漆树酸作为棘球蚴甘油醛三磷酸脱氢酶的抑制剂和作为治疗包虫病药物的应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种新生中草药单体漆树酸在抑制甘油醒=憐酸脱氨酶的活性及治 疗包虫病领域的应用。
【背景技术】
[0002] 包虫病是由棘球缘虫寄生于人体或宿主动物而引起的严重寄生虫疾病。而我国是同时 有囊型和泡状两种类型的包虫病高发区。目前临床应用最广泛的抗包虫病药物是阿苯达 挫，但是该药的肠道吸收率很差，而且其一般只能抑制寄生虫生长而不能彻底有效杀灭寄 生虫，导致患者必须长期大量服用该药物才能达到治疗效果。与此同时，大量的研究发现该 药可引起多系统的严重药物不良反应。因此，寻找或开发疗效显著且副作用小的包虫病治 疗新药物具有重大的意义。
[0003] 棘球缘虫获取能量的主要方式通过糖酵解过程。而甘油醒3-憐酸脱氨酶(GAPDH) 作为棘球缘虫糖酵解过程的关键酶，是抑制糖酵解过程的潜在祀标，阻断GAPDH的功能可W 干扰虫体赖W生存的碳水化合物和能量代谢，从而抑制寄生虫的生长。因此寻找GAPDH的抑 制剂具有十分重要的意义。
[0004] 漆树酸又称澄如酸，来源于银杏叶和腰果。漆树酸，Anarcardic Acid, C2曲36〇3， 分子量348.5，其结构式如式（1)所示：
目前已有报道漆树酸具有很好而且广泛的生物活性，具有抗细菌效果，抗真菌效果，杀 昆虫效果，抗肿瘤效果等等。但是目前国内外没有漆树酸对棘球蝴GAPDH的抑制作用及包虫 病作用方面的报道。
【发明内容】
[000引本发明要解决的技术问题是克服现有的难题，提供了一种新生中草药单体漆树酸 新的应用--作为棘球蝴甘油醒S憐酸脱氨酶的抑制剂和作为治疗包虫病药物的应用。
[0006 ]为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案： 漆树酸作为棘球蝴甘油醒=憐酸脱氨酶的抑制剂的应用。
[0007]优选的，所述棘球蝴甘油醒=憐酸脱氨酶包括细粒棘球蝴甘油醒=憐酸脱氨酶 和/或泡状棘球蝴甘油醒=憐酸脱氨酶。
[0008] 漆树酸作为治疗包虫病药物的应用。
[0009] 优选的，在漆树酸作为治疗包虫病药物的应用中，利用漆树酸抑制棘球蝴甘油醒 =憐酸脱氨酶的活性。
[0010] 进一步优选的，对于细粒棘球蝴，利用漆树酸杀死细粒棘球蝴原头节的方式抑制 其活性。
[0011] 进一步优选的，对于泡状棘球蝴，利用漆树酸破坏泡状棘球蝴组织生发层细胞的 方式抑制其活性。
[0012] 优选的，将漆树酸和药学上允许的任意一种辅料制成药物组合物，或者与其他抗 包虫病药物制成药物组合物。
[0013] 进一步优选的，所述药物组合物，制作为药学上的任意一种剂型，包括片剂、颗粒 剂、胶囊剂、丸剂、口服液、注射剂或脂质体。
[0014] -种治疗包虫病药物，其有效成分为漆树酸。 本发明有益效果： 本发明首次公开了漆树酸是棘球蝴甘油醒=憐酸脱氨酶的抑制剂及首次公开漆树酸 在抗包虫病的应用，拓展了漆树酸的应用，同时开发了一种新的治疗包虫病的药物。本发明 对漆树酸进行了酶活抑制试验研究，实验结果表明漆树酸对棘球蝴甘油醒=憐酸脱氨酶有 抑制效果。本发明还进行了细胞水平实验和棘球蝴体外实验研究，实验研究表明漆树酸具 有显著的杀死棘球蝴原头节的效果，能显著的破坏棘球蝴组织生发层细胞，在有效的浓度 内无明显的细胞毒性。
【附图说明】
[0015] 图1是漆树酸对棘球蝴甘油醒=憐酸脱氨酶的酶活影响的示意图； 图2是漆树酸对细粒棘球蝴的影响的示意图； 图3是漆树酸对泡状棘球蝴的影响的示意图； 图4是漆树酸对细胞的影响的示意图。
【具体实施方式】
[0016] W下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用 于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
[0017] 为了进一步说明本发明的实质，W下实施例对漆树酸在对棘球蝴甘油醒=憐酸脱 氨酶的抑制作用，对细粒棘球蝴、泡状棘球蝴的影响等进行了全面的对比实验。
[001 引 实验材料和方法 实验材料 漆树酸，纯度>97 %，（购自Se 11 eckchem公司），用DMSO溶液溶解，配成原液储存，然后用 0.22 Mi的滤器过滤，置于-20 °C保存。实验时用无菌水稀释成所需浓度即可。
[0019] 棘球蝴甘油醒S憐酸脱氨酶，为现有技术中公开的一种酶，参见化inese journal of zoonoses,2014,30(2):66-71。
[0020] 实施例1:漆树酸对棘球蝴甘油醒=憐酸脱氨酶的酶活影响 目的和原理:为了验证漆树酸能抑制棘球蝴甘油醒S憐酸脱氨酶，GAPDH酶活检测的原 理为3-憐酸甘油醒+H3P04+NAD+ - 1,3-二憐酸甘油+NAM+H+。随着反应混合物中NADH的生 成，其在34化m下的吸光度会升高。因此可W根据不同浓度的漆树酸和GAPDH反应记录340nm 的OD值来判断漆树酸对GAPDH的抑制效果。
[0021 ] 方法:反应试剂包括O.Olmol/L焦憐酸钢、0.02 mol/L憐酸钢、0.25 mmol/L NAD、3 皿ol/L DTT、0.25mmol/L 3-憐酸甘油醒(D-G3P)，5 yg纯化的GAPDH，反应溫度为25°C。记录 O-Smin 340nm波长下的OD值，得出GAPDH的催化活性。分别固定底物NAD+和D-G3P，测定在不 同浓度D-G3P及NAD+、条件下重组蛋白GAPDH的催化最大反应速度，获得D-G3P及NAD+的酶动 力学参数，用SPSS软件计算Lineweaver-Burk双倒数方程回归计算米氏常数化m值）、最大反 应速度(Vmax)。我们把不同的漆树酸药物浓度与GAPDH反应，记录5min内34化m波长下的OD 值，从而得出漆树酸的抑制效果。
[0022] 结果与评价:通过计算，结果如表1所示可得GAP畑具有很高的催化活性:69