沙棘属植物冬细枝的提取物及其在美容组合物中的用途
【专利摘要】本发明涉及沙棘属（Hippophae）植物（特别是，沙棘（Hippophae?rhamnoides））的细枝（尤其是，冬细枝）的提取物，以及这样的提取物在美容组合物中的用途。
【专利说明】沙棘属植物冬细枝的提取物及其在美容组合物中的用途
[0001]本发明涉及沙棘属(Hippophae)植物细枝(特别是沙棘(Hippophae rhamnoides)冬细枝)的提取物在美容组合物中的用途，所述美容组合物用于减轻皮肤、毛或头发的色素沉着。
[0002]皮肤以及毛和头发的着色归因于称为黑色素且按照牵涉超过90个基因的复杂生物化学过程由称为黑素细胞的特化细胞分泌的褐色色素(Tadokoro T., Mechanisms ofSuntanning,由 J-P Ortonne 和 RBallotti 编辑，Martin Dunitz, 2002,第 67 页)。
[0003]在许多文化中，尤其在亚洲，人们偏爱拥有尽可能浅色的皮肤，无论如何，没有色素斑。
[0004]这就是为什么美容产业销售大量的旨在阻止皮肤晒黑，或使皮肤颜色变浅，或减淡其斑点的产品。此外，还存在这样的皮肤病学制剂，其旨在减淡色素沉着斑例如雀斑(红棕斑)和黄褐斑(妊娠斑)，或旨在使白癜风白斑周围的皮肤颜色变浅以便它们不太被看得见。
[0005]因此，知道了一些使得能够降低由黑素细胞进行的黑色素的合成并因此减轻皮肤色素沉着的物质，例如:氢醌及其衍生物例如熊果苷，曲酸，壬二酸，十八烯二酸，某些植物例如桑(Morus alba)或洋甘草(Glycyrrhiza glabra)的提取物,抗坏血酸(维生素C)及其衍生物例如磷酸抗坏血酸酯或者维生素C和维生素E的双磷酸酯，某些半胱氨酸衍生物。
[0006]在文献FR-2，848，846-A中描述了皮肤和/或表皮性组织的脱色素和/或增白试剂的一个例子:在该情况下，它是抗坏血酸的衍生物。
[0007]另一个例子描述在文献FR-2，841，550-A中:在那里，它是衍生自酪胺的分子。
0008]另一个例子描述在文献FR-2，886，843-A中:在那里，它是Griffonia属植物的提取物。
[0009]但是，上面的物质对于黑素细胞有时是有细胞毒性的，和/或不足够有效，和/或过于昂贵，和/或难以使用:例如基于氢醌的组合物现在已被禁止自由出售。
[0010]本发明的目标也涉及其活性成分不具有上面所陈述的缺点的美容或皮肤病学组合物的用途。
[0011]本发明的另一个目标是提供具有更好的效力且具有有竞争力的价格的这样的组合物。
[0012]通过在用于减轻皮肤、毛或头发的色素沉着的美容或皮肤病学组合物中使用沙棘属植物的提取物而达到了这些目标以及随后将出现的其他目标。
[0013]在美容或皮肤病学组合物中经常使用植物提取物。
[0014]除了植物代谢所必需的分子例如储存能量的糖类、制造蛋白质所必需的α -氨基酸、用于合成构成细胞壁的纤维素的葡萄糖等等之外，在植物中还存在具有根据科和属而非常可变的性质的次生代谢物。
[0015]次生代谢物在植物中经常发挥保护作用，该保护作用针对细菌和真菌的侵袭，或者针对捕食者例如昆虫或植食性哺乳动物。它们是具有在制药学中或在植物病害防治领域中所寻求的生物学活性的复杂分子。[0016]此外，次生代谢物可以对于为了制造性能更好的美容制剂而研究的皮肤细胞具有令人感兴趣的效应。
[0017]次生代谢物的组成随季节，和随植物的部位，根、叶、枝条、花、果实、种子等等而变化。
[0018]根据其在具有或多或少极性性质的溶剂中的溶解性特性，从植物中提取出这些活性分子。因此，溶剂的极性决定了所提取的分子的类型和因而所述提取物的活性。
[0019]一般地，甲醇或水-乙醇的提取物包含大部分的极性次生代谢物。
[0020]此外，可以通过使用具有不同极性的溶剂来将粗提取物进行分级分离。因此，丁醇可以从水或甲醇或水-乙醇的粗提取物中提取出最小极性的分子。
