专利名称：去氧生物素基六亚甲基二胺-dota的合成的制作方法
技术领域：
本文公开的发明涉及改进的合成去氧生物素基六亚曱基二胺 -DOTA的方法。
背景技术：
在申请人名下的国际专利申请WO 02066075中，已经描述了化合 物去氧生物素基六亚甲基二胺-DOTA。 D0TA是1， 4， 7， 10-四氮杂环十 二烷四乙酸(1，4，7,10-四氮杂环十二烷四乙酸)。
为完整起见，本文公开去氧生物素基六亚曱基二胺-DOTA的结构式。
<formula>formula see original document page 3</formula>在同一专利申请WO 02066075中，也描述了合成该产物的方法， 并在上述申请第15页上的实施例中予以报道。本文报道为ST2nO的 化合物与W0 02066075实施例中的化合物4相对应。更具体地，用制 备型色谱获得中间产物生物素基六亚甲基二胺盐酸盐(ST2551或W0 02066075实施例中的化合物3)，产率为55%,滴定度未限定。
如
图1所示，通过缩合ST2551和D0TA，获得最终的去氧生物素 基六亚甲基二胺-DOTA产物(ST2210或WO 02066075实施例中的化合物 4)。
图1
以此方式进行的反应产生低的合成产率(在D0TA中存在4个未保 护的羧基官能团当量，参与形成多种副产物)和纯化的问题。实际上， 为了得到最终产物，必需使用制备级HPLC,产率为20%。
发明描述
在放大研究中，为了提高该方法的产率和使纯化过程更容易，检 查了替代合成方法
与早前所述的方法相比，改进的合成方法具有下述优点
1. 在偶联步骤或缩合(在W0 02066075中描述为"步骤d")中，三 叔丁基-DOTA的应用避免了更多缩合产物的形成，这是由于游离羧基 的部分反应性(甚至在控制的pH条件下工作时也发生)；
2. 仍然在相同步骤中，改变了缩合剂和碱；使用六氟磷酸苯并三 唑-l-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBOP -六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基 三吡咯烷基磷)作为缩合剂，三乙胺(TEA)作为碱，得到了提高的产率；
3. 生物素基六亚甲基二胺(ST2251)用作游离碱，已经证实，二 盐酸盐的应用会造成不希望的产物的量增加；更具体地，显著形成了 与二聚体相对应的副产物，其中ST2551与2分子的三叔丁基-DOTA反 应；
4. 最后一步是在酸性含水溶液中水解3个叔丁基基团，例如使用 与产物不同比例的3N - 6N HC1，持续时间是1小时至12小时，产率 是96°/。-98%;
5. 从合成工艺中删除了 2个相当费力的制备型色镨阶段；
6. 获得产品的滴定度为94% - 96%。
因此，本发明的目的是，合成去氧生物素基六亚甲基二胺-DOTA 的方法，其包括，在有作为缩合剂的六氟磷酸苯并三唑-l-基-氧基三 吡咯烷基磷和作为碱的三乙胺存在下，使生物素基六亚曱基二胺与三 叔丁基-D0TA反应。
因此，本发明的方法包含，在缩合步骤之后的一个步骤，即在酸 性pH水解。
缩合优选地在有机溶剂中进行。更优选地，该溶剂是二氯甲烷。 在分析过的方法中，开发的最好的合成方法是包含图2所示的阶 段的方法。
另外，用实施例解释了本发明，这些实施例不以任意方式限制发 明本身。
<formula>formula see original document page 6</formula>
实施例(化合物的编号参见图2) 方法
使用连接到二极管阵列检测器和具有电喷射的质谱仪上的分析型 HPLC系统，监测进行的试验。开发的分析方法包含，使用ACEC-18分 析柱(150 x 4. 60 mm， 5 |a )，流速为1.0 mL/min，线性洗脱梯度为在 20 min内5-95%的B (A= H20 + 0.1% TFA; B- AcCN + 0.1% TFA)，或 在20 min内10-90 %的B，或者10%B等度溶液保持6 min，随后在 20 min内梯度10-90 %的B。关于最终产物ST2210，使用在15% B等 度溶液中工作的方法40 min。通过检测器检查的波长范围是205-400 認。
通过TLC快速监测包含，使用OEt酸类型异丙醇冊3 30%或DCM : 异丙醇冊3 30% (4: 5: l)的洗脱液混合物，借助于12或磷钼试剂，揭 示分选出的产物(紫外不可见)。
作为游离碱的生物素基六亚甲基二胺(ST2551) (2)的制备
将产物ST2551 [(1)，纯度91%， 400 mg， 1. 0 mmol)溶于水(20 mL) 中，将溶液置于分液漏斗中；加入NaOH 2M溶液(20mL)，将沉淀的产 物用DCM (40 mL)萃取3次。用无水Na2S04脱水合并的有机相，在减 压下蒸发。得到的产物(2)是白色固体(290 mg，产率=98%)。
丄H-腿(200 MHz, CDC13) 5 (ppm): 1.25-2.05 [m， 16H， CH(C〃2)4 和N腦2(C《)4)]; 2.50-3.30 (m， 9H， 2 x沉HS和C然和3 x C朋); 4.32 (m， 1H， CHC洲H); 4.51 (m， 1H， CHCiWH); 5.77 (s， 1H， CON历； 6. 05 (s， 1H， CO關.
