专利名称：氧化槐果碱及其盐类的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种生物碱的制备方法，特别是涉及氧化槐果碱及其盐类的制备方法。
背景技术：
苦豆子(Sophora alopecuroides L)为豆科槐属植物，始载于《新疆草药手册》，维吾尔名“布亚”，别名苦甘草、苦参草、苦豆根及西豆根。它集中分布在我国西北地区，尤以宁夏、甘肃、青海、新疆及内蒙古为多。全株味极苦，性寒，有毒，具有清热解毒、抗菌消炎、祛风杀虫等多种功效。民间用其根治疗喉痛、咳嗽、痢疾及湿疹等。
苦豆子植物体内化学成分主要是蛋白、糖类、有机酸、色素及生物碱等。国内外研究的重点放在生物碱上，苦豆子生物碱属喹诺里西啶(quinolizidine)生物碱，是由三价氮原子形成稠合的哌啶环，所以又称双稠哌啶，仍属于哌啶或吡啶(piperidine)的衍生物，一般称之为羽扇豆生物碱(Lupin alkoloids)。
苦豆子种子中生物碱含量约8.11％，目前已分离出的生物碱有23种之多。按其结构可分为四个类型①羽扇豆碱(Lupinine)——二环型，②金雀花碱(Cytisine)——三环型，③鹰爪豆碱(Sparteine)——四环型，④苦参碱(Matrine)——四环型。这些生物碱包括苦参碱、槐定碱、槐果碱、拉马宁碱、槐胺碱、新槐胺碱、3α-羟基槐定碱，13，14-脱氢槐定碱、N-羟基槐定碱、氧化苦参碱、氧化槐定碱、氧化槐果碱、苦豆碱、臭豆碱、金雀花碱等。研究发现苦豆子生物碱在抗肿瘤、抗菌、抗心律失常、抗乙肝、免疫调节等方面具有重要的药理活性和应用前景。
鉴于上述情况，苦豆子总生物碱的制备方法研究日益引起药学工作者的关注。目前文献报道和专利公开的方法，工艺大多繁杂，存在费时，产品难于纯化等缺点。因此，有必要进一步深入研究，探索适宜工业化生产的苦豆子生物碱的制备工艺，以适应目前医药工业，医药科研对该类物质日益增长的需求。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术中的不足，提供一种易于工业化生产的，产品纯度较高的氧化槐果碱的制备方法；本发明的第二个目的是提供一种氧化槐果碱盐的制备方法。
本发明的技术方案概述如下一种氧化槐果碱的制备方法，包括如下步骤1)将槐果碱加入所述槐果碱1-4倍质量的双氧水水溶液或过碳酸钠水溶液或过氧化脲水溶液中至少一种，调pH为2-5，在20℃-50℃，反应5-10h，所述双氧水水溶液体积百分浓度为10-30％，所述过碳酸钠水溶液的质量百分浓度为30-40％，所述过氧化脲水溶液的质量百分浓度为30-40％；2)用C1-C2的卤代烷或苯或甲苯或二甲苯中的一种萃取未反应的槐果碱，直至萃取液经薄层色谱检查无槐果碱为止，调pH为8.0-8.5；3)减压浓缩至原体积的1/15-1/20，加无水乙醇至溶解，过滤，减压浓缩至干，真空干燥至完全固化；4)用体积比为1∶3-4的无水乙醇和丙酮的混合溶剂反复重结晶，得到白色氧化槐果碱。
所述步骤1)中调节pH值的酸为盐酸或硫酸。
所述步骤2)中C1-C2的卤代烷为1，2-二氯乙烷、氯乙烷、二氯甲烷、氯仿或四氯化碳。薄层色谱检查方法为取薄层层析硅胶板，将萃取液样品及对照品点于薄层板底部，以体积比为1∶1∶1-4的正丙醇∶氯仿∶甲醇为展开剂，进行薄层层析，再用改良碘化铋钾试液显色。所述调节pH值的碱为氢氧化钠或氨水。
