专利名称：新的苯并呋喃类和吲哚类化合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的苯并呋喃-2-基-羰基-反-2，5-二甲基-哌嗪衍生物和吲哚-2-基-羰基-反-2，5-二甲基-哌嗪衍生物、它们的药学上可接受的盐、包含它们的药物组合物以及它们的治疗用途。
本发明另一方面是治疗炎性疾病、自身免疫性疾病、增殖性疾病和过度增殖性疾病的方法。一种优选的方法是治疗以下疾病的方法类风湿性关节炎、动脉粥样硬化、全身性硬皮病、多发性硬化、阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease)、脑脊髓炎、系统性红斑狼疮、急性感染性多神经炎(Guillian-Barre syndrome)、同种异体移植物排斥、荨麻疹、血管性水肿(angioderma)、变应性结膜炎、特应性皮炎、变应性接触性皮炎、药物变态反应、昆虫叮咬变态反应、全身性过敏反应、直肠炎、炎性肠病或哮喘。
背景技术：
趋化因子是由8-14kDa蛋白质组成的小的分泌型细胞因子，根据它们的保守半胱氨酸残基，分为四个组别CXC、CC、C和CX3C。它们促进细胞粘附分子的上调，而细胞粘附分子增强粘附，导致细胞迁移。因此，趋化细胞因子在白细胞亚群的募集和运输中具有至关重要的作用。
在CC趋化因子中，已知为CCR1、CCR3、CCR4和CCR5受体的配体的MIP-1α和RANTES涉及自身免疫性疾病，例如类风湿性关节炎、炎性肠病和多发性硬化。强有力的证据是，与野生型小鼠相比，CCR1敲出小鼠在小鼠EAE模型中疾病发生率显著降低。Karpus等(J.Immunol.1995，155，5003)的研究进一步证明，MIP-1α在多发性硬化的相同模型中起关键作用。这表明抗MIP-1α抗体可阻止急性麻痹性疾病和复发性麻痹性疾病的进展，并可防止单核细胞浸润到CNS。
另外，存在强有力的证据表明RANTES涉及类风湿性关节炎的病理生理学。例如，从类风湿性关节炎患者的滑膜组织样品中检测到RANTES mRNA(Snowden，N.等，Lancet，1994，343，547)。此外，抗RANTES抗体大大减轻大鼠佐剂诱发性关节炎模型中疾病的进展。
许多研究都为CCR1在同种异体移植物排斥中的作用提供了证据。已经证实，将低于肾毒性量的环孢菌素A与CCR1拮抗剂对趋化因子受体的阻断作用相结合，对实体同种异体移植物存活具有积极作用(Horuk，R.等，J.Biol.Chem.2001，276，4199)。
因此，可抑制炎性趋化因子与其受体间相互作用的分子，将可用于治疗炎性疾病、自身免疫性疾病、增殖性疾病和过度增殖性疾病。
相关公开国际专利申请WO 0164676要求保护作为p38激酶抑制剂的(顺)-4-(4-氟苄基)-1-(7甲氧基-苯并呋喃-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪。
该文献涉及可用于治疗炎性疾病和心脏病的化合物。更具体地讲，该文献涉及用于治疗促炎病症、心脏病和肾病的化合物。没有要求保护或示例说明其它的具体苯并呋喃化合物。
美国专利5,814,644公开了一种作为合成结构单元的吲哚-2-羰基衍生物，用于制备多巴胺拮抗剂，而多巴胺拮抗剂可用于治疗精神病。
美国专利4,115,569和4,374,990要求保护含苯并呋喃取代基的哌嗪衍生物，该类衍生物用作精神病治疗药物。
发明内容
令人惊讶地发现，以下通式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物在抑制趋化因子受体CCR1信号传导方面具有预料不到的效果 其中X为氟原子或氯原子；位于哌嗪环2位和5位的两个甲基彼此为反式构型；Y为NH或O；R1选自氢、氯、溴、硝基、甲基或三氟甲基；R2选自氢、卤素、甲基、三氟甲基、甲氧基或三氟甲氧基。
在以上定义的式(I)化合物中，一组优选的式(I)的化合物是这样的化合物，其中X为氟原子；
Y为NH或O；R1选自氢、氯或溴；R2选自氢、氯、溴、甲基、三氟甲基、甲氧基或三氟甲氧基。
优选的化合物有(1)(反)-1-(5-溴-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟苄基)-2，5-二甲基哌嗪(2)(反)-4-(4-氯苄基)-1-(5-氯-吲哚-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪(3)(反)-4-(4-氟苄基)-1-(6-甲基-苯并呋喃-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪(4)(反)-4-(4-氟苄基)-1-(6-三氟甲氧基-苯并呋喃-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪(5)(反)-1-(5-氯-6-甲氧基-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟苄基)-2，5-二甲基哌嗪(6)(反)-1-(5-溴-6-甲氧基-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟苄基)-2，5-二甲基哌嗪(7)(反)-1-(5-氯-6-甲基-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟苄基)-2，5-二甲基哌嗪(8)(反)-1-(5-溴-6-甲基-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟苄基)-2，5-二甲基哌嗪(9)(反)-1-(5，6-二氯-吲哚-2-基-羰基)-4-(4-氟苄基)-2，5-二甲基哌嗪(10)(反)-1-(6-溴-5-氯-吲哚-2-基-羰基)-4-(4-氟苄基)-2，5-二甲基哌嗪(11)(反)-1-(5-溴-6-氯-吲哚-2-基-羰基)-4-(4-氟苄基)-2，5-二甲基哌嗪(12)(反)-1-(5-氯-6-三氟甲基-吲哚-2-基-羰基)-4-(4-氟苄基)-2，5-二甲基哌嗪(13)(反)-1-(5-氯-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟苄基)-2，5-二甲基哌嗪。
