裂果薯总皂苷在抗细胞微管作用中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药领域，设及裂果馨与裂果馨总皂巧在制备W细胞微管为祀点的药 物中的应用。
【背景技术】
[0002] 微管是一种具有极性的细胞骨架。微管是由a，P，丫等类型的微管蛋白亚基形 成的微管蛋白聚合体。微管在细胞中有着重要的功能：1、支架作用，细胞中的微管起到支撑 作用，在神经细胞的轴突和树突中，微管束沿长轴排列，起支撑作用，在胚胎发育阶段微管 帮助轴突生长，突入W细胞核为中屯、向外放射状排列的微管纤维；2、细胞内运输，在周围 组织与成熟的轴突中，微管起到物质运输的作用，与微管结合的驱动蛋白在消耗ATP的情 况下能在细胞内运输小泡；3、形成纺键体，在分裂细胞中牵引染色体到达分裂极，而微管的 动态聚合与解聚过程是细胞分裂中的重要环节，任何于扰运一过程的药物都可能影响肿瘤 细胞生长；4、细胞迁移与形变等运动。
[0003] 无限制的快速增殖是肿瘤细胞的重要特点，而微管的动态聚合与解聚过程是细 胞分裂中的重要环节，任何于扰运一过程的药物都可能影响肿瘤细胞生长。多数抑制微管 活性的化合物都对肿瘤细胞生长有不同程度的抑制作用。此外，W微管为祀点的药物在肿 瘤临床治疗中的成功应用，说明微管是抗癌药物的有效祀点。
[0004] 目前的研究表明，微管蛋白聚集抑制剂结合于秋水仙碱结合域或长春碱结合域， 抑制血管内皮细胞的生长，选择性地阻断已形成的血管、抑制血流，从而实现抗血管生成的 作用，在血管类药物中有一定的应用。
[0005] 神经细胞轴突生长过程中，生长锥内肌动蛋白丝与微管相互作用，改变微管与肌 动蛋白丝的动态性，影响它们之间的相互作用，从而影响生长锥的行为。肌动蛋白丝与微管 之间的动态协调作用，在轴突延伸与转向过程中具有重要意义，可W此为祀点来选择药物 调控神经细胞的生长。
[0006] 微管作为重要的细胞调控与结构部分，已成为药物研发的热点，目前已上市的针 对微管蛋白的药物有紫杉醇，长春新碱等。裂果馨，百合纲，百合目，茹翦馨科，裂果馨属植 物，拉下学名：SchizocapsaplantagineaHance，别名：屈头鸡、水狗仔、长须果、冬叶屯、黑 冬叶、箭根馨、客妈连、客妈屯、马老头、米荷瓦、曲头鸡、水横柳、水鸡仔、水萝K水=屯、水 田屯、水邮公、田螺屯、±贝母、± =屯、小田螺屯。多生于水沟边、田巧草地上。分布于江 西、湖南、广东、广西及贵州等省区。W块茎入药，主治咽喉肿痛，急性肠胃炎，泌尿道感染， 牙痛，慢性胃炎，胃、十二指肠溃瘍，风湿性关节炎，月经不调，追疾，跌打损伤；外用治疮瘍 肿毒，外伤出血。中国专利化201310072951公开了裂果馨总皂巧在治疗癌症方面的应用， 并公开了其制备方法；但目前尚未有裂果馨皂巧作用于微管方面的报道。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是公开一种从广西特色植物裂果馨的块茎中提取出的总皂巧在制 备w细胞微管为祀点的药物中的应用。
[0008] 本发明提供了一种新的抗微管作用的物质，该物质为裂果馨(拉下学名： Schizocapsa plantaginea Hance)中提取的总皂巧成分和包含的各总皂巧单体化合物成 分在制备W细胞微管为祀点的药物中的应用。
