一种石斛发酵原浆及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种石解发酵原浆及其制备方法与应用，属于生物技术领域。
【背景技术】
[0002] 铁皮石解(Den化obium off icinale Kimura et Migo)是我国名贵中草药，系兰 科石解属植物，因表皮呈铁绿色而得名，具有生津滋阴、明目养胃、补肾强身等功效。据文献 报道，石解属植物中的主要药效成分为多糖、生物碱、糖巧、菲类、联节类和氨基酸等。多糖 在铁皮石解中的含量高，且具有良好的抗肿瘤、抗氧化、增强免疫力W及降低血糖等生理功 能。
[0003] 国内外对于石解研究中，石解活性物质的提取方法W水提醇沉法为主，还有酶法 提取和超声波辅助提取等方法。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种石解发酵原浆及其制备方法与应用。本发明方法利用发 酵工程技术从石解中提取活性物质，操作简单，且由于不添加任何外来物质，制备得到的石 解发酵原浆对皮肤安全无伤害，将其应用于化妆品中具有很高的抗衰老活性。
[0005] 本发明提供的一种石解发酵原浆的制备方法，包括如下步骤:将石解干粉、水和发 酵菌混合得到初始体系，并对所述初始体系进行发酵培养，即得到石解发酵原浆。
[0006] 本发明中，所述石解干粉采用石解的茎部制成。
[0007] 上述的制备方法中，所述石解干粉、所述水和所述发酵菌的配比可为Ig: (9~20) 1111^:(0.1~1)1111^，具体可为1邑：121111^:0.61111^或1邑：（12~20)1111^:(0.6~1)1111^;
[000引所述发酵菌的浓度可为（IO5~108)CFU/mL。
[0009] 上述的制备方法中，所述发酵培养的溫度可为35~50°C，具体可为38°C、35~40 °C、35~38°C或38~50°C;所述发酵培养的时间可为4.5~6.化，具体可为化、4.5~化或6~ 6. Sho
[0010] 上述的制备方法中，所述石解干粉的粒径可为20~50目，具体可为40目或40~50 目，所述石解干粉可由粉碎机粉碎后过筛得到；
[0011] 所述发酵菌可为乳杆菌，具体可为德氏乳杆菌，更具体可为德氏乳杆菌保加利亚 亚种Lactobacillus delbrueckii bulgaricus。
[0012] 上述的制备方法中，所述发酵菌可W其培养液或悬浮液的形式存在，所述发酵菌 的培养液或悬浮液的pH值可为4.0~7.0，具体可为5.0、4.0~5.0或5.0~7.0。
[0013] 上述的制备方法中，所述方法中在所述发酵培养之后，还可包括对发酵液依次进 行灭菌、离屯、和取上清液的步骤。
[0014] 上述的制备方法中，所述灭菌的条件如下:所述灭菌的溫度可为115~12rC，具体 可为115°C;所述灭菌的时间可为15~25min，具体可为20min;
[0015] 所述离屯、的条件如下：离屯、转速可为3000~4000r/min，具体可为3800r/min或 3800~4000r/min;离屯、时间可为15~30min，具体可为20min或20~30min;离屯、半径可为 9cm〇
[0016] 本发明还提供了由上述的制备方法制备得到的石解发酵原浆。
[0017] 本发明进一步提供了上述的石解发酵原浆在制备具有下述1)和/或2)中功能的产 品中的应用：
[001引1)清除自由基；
[0019] 2)抗衰老。
[0020] 上述的应用中，所述产品可为化妆品、食品和保健品中的至少一种；
[0021] 所述化妆品可为面膜、精华液和爽肤水中的至少一种；
[0022] 所述自由基为DPPH自由基、超氧阴离子和径基自由基中的至少一种。
[0023] 本发明具有如下有益效果：
[0024] (1)本发明提供的石解发酵原浆的制备方法采用发酵工程技术，通过选择合适的 菌种及发酵条件，从石解中提取得到活性物质即石解发酵原浆。一方面，可最大程度保留植 物中的活性成分，且相对与传统的水提法，避免了有机溶剂的引入，安全环保;另一方面，不 需要添加酶等外来物质，不仅节约生产成本，而且最大化的简化了生产步骤，使该发酵技术 能够实现大量生产、工业化生产，并能够充分保证产品质量的稳定性。