[0021]可以通过高压液相色谱法(HPLC)来表征粗提取物或表征提取物的级分。通过在给定的洗脱条件(溶剂和梯度)下，对于给定的柱子，在特定时间处的洗脱峰来表征每种分子。
[0022]还可以通过薄层色谱法(TLC)来表征提取物或表征提取物的级分。该技术使得能够表征具有仍然未知的完整结构的分子，通过它们中的每个在板上的洗脱距离(Rf)和通过经由给定化学家族的或多或少特异的试剂对其进行的揭示。
[0023]胡颓子科(Elaeagnaceae)的沙棘属(Hippophae)尤其包括棱果沙棘(H.goniocarpa)、江孜沙棘(H.gyantsensis)、理塘沙棘(H.litangensis)、肋果沙棘(H.neurocarpa)、沙棘(H.rhamnoides)、柳叶沙棘(H.salicifolia)、西藏沙棘(H.tibetana)这些物种(www.NCB1.nlm.nih.gov/Taxonomy/Browser)0
[0024]沙棘是在亚洲北部和欧洲很常见的落叶性多刺荆棘状小灌木。在沙漠地区，它充当家畜的食物。古希腊人`给它起名为“Hippos phaos”，意思是“发亮的马”，因为吃其叶或细枝的马有着光亮的毛(Production et utilization de I’argousierHippophae rhamnoides L.,T.Li 和 T.Beveridge,Les Presses scientif iques duCNRC，0ttawa2004)。在法语中称其Argousier。在法国，它在南阿尔卑斯山中和在西北部于庇卡底(Picardie)和佛朗德尔(Flandre)的拉芒什海峡的沙质海岸上以自然状态生长(Pierre Lieuthaghi, Le livre des arbres arbustes et arbrisseaux.Robert Morel 编辑，1969)。在比利时和荷兰在沿海地带上，它也是常见的。它容易进行栽培，以生产浆果或作为观赏用灌丛。在英语中，它被叫做“Sea Buckthorn”,在德语中叫做“Sanddorn”,在汉语中叫做“Sha Ji ”，和在俄语中叫做“ObI印ika”。
[0025]中国、蒙古和俄罗斯总计有超过800000公顷的天然沙棘林和超过300000至500000公顷的该小灌木的栽培物(T.Li和T.Beveridge,已经提及)。
[0026]沙棘的根具有根瘤，其由于共生的并固定大气氮的弗兰克氏菌属(Frankia)的放线菌而形成(E.Small 等人,Biodiversity, 2002, 3, 25-27)。
[0027]在俄罗斯、蒙古、中国以及欧洲，和在该物种已被引入用于固定土壤和作为农艺-食品栽培物的加拿大，沙棘的果实或浆果就这样地或者在果汁中、在果酱中、作为调味品或以其他形式进行消费。沙棘浆果的维生素C含量极高。这些果实的另一个特点是其果肉包含油，如橄榄的果肉那样。可以从种子中提取出具有不同的脂肪酸组成的另一种油。这两种油包含生育酚和类胡萝卜素，其赋予所述浆果以黄色、橙色或红色(L’ Argousier-Uneculture polyvalente et prometteuse pour Ie Saskatchewan.Agriculture etAgroalimentaire Canada.2007.http//www4.agr.gc.ca)0[0028]当为了生产果实而栽培沙棘时，建议在冬天修剪枝条以便优化其数量和其品质。不建议在夏天或在秋末剪切枝条，以避免经由修剪伤口而引入疾病(Productionet utilisation de I’ argousier.Hippophae rhamnoides.Li T.和 BeveridgeT.,2004, Conseil national derecherches Canada)。
