6-嘧啶基-嘧啶-2-酮衍生物的制作方法

专利名称：6-嘧啶基-嘧啶-2-酮衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及用作药物活性成分的化合物，所述药物用于预防和/或治疗主要由 tau蛋白激酶1(TPK1也称为GSK3i3糖原合成酶激酶3 β )活性异常引起的神经退行性疾病 (例如阿尔茨海默病)。
背景技术：
阿尔茨海默病是进行性老年痴呆症，在这种病中可以观察到由于神经细胞变性和 神经细胞数目减少造成的明显的脑皮层萎缩。病理上，大脑内观察到许多老年斑和神经纤 维缠结。这种患者的人数随着老年人口的增长而增加，这种疾病产生了严重的社会问题。虽 然已提出各种理论，但是这种疾病的原因尚未阐明。人们渴望早些找到该病的原因。已知的是阿尔茨海默病的两个特征病理性改变出现的程度与智力障碍的程度很 相关。因此，早在80年代初就有研究通过两种病理性改变的成分的分子水平的研究来揭示 致病原因。老年斑在细胞外积累，并且β淀粉样蛋白已被鉴定为它们的主要成分(在本 说明书下文中缩写为 “Α β ”Biochem. Biophys. Res. Commun.，120，885 (1984) ；EMBO J.，4， 2757 (1985) ；Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82,4245 (1985))。在另一种病理性改变，即神经原 纤维缠结中，一个称为成对螺旋丝的双螺旋丝状物质(在下文中简称“PHF”)在细胞内聚 集，并且得知tau蛋白，一种特别针对大脑的微管相关蛋白，是它的主要成分(Proc. Natl. Acad. Sci. USA,85,4506(1988) ；Neuron,1，827(1988))。此外，基于基因研究，发现早老蛋白1和2作为家族性阿尔茨海默病的致病基因 (Nature, 375, 754 (1995) ；Science, 269,973 (1995) ；Nature. 376，775 (1995))，并且已经揭 示早老蛋白1和2的突变体的存在促进了 A β的分泌(Neuron, 17,1005 (1996) ；Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94, 2025 (1997) ) 0从这些结果来看可以认为，在阿尔茨海默病中，由于一定 原因使Αβ异常地积累和凝聚，这与PHF的形成相关进而导致神经细胞的死亡。并且可以 预料谷氨酸的细胞外流出物和响应于该流出物的谷氨酸受体激活可能是缺血性脑血管病 引起的神经细胞死亡早期过程中的重要因素。据报道，红藻氨酸处理刺激了作为谷氨酸受体之一的AMPA受体，增加了作 为Αβ前体的淀粉样前体蛋白(以下在说明书中简称为“ΑΡΡ”)的mRNA(S0Ciety forNeuroscience Abstracts, 17,1445(1991)),并且也促进了 APP 的代谢(The Journal ofNeuroscience, 10，2400 (1990))。因此，强烈暗示了 A β的聚集与缺血性脑血管病引起的 细胞死亡有关。可观察到Αβ异常聚集和结块的其它疾病包括，例如，唐氏综合征、单一脑 淀粉样血管病引起的脑出血、路易小体病等。此外，作为表现出由PHF聚集引起的神经纤维 缠结的疾病的例子包括进行性核上性麻痹、亚急性硬化性全脑炎帕金森氏综合征、脑炎后 帕金森氏综合征、拳击手脑炎、关岛震颤麻痹痴呆综合征、路易小体病等。tau蛋白通常由一组相关蛋白组成，其在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中形成分子量 为48_65kDa的几条带，并且tau蛋白促进微管的形成。已经证实，与通常的tau蛋白相比， 在患阿尔茨海默病的脑中，纳入PHF的tau蛋白异常磷酸化(J. Biochem.