[0025] (2)本发明提供的石解发酵原浆富含石解多糖，且由于在制备过程中未引入外来 物质，不含任何化学成分，可W直接作为面膜、精华液或爽肤水的成品使用，更加天然，不会 给肌肤造成任何负作用。
[0026] (3)本发明提供的石解发酵原浆，具有较强的抗氧化能力可清除自由基和超氧阴 离子，促进细胞代谢，增强细胞活力，改善机体的结构和功能，提高机体生命力，从而延缓细 胞老化，具有抗衰老的功效。
【附图说明】
[0027] 图1为不同体积百分浓度的石解发酵原浆与DPKl自由基清除率的关系曲线。
[0028] 图2为不同体积百分浓度的石解发酵原浆与径基自由基清除率的关系曲线。
[0029] 图3为不同体积百分浓度的石解发酵原浆与超氧阴离子清除率的关系曲线。
【具体实施方式】
[0030] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0031] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0032] 下述实施例中的液体培养基由溶质和溶剂组成，溶剂为水，溶质及其在液体培养 基中的浓度为:蛋白腺10.Og,牛肉膏10.Og,酵母膏5.Og,巧樣酸氨二锭2.Og,葡萄糖20.Og, 吐溫801.01111^，乙酸钢（邸3(：0(^3?3肥0)5.0旨，憐酸氨二钟化2册04?3肥0)2.0旨，硫酸儀 (MgS04?7H20)0.58g，硫酸儘(MnS04?H20)0.25g，琼脂18.0g，蒸馈水1000mL，pH6.2~ 6.6。
[0033] 下述实施例中的石解(茎部)来自浙江义乌鲜禾有限公司，粉碎过40目筛。
[0034] 下述实施例中的德氏乳杆菌保加利亚亚种化actobacillus delbrueckii bulgaricus)的ATCC编号为11842，可从ATCC购买得到。
[0035] 下述实施例中的发酵菌菌液按照如下步骤制得：
[0036] 1、菌种的活化
[0037] 挑取德氏乳杆菌保加利亚亚种(Xactobacillus de化rueckii bulgaricus)菌落 一环于液体培养基中，放入摇床中将菌种活化，得到活化后德氏乳杆菌保加利亚亚种菌液。 [003引 2、菌种的纯化
[0039] 将步骤1得到的活化后的菌液梯度稀释铺板，W便获取单菌落，得到纯化后德氏乳 杆困。
[0040] 3、菌种的扩大培养
[0041 ]将步骤2得到的纯化后的菌种接种到MRS培养基(pH值为7.0)中，在25°C的摇床中 培养，当OD值=0.5-1.0时，得到发酵菌菌液(菌种处在对数期，浓度为IO5~IO8CFlVmL)。
[0042] 实施例1、制备石解发酵原浆
[0043] 按照如下步骤制备石解发酵原浆：
[0044] (1)将20mL的9mL浓度为IO5~IO8CFlVmL的发酵菌菌液接种到15g的石解干粉和 ISOmL的水中，得到发酵体系；
[0045] (2)将上述发酵体系在38°C摇床中发酵6小时，得到发酵产物；
[0046] (3)将上述发酵产物115°C下灭菌20min，使菌失活，得到灭菌后的发酵产物;将灭 菌后的发酵产物在3800r/min，离屯、半径为9cm的条件下离屯、20min，弃沉淀，收集上清液，即 得到石解发酵原浆。
[0047] 实施例2、石解发酵原浆在作为化妆品中的应用
[0048] 一、石解发酵原浆化妆品的性质
[0049] 将本发明实施例1所制备所得的发酵提取物经活性炭脱色、去味后，制得石解发酵 原浆化妆品。其外观为粘稠液体、颜色为淡黄色至栋黄色。pH值5.0-6.1，粘度200-500CP，可 溶性固含物含量2.0-6.0 %，菌落总数小于50CFU/mL，无致病菌检出。根据化妆品卫生标准 GB7916-87，化妆品细菌总数不高于1 OOOCFU/ml，所W此发酵原浆符合化妆品质量要求。
[0050] 对该石解发酵原浆化妆品的主要功效成分石解多糖含量进行测量，检测方法参照 GB/T 5009.8-2008，测得石解多糖含量为