acid)对Kv7.4和Kv7.3/7.5钾通道电流 的增大作用。
[0048] (1)测试化合物tannic acid:市购tannic acid CAS: 1401-55_4(Sigma货号： MSDS403040)。
[0049] (2)测试方法：人胚胎肾细胞（HEK 293A)的培养：采用Lipofectamine 2000reagent(Invitrogen)瞬转了大鼠 Kv7 · 4，Kv7 · 3/7 · 5通道的HEK 293A细胞培养于含有 10 %胎牛血清，100U/ml青霉素和链霉素的DMEM培养液中，胰酶消化传代。将细胞铺于12mm 的圆形盖玻片上，24孔板培养。
[0050] 膜片钳技术记录细胞膜电流:膜片钳放大器采用Axon 700B。电极内应用两性霉素 B (终浓度0.1~0.2mg/ml)做打孔膜片钳记录。微电极抛光后，灌充电极内液，控制电阻值在 1.5~2.5ΜΩ。记录所用电极内液为（单位为毫摩尔/升(mM)):KCl 150，HEPES 10，MgCl25， 用K0H调pH至7.4;细胞外液成分为（单位为毫摩尔（mM)) :NaC1160，KC12.5，HEPES10， glucose 8，MgCl2l，CaCl25,其中还添加本发明的不同浓度的縣酸。微电极与细胞膜形成巨 阻封接后，钳制在_80mV等待5-1 Omin后开始按照不同的刺激程序进行电流记录。
[0051 ] (3)测试结果:从图1可以看出，ΙΟμΜ tannic acid可增大Κν7·4，Κν7·3/7·5钾通道 电流幅度。1〇μΜ tannic acid可使Κν7.4，Κν7.3/7.5钾通道电流幅度增大1.31 ±0.07倍和 0.95±0.05倍（详见图2(：小）。
[0052] 实施例2电生理膜片钳测定鞣酸（tannic acid)调节Kv7.4和Kv7.3/7.5钾通道电 流的量效关系。
[0053] (1)测试化合物：tannic acid。
[0054] (2)测试方法：同实施例1所用方法。
[0055] (3)测试结果：如图3所示，tannic acid可浓度依赖性增大Kv7.4，Kv7.3/7.5钾通 道电流幅度，半数最大有效浓度(ED5q)分别为：27.3±3.6微摩尔/升(μΜ)(Κν7.4,详见图 3C)，23 · 1 ± 3 · 9μΜ(Κν7 · 3/7 · 5，详见图3F)。
[0056] 实施例3电生理膜片钳测定鞣酸（tannic acid)调节Κν7.4和Κν7.3/7.5钾通道的 电导-电压关系曲线。
[0057] (1)测试化合物：tannic acid。
[0058] (2)测试方法：同实施例1所用方法。
[0059] (3)测试结果：如图4所示30μΜ tannic acid可使Κν7·4，Κν7·3/7·5通道电导-电压 关系曲线显著左移(详见图4Α、Β)。
[0060] 实施例4电生理膜片钳测定鞣酸(tannic acid)调节Κν7.4和Κν7.3/7.5钾通道的 失活动力学时程。
[0061] (1)测试化合物：tannic acid。
[0062] (2)测试方法：同实施例1所用方法。
[0063] (3)测试结果：如图4所示tannic acid可显著延长Kv7·4，Kv7·3/7·5钾通道的失活 时程。30μΜ tannic acid可分别使Kv7.4和Kv7.3/7.5钾通道的失活时程延长至272.10 土 15.031118和227.02±18.821118(详见图58、0)。
[0064]实施例5微血管张力测定縣酸(tannic acid)对大鼠肠系膜二级动脉血管张力的 调节作用。
[0065] (1)测试化合物：tannic acid。
[0066] (2)测试方法:成年SD大鼠（200~250g)肠系膜二级动脉血管张力的测定：取成年 SD大鼠肠系膜二级动脉血管。血管张力的测定采用DMT(ADInstrumentS，UK)。血管预收缩采 用1〇μΜ苯肾上腺素（Phe)。血管张力的记录采用PowerLab and Chart(version 5，AD Instruments，UK)〇
[0067] (3)测试结果:如图5所示，tannic acid可浓度依赖性舒张大鼠肠系膜二级动脉血 管，半数最大抑制浓度（IC5q)为148.7±13.4μM(详见图6C)。预孵育K V7钾通道阻断剂XE991 后，量效曲线显著右移，IC5Q为1747.0±35.7μΜ(详见图6C)。
[0068]实施例6制备口服片剂
[0069]按照本领域已知的方法制备片剂，每片含有下述成分： Tannic acid 20 mg 乳糖 7.0 mg
[0070] , 硬脂酸镁 5 mg 聚乙烯比咯烷酮 IOOmg
[0071] 以上实施例是为了更详细地说明本发明，但它不以任何形式限制本发明。
【主权项】
1. 多元酚类化合物鞣酸作为制备Kv7.4、Kv7.5离子通道激活剂的药物的用途。2. 多元酚类化合物鞣酸在制备激活Kv7.4、Kv7.5的扩血管药物种的用途。3. 多元酚类化合物鞣酸作为制备Kv7.4、Kv7.5离子通道激活剂的药物的用途，其特征 在于，能与药学上允许使用或可接受的载体或稀释剂混合，制备成药物制剂。4. 按照权利要求3的多元酚类化合物鞣酸作为制备Kv7.4、Kv7.5离子通道激活剂的药 物的用途，其特征在于，可接受的载体或稀释剂，选自药物制剂中的赋形剂、辅料或溶剂。5. 按照权利要求3的多元酚类化合物鞣酸作为制备Kv7.4、Kv7.5离子通道激活剂的药 物的用途，其特征在于，可接受的载体或稀释剂选自乳糖、蔗糖、糊精、滑石粉、明胶、琼脂、 果胶、阿拉伯树胶、硬脂酸镁、硬脂酸、纤维素的低级烷基醚、玉米淀粉、马铃薯淀粉、树胶、 糖浆、花生油、橄榄油、磷脂、脂肪酸、脂肪酸胺、单硬脂酸甘油脂或二硬脂酸甘油脂、着色 剂、矫味剂、防腐剂、水、乙醇、丙醇、生理盐水、葡萄糖溶液。6. 多元酚类化合物鞣酸作为制备Kv7.4、Kv7.5离子通道激活剂的药物的用途，其特征 在于，作为制备增大Kv7.4和7.5钾通道电流、降低Kv7.4和7.5通道激活电压的药物。7. 多元酚类化合物鞣酸作为制备Kv7.4、Kv7.5离子通道激活剂的药物的用途，其特征 在于，作为延长Kv7.4和7.5钾通道失活时程的药物。
【专利摘要】多元酚类化合物鞣酸在制药中的应用，涉及化合物在制药中的应用。本发明用作Kv7.4、Kv7.5钾离子通道激活剂的多元酚类化合物鞣酸的药物，是由以鞣酸为活性成分，辅以药学上可接受的载体组成，是一种用于治疗Kv7.4、Kv7.5钾离子通道相关疾病的药物。本发明开发了多元酚类化合物鞣酸的新的药物用途。
【IPC分类】A61K31/7024, A61K36/00, A61P9/08, A61P9/12
【公开号】CN105520948
【申请号】CN201610027082
【发明人】张园园, 张璇, 张建平, 楚立
【申请人】河北中医学院
【公开日】2016年4月27日
【申请日】2016年1月15日