一种氧化槐果碱盐的制备方法，包括如下步骤1)将槐果碱加入所述槐果碱1-4倍质量的双氧水水溶液或过碳酸钠水溶液或过氧化脲水溶液中至少一种，调pH为2-5，在20℃-50℃，反应5-10h，所述双氧水水溶液体积百分浓度为10-30％，所述过碳酸钠水溶液的质量百分浓度为30-40％，所述过氧化脲水溶液的质量百分浓度为30-40％；2)用C1-C2的卤代烷或苯或甲苯或二甲苯中的一种萃取未反应的槐果碱，直至萃取液经薄层色谱检查无槐果碱为止，调pH为8.0-8.5；3)减压浓缩至原体积的1/15-1/20，加无水乙醇至溶解，过滤，减压浓缩至干，真空干燥至完全固化；4)用体积比为1∶3-4的无水乙醇和丙酮的混合溶剂反复重结晶，得到白色氧化槐果碱。
5)将1摩尔氧化槐果碱用溶剂溶解，(所加溶剂量是使氧化槐果碱溶解为宜)再加1-1.5摩尔有机酸或无机酸的溶液，15℃-30℃反应1-2h，过滤，滤液减压浓缩至干，真空干燥，即制成一种氧化槐果碱盐。
所述步骤1)中调节pH值的酸为盐酸或硫酸。
所述步骤2)中C1-C2的卤代烷为1，2-二氯乙烷、氯乙烷、二氯甲烷、氯仿或四氯化碳。薄层色谱检查方法为取薄层层析硅胶板，将萃取液样品及对照品点于薄层板底部，以体积比为1∶1∶1-4的正丙醇∶氯仿∶甲醇为展开剂，进行薄层层析，再用改良碘化铋钾试液显色。所述调节pH值的碱为氢氧化钠或氨水。
所述步骤5)中溶剂为水、甲醇、乙醇、四氢呋喃、异丙醇、二氧六环中至少一种，所述有机酸为C1-C15的一元酸或C2-C15的二元酸或C2-C9的氨基酸或C1-C12的磺酸，所述无机酸为盐酸或硫酸或磷酸。
所述步骤5)中C1-C15的一元酸包括甲酸、乙酸、十三酸、十五酸等，所述C2-C15的二元酸包括乙二酸、丁二酸、十五二酸等，C2-C9的氨基酸包括甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸等，所述C1-C12的磺酸包括甲磺酸、乙磺酸、丁磺酸、十二烷基磺酸等。
本发明的优点是本发明的氧化槐果碱及其盐类的制备方法简单，省时，成本低，纯度和收率高。
本发明的反应条件温和，所加入的试剂毒性低，对环境污染小，工艺适宜工业化生产，产品可以满足作为医药原料的需求。
图1是本发明的工艺流程图。
具体实施例方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1一种氧化槐果碱的制备方法，包括如下步骤1)在150ml 30％的H2O2水溶液中，加入50g槐果碱，用浓盐酸调pH＝2，30℃反应8小时；2)用1，2-二氯乙烷萃取未反应的槐果碱，直至反应液经薄层色谱检查无槐果碱为止，用10％NaOH水溶液调反应液pH为8；3)将反应液减压浓缩至原体积的1/15，无水乙醇溶解，过滤，滤液减压浓缩至干，真空干燥至完全固化；4)用无水乙醇∶丙酮(1∶3)混合溶剂重结晶3次，得到白色氧化槐果碱粉末36.4g。
薄层色谱检查方法为取薄层层析硅胶板，将萃取液样品及对照品点于薄层板底部，以体积比为1∶1∶1的正丙醇∶氯仿∶甲醇为展开剂，进行薄层层析，再用改良碘化铋钾试液显色。
实施例2一种氧化槐果碱的制备方法，包括如下步骤1)将50g槐果碱，加入150g30％过碳酸钠水溶液，用浓硫酸调pH＝5，20℃反应10小时；2)用氯乙烷萃取未反应的槐果碱，直至反应液经薄层色谱检查无槐果碱为止，用10％NaOH水溶液调反应液pH为8.5；3)将反应液减压浓缩至原体积的1/20，无水乙醇溶解，过滤，滤液减压浓缩至干，真空干燥至完全固化；4)用无水乙醇∶丙酮(1∶4)混合溶剂重结晶3次，得到氧化槐果碱。
薄层色谱检查方法为取薄层层析硅胶板，将萃取液样品及对照品点于薄层板底部，以体积比为1∶1∶3的正丙醇∶氯仿∶甲醇为展开剂，进行薄层层析，再用改良碘化铋钾试液显色。
