防治静动脉 硬化，参与组成细胞膜，增强免疫功能，促进神经传导，提高大脑活力。
[0044] 本发明与将纳米粒吸附或连接于微泡表面的系统相比，本发明首次制备包裹载药 白蛋白纳米粒的脂质微泡，将载药白蛋白纳米粒包裹于微泡脂膜内部，可在体表超声辐照 下在体内精确定位爆破，释放出其包裹的白蛋白纳米粒，从而提高纳米粒的革巴向给药效率。 [0045] 本发明具有相对较高的载药量和包封率，可提高靶位的血药浓度，延长药物在靶 位的作用时间，减少药物降解，提高药物稳定性，并且纳米粒具有促进药物的选择性分布， 利于传递药物进入病变组织，可以增加药效并减少毒副作用。
[0046] 本发明采用的制备方法可显著提高微泡的载药量，降低药物的降解，实现药物在 靶位的缓释，延长药物作用时间，增加了药物的疗效；本发明制备工艺简单，制备过程不涉 及化学反应，未采用毒性大的有机溶剂，安全性高，环境友好性强，易于工业化。
[0047] 本发明制备的奥拉西坦脂质微泡冻干粉针极大地方便了药物的贮藏与运输，保存 时间大大延长。
[0048]
【附图说明】： 图1为本发明实施例1所制备的载奥拉西坦白蛋白纳米粒脂质微泡的光学显微镜（100 倍）下的图像。
[0049] 图2为本发明制备的载奥拉西坦白蛋白纳米粒和全氟丁烷的脂质微泡的示意图。
[0050] 图3为本发明制备的包载奥拉西坦白蛋白纳米粒和全氟丁烷的脂质微泡的粒径 分析图。
[0051] 图4为本发明制备的包载奥拉西坦白蛋白纳米粒和全氟丁烷的脂质微泡的体外 显影图。
[0052] 图5为本发明制备的包载奥拉西坦白蛋白纳米粒和全氟丁烷的脂质微泡的兔肝 脏显影图。
[0053] 图6为本发明制备的包载奥拉西坦白蛋白纳米粒和全氟丁烷的脂质微泡在超声 前后的体外释放情况。
[0054]
【具体实施方式】： 以下通过实施例对本发明进行详细描述，但本发明并不仅限于下述实施例。本发明所 述比例无特殊说明的均指的是重量百分比。
[0055] 实施例1 1)、卵磷脂混合液的制备 将蛋黄卵磷脂：甘油：磷酸盐缓冲液以6:57:100的比例混合均匀，以质量百分比计。
[0056] 2)、奥拉西坦白蛋白纳米粒的制备 采用去溶剂化法制备奥拉西坦白蛋白纳米粒，精密称取40 mg人血清白蛋白溶于4 mL 水中，另称取400 mg奥拉西坦溶于22 mL无水乙醇中，以I mL/min的体积流量将奥拉西 坦乙醇溶液滴加到白蛋白水溶液中，加入150mL质量浓度为0. 25%的戊二醛，避光搅拌4 h 固化，于35 °C旋转蒸发除去乙醇，即得奥拉西坦白蛋白纳米粒混悬液，结果见图1。离心法 测得其包封率为89. 58%。
[0057] 3 )、载奥拉西坦白蛋白纳米粒脂质微泡的制备 取步骤1制得的卵磷脂混合液4mL与步骤2制得的奥拉西坦白蛋白纳米粒ImL混合均 匀，加热培养2个小时，然后充入全氟丁烷至饱和后采用机械振荡法震荡30 s，制得载奥拉 西坦白蛋白纳米粒的脂质微泡。将所得微泡于光学显微镜下观察，结果见图2。
[0058] 4)载药微泡的粒径分析 采用马尔文MS2000激光粒度仪测定载药微泡的粒径分布。
[0059] 将制备得到的奥拉西坦脂质微泡加到装有800ml经超声脱气的纯化水的烧杯中， 置于MS2000激光粒度仪，2500rpm、超声强度15、时间2min分散处理，检测粒径分布，所得 微泡的粒径分布图（见图3)。
[0060] 5)、将制得的载奥拉西坦白蛋白纳米粒脂质微泡用水囊包裹，测定其显影效果。结 果表明本发明制备的微泡具有良好的体外显影效果（图4)。
[0061] 6 )、新西兰大白兔肝脏显影 以新西兰大白兔(新西兰大白兔来源于四川大学实验动物中心）为实验对象，应用速眠 新II型（lmL/Kg)肌肉注射麻醉大白兔后，仰卧位固体，采用自身前后对照的方法，造影前， 将ImL的载奥拉西坦白蛋白纳米粒脂质微泡，经兔耳缘静脉注入兔体内，观察兔肝脏部位 的显影效果。结果表明本发明制备的微泡具有良好的体内显影效果(见图5)。
[0062] 7)、体外超声释放 应用透析袋法，考察制得的载奥拉西坦白蛋白纳米粒脂质微泡在超声或不加超声情况 下不同时间点的奥拉西坦累计释放率(见图6)。结果表明在超声作用下，微泡的释药速率大 大提高，证明该微泡具有良好的超声响应性，在超声作用下，脂膜破裂，释放其包裹的奥拉 西坦白蛋白纳米粒，释药速率大大提1?。
[0063] 对比例1 将实施例1中的全氟丁烷换成氮气、全氟乙烷或六氟化硫，其余与实施例1相同。制得 的脂质微泡在超声条件下发现，声反应弱，24h释药总量不足70%。
[0064] 实施例2-10,按照以下参数运行，其他同实施例1，所述累积释放率实验为加超声 的情况下检测。
[0065] 实验结果显示：磷脂的种类，磷脂、甘油和磷酸盐缓冲液的配比关系，以及戊二醛 的选取对本发明有着非常重要的影响。
[0066] 本发明实施例1-7的实验结果显示：通过本发明的各个参数的配合，能实现包封 率80%~92%，制得的奥拉西坦脂质微泡直径为4~6微米，体外、体内显影效果良好，且 24h体内药物释放率为80~92%，具有良好的应用前景。
