子5-15%、王不留行4-10%；加入8 倍量95%乙醇浸泡0.证后，回流1. 5h, 8层纱布过滤，药渣用8倍水煎煮2次，每次池，合并 煎液浓缩至0. 5 1。将浓缩液用95%乙醇调含醇量至60%，过滤，干燥沉淀得到总多糖部位； 加入8倍量80%乙醇浸泡0.证后，回流池，8层纱布过滤，药渣用6倍80%乙醇回流2次， 每次池。旋转蒸发浓缩提取液至0.5:1，用沸程30-60° C石油醚等体积萃取3次脱脂，用 乙酸乙酯等体积萃取3次，旋转蒸发萃取液，干燥后得到总黄酮部位；用水饱和正丁醇等体 积萃取3次，旋转蒸发萃取液，干燥后得到总皂苷部位；同时各部位按折合投料量等量两两 组合。本发明通过动物实验研究，得到意想不到的治疗效果，实验报告如下 1方法
1. 1实验动物健康清洁级雄性昆明种小鼠90只，体重18_22g，购于北京实验动物有限公司动物许可证号SCXK (京)20090819。1. 1实验方法小鼠随机分为9组(每组各10只)(1)正常对照组生理盐水 (NS) 0. 2 mL / IOg灌胃，1日1次，共7d，于第7d灌胃2h后皮下注射NS10mg/kg ；⑵缺 血模型组NS灌胃同正常组，于第7d灌胃池后异丙肾上腺素皮下注射10mg/kg;(3)抗柯 萨奇B病毒中药制剂组抗柯萨奇B病毒中药制剂50mg/kg连续灌胃7d。于第7d给药池 后皮下注射异丙肾上腺素lOmg/kgJh后再灌药1次。各组灌胃容量为0.2 mL / IOg。(4) 阳性对照组地奥心血康(成都地奥制药集团有限公司，批号0911028)0. Ig /粒，临用前将 胶囊去壳，内容物用蒸馏水配成0. 98%的地奥心血康溶液)溶液0. 195g / (kg ·(!)，灌胃 容量为0. 2 mL / 10 g，连续灌胃7d。于第7d给药池后皮下注射异丙肾上腺素10mg/kg， 2h后再灌药1次。给予异丙肾上腺素或生理盐水他小时后，经股动脉采血，分离血清4°C 保存，待测CPK、LDH、SOD、MDA活性。1. 3检测指标 CK、LDH、SOD、MDA按试剂盒提供的方法检测。ι. 4统计分析mmmm 士标}(i 士s) ，各 M棚单因素方^>析，用 t检
验进行组间均数的比较。经SPSS软件处理，P<0. 05表示差异有统计学意义。2 结果
注射异丙肾上腺素后约他，与正常对照组相比，模型组小鼠血清中LDH、CK和MDA 含量明显升高、SOD含量显著下降(P<0. 05)，与模型组相比，阳性对照组和抗柯萨奇B病毒 中药制剂各组的血清中LDH、CK和MDA含量明显下降同时SOD含量显著升高(P<0. 0 。其 中多糖+黄酮组差异最显著(P<0. 01)。(见表1)
表1抗柯萨奇B病毒中药制剂对急性心肌缺血小鼠血清酶学的影响(n=10，^ 士s)
实施例二 死亡保护 1方法
1. 1实验动物昆明种小鼠90只，体重18-22g，购于北京实验动物有限公司动物许可证号SCXK (京)20090819。1.2实验方法①稀释毒种取CVB病毒株，以无菌生理盐水稀释成浓度约为15 个LD50的病毒液，冰浴保存；②攻毒小鼠随机分为9组(每组各10只)分别为正常组、 模型组、阳性药物组(病毒唑)、抗柯萨奇B病毒中药制剂组，除正常组外，其余各组腹腔注射 约0.05 mL/只。空白组以等量蒸馏水代替；③给药各组均于攻毒前1 d开始以灌胃方式 给药。各药物组灌胃量为0.3 mL/次，1次/d。空白及模型组则灌以等量蒸馏水代替，共 12d。④观察逐日观察动物发病及死亡数，共观察15 d。并根据观察结果计算死亡保护率 与延长生命率。1.3统计分析经SPSS软件处理，存活时间用秩和检验，存活率用X2检验。 P<0. 05表示差异有统计学意义。2 结果