实施例3一种氧化槐果碱的制备方法，包括如下步骤1)将50g槐果碱，加入200g40％过氧化脲水溶液，用浓硫酸调pH＝3，50℃反应5小时；2)用二氯甲烷萃取未反应的槐果碱，直至反应液经薄层色谱检查无槐果碱为止，用氨水调反应液pH为8.5；3)将反应液减压浓缩至原体积的1/16，无水乙醇溶解，过滤，滤液减压浓缩至干，真空干燥至完全固化；4)用无水乙醇∶丙酮(1∶3)混合溶剂重结晶3次，得到氧化槐果碱。
薄层色谱检查方法为取薄层层析硅胶板，将萃取液样品及对照品点于薄层板底部，以体积比为1∶1∶4的正丙醇∶氯仿∶甲醇为展开剂，进行薄层层析，再用改良碘化铋钾试液显色。
实施例4一种氧化槐果碱的制备方法，包括如下步骤1)在150g30％的H2O2水溶液中，加入50g槐果碱，用浓盐酸调pH＝2，30℃反应8小时；2)用氯仿萃取未反应的槐果碱，直至反应液经薄层色谱检查无槐果碱为止，用10％NaOH水溶液调反应液pH为8.0；3)将反应液减压浓缩至原体积的1/15，无水乙醇溶解，过滤，滤液减压浓缩至干，真空干燥至完全固化；4)用无水乙醇∶丙酮(1∶3)混合溶剂重结晶3次，得到氧化槐定碱。
薄层色谱检查方法为取薄层层析硅胶板，将萃取液样品及对照品点于薄层板底部，以体积比为1∶1∶2的正丙醇∶氯仿∶甲醇为展开剂，进行薄层层析，再用改良碘化铋钾试液显色。
实施例5一种氧化槐果碱的制备方法，制备工艺同实施例1，所不同的是步骤2)中萃取溶剂为四氯化碳。
实施例6一种氧化槐果碱的制备方法，制备工艺同实施例1，所不同的是步骤2)中萃取溶剂为苯。
实施例7一种氧化槐果碱的制备方法，制备工艺同实施例1，所不同的是步骤2)中萃取溶剂为二甲苯。
实施例8一种氧化槐果碱盐的制备方法，包括如下步骤将实施例1制备的1mol氧化槐果碱溶于200ml甲醇中，搅拌条件下加入1.5mol甲酸，15℃反应2h，过滤，滤液减压浓缩至干，真空干燥，即制成一种氧化槐果碱盐。
实施例9一种氧化槐果碱盐的制备方法，包括如下步骤将实施例1制备的1mol氧化槐果碱溶于200ml乙醇中，搅拌条件下加入1.5mol十五酸，30℃反应1h，过滤，滤液减压浓缩至干，真空干燥，即制成一种氧化槐果碱盐。
实施例10一种氧化槐果碱盐的制备方法，包括如下步骤将实施例1制备的1mol氧化槐果碱溶于200ml四氢呋喃中，搅拌条件下加入1mol乙二酸，20℃反应1.5h，过滤，滤液减压浓缩至干，真空干燥，即制成一种氧化槐果碱盐。
实施例11一种氧化槐果碱盐的制备方法，包括如下步骤将实施例1制备的1mol氧化槐果碱溶于200ml异丙醇中，搅拌条件下加入1mol十五二酸，20℃反应1.5h，过滤，滤液减压浓缩至干，真空干燥，即制成一种氧化槐果碱盐。
实施例12一种氧化槐果碱盐的制备方法，包括如下步骤将实施例1制备的1mol氧化槐果碱溶于200ml二氧六环中，搅拌条件下加入1mol乙酸，20℃反应1.5h，过滤，滤液减压浓缩至干，真空干燥，即制成一种氧化槐果碱盐。
实施例13一种氧化槐果碱盐的制备方法，包括如下步骤将实施例1制备的1mol氧化槐果碱溶于200ml乙醇中，搅拌条件下加入1mol丁二酸，20℃反应1.5h，过滤，滤液减压浓缩至干，真空干燥，即制成一种氧化槐果碱盐。
实施例14一种氧化槐果碱盐的制备方法，包括如下步骤
将实施例1制备的1mol氧化槐果碱溶于200ml水中，搅拌条件下加入1mol甘氨酸(也可以选用丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸或甲磺酸、乙磺酸、丁磺酸、十二烷基磺酸)。20℃反应1.5h，过滤，滤液减压浓缩至干，真空干燥，即制成一种氧化槐果碱盐。