，99，1807 (1986)；Proc. Natl. Acad. Sci. USA，83，4913 (1986))。催化这种异常磷酸化的酶已经被分离得到。 这种蛋白被称为tau蛋白激酶1(在本说明书中简称为“TPK1”)，其理化性质已被阐明 (J. Biol. Chem.，267，10897 (1992))。而且，基于TPKl的一部分氨基酸序列从大鼠大脑皮质 cDNA库中克隆了大鼠TPKl的cDNA，并且确定了其核苷酸序列并推导出了氨基酸序列。结果 显示大鼠的TPKl的一级结构相当于被称为大鼠GSK-3 β的酶(糖原合成酶激酶3i3，FEBS Lett. ，325，167(1993))。据报道，老年斑的主要成分A β是有神经毒性的(Science, 250, 279 (1990) ) 0但 是，虽然对Αβ引起细胞死亡的原因提出了多种理论，然而还没有建立任何权威理论。 Takashima等人观察到对胎鼠海马原代培养体系进行A β处理引起细胞死亡，而后发现A β 处理提高了 TPKl的活性并且反义TPKl抑制了 Αβ所引起的细胞死亡(Proc. Natl. Acad. Sci. USA,90，7789(1993) ；EP616032)。鉴于前述内容，抑制TPKl活性的化合物在阿尔茨海默病中或许可以遏制Αβ的神 经毒性和PHF的形成，并且抑制神经细胞的死亡，从而终止或延缓该病的发展。该化合物或 许也可以用作药物，从而通过遏制Αβ的细胞毒性来治疗缺血性脑血管病、唐氏综合征、脑 淀粉样血管病、路易小体病引起的脑出血等病症。此外，该化合物也可能用作药物来治疗神 经退行性疾病，如进行性核上性麻痹、亚急性硬化性全脑炎帕金森综合征、脑炎后帕金森 氏综合征、拳击手脑炎、关岛震颤麻痹痴呆综合征、路易小体病、皮克氏病、皮质基底节变性 和额颞叶型痴呆症、血管性痴呆、创伤性损伤、脑和脊髓损伤、周围神经病变、视网膜病变和 青光眼，以及治疗其它疾病如非胰岛素依赖型糖尿病、肥胖症、躁狂抑郁症、精神分裂症、秃 头症、乳腺癌、非小细胞肺癌、甲状腺癌、T或B-细胞白血病和几种病毒诱导的肿瘤。人类TPKl抑制剂还可以抑制pfGSK3，人们在恶性疟原虫中发现这种酶的同源物， 因而它们可以用于治疗疟疾(Biochimica et BiophysicaActa 1697，181-196，2004)。近来，人类遗传学和动物研究都指出Wnt/LPR5路径作为骨量自然增长的主要调 节剂的作用。抑制TPKl导致标准的Wnt信号发生激活。因为发送Wnt信号的不足是骨量 减少疾病的起因，所以TPKl抑制剂还可以用于治疗骨量减少疾病、骨骼相关的病变、骨质 疏松症。根据当前的数据，TPKl抑制剂可用于治疗或预防寻常型天疱疮。最近的研究表明TPKl抑制剂的治疗改善了嗜中性粒细胞和巨核细胞的恢复。因 此，TPKl抑制剂将可用于治疗由癌症化疗所诱发的中性粒细胞减少症。已知一些6-嘧啶基-嘧啶-2-酮衍生物作为TPKl抑制剂具有活性 (W003/027080)，但是令人意料不到地发现结构式(I)的化合物在没有细胞色素P4502D6 CYP 2D6的抑制下呈现出较好的体内活性。这将明显有助于该化合物的可展性。进一步，研究用作药物的化合物通常有必要与其它药剂的结合给药。这种需求随 着近来医疗的多元化和社会老龄化而增加。为了避免药-药间相互作用，希望例如服用的 化合物之一不抑制细胞色素P450酶类，例如细胞色素P450 2D6。这将导致与联合用药相关 的不可预知的副作用。从W003/027080已知的化合物来看，体外活性是可比较的，因此期望所有这些化 合物将具有相似的分布(profile)。意外地发现W003/027080中在属类上被覆盖但没有列 举的化合物之一明显不同于其它被公开的化合物。

发明内容