[0067] 实施例11 将实施例1制得的奥拉西坦脂质微泡制成冻干粉针制剂 预冻：把分装好的奥拉西坦脂质微泡放入冻干箱内隔板上，在手动界面中，设板层 温度为OtMmin (开启电加热)，进箱完毕后，待制品达到rc以下保持60min ;打开两个 压缩机，设板温_40°C、lmin，使制品在-35°C以下保持60min ;设板温-11°C、60min，待制 品达-lit：时，使制品在-lit：保持60min ;设板温-38°C、lmin，使制品在-35°C以下保持 60min〇
[0068] 一次干燥(升华干燥） 对后箱制冷，待后箱温度达_40°C时，开启真空泵，2s后开小蝶阀，对后箱抽真空。待 后箱真空彡90Pa时，开中隔阀，待前箱真空彡12pa时，设定导热油温度为0°C，有限泄 露为8±2pa，对制品加热180min，设定导热油温度为1(TC，有限量泄露为8±2pa，至制品 完全抽白。整个升华过程中，前、后箱真空度应< 30Pa，制品温度< -20°C，冷凝器温度< -50°C。如出现异常情况应减慢加热速度、停止加热或降低板温。
[0069] 二次干燥(解析干燥） 设定板层温度为20°C，待制品温度越过-25~-20°C温度段后，打开有限量泄漏 20±5 (彡30Pa)，使制品温度迅速上升到20°C后，关闭有限量泄漏，恒温干燥5小时以上。
[0070] 整个过程中，冷阱温度应< -50°C。恒温阶段前、后箱真空为< 5Pa。
【主权项】
1. 一种奥拉西坦脂质微泡，其特征在于：所述脂质微泡包括磷脂双分子层膜、气体和 载奥拉西坦的白蛋白纳米粒；所述气体和载奥拉西坦的白蛋白纳米粒均包裹在磷脂双分子 层膜内部；所述白蛋白为人血清白蛋白。2. 如权利要求1所述的奥拉西坦脂质微泡，其特征在于：所述磷脂为天然磷脂。3. 如权利要求2所述的奥拉西坦脂质微泡，其特征在于：所述天然磷脂为蛋黄卵磷脂、 大豆卵磷脂和磷脂酰乙醇胺中的一种或几种混合。4. 如权利要求1所述的奥拉西坦脂质微泡，其特征在于：所述气体为全氟丁烷。5. 如权利要求1-4任一项所述奥拉西坦脂质微泡的制备方法，其特征在于：包括以下 步骤： 1) 载奥拉西坦白蛋白纳米粒混悬液的制备： 分别配制白蛋白水溶液和奥拉西坦的乙醇溶液，然后将奥拉西坦乙醇溶液缓慢滴加到 白蛋白水溶液中，然后加入戊二醛，搅拌固化，旋转蒸发除去乙醇，即得载药白蛋白纳米粒 混悬液； 2) 包裹载奥拉西坦白蛋白纳米粒脂质微泡的制备： 将磷脂、甘油和磷酸盐缓冲液按55~60:5~8:100的比例混合，再加入步骤1)中制 得的白蛋白纳米粒混悬液并加热，然后充入气体振荡，制得包裹载药白蛋白纳米粒的脂质 微泡，所述比例为重量百分比。6. 如权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述白蛋白水溶液的浓度为0. 8%~ 5% ;戊二醛的浓度为0. 2%~0. 3% ;磷脂、甘油和磷酸盐缓冲液的比例为55~60:5~ 8:100。7. 如权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于：所述戊二醛的浓度为0. 23%~ 0. 28% ;奥拉西坦的乙醇溶液加入到白蛋白水溶液中的滴速控制在0. 1~6 mL/min。8. 如权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于：所述白蛋白水溶液的浓度为1%~ 3% ;戊二醛的浓度为0. 25% ;磷脂、甘油和磷酸盐缓冲液的比例为55~60:5~8:100 ;奥拉 西坦的乙醇溶液加入到白蛋白水溶液中的滴速控制在0. 5~3 mL/min。9. 如权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述气体充入后震荡的时间为5~300 So10. 如权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述加热时间为2~3h。
【专利摘要】本发明提供一种奥拉西坦脂质微泡，包括磷脂双分子层膜、气体和载奥拉西坦的白蛋白纳米粒，其中气体和载奥拉西坦的白蛋白纳米粒均包裹在磷脂双分子层膜内部。本发明具有相对较高的载药量和包封率，可提高靶位的血药浓度，延长药物在靶位的作用时间，减少药物降解，提高药物稳定性，并且纳米粒具有促进药物的选择性分布，利于传递药物进入病变组织，可以增加药效并减少毒副作用。本发明还公开了这种脂质微泡的制备方法，制备工艺简单，易于工业化，制备过程不涉及化学反应，未采用毒性大的有机溶剂，安全性高，环境友好性强。
【IPC分类】A61K47/42, A61K31/685, A61K31/4015, A61K41/00, A61K9/127, A61P25/28
【公开号】CN105520911
【申请号】CN201410516789
【发明人】叶雷
【申请人】重庆润泽医药有限公司
【公开日】2016年4月27日
【申请日】2014年9月30日