ES-MS m/z: 329. 5 [M+H]+。
去氧生物素基六亚甲基二胺-叔丁基-DOTA (4)的合成 在室温，搅拌三叔丁基-D0TA[(3)， 524 mg， 0. 915 mmol， 1当量]， PyBOP (714 mg， 1. 37 mmol， 1. 5当量)和三乙胺(166 ja L， 1. 19 mmol， 1.3当量)于DCM (5 mL)中的溶液10分钟，逐滴加入ST2551-游离碱+.
去氧生物素基六亚甲基二胺-DOTA [ST2210， (5)]的合成 在室温，搅拌(4) (210 mg， 0. 238 mmol)于HC1 6N中的溶液[l mL， (4)的20% w/v溶液]1小时。然后，在减压下蒸发混合物，将残余物 溶于&0 (约l:50w/v)中，将溶液冷冻干燥。得到白色固体(205 mg, 96%)。力-NMR (200 MHz， DMSO-d6) 5 (ppm): 1. 30-1. 77 [m， 16H， CH(C《)4和NHCH2(C《)4〗；2.59 (d， 1H，腦S); 2.77— 2.88 (m， 7H，
沉HS和3 x C尿N); 2. 98-3.70 (m， 25H, 8 x D0TA-环C應和C)9S和4 xD0TAC《C0); 4.15 (m， 1H， CHCi9NH); 4.31 (m， 1H， CHCMH); 7.58 (br s， 2H， 2 x生物素N历；8.86 (t， 1H， N〃酰胺)；9.19 (br s， 2H， M2+).
13C-NMR (75 MHz, DMS0-d6) 5 (ppm):25.77; 25.85; 26.32; 26.53; 26.70; 28.74; 29.16; 47.08; 47.16; 48.54; 49.00; 51,35; 53.13; 54.51 ; 55.38; 56.02; 59.90; 61.61; 163.44; 165.58; 168.90; 172. 31.
ES-MS m/z: 715. 4 [M+H]+.
权利要求
1.合成去氧生物素基六亚甲基二胺-DOTA的方法，其包含，在有作为缩合剂的六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷和作为碱的三乙胺存在下，使生物素基六亚甲基二胺与三叔丁基-DOTA反应。
2. 根据权利要求1的方法，其中生物素基六亚甲基二胺与三叔丁 基-D0TA在有机溶剂中反应。
3. 根据权利要求2的方法，其中所述有机溶剂是二氯甲烷。
4. 根据任一项前述权利要求的方法，其包含在酸性pH的含水环 境中水解的后续步骤。
全文摘要
本文描述了合成去氧生物素基六亚甲基二胺-DOTA的方法。所述方法包含，在有作为缩合剂的六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷和作为碱的三乙胺存在下，使生物素基六亚甲基二胺与三叔丁基-DOTA反应。
文档编号C07D495/04GK101189242SQ200680019752
公开日2008年5月28日 申请日期2006年5月31日 优先权日2005年6月30日
发明者M·迪马佐, M·马兹 申请人:希格马托制药工业公司