本发明的目的是提供一种作为药物活性成分的化合物，用于预防和/或治疗如阿 尔茨海默病的疾病，具有良好的体内活性而不抑制细胞色素2D6。尤其是，目的在于提供一 种作为药物活性成分的新的化合物，该化合物通过抑制TPKl的活性来抑制A β的神经毒性 和PHF的形成，并保持良好的体内活性抑制神经细胞的死亡而不抑制CYP 2D6，能从根本上 预防和/或治疗神经退行性疾病如阿尔茨海默病。意料不到地发现下列结构式(I)表示的新的化合物具有期望的活性，并可用作预 防和/或治疗前述疾病的药物的活性成分。基于这些研究成果获得本发明。因此本发明提供一种由结构式⑴表示的化合物 {3-甲基-2-((2S)-2-(4_(5-甲基-1，2，4_ 噁二唑 _3_ 基)苯基)吗啉基 基)-6-(嘧啶-4-基)嘧啶_4(3!1)-酮}或其药学上可接受的盐。本发明涉及3-甲基-2-((2S)-2-(4-(5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)苯基)吗 啉基吗啉基)-6-(嘧啶-4-基)嘧啶_4(3H)-酮或药学上可接受的盐用作药剂。本发明涉及3-甲基-2-((2S)-2-(4-(5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)苯基)吗 啉基)-6-(嘧啶-4-基)嘧啶-4 (3H)-酮或其药学上可接受的盐用作tau蛋白激酶1抑制 剂。本发明涉及3-甲基2-((2S)-2-(4_(5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)苯基)吗啉 基)-6-(嘧啶-4-基)嘧啶-4 (3H)-酮或其药学上可接受的盐作为药剂用于预防和/或治 疗tau蛋白激酶1活性过高引起的疾病。本发明涉及3-甲基2-((2S)-2-(4_(5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)苯基)吗啉 基)-6-(嘧啶-4-基)嘧啶-4 (3H)-酮或预防和/或其药学上可接受的盐用于预防和/或 治疗神经退行性疾病。本发明涉及3-甲基-2-((2S)-2-(4_(5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)苯基)吗啉 基)-6-(嘧啶-4-基)嘧啶-4 (3H)-酮或其药学上可接受的盐，用于预防和/或治疗阿尔茨 海默病、缺血性脑血管病、唐氏综合征、脑淀粉样血管病引起的脑出血、进行性核上性麻痹、 亚急性硬化性全脑炎帕金森氏综合征、脑炎后帕金森氏综合征、拳击手脑炎、关岛震颤麻痹 痴呆综合征、路易小体病，皮克氏病、皮质基底节变性和额颞叶型痴呆症、血管性痴呆、创伤 性损伤、脑和脊髓损伤、周围神经病变、视网膜病变和青光眼。本发明涉及3-甲基-2-((2S)-2-(4-(5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)苯基)吗 啉基)-6_(嘧啶-4-基)嘧啶_4 (3H)-酮或其药学上可接受的盐，用于预防和/或治疗以 下疾病非胰岛素依赖型糖尿病、肥胖症、躁狂抑郁症、精神分裂症、秃头症、乳腺癌、非小细胞肺癌、甲状腺癌、T或B-细胞白血病、骨质疏松、疟疾、癌症化学疗诱发的中性粒细胞减少 症和病毒诱发的肿瘤。以往的研究已经表明GSK3活性降低长时程增强(一种电生理相关的记忆巩固) 暗示这种酶的抑制剂将具有预知活性(procognitive activity)。该化合物的认知作用可 以用于治疗以记忆缺陷为特征的阿尔茨海默病、帕金森病、增龄相关记忆障碍、轻度认知障 碍、脑外伤、精神分裂症和发现这种缺陷的其他情况的疾病。本发明涉及结构式(I)的3-甲基-2-((2S)-2-(4_(5-甲基_1，2，4_噁二 唑-3-基)苯基)吗啉基)-6-(嘧啶-4-基)嘧啶-4(3H)_酮或药学上可接受的盐用于 治疗以认知和记忆缺陷为特征的阿尔茨海默病、帕金森病、增龄相关记忆障碍、轻度认知障 碍、脑外伤、精神分裂症和发现这种缺陷的其他情况的疾病。发明的实施方式除非另有说明，以下定义用于说明和限定描述本发明的各种术语的含义和范围。