四氮唑基）乙基衍生物（IV)的合成
[0026] 将化合物II(209mg，0.5mmol)溶于20mL乙腈当中，向其中加入无水碳酸钾 (345mg，2. 5mmol)，鹏化钟（84mg，0· 5mmol)和 1H-四氣唑（1401mg，20mmol)，混合物加热 回流l〇h。反应结束后将反应液倒入25mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有机 相。依次用水和饱和食盐水洗涤合并之后的有机相，再用无水硫酸钠干燥，减压浓缩去除 溶剂得到产物粗品。因为互变异构作用，在反应条件下会生成1H-四氮唑基和2H-四氮唑 基两种取代产物。产物粗品用硅胶柱层析纯化（流动相为：石油醚/丙酮=100:1，v/V)， 收集黄色集中洗脱带，再将洗脱带浓缩，用硅胶柱层析纯化（流动相为：石油醚/丙酮= 100:0. 5,v/v)，依次收集两个淡黄色的洗脱带，浓缩前1个洗脱带即得到化合物IV的黄色 粉末（85.7mg，42% )。
[0027] 4NMR(500MHz，Chloroform-dl)δ10.21(s，1H)，6.53(d，J=95.4Hz，1H)，6.31(s ,1H), 5. 73(s,1H), 4. 41(t,J=7. 8Hz, 4H), 4. 04(s,1H), 2. 09(s,1H), 1. 98(s,1H), 1. 85(s, 1H),1. 59(s,1H),1. 33(s,3H),1. 02(s,6H),0. 93(s,6H).
[0028]13CNMR(125MHz,DMS0-d6)δ188. 01 (s)，183. 52 (s)，154. 09 (s)，147. 15 (s)，144. 6 0(s), 140. 11 (s), 136. 23 (s), 134. 42 (s), 130. 84 (s), 127. 86 (s), 118. 73 (s), 66. 79 (s), 46. 45 (s), 45. 42 (s), 37. 35 (s), 33. 27 (s), 25. 74 (s), 24. 62 (s), 24. 60 (s), 23. 32 (s), 22. 86 (s) ,22. 22 (s).
[0029]HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcdforC23H29N403:409 . 2 2 40 ;found:409. 2245。
[0030]
[0031 ] 实施例5小鼠特异性心肌缺氧实验
[0032] 1、方法：
[0033] 组合物的制备：将研磨之后过200目网的30mg化合物III的粉末和研磨之后过 200目网的70mg化合物IV的粉末装入带盖的小管中并用涡轮搅拌仪混合即得到100mg组 合物，使用时用水溶解这l〇〇mg的组合物即得到组合物的溶液。
[0034] 50只昆明小鼠，体重（20±2)g。随机分为5组，灌胃给药。前2组给予0.3%羧甲 基纤维素钠（CMC-Na)溶液，后3组分贝给予化合物III、化合物IV和组合物，50min后，除 第1组外，均腹腔注射异丙肾上腺素（ISO) 15mg·Kg\ 15min后，将小鼠放入常压缺氧装置 中，记录小鼠死亡时间及耗氧量。
[0035]结果：
[0036] 异丙肾上腺素可通过兴奋心脏β受体，使心肌耗氧量增加。本实验显示，与溶媒 对照组相比，组合物〇.〇l〇g· Kg1能显著对抗异丙肾上腺素（ISO)导致的心肌耗氧量增加 (P〈0. 01)，同时延长小鼠缺氧密闭状态下的存活时间（P〈0. 01)，结果见表1。而化合物III 和化合物IV均不具备此作用。
[0037] 表1待试物对异丙肾上腺素致特异性缺氧小鼠的影响（X，η= 10)
[0038]
[0039] 注fPW.01，与对照组比较，2)P〈0.01，与异丙肾上腺素组比较。
[0040] 实施例6小鼠常压室息性缺氧实验
[0041] 1、方法：
[0042] 40只昆明小鼠，体重（20±2)g。随机分为4组，灌胃给药。第1组给予0.3%羧甲 基纤维素钠（CMC-Na)溶液，后3组分别给予含组合物、化合物III和化合物IV的CMC-Na 溶液，浓度为O.OlOg^Kg1。给药50min后，置于广口瓶中并盖紧瓶塞（瓶内放置5g钠石 灰）。以呼吸停止为标志，记录小鼠存活时间。
[0043] 2、结果：
[0044] 与溶媒对照组相比，组合物的0.010g·Kg1使小鼠在常压密闭条件下的存活时间 延长了 41. 22 %，差异具有显著性（P〈0. 01)，而化合物III和化合物IV均未能使小鼠在常 压密闭条件下的存活时间显著延长。
[0045] 实施例7小鼠减压缺氧实验
[0046] 1、方法：
[0047] 40只昆明小鼠，体重（20±2)g。随机分为4组，灌胃给药。给药组分别给予组合 物、化合物ΠΙ和化合物IV，浓度为0. 010g·Kg\对照组给予0. 3%CMC-Na溶液，灌胃体 积均为2ml*Kg^ 50min后，各给药组和对照组各取5只，放入减压装置中，在26. 7Kpa(相 当于海拔约10000m)时停止减压，保持此压力不变，待对照组动物死亡80%时，立即停止减 压，缓缓放入空气，取出动物，记录各组死亡及存活数目，重复操作至实验完成。
[0048] 2、结果：
[0049] 组合物0.010g·Kg1使小鼠在减压缺氧条件下的存活率由对照组的20%提高至 50%，差异具有显著性（P〈0. 05);而化合物III和化合物IV对小鼠在减压缺氧条件下的存 活率为20%，均未有提高。
[0050] 结论：组合物可显著提高异丙肾上腺素致特异性缺氧的存活时间，室息性缺氧和 急性减压缺氧小鼠的存活率，提供了组合物在制备抗缺氧药物中的用途。而化合物III和 化合物IV均不具有上述活性。
[0051] 实施例8本发明所涉及组合物片剂的制备
[0052] 取2克组合物，加入制备片剂的常规辅料18克，混匀，常规压片机制成100片。
[0053] 实施例9本发明所涉及组合物胶囊的制备
[0054] 取2克组合物，加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉18克，混匀，装胶囊制成100 粒。
【主权项】
1. 一种组合物，其特征为该组合物由化合物III和化合物IV组成，该组合物中化合物 III和化合物IV的质量百分数分别为30%和70%，2. 如权利要求1所述的组合物的制备方法，其特征为：将化合物III的粉末和化合物 IV的粉末按照质量百分数分别为30%和70%充分混合。3. -种如权利要求1所述的组合物在抗缺氧药物中的应用。4. 根据权利要求3所述的组合物在抗缺氧药物中的应用，其特征在于：所述缺氧为异 丙肾上腺素致特异性缺氧。5. 根据权利要求3所述的组合物在抗缺氧药物中的应用，其特征在于：所述缺氧为常
【专利摘要】本发明涉及有机合成和药物化学领域，具体涉及组合物及其在抗缺氧药物上的用途。本发明公开了一种组合物及其制备方法。药理学实验表明，本发明的组合物具有抗缺氧作用，具有开发抗缺氧药物的价值。
【IPC分类】A61P39/00, A61K31/495, A61K31/41
【公开号】CN105250299
【申请号】CN201510742284
【发明人】王卓婷
【申请人】南京赋海澳赛医药科技有限公司
【公开日】2016年1月20日
【申请日】2015年11月4日