下表1中列出了本发明以上式(I)的优选化合物的实例。
表1
定义本文使用的术语“治疗”包括预防以及减轻疾病的症状。
除非另有说明，否则“卤代”或“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
“硝基”是指基团-NO2。
CHCl3是指氯仿。
CH2Cl2是指二氯甲烷。
“反”是指两个甲基位于哌嗪平面的相反两侧。“顺”是指两个甲基位于哌嗪平面的同侧。
结构活性关系现有技术化合物及对照化合物(顺)-4-(4-氟苄基)-1-(7-甲氧基-苯并呋喃-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪、4-(4-氟苄基)-1-(吲哚-2-基-羰基)-哌嗪、4-(4-氯苄基)-1-(苯并呋喃-2-基-羰基)-哌嗪和(反)-4-(4-氟苄基)-1-(7-甲氧基-苯并呋喃-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪为现有技术化合物及对照化合物，在下文中分别称为化合物A、B、C和D。化合物A在国际专利申请WO 0164676中披露。化合物C在美国专利4,115,569中披露。化合物B和D是非本发明化合物的对照化合物。
化合物A化合物B 化合物C化合物D与现有技术化合物A和C以及对照化合物B和D相比，本发明化合物在Ca2+流出测定中具有强得多的抑制作用。本发明化合物功效的改善尤其与以下结构特征有关1.对于在Ca2+流出测定中在纳摩尔范围内获得活性，在苄基哌嗪部分的对位引入氯或优选的氟是至关重要的。用另外的官能团(例如烷基或氢)置换X将降低功效和亲和力。
2.2，5-位的两个甲基为反式构型。反-2，5-位的甲基用氢取代以及改变取向为顺-2，5取代，则化合物在Ca2+流出测定中功效显著下降。
3.R1必须是摩尔折射率(molrefractory，MR)值为5.0≤MR≤9.0的基团，例如氯、溴、甲基、硝基或三氟甲基。
4.苯并呋喃和吲哚环系统的4位和7位必须是未取代的。
综合以上4项特征的本发明提供具有令人惊奇又意想不到的功效的化合物(见表2)。
本发明化合物显示有利的药代动力学特性。
MR概念的定义及其值可以参见下面的两个参考文献
Hansch，C.和Leo，A.，In Exploring QSARFundamentals andApplications in Chemistry and Biology.ACS，Washington，DC 1995。
Hansch，C.，Leo，A.和Hoekman，D.，In Exploring QSARHydrophobic，Electronic，and Steric Constants.ACS，Washington，DC1995。
化合物的制备本发明还提供以下制备式(I)化合物的方法。
方法 可以如下制备式(I)化合物将式(II)哌嗪衍生物用式(III)化合物处理，其中X如式(I)中的定义，L1为离去基团(例如卤离子(例如氯离子)、羟基、苯并三唑-1-基酯、异脲基)，Y、R1和R2如式(I)中的定义。本发明方法可以方便地在CH2Cl2或CHCl3中于例如0℃以上(例如20-120℃)实施。
最优选这样的方法在摩尔过量的碳二亚胺(例如N-环己基碳二亚胺)、N′-甲基聚苯乙烯和1-羟基苯并三唑存在下，将式(II)胺衍生物的氯仿溶液用摩尔过量的式(III)化合物处理，其中L1为羟基。在微波烘箱(Personal Chemistry的Smith Synthesiser)中，通常将反应混合物在60℃-150℃搅拌100-1000秒。在这些条件下，收率提高到99％。式(II)化合物可通过例如Tabia等(J.Med.Chem.1999，42，2870)介绍的已知方案制备。式(II)范围内的化合物可以由通常类似于所述文献的方法制备。式(III)化合物是市售的或者实施例1、实施例2和实施例4描述的。式(III)范围内的化合物可以由通常类似于所述文献的方法制备(Hodeges等，J.Med.Chem.1981，24，1184；Hino等，Chem.Pharm.Bull.1990，38，59)或者按照实施例1、实施例2和实施例4制备。
本发明还可使用二甲基-哌嗪衍生物的酸加合物，其中这样的酸包括例如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、磷酸、碳酸、苹果酸、柠檬酸、富马酸、酒石酸、草酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、三氟乙酸，等等。其它合适的盐参见Remington′s Pharmaceutical Sciences，第17版，Mack Publishing Company，Easton，PA，1985，第1418页。
实施例15-溴-1-苯并呋喃-2-甲酸向5-溴水杨醛(20g，98.5mmol)和溴丙二酸二乙酯(95％，37g，148mmol)的丁酮(200ml)溶液中加入碳酸钾(27.5g，197mmol)。将混合物回流4小时，然后让其达到室温。滤出碳酸钾，真空除去溶剂。残余物在CH2Cl2和1M硫酸水溶液间分配。干燥有机层，浓缩，得到油状物。将油状物用10％KOH/EtOH(125ml)处理，回流45分钟。浓缩反应混合物，加入2M硫酸水溶液(350ml)，将混合物升至90℃。在冷却至室温后，沉淀出产物，用EtOH/H2O(4∶1)重结晶(产量6.6g，28％)。
1H NMRδ(DMSO-d6)13.55(bs，1H)，7.97(d，1H)，7.67(d，1H)，7.60(m，2H).