前述的结构式(I)表示的化合物药学上可接受的盐可包括无机酸(例如，盐酸、氢 溴酸等)的盐和有机酸(例如，醋酸、丙酸、酒石酸、富马酸、马来酸、苹果酸、草酸、丁二酸、 柠檬酸、苯甲酸等)的盐。除了前述的结构式(I)表示的化合物及其药学上可接受的盐之外，它们的溶剂化 物和水合物也在本发明的范围内。本发明的化合物在体内具有抑制TPKl的活性。因此，他们能够抑制神经退行性疾 病如阿尔茨海默病患者体内TPKl的活性，从而抑制A β的神经毒性和PHF的形成，和抑制 神经细胞死亡。所以，本发明的化合物用作药物的活性成分，能从根本上预防和/或治疗阿 尔茨海默病。此外，本发明的化合物也作为药物的活性成分用于预防和/或治疗缺血性脑 血管病、唐氏综合征、单一脑淀粉样血管病引起的脑出血、进行性核上性麻痹、亚急性硬化 性全脑炎帕金森综合征、脑炎后帕金森氏综合征、拳击手脑炎、关岛震颤麻痹痴呆综合征、 路易小体病、皮克氏病、皮质基底节变性和额颞叶型痴呆症、血管性痴呆、创伤性损伤、脑和 脊髓损伤、周围神经病变、视网膜病变和青光眼，非胰岛素依赖型糖尿病、肥胖症、躁狂抑郁 症、精神分裂症、秃头症、乳腺癌、非小细胞肺癌、甲状腺癌、T或B-细胞白血病和几种病毒 诱发的肿瘤、骨质疏松、疟疾、癌症化学疗诱发的中性粒细胞减少症，及以认知和记忆缺陷 为特征的阿尔茨海默病、帕金森病、增龄相关记忆障碍、轻度认知障碍、脑外伤、精神分裂症 和发现这种缺陷的其他疾病。本发明的化合物对于CYP2D6还具有低抑制活性，从而导致对于结合使用的药物 的代谢影响小。因此，甚至在将这药与其它药结合使用时几乎不产生药-药间的相互作用 的副作用。另外，本发明的化合物没有表现出显著的毒性，从而适用于药物中。作为本发明的药物的活性成分，可以使用前述的结构式(I)表示的物质及其药学 上可接受的盐，以及它们的溶剂化物和水合物。该物质本身可以作为本发明的药物给药，然 而希望以药物组合物的形式给药，这种组合物包括作为活性成分的前述的物质和一种或多 种药物添加剂。作为本发明的药物的活性成分，可结合使用前述的两种或多种物质。对药物组合物的种类没有特别限定，可以口服或胃肠外给药的任何制剂形式来提 供该组合物。例如，该药物组合物可以配制成，例如，口服的药物组合物形式，如颗粒剂、微细颗粒剂、粉剂、硬胶囊、软胶囊、糖浆剂、乳剂、混悬液、溶液等，或胃肠外给药的药物组合 物形式，如用于静脉内、肌肉内或皮下给药的注射剂、滴注剂、透皮制剂、透粘膜制剂、滴鼻 剂、吸入剂、栓剂等。 对本发明的药物的给药剂量和频率没有特别限制，它们可以根据预防和/或治疗 的目的、疾病类型、患者的体重和年龄、疾病严重程度等情况而适当地选择。通常，成人口服 给药每日剂量可以为0. 01-1，OOOmg(活性成分的重量)，并且可以每天给药一次或者每天 以分剂量给药数次，或者几天给药一次。当所用药物为注射剂时，对成人给药可优选按每天 0. 001-3000mg (活性成分的重量)的剂量连续或者间断地进行给药。
实施例将参照实施例对本发明进行更详细地说明。然而，本发明的范围不限于下列实施 例。制备本发明的化合物实施例1 :3_甲基-2-((2S)-2-(4-(5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)苯基)吗啉 基)-6-(嘧啶-4-基)嘧啶-4 (3H)-酮通过将2-氯-1-甲基-IH-[4，4’ ]双嘧啶基_6_酮(中间体丄)和相应的胺化合 物(中间体19)在碱的存在下缩合反应来制备本发明的化合物。本发明的化合物的总的合成方案如下。方案1 中间体丄的合成方案 方案2 本发明化合物的合成方案 步骤1-1 乳清酸乙酯(中间体①向1，8-二氮杂二环[5.4.0] -j^一碳 _7_ 烯(46. 51g,0. 306mmol)的二甲基甲酰胺 (85ml)溶液中加入乳清酸一水化物(中间体153. 19g，0. 306mmol)。