压蒸馏蒸去溶剂，得氯仿萃取浸膏281g、乙酸乙酯萃取浸膏46和正丁醇萃 取浸膏402g ; (6) 合并氯仿和乙酸乙酯层浸膏，转移至AB-8型大孔吸附树脂柱上； (7) 分别以水、体积比 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80% 和 95% 乙醇以 l-3BV/h 的流 速梯度洗脱，每个梯度洗脱5-8个柱体积，取50%-70%乙醇洗脱液； (8) 将50%-70%乙醇洗脱液合并，采用喷雾干燥技术干燥，进料速度5mL/min，进风口温 度150-160°C，出风口温度60-70°C，喷雾干燥得到产品。
[0021] 实施例二(本药物HPLC分析）： 取实施例1所述镇痛止血粉末(过三号筛）进行HPLC分析。
[0022] (1)色谱条件 色谱柱 Diamonsil C18 (250 mmX4.6 mm, 5 u m) 流动相A :乙腈 B :0. 75%冰醋酸水溶液 洗脱方式梯度洗脱 流速I. 0 mL/min 检测波长320 nm 柱温25 °C 进样量20 μ L 色谱运行时间为90分钟，梯度洗脱程序见表1，在此色谱条件下本发明镇痛止血药物 的HPLC色谱图见附图1。
[0023] (2)样品制备方法 约提取物约〇. 5g，精密称定，置锥形瓶中，加70%乙醇超声溶解，滤过，滤液置100 mL量 瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，用0. 45 μ m滤膜过滤，即得。
[0024] (3)测定结果 根据测定结果建立飞龙掌血提取物的色谱指纹图谱共有模式，标定了飞龙掌血提取物 中20个共有峰(见附图1 )，其中3号峰为绿原酸，7号峰为两面针碱，11号峰为毛两面针素， 12号峰为8-羟基-6-甲氧基香豆素，13号峰为白屈菜红碱，14号峰为茵芋碱，15号峰为 异茴芹香豆素，16号峰为茴芹香豆素，20号峰为珊瑚菜内酯，香豆素类成分约占提取物的 35. 2%，白屈菜红碱等生物碱类物质降低到2. 0%以下。
[0025] 实施例三（口服本药物后小鼠醋酸扭体镇痛实验）： (1)实验目的：通过小鼠醋酸扭体法对本发明镇痛止血药物的镇痛作用进行研究。
[0026] (2)实验对象：昆明种小鼠，雌雄各半。
[0027] (3)药材与仪器：本发明镇痛止血药物由实验室自制，加蒸馏水制成混悬液；秒 表。
[0028] (4)动物分组及给药：健康小鼠40只随机分为4组，每组10只，分为3% CMC-Na溶 液(模型组)、阿司匹林组、本发明药物低剂量组(折合生药量为〇. 65g/kg)和本发明药物高 剂量组(折合生药量为I. 3g/kg)，每日灌胃一次，连续给药5天，于第5天给药30分钟后腹 腔注射0. 6%醋酸（0. 2ml/只），观察20分钟内各组实验动物由醋酸引起的扭体次数，结果 如表2 : (5)实验结果：经one-way ANOVA统计分析结果表明：模型组、阿司匹林组及本发明药 物给药组小鼠开始扭体时间和扭体次数之间均存在显著性差异（/<〇. 05)，说明本发明镇痛 止血药给药组均表现出不同程度镇痛作用，其中以提取物高剂量给药组的镇痛作用最为显 著。
[0029] 实施例四（口服本药物止血活性实验）： (1)实验目的：采用断尾法测定小鼠出血时间，以小鼠给药前后出血时间的缩短为指 标，来判断药物止血的效果。
[0030] (2)实验对象：昆明种小鼠，雌雄各半。
[0031] (3)动物分组及给药：取健康小鼠40只，饲养一周后随机分为4组，即空白组、阳 性药组(云南白药)、本发明药物低剂量组和本发明药物高剂量组。参考文献给药剂量并根 据人每日服用飞龙掌血和云南白药胶囊的剂量进行折算，按体重分别按低剂量组(折合生 药量为〇. 65g/kg)和高剂量组(折合生药量为I. 3g/kg) 口服灌胃给药，阳性药云南白药的 给药剂量为〇. 2 g/kg，每日灌胃一次，连续7天，于第7天给药30分钟后采用毛细玻管法测 定小鼠凝血时间，次日采用剪尾法测定出血时间，结果见表3和表4。
[0032] (4)实验结果：实验结果采用统计学软件SPSS 17.0处理，所有数据经one-way ANOVA统计分析结果表明：空白组与阳性对照组及本发明镇痛止血药物给药组小鼠出血时 间（BT)值和小鼠凝血时间（CT)之间均存在显著性差异（/<0. 05)，说明本发明药物给药组 均表现出不同程度缩短小鼠出血时间和凝血时间的作用，其中以提取物高剂量给药组的止 血作用最为显著。