其它1-苯并呋喃-2-甲酸可以按照类似的方法获得。
实施例25，6-二氯-1-吲哚-2-甲酸在剧烈搅拌下，向3，4-二氯甲苯(10.0g，62.1mmol)和硫酸(96-98％，50ml)的冰冷混合物中滴加硝酸(100％，2.87ml，68.3mmol)，滴加速度应该使反应温度不超过15℃。加入完毕后，让反应混合物达到室温，再搅拌60分钟。将反应混合物倒在250ml冰上，通过抽吸过滤分离出沉淀产物，用水洗涤，真空干燥，最后用庚烷重结晶(4，5-二氯-2-硝基甲苯的产量4.4g，34％)。
1H NMRδ(CDCl3)8.10(s，1H)；7.65(s，1H)；2.57(s，3H).
向4，5-二氯-2-硝基甲苯(2.0g，9.7mmol)的CCl4(15ml)溶液中加入N-溴丁二酰亚胺(2.6g，15mmol)和Bz2O2(50mg)。将反应混合物回流120小时，然后让其达到室温。反应混合物用水洗涤两次，干燥，浓缩，得到3.54g粗产物，粗产物由约70％4，5-二氯-2-硝基苄基溴和30％4，5-二氯-2-硝基苄基二溴组成。将此混合物悬浮于1，4-二烷(35ml)和水(35ml)的混合物。加入CaCO3(6.2g，62mmol)，将反应混合物回流18小时。让反应混合物达到室温，然后浓缩至干。向残余物的CH2Cl2(50ml)悬浮液中加入2M HCl水溶液，直到没有固体残留。水层用CH2Cl2萃取，干燥合并的有机层，浓缩。将粗产物溶于甲苯，用快速色谱纯化(硅胶60，庚烷/乙酸乙酯(19∶1→4∶1))(4，5-二氯-2-硝基苄基醇的产量1.15g，53％)。
1H NMRδ(CDCl3)8.27(s，1H)；7.98(s，1H)；5.02(s，2H).
向4，5-二氯-2-硝基苄基醇(1.15g，5.2mmol)的CHCl3(20ml)溶液中加入MnO2(4.0g，47mmol)。将反应混合物回流18小时，然后让其达到室温。通过硅藻土过滤反应混合物，浓缩(4，5-二氯-2-硝基苯甲醛的产量1.0g，87％)。
1H NMRδ(CDCl3)10.20(s，1H)；8.07(s，1H)；7.84(s，1H).
将4，5-二氯-2-硝基苯甲醛(0.85g，3.85mmol)和(乙氧羰基亚甲基)-三苯基正膦(phophorane)(1.84g，5.55mmol)的苯(25ml)溶液回流3小时。让反应混合物达到室温，然后浓缩。粗产物由快速色谱(硅胶60，甲苯)纯化((顺，反)-4，5-二氯-2-硝基肉桂酸乙酯的产量1.01g，90％)。将(顺，反)-4，5-二氯-2-硝基肉桂酸乙酯(1.01g，3.48mmol)溶于亚磷酸三乙酯(2ml)。在125℃下，将溶液滴加到亚磷酸三乙酯(5ml)中。加入完毕后，使温度升至145℃，反应混合物在此温度静置2小时。让反应混合物达到室温，然后浓缩。粗产物由快速色谱(硅胶60，庚烷/甲苯(10∶1→5∶1→1∶1→0∶1))纯化(5，6-二氯吲哚-2-甲酸乙酯的产量0.18g，20％)。
1H NMRδ(CDCl3)8.90(bs，1H)；7.81(s，1H)；7.57(s，1H)；7.16(s，1H)；4.48(q，2H)；1.45(t，3H).
