为15mg/kg。整个实验过程中保证小鼠 每日正常饮食，每两天对小鼠进行称重，并使用数显游标卡尺测量荷瘤小鼠肉瘤的长径（A) 与短径（B)，按公式肿瘤体积V = AXB2/2计算肿瘤体积。记录的数据显示，静脉注射组： Tf-CuS/AS 组，Tf-CuS/AS-laser 组的抑瘤率分别为 38. 98%，61. 14%;癌周注射组：Tf-CuS 组、Tf-CuS-Iaser 组、AS 组、AS-Iaser 组、AS/CuS 组、AS/CuS-laser 组、AS/Tf-CuS 组、 AS/Tf-CuS-laser 组各组的抑瘤率分别为 8. 32 %，30. 24 %，19. 27 %，22. 87 %，22. 83 %， 39. 61 %，46. 92 %，74. 89%。结果表明，癌周注射组Tf-CuS/AS-laser组的药效显著，说明 Tf-CuS/AS癌周注射肿瘤靶向产生的DMR效应和808nm激光热疗联合可以显著增强肿瘤的 治疗效果。
[0047] 实验表明，本发明具有以下突出的有益技术效果：
[0048] (1)应用癌周注射的给药方式，产生DMR效应，可以靶向将抗癌药物青蒿琥酯和光 热试剂硫化铜传输到癌症部位，从而进一步提高治疗效果，减小对正常组织和细胞的毒副 作用。
[0049] (2)第一次将CuS纳米颗粒的近红外吸收功能及转铁蛋白与青蒿琥酯的协同增效 功能与DMR效应结合起来，建立了一种可同时实现靶向、光热治疗、光动力学治疗、光声成 像、药物治疗和产生DMR效应六重功效的方法，有望为疾病的早期诊断和治疗等领域提供 技术基础，具备显著的经济效益和社会效益。
[0050] (3)引入的转铁蛋白增加了 CuS的生物相容性，提高了药物的负载率，不仅使制剂 具有靶向性，同时与药物青蒿琥酯产生协同增效功能。
[0051] (4) AS/Tf-CuS纳米粒的制备方法简单，成本低廉，易于大规模制备，经济和社会效 益巨大。
【主权项】
1. 一种转铁蛋白修饰的中空介孔硫化铜/青蒿琥酯纳米粒的制备方法，其特征在于， 首先合成中空介孔硫化铜纳米颗粒，在中空介孔结构的硫化铜内部负载药物青蒿琥酯，再 通过静电吸附修饰上转铁蛋白，制得转铁蛋白修饰的中空介孔硫化铜/青蒿琥酯纳米粒， 具体步骤如下： (1 )、将0. 8-0. 9g的CuSO4 ? 5H20溶解于180-220ml水中，搅拌加入4. 5-5. 5g聚乙烯 吡咯烷酮，室温反应10~20min，加入l-2g氢氧化钠，搅拌均匀，滴加10-20ml水合肼， 搅拌10~15min，再加入I. 2-1. 4g硫酸铵，搅拌lh，用超纯水离心水洗至中性，冷冻干燥 46-50h，得到中空介孔硫化铜纳米颗粒； (2 )、将中空介孔硫化铜纳米颗粒25-35mg分散于pH7~9的磷酸盐缓冲液25-30ml中， 搅拌下加入110-130mg青蒿琥酯，继续搅拌24h，得负载药物青蒿琥酯的硫化铜纳米粒； (3)、将10-20mg转铁蛋白加入pH7~9的磷酸盐缓冲液8-12ml中，搅拌溶解，随后加 入到上述的负载药物青蒿琥酯的硫化铜纳米粒中，搅拌24h，用质量浓度20%乙醇透析12h， 除去游离的青蒿琥酯，即得转铁蛋白修饰的中空介孔硫化铜/青蒿琥酯纳米粒。2. 根据权利要求1所述的转铁蛋白修饰的中空介孔硫化铜/青蒿琥酯纳米粒的制备 方法，其特征在于，所述的转铁蛋白为单链糖蛋白，分子量为7. 5~7. 9万，铁含量为300~ 600ppm〇3. 根据权利要求1所述的转铁蛋白修饰的中空介孔硫化铜/青蒿琥酯纳米粒的制 备方法，其特征在于，所述的转铁蛋白修饰的中空介孔硫化铜/青蒿琥酯纳米粒粒径为 190-200nm〇4. 根据权利要求1所述的转铁蛋白修饰的中空介孔硫化铜/青蒿琥酯纳米粒的制备 方法，其特征在于，所述的青蒿琥酯的载药量为23%~27%，转铁蛋白与硫化铜的质量比为 1:2 ~4〇5. 根据权利要求1所述的转铁蛋白修饰的中空介孔硫化铜/青蒿琥酯纳米粒的制备方 法，其特征在于，由以下步骤实现： (1 )、将0. 85g的CuSO4 ? 