[0029]在中国北方，已通过飞机或直升机在黄土高原的广阔范围内(内蒙古、山西)播种了沙棘，以使土壤肥沃并固定土壤以及发展围绕使果实增值的经济活动。但是，它也充当薪材和家畜(绵羊、牛等)的草料，这些家畜的健康由此得到改善(体重增加、更好的毛外观、更强的对于疾病的抵抗力)(Ruan Chengjiang 和 Li Daiqiong, Function and benefit ofHippophae rhamnoides L.1mproving eco-environment of loess plateau of China.12thISCO Conference, Beijing, 2002)o
[0030]在干燥且寒冷的印度拉达克(Ladakh)地区，多亏了沙棘属植物(它在那时是唯一可用的草料)，骆骑、牦牛、绵羊、山羊等活过了冬天(Tsering Stobdan, DRDO ScienceSpectrum, 2008 年 5 月，255-7)。
[0031]在尼泊尔莫斯坦(Mustang)的牧场，牧羊人在初冬时赶着他们的牲畜，以便它们吃西藏沙棘的叶。罗马丹(Lomanthang)的牧羊人已注意到，如果给它们吃西藏沙棘的叶和嫩枝，他们的病马就会恢复其体重和光亮的毛(Khilendra Gurung和VimalGupta, Traditional uses and commercial utilization of seabuckthorn, HippophaeL., in Mustang district, Nepal.2008)。
[0032]在俄罗斯，在西伯利亚的阿尔泰共和国、布里亚特共和国以及图瓦共和国，沙棘(Hippophae rhamnoides L.)以野生状态生长,并且在许多其他地区已发展了栽培物以用于在农艺-食品业、医学和美容学中利用果实(Terekhina NV, Interactive AgriculturalEcological Atlas of Russia and Neighboring Countries, 2003-2009.http://www.agroatlas, ru)。
[0033]在食品业、医`学和美容学中，沙棘果实和叶的用途是多方面的(E.Small，已经提及)。
[0034]在食品业中，待就这样进行消费的、极其富含维生素C但稍微过于酸的果实用于制作果汁(纯的或混合的)、果冻、果酱、调味汁和利口酒。
[0035]在传统医学中，非常久以来就已经知道沙棘属植物。在追溯至公元618-907年的藏书《四部医典》(rGyud bzi)中提及了该植物(Lu Rongsen, Seabuckthorn, ICIMOD PaperN ° 20，Kathmandu, Nepal, 1992),并且在 Gyurne Dorje 和 Fernand Meyer 的 “TibetanMedicinal Paintings.1llustrations to the Blue Berry treatise of Sangye Gyamtso(1653-1705)” (Serindia Publications, 1992)中给出了该植物的非常忠实的描绘。它尤其可以用作祛痰剂和血液冲淡剂。
[0036]在现代医学中，自1966年起，沙棘属植物(俄罗斯本国名称:0blipika)的油就是旧时苏联国家中的许多药物，尤其是旨在护理皮肤和粘膜的药物的基础(Lu Rongsen,已经提及)。尤其是使用果实的油。在中国，沙棘属植物的油的生产开始于1988年，并且在1986年已推出了沙棘属植物果实的黄酮片剂用于治疗冠状动脉疾病(Lu Rongsen,已经提及)。
[0037]从沙棘属植物得到的主要工业产品是通过压榨而获得的果汁，通过果汁的离心而获得的果肉油乳，通过用己烷进行提取而获得的种子油，用醇从由于分开了果汁和种子而得到的果皮中提取的黄酮(Li和Beveridge，已经提及)。在中国，将叶进行干燥以制作药茶。