实施例15实施例1所制备的氧化槐果碱的经IR、MS、1H-NMR、13C-NMR、熔点、TLC及性状分析，分子式为C15H22N2O2，分子量(MW)为262，与文献报道一致。产品质量检验合格，并对其稳定性进行了研究。
氧化槐果碱具有如下理化性质本品为白色固体粉末，Mp208-209℃。
结构确证1.红外光谱IR(KBr)cm-13080，2940，2873(CH)，2210，1656，1559，1145，952，820。
2.质谱EI-MSm/z(％)262(M+，0.3)，245(M+-OH，13.8)，225(10.6)，219(25.0)，204(13.0)，150(24.8)，136(16.0)，112(10.2)，96(8.0)。
3.氢核磁共振谱1H-NMR(CDCl3，TMS)δppm6.88(1H，m，13-H)，5.98(1H，dd，14-H)，4.58(1H，m，11-H)，3.93(1H，dd，17-He)，3.80(1H，t，17-Ha)，3.50(3H，m，6-H，10，2-He)，3.38(2H，m，10，2-Ha)，2.85(1H，m，12-He)，2.47(1H，m，3-Ha)，2.34(1H，m，9-Ha)，2.20(2H，m，12-Ha，5-H)，2.05(2H，m，7-H，8-He)，1.70-2.00(5H，m，4，3，9-He，8，4-Ha)。
4.碳核磁共振谱13C-NMR(CDCl3，TMS)δppm169.06(C-15)，142.68(C-13)，122.68(C-14)，67.98(C-10)，67.78(C-2)，66.95(C-6)，52.56(C-11)，42.76(C-17)，39.42(C-7)，32.02(C-5)，29.76(C-12)，24.92(C-4)，23.68(C-8)，16.88(C-3)，16.82(C-9)。
5.产品质量检验取本发明所得氧化槐果碱20g进行检验，结果如下检查项目 检查结果[性状] 白色结晶性粉末[鉴别]*(1)正反应[检查]水分％ 8％
炽灼残渣％0.01酸碱度8.0～8.5澄清度澄清重金属10ppm有关物质％* 0.5[含量测定]* 按干燥品计算98.5％结论符合规定。
*项目鉴别方法详述如下(1)取本品1.0mg，加水5ml溶解，置两只试管中，分别滴加碘化汞钾试液和碘化铋钾试液，即生成淡黄色沉淀和橙红色沉淀。
*项目检查方法详述如下有关物质照高效液相色谱法(中国药典附录VD)测定。
色谱条件与系统适应性试验 用氨基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈磷酸缓冲液(pH2.0)∶无水乙醇＝80∶13∶8为流动相；流速为1ml/min；检测波长220nm。
取本品适量，精密称定，加水溶解制成每1ml中含1mg的溶液，作为高浓度供试品溶液；精密量取1ml高浓度供试品溶液至25ml量瓶中，用水稀释至刻度，作为低浓度供试品溶液。分别取20μl低浓度和高浓度供试品溶液注入液相色谱仪，并记录色谱图，测量峰面积，按下列公式计算。
(1)最大杂质峰量不得大于2.0％。
最大杂质峰量＝100ri/rt+25rv(2)有关物质的总量不得大于5.0％。
有关物质总量＝100ri/rt+25rv式中ri为除溶剂峰外高浓度供试品溶液中最大有关物质的峰响应；rt为除溶剂峰以外高浓度供试品溶液中所有有关物质的峰响应之和；rv为低浓度供试品溶液中的氧化槐定碱峰响应。
含量测定 照中国药典2005版(中国药典附录VD)高效液相色谱法测定。
色谱条件与系统适应性试验用氨基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-磷酸水溶液(pH2.0)-无水乙醇(80∶13∶8)为流动相；流速为每分钟1ml；检测波长为220nm。理论板数氧化槐果碱峰计算不低于1000。