将溶液搅拌5分钟后， 向其中加入碘乙烷(57. 14g，0. 366mmol)，将混合物在60°C加热5小时。向该混合物中加入 水(IOOOml)，过滤得到沉淀，用水洗涤，干燥后得到乳清酸乙酯(中间体2，49. 25g,88% )。1H 匪R(DMS0-d6) δ :1· 29 (3Η，dt，J = 1.5,6. 9Hz), 4. 31 (2H, dq, J = 1. 2,7. 2Hz), 6. 04 (1H, d, J = 1. 2Hz)，11. 11 (1H, s)，11. 37 (1H, s)MS :[M+H]+ = 185熔点205·5°C步骤1-2 :2，6-二氯嘧啶-4-羧酸乙酯(中间体4)乳清酸乙酯(中间体2，97. 70g，0. 531mmol)和三氯氧磷(120ml, 1. 31mol)的混合 物中加入N，N- 二乙基苯胺(60ml，0. 377mmol)，将混合物回流70分钟。将溶液倒入到冰水 中，过滤收集得到固体，然后用水洗涤。将得到的固体溶解在乙酸乙酯中，通过硅胶过滤溶 液。用硫酸钠干燥滤液，然后减压浓缩。残留物通过短硅胶柱色谱法提纯(洗脱剂己烷/ 乙酸乙酯=2/1)得到2，6-二氯嘧啶-4-羧酸乙酯(中间体4，99.94g，85% )。1H NMR(CDCl3) δ :1· 45 (3Η, t, J = 7. 3Ηζ)，4· 51 (3H, q, J = 7. 1Hz)，7· 97 (1H, s)MS :[M+H]+ = 221熔点31·6°C步骤1-3 嘧啶-4-羧酸乙酯(中间体互)向2，6- 二氯嘧啶-4-羧酸乙酯(中间体4，38. 60g, 0. 175mmol)的四氢呋喃 (700ml)溶液中添加三乙胺(48.03g，0.475mmol)。将钯碳(5% )添加到溶液中，在氢气氛 下搅拌6小时。通过过滤除去反应系统中的固体，在减压下浓缩滤液。获得的残留物用硅胶柱色谱法纯化得到嘧啶-4-羧酸乙酯(中间体&，23. 06g,87% )。1H 匪R(CDCl3) δ :1· 46 (3Η, t, J = 7. 1Hz)，4· 52 (2Η, q, J = 7. IHz)，8· 03 (1H, dd, J= 1. 7,5. 0Hz)，9. 00 (1H, d, J = 5. OHz)，9. 42 (1H, d, J = 1. 4Hz)MS :[M+H]+ = 153熔点36·8°C步骤1-4:3-氧代-3-(嘧啶-4-基)丙酸乙酯(中间体β)将乙醇(16. 18g，0. 351mol)的乙醚(15ml)溶液添加到分散含有氢化钠(13. 71g， 0.343mol，以60%的比例分散在煤油中，用正己烷洗掉煤油)的乙醚(IOOml)溶液中。在 搅拌混合物30分钟之后，减压蒸除溶剂，向残留物中添加甲苯(IOOml)。向该溶液添加嘧 啶-4-羧酸乙酯(中间体互，30. 86g，0. 203mol)和含乙酸乙酯(30. 48g,0. 346mol)的甲苯 (100ml)溶液，该混合物在80°C加热3小时。向混合物中先添加盐酸然后添加碳酸氢钠调 整PH为4。将溶液在水和乙酸乙酯间分配。用盐水洗有机层然后用硫酸钠干燥。减压蒸除 溶剂得到3-氧代-3-(嘧啶-4-基)丙酸乙酯(中间体仏36. 10g,92% )01H 匪R(CDCl3) δ :1· 35 (3Η，t，J = 6. 9Hz), 4. 31 (2H, q, J = 7. 2Hz)，6. 47 (1H，s)， 7. 84 (1H, dd, J = 1.5，5. 4Hz)，8. 89 (1H, d, J = 5. 1Hz)，9. 24 (1H, d, J = 1. 2Hz)，12. 22 (1H, s)MS :[M+H]+ = 195熔点52·3V步骤1-5 :2-巯基-1-甲基-IH-[4，4，]双嘧啶基_6_酮(中间体I)将含有3-氧代-3-(嘧啶-4-基)丙酸乙酯(中间体互，36. 10g，0. 186mol)，N_甲 硫脲(25. 