专利名称：抗柯萨奇病毒的药物组合物及其医药用途的制作方法
技术领域：
本发明属于药物组合物领域，具体地，涉及达玛垸型四环三路类化合物人参皂苷Rh4或20(5)-原人参三醇为活性成分的药物组合物， 其在制备抑制柯萨奇病毒B3和在制备治疗由柯萨奇病毒B3感染所 引起的病毒性心肌炎的药物中的应用。
技术背景柯萨奇病毒是正链RNA病毒，属于小RNA病毒科，肠道病毒 属，根据其生物学特点可分为A型和B型。柯萨奇病毒B型感染引 起特征性传染性胸肋痛，可合并脑膜脑炎、心肌炎、肝炎等。病毒性心肌炎主要由柯萨奇病毒B3 (CVB3)感染所致，在各年 龄组尤其青壮年中发病较高，是一常见的心血管疾病，由于病毒感染 后可在心肌长期存在，而目前缺乏有效的抗病毒治疗手段，因此被 CVB3感染的患者常表现为病程长、难治愈。西医对其治疗主要是使 用抗病毒药、免疫抑制剂等，，效果不甚理想。而近年来中药在病毒性 心肌炎的治疗中表现出一定优势，如黄芪注射液、双黄连粉针等均有 一定的抗病毒作用。药用植物三七药理作用广泛，尤其对心血管系统的疾病有较好的 疗效，但对由柯萨奇病毒B3 (CVB3)感染所致病毒性心肌炎的治疗 研究甚少。现有技术中未见有达玛烷型四环三萜类化合物人参皂苷 Rh4或20(5>原人参三醇用于病毒性心肌炎治疗的研究报道。发明内容本发明的目的是提供达玛垸型四环三萜类化合物人参皂苷Rh4 或20(5>原人参三醇为活性成分的药物组合物，其在制备抑制柯萨奇 病毒B3和在制备治疗由柯萨奇病毒B3感染所引起的病毒性心肌炎 的药物中的应用。为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下技术方案抗柯萨奇病毒B3的药物组合物，包括如下结构式所示的达玛垸 型四环三砲类化合物人参皂苷Rh4或20(5>原人参三醇和药用载体，ginsenoside Rh4 20(5>protopanaxatriol人参皂苷Rh4 20(5>原人参三醇。达玛烷型四环三萜类化合物人参皂苷Rh4或20C5)-原人参三醇在制备抑制柯萨奇病毒B3药物中的应用。达玛烷型四环三萜类化合物人参皂苷Rh4或20(5>原人参三醇在制备治疗由柯萨奇病毒B3引起的病毒性心肌炎的药物中的应用。本发明首先对经炮制过的三七进行了系统地化学成分研究，利用 多种分离手段，包括大孔树脂柱层析、正反相硅胶柱层析等，从中获 得了 28个达玛烷型四环三萜类化合物。之后以柯萨奇病毒B3毒株(CVB3)和Hela细胞为实验对象进 行药效试验。在Hela细胞上进行的体外抗病毒试验结果表明，其中2 个己知化合物表现出较好的活性，结果如下表1人参皂苷Rh4或20(5)-原人参三醇体外抗病毒试验化合物TC。(最大无毒浓度)Oig/mL)IC50 (半数抑制浓度)(吗/mL)人参皂苷RM (1)506.2520(5>原人参三醇(2)201.252个化合物人参皂苷Rh4或20(5)-原人参三醇均属于原人参三醇 型达玛垸型三萜，人参皂苷Rh4的17位侧链发生了一定变化，由于 脱羟基产生了一个双键，而20(S)-原人参三醇为苷元。基于上述结果， 本发明证实了 2种达玛垸型四环三萜类化合物可在制备抗柯萨奇病 毒药物中应用，并用于治疗病毒性心肌炎。达玛烷型四环三萜类化合物人参皂苷Rh4或20(5>原人参三醇的 一种医学用途，即用于治疗由柯萨奇病毒感染所引起的疾病。具体地 说是对炮制过的三七进行了系统地化学成分研究，从中获得了一系列 达玛烷型四环三萜类化合物，之后对其进行体外抗病毒活性筛选，其 中2个已知化合物具有良好的体外抑制柯萨奇病毒的活性，可用于制 备抗柯萨奇病毒药物。本发明提供了用于治疗由柯萨奇病毒感染所引起的疾病的药物 组合物，包括有效治疗剂量的作为活性成分的达玛烷型四环三萜类化 合物人参皂苷Rh4或20(5)-原人参三醇，以及药物学上可接受的载体。本发明所述的治疗由柯萨奇病毒感染所引起的病毒性心肌炎疾病的药物组合物，由人参皂苷Rh4或20(5>原人参三醇与药学上可接 受的载体制备的药物剂型包括片剂、胶囊、口服液、针剂或粉针剂。 由于人参皂苷Rh4或20(5)-原人参三醇可从三七及相关药材中提取分 离，而片剂、胶囊、口服液、针剂或粉针剂等药物剂型的制备也是本 领域的常规知识，因此，由人参皂苷Rh4或20(5)-原人参三醇与相应 载体制备的各种药物剂型也能够由本领域技术人员容易实现。上文所述的的药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载 体，例如稀释剂、赋形剂如水等，填充剂如淀粉、蔗糖等；黏合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；湿润剂如甘油； 崩解剂如琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂如季铵化合物；表面 活性剂如十六垸醇；吸附载体如高岭土和皂黏土；润滑剂如滑石粉、 硬脂酸钙和镁、以及和聚乙二醇等。