对病毒所致小鼠死亡的保护作用小鼠感染病毒15 d内，抗柯萨奇B病毒中药制剂各 组动物的死亡数均小于病毒组且不大于阳性对照组，死亡保护率与病毒组比较有显著性差 异(P<0.(^)；小鼠的平均存活天数较病毒组明显延长，生命延长率与病毒组比较有显著性 差异(P<0.(^)，其中多糖+黄酮组差异最显著(P<0.01)。见表1。 表1抗柯萨奇B病毒中药制剂对染毒小鼠的死亡保护作用
权利要求
1.一种抗柯萨奇B病毒中药制剂有效部位的组合物，其特征在于包含总多糖部位、总 黄酮部位、总皂苷部位之一或相互组合；选择中药西洋参、五味子、麦冬、黄芪、丹皮、莱菔 子、王不留行，洗净，粉碎成粗粉，可全部通过20目的二号药筛，但能通过65目的四号药筛 的量不超过40% ；按重量百分比配制，各中药组分的重量百分比如下西洋参30-40%、五味 子4-15%、麦冬5-20%、黄芪30-40%、丹皮10_25%、莱菔子5_15%、王不留行4-10% ；中 药粗粉按下列三种方式，分别提取总多糖部位、总黄酮部位、总皂苷部位；①提取总多糖部位中药粗粉加入6-10倍量90-95%乙醇浸泡0.5-1小时后，回流1_2 小时，6-10层纱布过滤，药渣用6-10倍水煎煮2-4次，每次2-4小时，合并煎液浓缩至 1-0. 5:1 ；将浓缩液用90-95%乙醇调含醇量至60-80%，过滤，干燥沉淀得到粉末，为总多糖 部位；②提取总黄酮部位中药粗粉加入6-10倍量70-80%乙醇浸泡0.5-1小时后，回流2_4 小时，6- 10层纱布过滤，药渣用4-8倍80%乙醇回流2-3次，每次2_4小时。
2.旋转蒸发浓缩提取液至1-0.5:1，用沸程30-60° C石油醚等体积萃取3-6次脱脂， 用乙酸乙酯等体积萃取3-6次，旋转蒸发萃取液，干燥后得到粉末，为总黄酮部位；③提取总皂苷部位中药粗粉加入6-10倍量70-80%乙醇浸泡0.5-1小时后，回流2_4 小时，6- 10层纱布过滤，药渣用4-8倍80%乙醇回流2-3次，每次2_4小时；旋转蒸发浓缩 提取液至1-0. 5:1，用沸程30-60° C石油醚等体积萃取3-6次脱脂，用水饱和正丁醇等体 积萃取3-6次，旋转蒸发萃取液，干燥后得到粉末，为总皂苷部位。
3.一种抗柯萨奇B病毒中药制剂有效部位的组合物制备方法，其特征在于包括如下 步骤选择中药西洋参、五味子、麦冬、黄芪、丹皮、莱菔子、王不留行，洗净，粉碎成粗粉， 可全部通过20目的二号药筛，但能通过65目的四号药筛的量不超过40%;按重量百分比 配制，各中药组分的重量百分比如下西洋参30-40%、五味子4-15%、麦冬5-20%、黄芪 30-40%、丹皮10-25%、莱菔子5-15%、王不留行4-10% ；中药粗粉按下列三种方式，分别 提取总多糖部位、总黄酮部位、总皂苷部位，总多糖部位、总黄酮部位、总皂苷部位之一或相 互组合为抗柯萨奇B病毒中药制剂有效部位的组合物；①提取总多糖部位中药粗粉加入6-10倍量90-95%乙醇浸泡0.5-1小时后，回流1_2 小时，6-10层纱布过滤，药渣用6-10倍水煎煮2-4次，每次2-4小时，合并煎液浓缩至 1-0. 