向5，6-二氯吲哚-2-甲酸乙酯(0.16g，0.64mmol)的乙醇(99％，5ml)溶液中加入1M NaOH水溶液(5ml)。将反应混合物回流5分钟，然后让其达到室温。蒸发除去乙醇，用1M HCl水溶液酸化水性残余物。过滤收集沉淀产物，用水洗涤，真空干燥(5，6-二氯吲哚-2-甲酸的产量0.14g，96％)。
1H NMRδ(DMSO-d6)13.26(bs，1H)；12.06(s，1H)；7.94(s，1H)；7.60(s，1H)；7.07(d，1H).
其它吲哚-2-甲酸可以按照类似的方法获得。
实施例33.1(反)-1-(5-溴-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟苄基)-2，5-二甲基哌嗪将(反)-1-(4-氟苄基)-2，5-二甲基-哌嗪(220mg，1.0mmol)、5-溴-1-苯并呋喃-2-甲酸(342mg，1.5mmol)、1-羟基苯并三唑(200mg，1.5mmol)以及N-环己基碳二亚胺、N′-甲基聚苯乙烯(167g，3mmol载荷1.8mmol/g的树脂)在CHCl3中的混合物在微波烘箱中于110℃加热5分钟。让混合物达到室温，加入TBD-甲基聚苯乙烯(1000mg，3mmol载荷2.9mmol/g的树脂)，搅拌混合物过夜。将两种树脂滤出，用CHCl3和EtOAc洗涤。真空浓缩滤液，将残余物上样到快速柱色谱(甲苯→甲苯∶EtOAc，20∶1→甲苯∶EtOAc，1∶1)，得到标题产物，收率93％。
1H NMRδ(CDCl3)7.78(d，1H)，7.48(dd，1H)，7.38(d，1H)，7.33(dd，2H)，7.19(s，1H)，7.01(dd，2H)，4.63(bs，1H)，4.14(bs，1H)，3.62(m，2H)，3.46(d，1H)，3.08(bs，1H)，2.79(dd，1H)，2.30(d，1H)，1.43(d，3H)，1.06(d，3H).
按照类似的方法制备下列化合物3.2(反)-1-(5-氯-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氯苄基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)7.62(d，1H)，7.43(d，1H)，7.33(m，1H)，7.29(m，4H)，7.19(d，1H)，4.63(bs，1H)，4.14(bs，1H)，3.54(m，3H)，3.08(bs，1H)，2.80(dd，1H)，2.29(d，1H)，1.43(d，3H)，1.06(d，3H).
3.3(反)-4-(4-氟苄基)-1-(5-硝基-吲哚-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)9.67(s，1H)，8.65(s，1H)，8.20(d，1H)，7.49(d，1H)，7.35(dd，2H)，7.04(dd，2H)，6.92(s，1H)，4.81(m，1H)，4.33(d，1H)，3.57(m，3H)，3.15(bs，1H)，2.82(dd，1H)，2.35(d，1H)，1.51(d，3H)，1.07(d，3H).
3.4(反)-4-(4-氟苄基)-1-(5-硝基-苯并呋喃-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)8.60(d，1H)，8.32(dd，1H)，7.61(d，1H)，7.34(m，3H)，7.02(dd，2H)，4.61(bs，1H)，4.15(bs，1H)，3.56(m，3H)，3.11(bs 1H)，2.82(dd，1H)，2.33(d，1H)，1.46(d，3H)，1.08(d，3H).
3.5(反)-4-(4-氟苄基)-1-(7-甲氧基-苯并呋喃-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪(对照化合物D)1H NMRδ(CDCl3)7.34(dd，2H)，7.27(s，1H)，7.20(m，2H) 7.01(dd，2H)，6.87(dd，1H)，4.69(bs，1H)，4.20(bs，1H)，3.99(s，3H)，3.62(m，2H)，3.46(d，1H)，3.07(bs，1H)，2.80(dd，1H)，2.30(d，1H)，1.43(d，3H)，1.07(d，3H).
3.6(反)-1-(5-溴-吲哚-2-基-羰基)-4-(4-氟苄基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)10.17(s，1H)，7.77(s，1H)，7.36(m，4H)，7.04(dd，2H)，6.70(d，1H)，4.86(m，1H)，4.38(d，1H)，3.56(m，3H)，3.13(bs，1H)，2.81(dd，1H)，2.33(d，1H)，1.49(d，3H)，1.05(d，3H).
3.7(反)-4-(4-氟苄基)-1-(5-甲基-吲哚-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)9.54(s，1H)，7.43(s，1H)，7.36(m，3H)，7.12(d，1H)，7.04(dd，2H)，6.70(d，1H)，4.88(m，1H)，4.40(d，1H)，3.56(m，3H)，3.12(bs，1H)，2.81(dd，1H)，2.46(s，3H)，2.32(d，1H)，1.49(d，3H)，1.06(d，3H).
3.8(反)-1-(5-氯-吲哚-2-基-羰基)-4-(4-氟苄基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)9.40(s，1H)；7.61(d，1H)；7.36(d，1H)；7.34(dd，2H)；7.23(dd，1H)；7.03(m，2H)；6.69(d，1H)；4.82(m，1H)；4.34(d，1H)；3.56(m，3H)；3.12(m，1H)；2.80(dd，1H)；2.32(dd，1H)；1.48(d，3H)；1.05(d，3H).