[0009] 本发明中，将裂果馨总皂巧用于对SMMC-7721细胞迁移能力的影响实验，结果显 示裂果馨总皂巧对细胞的迁移有抑制作用，该效应通过作用于微管蛋白实现。
[0010] 本发明中，将裂果馨总皂巧用于对细胞克隆增殖的抑制作用的实验。细胞的增殖 与集落形成能力与微管相关，微管蛋白调控剂可通过调节微管功能降低细胞的增殖与集落 形成能力；实验结果显示：裂果馨总皂巧加药组细胞克隆数显著低于空白对照组，且呈剂 量依赖性。说明裂果馨总皂巧能够抑制肿瘤细胞的增殖与分裂，该效应通过作用于微管微 管蛋白实现。
[0011] 本发明中，进行了免疫巧光观察裂果馨总皂巧对微管形态的影响的实验，结果显 示：与空白对照组相比，裂果馨总皂巧作用后的SMMC-7721细胞微管皱缩于细胞核周围，细 胞呈圆形或梭形，正常细胞的微管W细胞核为中屯、向外伸展平铺；可见裂果馨总皂巧可W 调控微管蛋白的功能。
[0012] 本发明中，进行了微管聚合实验观察裂果馨总皂巧对微管蛋白聚合的影响；结果 显示：裂果馨总皂巧具有干扰微管聚合与抗微管解聚的作用，裂果馨总皂巧对微管蛋白具 有调控作用。
[0013] 裂果馨总皂巧对细胞的迁移有抑制作用，能够抑制肿瘤细胞的增殖与分裂，裂果 馨总皂巧具有干扰微管聚合与抗微管解聚的作用，对微管蛋白具有调控作用。裂果馨总皂 巧的作用在肿瘤与血管、神经药物中有广泛的应用，是一种非常有价值的药物祀点；而且裂 果馨总皂巧的植物来源为广西本地特有的植物品种，有较大的开发利用价值，有一定种植 规模，廉价易得。
【附图说明】
[0014] 图1为裂果馨总皂巧对细胞划痕恢复的影响，图1中可见裂果馨总皂巧高剂量组 相比空白对照组，划痕无法愈合且相比24h前更宽；说明裂果馨总皂巧对细胞的迁移有抑 制作用，该效应通过作用于微管蛋白实现。
[0015] 图2为裂果馨总皂巧对细胞集落形成能力的影响，由图2可见，裂果馨总皂巧加药 组细胞克隆数显著低于空白对照组，且呈剂量依赖性；说明裂果馨总皂巧能够抑制肿瘤细 胞的增殖与分裂，该效应通过作用于微管微管蛋白实现。
[0016] 图3为免疫巧光观察裂果馨总皂巧对微管蛋白的作用，由图3可见与空白对照组 相比，裂果馨总皂巧作用后的SMMC-7721细胞微管皱缩于细胞核周围，细胞呈圆形或梭形， 正常细胞的微管W细胞核为中屯、向外伸展平铺；可见裂果馨总皂巧可W调控微管蛋白的功 能。
[0017] 图4为微管聚合实验观察裂果馨总皂巧对微管蛋白聚合与解聚的影响；由图4可 见，微管蛋白的吸光度-时间曲线在37°C上升直到稳定，冰浴后又降低到0点。作用于微管 蛋白的药物可破坏运一过程，图4中紫杉醇的曲线可见冰浴后0D值下降很慢，是因为紫杉 醇具有抗微管蛋白解聚的作用，因此在冰浴中微管蛋白仍保持聚合状态。相比空白组与紫 杉醇，裂果馨总皂巧在开始解育时曲线上升较慢，冰浴后出现与紫杉醇类似的效应，说明裂 果馨总皂巧具有干扰微管聚合与抗微管解聚的作用，证明裂果馨总皂巧对微管蛋白具有调 控作用。
【具体实施方式】
[001引 1.裂果馨总皂巧对SMMC-7721细胞迁移能力的影响 1. 1实验方法 将人肝癌细胞SMMC-7721培养于含15%胎牛血清的DMEM培养基中，置于C02培养箱 (37°C，5%C02,饱和湿度)中培养。待细胞为对数生长期时W0. 25%膜蛋白酶将细胞消化，W 5*106个/孔浓度接种于6孔板中，置C02培养箱（37°C，5%C02,饱和湿度）继续培养12小 时让细胞完全贴壁。用10微升灭菌移液枪枪头在细