[0038]在美容学中，主要使用果肉油或种子油以保护皮肤，尤其是对抗老化(Li和Beveridge,已经提及)。这些油是昂贵的，因为沙棘属植物果实的采摘由于其小尺寸和其易损性而存在问题(Li和Beveridge,已经提及)。
[0039]因此，文献JP-1238511-A描述了包含提取自沙棘果皮的油的化妆品。
[0040]文献FR-2840808-A1描述了包含沙棘果实的亲水级分的美容、皮肤病学或药物组合物。
[0041]文献FR-2840809-A1也描述了包含沙棘果实的亲水级分的美容、皮肤病学或药物组合物，其更特别地用于真皮的预防或治疗。
[0042]但是，没有一个前面的文献提及获得沙棘属植物冬细枝的提取物，以制备旨在减轻皮肤、毛或头发的色素沉着的美容组合物。
[0043]然而，令人惊奇地发现，如下面实施例的描述所显示的，通过极性溶剂而获得的沙棘冬细枝的提取物抑制由皮肤的特化细胞(黑素细胞)进行的黑色素色素的生物合成。
[0044]“冬细枝”是指在已经失去其叶或者仍不具有叶的沙棘属植物上取得的枝条或枝条末端。合适的收获期显然取决于采集地的纬度和海拔高度以及气候条件。
[0045]实施例1.沙棘枝条的提取
[0046]在二月在荷兰的沿海沙丘中采集了沙棘的幼枝。这些细枝(冬细枝)不具有叶，携带有芽，并且缺乏木质。
[0047]将300g的一份该植物材料通过冻干进行干燥，这给出147g的干产物，将其研磨成大约100目的粉末。
[0048]将140g的该粉末用700ml的甲醇提取过夜。
[0049]在过滤后，将甲醇粗提取物在旋转蒸发器上蒸发至干，然后用500ml的水吸纳。然后，将所获得的悬浮液相继地用3份200ml的2- 丁醇进行提取。
[0050]汇集这些丁醇提取物，然后在旋转蒸发器上进行蒸发。对残留物进行冷冻，然后冻干，从而给出丁醇级分。
[0051]剩余的水相也被带至旋转蒸发器，并且将所获得的残留物也进行冻干，从而给出水性级分。
[0052]如此获得了 13.7g的丁醇级分和19.2g的水性级分。
[0053]使粗提取物以及丁醇级分和水性级分经历在Phenomex Luna C18柱上的HPLC液相色谱法分析，其中具有在0.01%TFA水溶液中的乙腈的线性梯度，以及经历薄层色谱法(TLC)分析，其中用乙酸乙酯-乙酸-甲酸-水(70-8-8-18，以体积计)混合物进行洗脱。
[0054]用254和366nm的UV以及通过茴香醛-硫酸这一试剂进行揭示的TLC板显示，丁醇级分和水性级分是相当相似的，但Rf处于0.50附近的主要化合物(用茴香醛揭示出的)在水性级分中更多。
[0055]实施例2.沙棘提取物对于由皮肤细胞进行的黑色素色素合成的活性的研究
[0056]研究了在实施例1中获得的沙棘提取物的丁醇级分和水性级分对于由皮肤细胞进行的黑色素生物合成的作用。
[0057]根据先前的细胞毒性试验的结果来选择关于每一个级分的所测试的最大浓度。[0058]在非细胞毒性的量的这些级分不存在或存在下，将正常的人表皮黑素细胞培养10天。通过用0.5N氢氧化钠进行提取并随后测量光密度来评价黑色素色素的量。
[0059]a) 一丁醇级分的效应
[0060]浓度为0.0004,0.002和0.01mg/ml的丁醇级分未引起由黑素细胞产生的黑色素的量的显著降低。
[0061]b)—水性级分的效应
[0062]浓度为0.0002,0.001和0.005mg/ml的水性级分引起了由黑素细胞产生的黑色素的量的显著且剂量依赖性的降低，其分别达到对照的99%、对照的94% (P小于0.01)和对照的 87% (P 小于 0.01)。
[0063]从该实施例中看起来，沙棘枝条的提取物对于由皮肤细胞进行的黑色素色素的产生具有显著的作用。
[0064]因此，可以制备目的在于减轻皮肤、毛和头发的色素沉着的美容或皮肤病学组合物。下面将给出此类组合物的几个实例，它们并没有任何限制性性质。