测定法取本品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含1mg的溶液，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取氧化槐果碱对照品适量，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。
2.对氧化槐果碱稳定性进行加速实验考察(高温、高湿、强光照射)，结果发现其对高温、高湿、强光照射稳定、无分解，纯度及理化指标不变。技术指标达到新药报批的要求，工艺适合工业化生产。
权利要求
1.一种氧化槐果碱的制备方法，其特征是包括如下步骤1)将槐果碱加入所述槐果碱1-4倍质量的双氧水水溶液或过碳酸钠水溶液或过氧化脲水溶液中至少一种，调pH为2-5，在20℃-50℃，反应5-10h，所述双氧水水溶液体积百分浓度为10-30％，所述过碳酸钠水溶液的质量百分浓度为30-40％，所述过氧化脲水溶液的质量百分浓度为30-40％；2)用C1-C2的卤代烷或苯或甲苯或二甲苯中的一种萃取未反应的槐果碱，直至萃取液经薄层色谱检查无槐果碱为止，调pH为8.0-8.5；3)减压浓缩至原体积的1/15-1/20，加无水乙醇至溶解，过滤，减压浓缩至干，真空干燥至完全固化；4)用体积比为1∶3-4的无水乙醇和丙酮的混合溶剂反复重结晶，得到白色氧化槐果碱。
2.根据权利要求1所述的一种氧化槐果碱的制备方法，其特征是所述步骤1)中调节pH值的酸为盐酸或硫酸。
3.根据权利要求1所述的一种氧化槐果碱的制备方法，其特征是所述步骤2)中C1-C2的卤代烷为1，2-二氯乙烷、氯乙烷、二氯甲烷、氯仿或四氯化碳。薄层色谱检查方法为取薄层层析硅胶板，将萃取液样品及对照品点于薄层板底部，以体积比为1∶1∶1-4的正丙醇氯仿甲醇为展开剂，进行薄层层析，再用改良碘化铋钾试液显色。所述调节pH值的碱为氢氧化钠或氨水。
4.一种氧化槐果碱盐的制备方法，其特征是包括如下步骤将权利要求1或2或3制备的1摩尔氧化槐果碱用溶剂溶解，再加1-1.5摩尔有机酸或无机酸的溶液，15℃-30℃反应1-2h，过滤，滤液减压浓缩至干，真空干燥，即制成一种氧化槐果碱盐。
5.根据权利要求4所述的一种氧化槐果碱盐的制备方法，其特征是所述溶剂为水、甲醇、乙醇、四氢呋喃、异丙醇、二氧六环中至少一种，所述有机酸为C1-C15的一元酸或C2-C15的二元酸或C2-C9的氨基酸或C1-C12的磺酸，所述无机酸为盐酸或硫酸或磷酸。
全文摘要
本发明公开了氧化槐果碱及其盐类的制备方法，氧化槐果碱盐的制备方法，包括步骤1)将槐果碱加入双氧水水溶液中，调pH为2－5，在20℃－50℃，反应5－10h。2)用1，2－二氯乙烷萃取未反应的槐果碱，直至萃取液经薄层色谱检查无槐果碱为止，调pH为8.0－8.5；3)减压浓缩，加无水乙醇至溶解，过滤，减压浓缩至干，真空干燥至完全固化；4)用无水乙醇和丙酮的混合溶剂重结晶，得到白色氧化槐果碱，5)将氧化槐果碱用溶剂溶解，再加有机酸或无机酸的溶液，15℃－30℃反应1－2h，过滤，滤液减压浓缩，真空干燥，即制成一种氧化槐果碱盐。本发明制备工艺简单，省时，成本低，所加入的试剂毒性小，对环境污染小，工艺适宜工业化生产，产品可以满足作为医药原料的需求。
文档编号C07D471/22GK1935809SQ20061001553
公开日2007年3月28日 申请日期2006年8月31日 优先权日2006年8月31日
发明者洪阁, 刘培勋 申请人:中国医学科学院放射医学研究所