3.9(反)-4-(4-氯苄基)-1-(5-氯-吲哚-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)9.35(s，1H)；7.61(d，1H)；7.35(d，1H)；7.32(dd，4H)；7.23(dd，1H)；6.69(d，1H)；4.81(m，1H)；4.34(d，1H)；3.56(m，3H)；3.12(m，1H)；2.80(dd，1H)；2.32(dd，1H)；1.48(d，3H)；1.05(d，3H).
3.10(反)-4-(4-氯苄基)-1-(5-硝基-苯并呋喃-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)8.60(d，1H)；8.33(dd，1H)；7.62(d，1H)；7.36(d，1H)；7.31(dd，4H)；4.61(m，1H)；4.12(m，1H)；3.56(m，3H)；3.11(m，1H)；2.82(dd，1H)；2.32(dd，1H)；1.46(d，3H)；1.08(d，3H).
3.11(反)-1-(5-溴-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氯苄基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)7.79(d，1H)；7.49(dd，1H)；7.39(d，1H)；7.31(dd，4H)；7.20(d，1H)；4.63(m，1H)；4.14(m，1H)；3.55(m，3H)；3.09(m，1H)；2.80(dd，1H)；2.30(d，1H)；1.44(d，3H)；1.07(d，3H).
3.12(反)-4-(4-氟苄基)-1-(5-甲基-苯并呋喃-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪
1H NMRδ(CDCl3)7.51(d，1H)；7.34(dd，2H)；7.31(s，1H)；7.23(d，1H)；7.12(d，1H)；7.02(t，2H)；4.67(bs，1H)；4.21(bd，1H)；3.63(d，1H)；3.58(bs，1H)；3.46(d，1H)；3.08(bs，1H)；2.80(dd，1H)；2.49(s，3H)；2.29(d，1H)；1.43(d，3H)；1.07(d，3H).
3.13(反)-4-(4-氟苄基)-1-(6-甲基-苯并呋喃-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)7.42(s，1H)；7.38(d，1H)；7.34(dd，2H)；7.20(m，2H)；7.02(t，2H)；4.68(bs，1H)；4.20(bd，1H)；3.63(d，1H)；3.59(bs，1H)；3.51(d，1H)；3.08(bs，1H)；2.79(dd，1H)；2.32(s，3H)；2.29(d，1H)；1.43(d，3H)；1.06(d，3H).
3.14(反)-4-(4-氟苄基)-1-(6-三氟甲氧基-苯并呋喃-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)7.51(m，2H)；7.28(dd，2H)；7.25(m，2H)；7.02(t，2H)；5.23(bs，1H)；4.15(bs，1H)；3.63(d，1H)；3.58(bs，1H)；3.47(d，1H)；3.09(bs，1H)；2.80(dd，1H)；2.31(d，1H)；1.44(d，3H)；1.07(d，3H).
3.15(反)-1-(5-氯-6-甲氧基-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟苄基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)7.63(s，1H)；7.34(dd，2H)；7.17(s，1H)；7.06(s，1H)；7.00(t，2H)；4.66(bs，1H)；4.19(bd，1H)；3.95(s，3H)；3.63(d，1H)；3.59(bd，1H)；3.47(d，1H)；3.08(bs，1H)；2.80(dd，1H)；2.30(d，1H)；1.43(d，3H)；1.07(d，3H).
3.16(反)-1-(5-溴-6-甲氧基-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟苄基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)7.81(s，1H)；7.34(dd，2H)；7.16(s，1H)；7.04(s，1H)；7.02(t，2H)；4.65(bs，1H)；4.19(bd，1H)；3.95(s，3H)；3.62(d，1H)；3.58(bd，1H)；3.47(d，1H)；3.08(bs，1H)；2.80(dd，1H)；2.30(d，1H)；1.43(d，3H)；1.07(d，3H).
3.17(反)-4-(4-氟苄基)-1-(6-甲氧基-5-硝基-苯并呋喃-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪
1H NMRδ(CDCl3)8.17(s，1H)；7.34(dd，2H)；7.24(s，1H)；7.17(s，1H)；7.02(t，2H)；4.62(bs，1H)；4.13(bs，1H)；3.63(d，1H)；3.59(bs，1H)；3.47(d，1H)；3.10(bs，1H)；2.80(dd，1H)；2.32(d，1H)；1.44(d，3H)；1.07(d，3H).
3.18(反)-1-(5-氯-6-甲基-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟苄基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)7.62(s，1H)；7.38(s，1H)；7.34(dd，2H)；7.17(s，1H)；7.00(t，2H)；4.63(bs，1H)；4.16(bs，1H)；3.63(d，1H)；3.58(bd，1H)；3.46(d，1H)；3.08(bs，1H)；2.79(dd，1H)；2.49(s，3H)；2.30(d，1H)；1.43(d，3H)；1.06(d，3H).