另外还可以在组合物中加入其它 辅剂如香味剂、甜味剂等。本发明化合物可以组合物的形式通过口服、鼻吸入、直肠或肠胃 外给药的方式施用于需要这种治疗的患者。用于口服时，可将其制成 常规的固体制剂如片剂、粉剂、粒剂、胶囊等，制成液体制剂如水或 油悬浮剂或其他液体制剂如糖浆、酏剂等；用于肠胃外给药时，可将 其制成注射用的溶液、水或油性悬浮剂等。优选的形式是片剂、胶囊 和注射剂。本发明药物组合物的各种剂型可以按照药学领域的常规生 产方法制备。例如使活性成分与一种或多种载体混合，然后将其制成 所需的剂型。 '本发明的药物组合物优选含有重量比为0.1% 99.5%的活性成 分，最优选含有重量比为0.5% 95%的活性成分。本发明化合物的施用量可根据用药途径、患者的年龄、体重、所 治疗的疾病的类型和严重程度等变化，其日剂量可以是0.01 10mg/kg体重，优选0.1 5mg/kg体重。可以一次或多次施用。
具体实施例方式下面结合具体实例对本发明作进一步阐述，但不对其有任何限制。实施例1:2个活性化合物人参皂苷Rh4和20(5)-原人参三醇的提取分离和 结构鉴定5kg三七购于云南，将其粉碎成颗粒状后，用双层纱布包裹，置 于高压锅中，将温度控制在高温120。C，蒸制12小时后即得熟三七。 将熟三七用工业乙醇回流提取(5 L x 4)，减压回收溶剂浓縮后得总 浸膏778 g。将浸膏用水溶解，用D101大孔吸附树脂(90x8.5 cm) 进行柱层析，先用水洗脱至流出液Molish反应呈阴性，再用工业甲 醇洗脱即得粗皂苷440 g。将粗皂苷用硅胶(200-300目)约500 g拌样，经硅胶(200-300 目)干柱层析，以氯仿-甲醇-水(85:15:1)为流动相，共得9个组分。 组分l (13 g)经中压Z型硅胶柱层析，以氯仿-甲醇-水(90:10:1) 为流动相，得到组分6 (lg)，再经RP-8反相柱层析，流动相为甲 醇-水(65:35)，逐步增加甲醇浓度，得到第5、 6号流分，即为人参 皂苷Rh4(1) (252 mg)。粗皂苷经硅胶柱层析得到组分3 (21 g)，以石油醚-丙酮(11:1) 为流动相洗脱，逐步增加极性至(1:1)，得到组分ll、 12 (lg)。 将组分ll、 12用硅胶柱层析，以氯仿-甲醇(100:1.5)为流动相，得 到第2号流分。将此流分再经RP-18反相柱层析，流动相为甲醇-水 (75:25)，逐步增加甲醇浓度，得到第2号流分，即为20(5)-原人参 三醇(2) (23 mg)。2个活性化合物的结构鉴定主要利用核磁共振谱。H-NMR、 13C-NMR)、质谱(负离子FAB-MS)分析以及与已知文献对照来鉴定结构。人参皂苷Rh4 (1)白色无定形粉末，分子式为C36H6oOs，易溶于甲醇、吡啶等有机溶剂，FAB-MS (negative ion mode): 619 [M-ir，456[M - 1 - 163]_。 & NMR (pyridine-《，400 MHz): <5H0.80 (3H, s,Me-30)， L02(3H, s,Me-19)， 1.22 (3H, s, Me-18)， 1.55 (3H, s, Me-29)，1.59 (3H, s, Me-27)， 1.61 (3H, s, Me-26)， 1.80 (3H, s, Me-21)， 2.08 (3H,s, Me-28)， 5.04 (1H, d, /= 7.6 Hz, Glc H國l); 13C NMR (pyridine-d5， 100MHz):见表l。20(5>原人参三醇(2)白色无定形粉末，分子式为C3。H5204，易 溶于氯仿、甲醇、吡啶等有机溶剂，iHNMR(pyridine-^， 500 MHz): (5H0.95(3H, s,Me-30)， 0.99 (3H, s, Me-19)， 1.10 (3H, s, Me-18)， 1.41 (3H, s,Me-21)， 1.44 (3H, s, Me-29)， 1.62 (3H, s, Me-27), 1.65 (3H, s, Me隱26)， 1.99(3H, s,Me曙28); 13C NMR (pyridine-《-，100 MHz): 39.4 (t,C-l)， 28.1(t,C誦2)， 78.4(d,C-3)， 40.4(s,C-4)， 61.8(d,C-5)， 67.7(d，C画6)， 47.7(t, C-7)， 41.2(s, C-8)， 50.1(d, C誦9)， 39.4 (s, C-IO)， 32.1 (t,C隱ll)， 71.1 (d,C-12)， 48.2(d, C誦13)， 51.7 (s, C-14)， 31.4 (t, C-15)， 26.9 (t, C-16)， 54.8 (d, C-17)， 17.5 (q, C-18)， 17,6 (q, C-19)， 73.0 (s, C誦20)， 27.1 (q, C-21), 35.9 (t, C鍾22)， 23.0 (t, C-23)， 126.3 (d, C-24), 130.8 (s,C-25)， 25,9(q,C國26)， 17.7 (q, C-27)， 32.0 (q, C-28)， 16.5 (q, C誦29)， 17.1 (q, C誦30)。