[0033] w: 5麵 实施例五(片剂的制备）： 取实施例1所述药物，加入淀粉、麦芽糖等药用辅料后采用湿法制粒，整粒后加入滑石 粉等润滑剂，按常规方法压片，即得本发明镇痛止血片。
【主权项】
1. 一种镇痛止血药物，其特征是以飞龙掌血（Toddalia asiatica ( L. ) Lam.)的根或 根皮为原料，分别经水和乙醇溶液提取，再经提纯和分离而制得的一种黄棕色固体颗粒，其 主要成份香豆素类化学物质含量不低于25%，生物碱类物质低于5%，其余为淀粉、糖类、鞣 制、萜类和留醇类物质，该药物具有良好的镇痛止血效果，镇痛效果堪比阿司匹林，止血效 果与云南白药相近。2. 根据权利要求1所述一种镇痛止血药物，其特征是所指的香豆素类化学物质包括茴 芹香豆素、异茴芹香豆素、毛两面针素、8-羟基-6-甲氧基香豆素和珊瑚菜内酯。3. 根据权利要求1所述一种镇痛止血药物，其特征是生物碱指白屈菜红碱毒性生物碱 物质。4. 根据权利要求1所述一种镇痛止血药物的制备方法，其特征是按下列步骤制备： (1) 将飞龙掌血（Toddalia asiatica ( L.) Lam.)的根或根皮洗净、瞭干、粉碎过80 目筛； (2) 分别加入水、乙醇溶液：10% (v/v)、20% (v/v)、30% (v/v)、40% (v/v)、50% (v/v)、 60% (v/v)、70% (v/v)、80% (v/v)和95% (v/v)回流提取3次，每次I小时，料液比第一次 为1 :12,第二和三次为1 :10 ; (3) 将全部提取液合并，过滤，取滤液减压蒸馏蒸去溶剂，得乙醇浸膏，向浸膏中加入 1-2倍重的40-60°C热水，搅拌悬浮，得悬浮液； (4) 依次用0. 5-2倍体积的石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取1-3次； (5) 分别减压蒸馏蒸去溶剂，得石油醚萃取浸膏、氯仿萃取浸膏、乙酸乙酯萃取浸膏和 正丁醇萃取浸膏； (6) 将全部浸膏转移至AB-8型大孔吸附树脂柱上； (7 )分别以水、体积比10%、20%、、30%、40%、50%、60%、70%、80%和95%的乙醇梯度洗脱，每 个梯度洗脱5-8个柱体积，取50%-70%乙醇洗脱液； (8)将50%-70%乙醇洗脱液合并，采用喷雾干燥技术干燥后得到产品。5. 根据权利要求4所述一种镇痛止血药物的制备方法，其特征是步骤（2)提取方式除 了回流提取外还包括煎煮提取、索式提取、渗辘提取或超临界流体萃取。6. 根据权利要求4所述一种镇痛止血药物的制备方法，其特征是步骤（8)干燥方法还 包括常温减压干燥、冷冻干燥和真空微波干燥。7. 根据权利要求1所述一种镇痛止血药物的应用，其特征是用于制备镇痛止血的药物 或药剂。8. 根据权利要求7所述一种镇痛止血药物的应用，其特征是所指的药剂包括外用散 剂、巴布剂，口服颗粒剂、胶囊剂或片剂。9. 根据权利要求7所述一种镇痛止血药物的应用，其特征是可将本药物与三七提取物 或者市售三七总皂苷等具有活血化淤作用的植物药提取物制成复方镇痛、止血药物。
【专利摘要】本发明一种镇痛止血药物及其制备方法和应用提供了一种以传统民族药物飞龙掌血（<i>Toddalia？asiatica</i>？(？L.)？Lam．）为原料深加工所得的镇痛止血药物及其制备方法和应用，属于中药深加工技术领域，飞龙掌血分别经水和乙醇溶液提取，再经提纯和分离而制得的一种黄棕色颗粒，其主要成份香豆素类化学物质含量不低于25%，生物碱类物质低于5%，其余主要为淀粉、糖类、鞣制、萜类和甾醇类物质。该药物具有良好的镇痛止血效果，并可应用于符合现代制剂工艺的药物及制剂，药效学研究表明其镇痛效果堪比阿司匹林，止血效果与云南白药相近，本发明工艺简便、操作方便、可工业化生产，市场前景良好。
【IPC分类】A61P7/04, A61P29/00, A61K36/75, A61K125/00
【公开号】CN105012455
【申请号】CN201510508482
【发明人】刘志刚, 谢晓林
【申请人】贵阳学院
【公开日】2015年11月4日
【申请日】2015年8月19日