40g,0. 282mol)和 1，8-二氮杂二环[5.4.0] ^^一碳 _7_ 烯(29. llg,0. 191mol) 的乙醇(150ml)溶液回流21小时。减压蒸除一半量的乙醇，向其中加入盐酸，将得到的沉 淀物过滤收集，水洗并干燥。将沉淀物在热乙酸乙酯(1000ml)中搅拌，然后过滤收集沉淀 物，干燥后得到2-巯基-1-甲基-IH-[4，4’ ]双嘧啶基-6-酮(中间体I，33. 91g,83% )。1H 匪R (CDCl3) δ :3· 59 (3Η, s)，6· 91 (1Η, s)，8· 27 (1Η, d, J = 2. 4Ηζ)，9· 08 (1Η, d, J = 2. 1Ηζ)，9. 41(1Η，s), 11. 99 (1Η, s)MS :[Μ+Η]+ = 221熔点228.0°C(分解)步骤1-6 2-氯-1-甲基-IH-[4，4’ ]双嘧啶基_6_酮(中间体丄)将含有2-巯基-1-甲基-IH-[4，4，]双嘧啶基_6_酮(中间体厶8. 8g，40mmol) 的二甲基甲酰胺(30ml)和1，2_ 二氯乙烷(30ml)混合溶剂的悬浮液添加到三氯氧磷 (11. 2ml, 120mmol)中，将该混合物在65°C下搅拌50分钟。将溶液倾入到冰冷的二氯甲烷 (300ml)中，向该溶液中加入水，将该混合物剧烈地搅拌5分钟。向其中添加碳酸钠水溶液 (25. 4g，240mmol，水(IOOml))，用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH到8。添加次氯酸钠水溶液 (在水中5%，120ml)。再用硅藻土过滤之后，有机层用二氯甲烷萃取两次，并用饱和碳酸氢 钠水溶液洗涤后用硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，将得到的残留物用硅胶柱色谱法纯化(洗 脱剂乙酸乙酯/己烷=1/1)，并用乙醚洗涤，得到浅黄色固体2-氯-1-甲基-1Η-[4，4’ ] 双嘧啶基-6-酮(中间体丄)(2. 2g，62%，纯度98. 7% )01H 匪R (CDCl3) δ :3· 74 (3Η, s)，7. 58 (1H, s)，8. 19 (1H, d, J = 5. 7Hz)，8. 92 (1H, d,J = 5. 2Hz)，9. 31 (1H, d, J = 1. IHz)MS :[M+H]+ = 223熔点168.5°C(分解)步骤1-7 :2_溴-(IS)-I-(4-溴苯基)乙醇(中间体2)将(S)-CBS (25ml, (S)_2_ 甲基-CBS-噁唑硼烷，由 Aldrich 制造，1. OM 的甲苯溶 液)冷却到0°c，然后添加硼烷-四氢呋喃络合物(185ml，185mmol, 1. OM的四氢呋喃溶液)。 将烧瓶用冰盐(氯化钠)浴冷却，向其中滴加4-溴代苯酰基溴化物(中间体§，50. 28g， 181mmol)的二氯甲烷(300ml)溶液超过一个小时以上，其间温度保持在_5°C _0°C。在 0°C下搅拌混合物50分钟，向其中小量分批添加甲醇(12ml)。然后，向其中滴加0. 5M盐酸 (300ml)，并将混合物室温搅拌40分钟。过滤掉沉淀物，在二氯甲烷和水间分配滤液。分离 有机层，并用二氯甲烷萃取含水层。合并有机层，用0. 5M盐酸和盐水洗两次，用无水硫酸钠 干燥。减压蒸除溶剂得到浅褐色油状的2-溴-I-(IS)-(4-溴苯基)乙醇(中间体出。该 粗产品用于下一步骤而不用纯化。步骤1_8 (2S) -2- (4-溴苯基)环氧乙烷(中间体边)将以上得到的(2S)-2_溴-l-(4-溴苯基)乙醇(中间体S)溶解在乙醚(300ml) 中，该溶液用氢氧化钠水溶液(14. 47g，在300ml水中362mmol)在两层体系中室温下搅拌 1.5小时。混合物在乙醚和水间分配，有机层用饱和的盐水洗涤并用无水硫酸钠干燥。减压 蒸除溶剂得到浅褐色油状的(2S)-2-(4-溴苯基)环氧乙烷(中间体边)。