表1 人参皂苷Rh4 (l)的13C-NMR化学位移值"ppm， in C5D5N)No.1No.* 1No.1No.1139.81039.51917.82831.8227.51132.420140.12916.4378.51272.52113.23016.8440.51350.622123.4r106.0561.41450.92328.02,75.4680.01532.624123.83,79.7745.31628.925131.34,71.7841.41750.42625.85,78.2950.61817.42717.86,63.1实施例2:人参皂苷Rh4 (l)和20(5)-原人参三醇对Hela细胞的毒性测定试验Hela细胞经胰酶消化后，加入96孔培养板中，100pL/孔，待细 胞长成单层后弃生长液，每孔加100 ^L含样品维持液，每个稀释度 设四个复孔，同时设正常细胞对照组，置5y。C02孵箱中37。C培养， 每天观察细胞的变化，计算药物的最大无毒浓度TCo。结果人参皂苷Rh4和20(6)-原人参三醇对Hela细胞的最大无毒 浓度TCo为50 pg/mL，无明显的毒性作用。人参皂苷Rh4 (1)和20 (6)-原人参三醇的抗CVB3病毒药效学实验Hela细胞在96孔板培养至单层，弃生长液，将样品用维持液分 别稀释成六个浓度(在样品最大无毒范围内)，每孔加入含样品维持 液和病毒稀释液各50 pL，每个浓度设4个复孔，同时设阳性对照组、 病毒对照组和正常细胞对照组，置5y。C02孵箱中37。C培养，每天 观察细胞病变(CPE)的情况。待病毒对照组的细胞病变达到75%及 以上而正常细胞对照组正常时，观察并记录各孔的CPE，采用MTT 法检测样品对病毒的抑制率，并计算样品对CVB3的半数抑制浓度 (IC50)。表2人参皂苷Rh4和20(6>原人参三醇的抗CVB3病毒药效学实验化合物浓度([ig/ml)502512.5 6.253.131.56人参皂苷Rh4 (1)+++++ +++++++++20GS)-原人参三醇+++++ +++++++++结果人参皂苷Rh4和20(5>原人参三醇对CVB3的半数抑制浓度 (IC5o)为6.25pg/mL，有较好的体外活性。实施例4:片剂实施例1所得化合物人参皂苷Rh4或20(5>原人参三醇 10mg，乳糖180mg，淀粉55mg，硬脂酸镁5mg;制备方法将化合物、乳糖和淀粉混合，用水均匀湿润，把湿润 后的混合物过筛并干燥，再过筛，加入硬脂酸镁，然后将混合物压片，每片重250mg，化合物含量为10mg。实施例4:安瓿剂实施例1所得化合物人参皂苷Rh4或20(5>原人参三醇 2mg，氯化钠10mg;制备方法将化合物和氯化钠溶解于适量的注射用水中，过滤所 得溶液，在无菌条件下装入安瓿瓶中。 实施例5:胶囊剂实施例1所得化合物人参皂苷Rh4或20(5>原人参三醇10mg，乳糖187mg，硬脂酸镁3mg;制备方法将化合物与助剂混合，过筛，均匀混合，把得到的混合物装入硬明胶胶囊，每个胶囊重200mg，活性成分含量为10mg。
权利要求
1、抗柯萨奇病毒B3的药物组合物，包括如下结构式所示的达玛烷型四环三萜类化合物人参皂苷Rh4或20(S)-原人参三醇和药用载体，人参皂苷Rh420(S)-原人参三醇。
2、 权利要求1所述的达玛垸型四环三萜类化合物在制备抑制柯 萨奇病毒B3药物中的应用。
3、 如权利要求2所述，达玛垸型四环三萜类化合物在制备治疗 由柯萨奇病毒B3引起的病毒性心肌炎的药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及如下结构式所示的达玛烷型四环三萜类化合物人参皂苷Rh4和20(S)-原人参三醇为活性成分的药物组合物及其在医药领域中的应用。经体外药理实验证明其对柯萨奇病毒B3有较好的体外抑制活性，可用于治疗由柯萨奇病毒B3引起的病毒性心肌炎。
文档编号A61K31/704GK101322715SQ20081005872
公开日2008年12月17日 申请日期2008年7月25日 优先权日2008年7月25日
发明者廖彭莹, 张颖君, 杨崇仁, 东 王, 王一飞, 赢 裴 申请人:中国科学院昆明植物研究所