3.19(反)-1-(5-溴-6-甲基-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟苄基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)7.82(s，1H)；7.40(s，1H)；7.34(dd，2H)；7.16(s，1H)；7.02(t，2H)；4.63(bs，1H)；4.15(bs，1H)；3.62(d，1H)；3.59(bs，1H)；3.46(d，1H)；3.08(bs，1H)；2.79(dd，1H)；2.51(s，3H)；2.29(d，1H)；1.43(d，3H)；1.06(d，3H).
3.20(反)-1-(5，6-二氯-吲哚-2-基-羰基)-4-(4-氟苄基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)9.31(bs，1H)；7.72(s，1H)；7.54(s，1H)；7.34(dd，2H)；7.03(t，2H)；6.67(d，1H)；4.79(bs，1H)；4.31(bd，1H)；3.63(d，1H)；3.58(bs，1H)；3.47(d，1H)；3.12(bs，1H)；2.79(dd，1H)；2.32(d，1H)；1.47(d，3H)；1.05(d，3H).
3.21(反)-1-(6-溴-5-氯-吲哚-2-基-羰基)-4-(4-氟苄基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)9.38(bs，1H)；7.73(s，1H)；7.72(s，1H)；7.34(dd，2H)；7.03(t，2H)；6.66(d，1H)；4.78(bs，1H)；4.31(bd，1H)；3.63(d，1H)；3.58(bs，1H)；3.47(d，1H)；3.12(bs，1H)；2.79(dd，1H)；2.32(d，1H)；1.47(d，3H)；1.05(d，3H).
3.22(反)-1-(5-溴-6-氯-吲哚-2-基-羰基)-4-(4-氟苄基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)9.60(bs，1H)；7.89(s，1H)；7.57(s，1H)；7.35(dd，2H)；7.03(t，2H)；6.66(s，1H)；4.79(bs，1H)；4.32(bd，1H)；3.63(d，1H)；3.59(bs，1H)；3.47(d，1H)；3.12(bs，1H)；2.80(dd，1H)；2.33(d，1H)；1.47(d，3H)；1.05(d，3H).
3.23(反)-1-(5-氯-6-三氟甲基-吲哚-2-基-羰基)-4-(4-氟苄基)-2，5-二甲基哌嗪1H NMRδ(CDCl3)9.93(bs，1H)；7.82(s，1H)；7.75(s，1H)；7.35(dd，2H)；7.03(t，2H)；6.72(d，1H)；4.80(bs，1H)；4.33(bd，1H)；3.67(bs，1H)；3.64(d，1H)；3.48(d，1H)；3.13(bs，1H)；2.81(dd，1H)；2.34(d，1H)；1.49(d，3H)；1.05(d，3H).
实施例44.1(反)-1-(5-氯-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟苄基)-2，5-二甲基哌嗪将5-氯-1-苯并呋喃-2-甲酸(827mg，4.2mmol)的亚硫酰二氯(4ml)溶液回流过夜。真空除去溶剂，以定量产量得到5-氯-1-苯并呋喃-2-羰基氯。
向(反)-1-(4-氟苄基)-2，5-二甲基哌嗪(712mg，3.2mmol)和三乙胺(506mg，5mmol)的CH2Cl2(5ml)冰冷溶液中滴加5-氯-1-苯并呋喃-2-羰基氯(4.2mmol)的CH2Cl2(2ml)溶液。在室温下搅拌反应混合物过夜，用0.5M NaOH水溶液洗涤。干燥有机层，浓缩后上样到快速柱色谱(CHCl3/MeOH；1∶0→10∶1)，得到1.05g(82％)标题化合物。
1H NMRδ(CDCl3)7.59(d，1H)，7.40(d，1H)，7.31(m，3H)，7.17(d，1H)，6.99(dd，2H)，4.61(bs，1H)，4.12(bs，1H)，3.60(m，2H)，3.44(d，1H)，3.06(bs，1H)，2.77(dd，1H)，2.28(d，1H)，1.41(d，3H)，1.04(d，3H).