该粗产品用于下 一步骤而不用纯化。1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ :2· 74-2. 77 (1Η，m)，3· 13-3. 17 (1Η，m)，3· 82-3. 84 (1Η， m)，7. 16 (2H, d, J = 8. 4Hz)，7. 48 (2H, d, J = 8. 4Hz)步骤1-9 : (IS)-I-(4-溴苯基)-2-((IR)-I-苯乙基氨基)乙醇(中间体旦)将以上得到的(2S)-2_(4-溴苯基)环氧乙烷(中间体边)和(R)-I-苯乙胺 (65. 22g，538mmol)的混合物在80°C下油浴中搅拌3小时。减压(约70°C在7mmHg)蒸馏出 过量的胺。冷却后，得到的固体残留物用异丙醚洗涤，干燥得到白色晶体(1S)-1_(4-溴苯 基)-2-((IR)-I-苯乙基氨基)乙醇(中间体li，46.76g，3个步骤的产率为81% )。1H-WrGOOMHz, CDCl3) δ 1. 39 (3Η, d, J = 6. 3Ηζ), 2. 48 (1H, dd, J = 9. OHz, 12. 0Hz)，2. 77 (1H, dd, J = 3. 6Hz, 12. 3Hz)，3. 82 (1H, dd, J = 6. 6Hz, 13. 2Hz)，7. 16 (2H, d, J = 8. 4Hz)，7. 20-7. 27 (3H, m)，7. 31-7. 34 (2H, m)，7. 41 (2H, d, J = 8. 4Hz)MS :[M+H]+ = 320熔点106.3°C比旋度[a]D= +80. 74 (c = 1.0，二氯甲烷)步骤1-10 :(6S)-6-(4-溴苯基)-4-((IR)-I-苯乙基)吗啉_3_酮(中间体U)将氯乙酰氯(19. 5ml,245mmol)的二氯甲烷(IOOml)溶液滴加到冰冷的 (IS)-I-(4-溴苯基)-2-((IR)-I-苯乙基氨基)乙醇(中间体U，71.0g，222mmOl)和三乙 胺(34ml，245mmol)的二氯甲烷(600ml)溶液中。在混合物搅拌2小时之后，添加IM盐酸， 将混合物在水和氯仿间分配。有机层用饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，并用无水硫酸钠 干燥。减压蒸除溶剂，并将残留物溶解在2-丙醇(600ml)中。将氢氧化钾(85%，18.3g， 278mmol)添加到该溶液中。混合物在室温搅拌15小时。减压蒸除溶剂，向残留物中加入乙酸乙酯，在水和乙酸乙酯间分配混合物，用IM盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤有机 层，并用无水硫酸镁干燥。减压蒸除溶剂得到褐色油状(6S) -6- (4-溴苯基)-4- ((IR)-1-苯 乙基)吗啉-3-酮(中间体ll，92g)。这种粗产品用于下一反应而不用纯化。1H-WrGOOMHz, CDCl3) δ 1. 53 (3Η, d, J = 7. OHz)，2. 96 (1H，dd, J = 3. OHz, 12. 2Hz)，3. 29 (1H, dd, J = 10. 8Hz, 12. OHz)，4. 38 (1H, d, J = 16. 8Hz)，4. 49 (1H, d, J = 16. 9Hz) ,4. 53 (1H, dd, J = 3. OHz, 10. 6Hz) ,6. 53 (1H, q, J = 7. 2Hz)，7· 14 (2H，d, J = 8. 3Hz)，7. 28-7. 39 (5H, m)，7. 45 (2H, d, J = 8. 4Hz)MS :[M+H]+ = 360比旋度:[α]D = +71. 68 (c = 0. 