5:1 ；将浓缩液用90-95%乙醇调含醇量至60-80%，过滤，干燥沉淀得到粉末，为总多糖 部位；②提取总黄酮部位中药粗粉加入6-10倍量70-80%乙醇浸泡0.5-1小时后，回流2_4 小时，6- 10层纱布过滤，药渣用4-8倍80%乙醇回流2-3次，每次2_4小时。
4.旋转蒸发浓缩提取液至1-0.5:1，用沸程30-60° C石油醚等体积萃取3-6次脱脂， 用乙酸乙酯等体积萃取3-6次，旋转蒸发萃取液，干燥后得到粉末，为总黄酮部位；③提取总皂苷部位中药粗粉加入6-10倍量70-80%乙醇浸泡0.5-1小时后，回流2_4 小时，6- 10层纱布过滤，药渣用4-8倍80%乙醇回流2-3次，每次2_4小时；旋转蒸发浓缩 提取液至1-0. 5:1，用沸程30-60° C石油醚等体积萃取3-6次脱脂，用水饱和正丁醇等体 积萃取3-6次，旋转蒸发萃取液，干燥后得到粉末，为总皂苷部位。
5.根据权利要求2所述之抗柯萨奇B病毒中药制剂有效部位的组合物制备方法，其特 征在于提取总多糖部位中药粗粉加入8倍量95%乙醇浸泡0. 5小时后，回流1. 5小时，8层纱布过滤，药渣用8倍水煎煮2次，每次2小时，合并煎液浓缩至0. 5:1。
6.将浓缩液用95%乙醇调含醇量至60%，过滤，干燥沉淀得到总多糖部位； 提取总黄酮部位中药粗粉中药粗粉加入8倍量80%乙醇浸泡0.5小时后，回流2小时， 8层纱布过滤，药渣用6倍80%乙醇回流2次，每次2小时；旋转蒸发浓缩提取液至0. 5:1， 用沸程30-60° C石油醚等体积萃取3次脱脂，用乙酸乙酯等体积萃取3次，旋转蒸发萃取 液，干燥后得到总黄酮部位；提取总皂苷部位中药粗粉中药粗粉加入8倍量80%乙醇浸泡0.5小时后，回流2小时， 8层纱布过滤，药渣用6倍80%乙醇回流2次，每次2小时；旋转蒸发浓缩提取液至0. 5:1， 用沸程30-60° C石油醚等体积萃取3次脱脂，用水饱和正丁醇等体积萃取3次，旋转蒸发 萃取液，干燥后得到总皂苷部位。
全文摘要
本发明涉及一种复方中药制剂有效部位的组合物及其制备方法，特别是抗柯萨奇B病毒中药制剂有效部位的组合物及其制备方法。技术方案是包含总多糖部位、总黄酮部位、总皂苷部位之一或相互组合；中药粗粉按三种方式，分别提取总多糖部位、总黄酮部位、总皂苷部位。本发明克服现有的胶囊服用剂量大、贮存不便、时间短的缺点，对全方原料药材提取分离并筛选出药效最高部位组合，既保留复方中各药材成分的综合作用，有利于发挥中药的多效性，又去除了组织物质和部分无效成分，活性明显提高，而且可减少服用量，增强药物顺应性，方便贮藏和运输。本发明的方法工艺简单安全，适于工业化生产，制备出的有效部位为活性成分可制成各种药物剂型。
文档编号A61K36/8968GK102120000SQ20111005612
公开日2011年7月13日 申请日期2011年3月9日 优先权日2011年3月9日
发明者储金秀, 包巨太, 吕立勋, 吴范武, 李洁, 郑彩慧, 韩淑英, 马会霞 申请人:储金秀, 包巨太, 吕立勋, 吴范武, 李洁, 郑彩慧, 韩淑英, 马会霞