药理学方法体外试验在竞争性结合亲和性测定中，通过测量化合物从CCR1受体置换出125I-Mip-1α的能力，可以确定化合物对CCR1受体的结合亲和性。
Mip-1α在CCR1受体的结合导致胞内钙浓度升高。在Ca2+流出测定中确定本发明化合物对CCR1受体的这种生物反应的阻断能力。
体外竞争性结合亲和性测定法试剂和溶液1.Screen ReadyTMTargets克隆的人CCR1趋化因子受体，在CHO细胞中表达，包被在96孔FlashPlate上(Perkin Elmer Cat#6120525)2.配体将125I-MIP-1α(Perkin Elmer，比活为2200Ci/mmol)用水复溶至25μCi/ml。
3.测定缓冲液50mM HEPES，1mM CaCl2，5mM MgCl2，0.2％BSA，pH7.4。
4.MIP-1α(Peprotech EC Ltd Cat#300-08)。
5.将本发明化合物溶于DMSO。进行连续稀释，每种化合物筛选10个浓度，绘制剂量曲线，IC50值根据剂量曲线确定。
测定程序将包被在FlashPlate上的细胞膜与125I-MIP-1α一起在不同浓度的化合物存在或不存在下于室温孵育1小时。各个孔的放射性用微量培养板闪烁计数器测定。非特异性结合定义为在1250倍未标记的MIP-1α存在下的结合。按照生产商的Screen ReadyTMTargets说明书进行测试。在此测定中，证明本发明化合物对CCR1受体具有亲和性。
对人单核细胞的体外Ca2+流出测定法试剂和溶液1.细胞培养a)THP-1(ATCC Cat#TIB202)b)组织培养基补充了10％(v/v)胎牛血清的RPMI 1640和Ultraglutamine 1。在下文中称该培养基为“生长培养基”。
2.测定缓冲液HBSS(Hanks平衡盐溶液)，20mM HEPES，1mMCaCl2，1mM MgCl2，2.5mM丙磺舒，pH7.4。
3.Fluo-4AM(Molecular Probes Cat#F14201)
4.PluronicF-127(Molecular Probes Cat#P-6867)5.将本发明化合物溶于DMSO。进行连续稀释，每种化合物筛选9个浓度，绘制剂量曲线，IC50值根据剂量曲线确定。
6.MIP-1α(Peprotech EC Ltd Cat#300-08)7.Victor21420(Perkin Elmer)8.MicroliteTM2+(Dynex Cat#7572)测定程序在T-75cm2培养瓶中，THP-1细胞在生长培养基中于37℃、5％CO2下生长。离心收获细胞，重新悬浮于测定缓冲液。在37℃、5％CO2下将细胞加载5μM Fluo-4和0.02％pluronic acid(终浓度)30分钟。用测定缓冲液洗涤以除去过量染料。将细胞重新悬浮，以105细胞/孔加入到装有化合物的Microlite板中，然后在37℃、5％CO2下孵育15分钟。将细胞用MIP-1α刺激，用Victor2测量胞内游离Ca2+浓度变化。在此测定中，证明本发明化合物对THP-1细胞中MIP-1α介导的Ca2+动员具有抑制能力。
小鼠的体内生物利用度给予雌性小鼠(SJL/N Tac)一剂静脉内(iv)或口服(po)剂量的每盒5种或6种化合物的混合物(标称剂量1mg/kg/化合物)，混合物溶于包含0.5％N，N′-二甲基乙酰胺(DMA)和15％磺丁基醚β-环糊精(Captisol)的溶液。在每个时间点从每个剂量组的一只小鼠采集血样，直到各自给药24小时后。各个化合物的剂量制剂和血浆浓度由LC-MS/MS测定。用WinNonlin Professional(4.0.1版)通过非房室分析确定药代动力学参数。线性回归分析对数血浆浓度-时间曲线的末端斜率，估计消除速率常数λ。用线性/对数梯形法则计算血浆浓度-时间曲线下面积AUC0-t。用估计为Cz/λ的剩余面积计算AUCinf。计算的最后时间点的血浆浓度Cz由回归方程得出。口服生物利用度(F)计算为
F口服＝(AUCinf，po/AUCinf，iv)·(剂量iv/剂量po)。
药效动力学测定采用Horuk，R.和Ng，H.，Med.Res.Rev.，2000，20，155和Horuk，R.Methods，2003，29，369及其中的参考文献所介绍的方法，证实了本发明化合物治疗炎性疾病、自身免疫性疾病、增殖性疾病或过度增殖性疾病(例如类风湿性关节炎、多发性硬化、系统性红斑狼疮、炎性肠病或哮喘)的治疗功效。
因此，本发明的一个实施方案提供包含式I化合物的组合物，用于治疗炎性疾病、自身免疫性疾病、增殖性疾病或过度增殖性疾病。
利用所述参考文献中的方法，还证实了本发明化合物与环孢菌素A联合使用的协同作用。因此，本发明的一个实施方案提供包含式I化合物以及低于肾毒性量的环孢菌素A的组合物。
采用竞争性结合亲和性测定法以及Ca2+流出测定法描述的程序，测试了本发明不同化合物阻断Ca2+流出的能力(IC50Ca)。表2列出了部分实施例以及化合物A、B、C和D的试验结果，其中所有的IC50值单位都为nM(纳摩尔)。表2仅仅示例性说明本发明，并非对本发明范围进行限制。
表2 注解所有2，5-二甲基哌嗪衍生物都合成为外消旋混合物，经测试也为外消旋混合物。