[0065]实施例3.沙棘枝条的提取
[0066]在四月在荷兰的沿海沙丘中采集了沙棘的幼枝(冬细枝)。选择还不具有叶，携带有芽并且缺乏木质的细枝。
[0067]将327g的一份该植物材料通过冻干进行干燥，这给出127g的干产物，将其研磨成大约100目的粉末。
[0068]将126g的该粉末`用630ml的70%乙醇在超声波作用下提取30分钟。在过滤后，将1000ml的新的一份70%乙醇再添加在该粉末上并让其过夜。
[0069]在过滤后，汇集这些乙醇粗提取物，并且在旋转蒸发器上蒸发至干，然后用400ml的水吸纳。然后，将所获得的悬浮液相继地用3份160ml的2- 丁醇进行提取。
[0070]汇集这些丁醇提取物，然后在旋转蒸发器上进行蒸发。对残留物进行冷冻，然后冻干，从而给出丁醇级分。
[0071]剩余的水相也被带至旋转蒸发器，并且将所获得的残留物也进行冻干，从而给出水性级分。
[0072]如此获得了 11.6g的丁醇级分和16.6g的水性级分。
[0073]使粗提取物以及丁醇级分和水性级分经历在Phenomex Luna C18柱上的HPLC液相色谱法分析，其中具有在0.0P/oTFA水溶液中的乙腈的线性梯度，以及经历TLC薄层色谱法分析，其中用乙酸乙酯-乙酸-甲酸-水(70-8-8-18，以体积计)混合物进行洗脱。
[0074]用254和366nm的UV以及通过茴香醒-硫酸、氯化铁_高氯酸(Salkowski )、却三酮和对二甲基氨基苯甲醛(Ehrlich)这些试剂进行揭示的TLC板显示，丁醇级分和水性级分在低Rf的区域中具有差异。Rf 0.47的主要化合物以及Rf 0.58,0.55,0.41的其他条带(用FeCl3 (其与吲哚基团反应)和用茚三酮(其与胺基团反应)揭示出的)可能是吲哚-胺类型的化合物。
[0075]实施例4.沙棘提取物对于由黑素细胞进行的黑色素色素合成的活性的研究
[0076]对于该试验，选择了用a MSH的类似物即NDP-MSH进行刺激的B16系的黑素细胞。
[0077]接种具孔平板，并且让黑素细胞生长至汇合。
[0078]然后，更换培养基以便沿着孔用补充有或未补充有NDP-MSH以及具有不同浓度的实施例3的沙棘提取物的丁醇级分和水性级分的培养基来替代它。
[0079]在温育72小时后，通过测量其在405nm处的吸光度来测定培养物中黑色素的量。
[0080]因此，可以通过由用NDP-MSH刺激的黑素细胞进行的黑色素生物合成的产物来评价抑制。
[0081]根据先前的细胞毒性试验的结果来选择关于每一个级分的所测试的最大浓度。
[0082]将结果总结在下表中:
[0083]
【权利要求】
1.沙棘属植物细枝的提取物，其特征在于，它是冬细枝的提取物，并且使用水、甲醇、乙醇、丙二醇、甘油或其混合物作为溶剂。
2.根据权利要求1的提取物，其特征在于，它包含至少一种具有吲哚基团的分子。
3.根据权利要求1至2之一的提取物在美容组合物中的用途，所述美容组合物用于减轻皮肤、毛或头发的色素沉着。
4.根据权利要求3的提取物的用途，其特征在于，所述组合物包含0.05-20重量％的沙棘细枝的干提取物。
5.根据权利要求4的提取物的用途，其特征在于，所述组合物包含0.5-5重量％的沙棘细枝的干提取物。
6.根据权利要求3的提取物的用途，其特征在于，所述组合物还包含至少一种其他脱色素活性剂。
7.根据权利要求3的提取物的用途，其特征在于，所述组合物还包含用于过滤UVB和/或UVA辐射的物质。
8.根据权利要求3的提取物的用途，其特征在于，所述组合物还包含用于促进脱屑的试剂。`
【文档编号】A61Q19/02GK103501761SQ201280010597
【公开日】2014年1月8日 申请日期:2012年2月24日 优先权日:2011年2月28日
【发明者】A·梅贝克 申请人:安植物顾问有限责任公司