5H20溶解于200ml水中，搅拌加入5. Og聚乙烯吡咯烷酮，室 温反应10~20min，加入I. 5g氢氧化钠，搅拌均勾，用注射器滴加15ml水合肼，搅拌10~ 15min，再加入I. 38g硫酸铵，搅拌lh，用超纯水离心水洗至中性，冷冻干燥48h，得中空介孔 硫化铜纳米颗粒； (2) 、将中空介孔硫化铜纳米颗粒30mg探头超声分散于pH7~9的磷酸盐缓冲液28ml 中，搅拌下加入120mg青蒿琥酯，搅拌24h，得负载药物青蒿琥酯的硫化铜纳米粒； (3) 、将15mg转铁蛋白加入pH7~9的磷酸盐缓冲液IOml中，搅拌溶解，随后加入到上 述的负载药物青蒿琥酯的硫化铜纳米粒中，搅拌24h，用质量浓度20%乙醇透析12h，除去游 离的青蒿琥酯，即得转铁蛋白修饰的中空介孔硫化铜/青蒿琥酯纳米粒。6. 根据权利要求1所述的转铁蛋白修饰的中空介孔硫化铜/青蒿琥酯纳米粒的制备方 法，其特征在于，由以下步骤实现： (1 )、将0. 8g的CuSO4 *5H20溶解于180ml水中，搅拌加入4. 5g聚乙烯吡咯烷酮，室温反 应10~20min，加入Ig氢氧化钠，搅拌均勾，用注射器滴加IOml水合肼，搅拌10~15min， 再加入I. 2g硫酸铵，搅拌lh，用超纯水离心水洗至中性，冷冻干燥46-50h，得到中空介孔硫 化铜纳米颗粒； (2) 、将中空介孔硫化铜纳米颗粒25mg探头超声分散于pH7~9的磷酸盐缓冲液25ml 中，搅拌下加入IlOmg青蒿琥酯，继续搅拌24h，得负载药物青蒿琥酯的硫化铜纳米粒； (3) 、将IOmg转铁蛋白加入pH7~9的磷酸盐缓冲液8ml中，搅拌溶解，随后加入到上 述的负载药物青蒿琥酯的硫化铜纳米粒中，搅拌24h，用质量浓度20%乙醇透析12h，除去游 离的青蒿琥酯，即得转铁蛋白修饰的中空介孔硫化铜/青蒿琥酯纳米粒。7. 根据权利要求1所述的转铁蛋白修饰的中空介孔硫化铜/青蒿琥酯纳米粒的制备方 法，其特征在于，由以下步骤实现： (1) 、将0. 9g的CuSO4 *5H20溶解于220ml水中，搅拌加入5. 5g聚乙烯吡咯烷酮，室温反 应10~20min，加入2g氢氧化钠，搅拌均勾，用注射器滴加20ml水合肼，搅拌10~15min， 再加入I. 4g硫酸铵，搅拌lh，用超纯水离心洗至中性，冷冻干燥46-50h，得到中空介孔硫化 铜纳米颗粒； (2) 、将中空介孔硫化铜纳米颗粒35mg探头超声分散于pH7~9的磷酸盐缓冲液30ml 中，搅拌下加入130mg青蒿琥酯，继续搅拌24h，得负载药物青蒿琥酯的硫化铜纳米粒； (3) 、将20mg转铁蛋白加入pH7~9的磷酸盐缓冲液12ml中，搅拌溶解，随后加入到上 述的负载药物青蒿琥酯的硫化铜纳米粒中，搅拌24h，用质量浓度20%乙醇透析12h，除去游 离的青蒿琥酯，即得转铁蛋白修饰的中空介孔硫化铜/青蒿琥酯纳米粒。8. 权利要求1或2-7任一项所述方法制备的转铁蛋白修饰的中空介孔硫化铜/青蒿琥 酯纳米粒在制备肿瘤光热治疗-光动力学治疗-化疗-诊断综合一体化药物中的应用。
【专利摘要】本发明涉及转铁蛋白修饰的中空介孔硫化铜/青蒿琥酯纳米粒的制备方法及其应用，可有效解决同时具有靶向、光热治疗、光动力学治疗、光声成像、药物治疗和产生DMR效应，实现诊断和治疗一体化的问题，方法是，先合成中空介孔硫化铜纳米颗粒，在中空介孔结构的硫化铜内部负载药物青蒿琥酯，再通过静电吸附修饰上转铁蛋白，制得转铁蛋白修饰的中空介孔硫化铜/青蒿琥酯纳米粒，本发明合成工艺简单，通过癌周注射后，将抗癌药物传送到癌症部位，进一步提高治疗效果，减小对正常组织和细胞的毒副作用，具有红外光热治疗作用，还可进行光动力学治疗、光声成像，实现光热治疗-光动力学治疗-化疗-肿瘤诊断综合治疗一体化，是治疗肿瘤药物上的一大创新。
【IPC分类】A61K31/357, A61K41/00, A61P35/00, A61K47/42, A61K49/00, A61K47/48
【公开号】CN105126113
【申请号】CN201510549228
【发明人】侯琳, 单晓宁, 张振中, 冯倩华, 郝丽莎, 袁玉洁, 王用超
【申请人】郑州大学
【公开日】2015年12月9日
【申请日】2015年8月31日