本发明化合物在小鼠中具有口服生物利用度。采用体内生物利用度测定法描述的程序，在给予1mg/kg标称剂量的本发明的不同化合物后，测试各种化合物的清除率(CL；L/h/kg)、血浆半衰期(t1/2；hrs)以及口服生物利用度(F；％)。表3列出了部分实施例的试验结果。表3仅仅示例性说明本发明，并非对本发明范围进行限制。
表3 给药方法有效量的式(I)化合物优选通过常用给药途径并配制为常用药物组合物给予需要这种治疗的患者，所述药物组合物包含有效量的活性成分以及合适的药用成分。这样的组合物可以采用各种不同的形式，例如用于口服给药的溶液剂、混悬剂、乳剂、片剂、胶囊剂和散剂，用于胃肠外给药的无菌溶液剂，用于直肠给药的栓剂，或者合适的局部制剂。选择和制备合适药物制剂的常规方法参见例如Pharmaceuticals-The Science of Dosage Form Design，M.B.Aulton，Churchill Livingstone，1988。
治疗RA的合适日剂量为0.005mg/kg体重至约10mg/kg体重，优选0.025mg/kg体重至2mg/kg体重，这取决于所治疗的具体疾病、患者的年龄和体重、以及患者对药物治疗的反应。准确的个体剂量以及日剂量将由医生根据标准医学原则确定。
权利要求
1.一种以下通式(I)的化合物或者其药学上可接受的盐或溶剂合物 其中X为氟原子或氯原子；位于哌嗪环2位和5位的两个甲基彼此为反式构型；Y为NH或O；R1选自氢、氯、溴、硝基、甲基或三氟甲基；R2选自氢、卤素、甲基、三氟甲基、甲氧基或三氟甲氧基。
2.权利要求1的化合物，其中X为氟原子；Y为NH或O；R1选自氢、氯或溴；R2选自氢、氯、溴、甲基、三氟甲基、甲氧基或三氟甲氧基。
3.权利要求1或2的化合物，所述化合物是(1)(反)-1-(5-溴-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟苄基)-2，5-二甲基哌嗪；(2)(反)-4-(4-氯苄基)-1-(5-氯-吲哚-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪；(3)(反)-4-(4-氟苄基)-1-(6-甲基-苯并呋喃-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪；(4)(反)-4-(4-氟苄基)-1-(6-三氟甲氧基-苯并呋喃-2-基-羰基)-2，5-二甲基哌嗪；(5)(反)-1-(5-氯-6-甲氧基-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟苄基)-2，5-二甲基哌嗪；(6)(反)-1-(5-溴-6-甲氧基-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟苄基)-2，5-二甲基哌嗪；(7)(反)-1-(5-氯-6-甲基-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟苄基)-2，5-二甲基哌嗪；(8)(反)-1-(5-溴-6-甲基-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟苄基)-2，5-二甲基哌嗪；(9)(反)-1-(5，6-二氯-吲哚-2-基-羰基)-4-(4-氟苄基)-2，5-二甲基哌嗪；(10)(反)-1-(6-溴-5-氯-吲哚-2-基-羰基)-4-(4-氟苄基)-2，5-二甲基哌嗪；(11)(反)-1-(5-溴-6-氯-吲哚-2-基-羰基)-4-(4-氟苄基)-2，5-二甲基哌嗪；(12)(反)-1-(5-氯-6-三氟甲基-吲哚-2-基-羰基)-4-(4-氟苄基)-2，5-二甲基哌嗪；(13)(反)-1-(5-氯-苯并呋喃-2-基-羰基)-4-(4-氟苄基)-2，5-二甲基哌嗪。
4.一种制备式(I)化合物的方法 该方法包括将式(II)的哌嗪衍生物用式(III)的化合物在有机溶剂中于0℃-120℃处理，其中L1为离去基团。
5.一种组合物，该组合物包含治疗有效量的下式(I)的化合物或者其药学上可接受的盐或溶剂合物以及药学上可接受的成分 其中X为氟原子或氯原子；位于哌嗪环2位和5位的两个甲基彼此为反式构型；Y为NH或O；R1选自氢、氯、溴、硝基、甲基或三氟甲基；R2选自氢、卤素、甲基、三氟甲基、甲氧基或三氟甲氧基。
6.权利要求5的组合物，所述组合物还包含低于肾毒性量的环孢菌素A。
7.权利要求1-2的化合物在制备用于治疗以下疾病的药物中的用途炎性疾病、自身免疫性疾病、增殖性疾病或过度增殖性疾病。
8.权利要求7的用途，其中所述药物用于治疗类风湿性关节炎、多发性硬化、系统性红斑狼疮、炎性肠病、同种异体移植物排斥或哮喘。
全文摘要
式(I)的化合物或者其药学上可接受的盐或溶剂合物、包含它们的药物组合物以及它们的治疗用途，它们用于治疗炎性疾病、自身免疫性疾病、增殖性疾病或过度增殖性疾病；式中X为氟原子或氯原子；位于哌嗪环2位和5位的两个甲基彼此为反式构型；Y为NH或O；R
文档编号C07D307/85GK1918122SQ200480041973
公开日2007年2月21日 申请日期2004年11月23日 优先权日2004年2月25日
发明者E·维尔纳, H·桑丁 申请人:活跃生物技术有限公司