5，氯仿)步骤1-11 (2S)-2-(4-溴苯基)-4-((IR)-I-苯乙基)吗啉(中间体丛)在超过30分钟的时间内，向步骤1-10中获得的(6S)-6_(4-溴苯 基)-4-((lR)-l-苯乙基)吗啉-3-酮(中间体丛，920的冰冷的四氢呋喃(400ml)溶液 中滴加硼烷-四氢呋喃络合物(1.0M的四氢呋喃溶液，600ml，600mmol)。升温至室温并搅 拌2小时后，再将混合物冰冷并向其中滴加甲醇(70ml)。减压蒸除溶剂。将甲醇(750ml) 和IM氢氧化钠水溶液(280ml)添加到残留物中。混合物在80°C下搅拌1小时，这期间每 15分钟分3次添加IM氢氧化钠水溶液(70ml)。在混合物冷却到室温后，减压蒸除甲醇，得 到的溶液用乙酸乙酯萃取。用水和盐水洗有机层，并用无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂得 到白色晶体(2S)-2-(4-溴苯基)-4-((IR)-I-苯乙基)吗啉(中间体n，68g，从中间体11 得到的产率为88% )。IR(ATR) 1487，1449，1117，1098，809，758，699，550CHT11H-WR (CDCl3) δ 1. 35 (3Η, d)，2. 10 (2H, m)，2. 60 (1H, m)，3. 05 (1H, m)，3. 35 (1H, q)，3. 75 (1H, m)，3. 89 (1H, m)，4. 55 (1H, m)，7. 25 (7H, m)，7. 46 (2H, d)MS :[M+H]+ = 346熔点88·O0C比旋度[a]D= +32. 06 (c = 1.0，二氯甲烷)步骤1-12 :4_((2S)-4-((IR)-I-苯乙基)吗啉_2_基)苯甲醛(中间体 )在-78°C向(2S)-2-(4-溴苯基)-4-((IR)-I-苯乙基)吗啉(中间体丛，63. 3g， 183mmol)的四氢呋喃(450ml)溶液中添加正丁基锂(1. 57M的己烷溶液，175ml，275mmol)， 将混合物搅拌20分钟。添加N，N- 二甲基甲酰胺(28. 3ml 365mmol)，在_78°C搅拌混合物2 小时，然后升温至-10°C。反应用氯化铵水溶液淬灭，得到的溶液在水和乙酸乙酯间分配。有 机层用水和盐水洗涤并用硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂得到粗产品4-((2S)-4-((IR)-I-苯 乙基)吗啉-2-基)苯甲醛(中间体H，55. Ig)。使用这种化合物不用进一步纯化。步骤1-13 :4_((2S)-4-((IR)-I-苯乙基)吗啉_2_基)苯甲腈(中间体边)在室温向粗产品4-((2S)-4-((IR)-I-苯乙基)吗啉_2_基)苯甲醛(中间 体H，55. Ig)的乙醇(280ml)溶液中添加乙酸钠(30. 0g，365mmol)和盐酸羟胺(25. 4g， 365mmol)。在回流2小时之后，混合物在水和二氯甲烷间分配，有机层用水和盐水洗涤并 用硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂。然后向残留物中添加乙酸(140ml)和乙酸酐(140ml)。在 混合物回流2小时之后，减压蒸除溶剂。将残留物在水和氯仿间分配。有机层用碳酸氢钠 水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂。该残留物用硅胶柱色谱法纯化(洗脱剂己烷/乙酸乙酯=9/1)得到4-((2S)-4-((IR)-I-苯乙基)吗啉_2_基)苯甲腈(中间体边， 45. 7g，从中间体13得到的产率为86% )。1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 1. 37 (3Η, d, J = 7. OHz)，2. 01 (1H，t, J = 11. OHz)，
2.15 (1H, dt, J = 3. 1，11. 7Hz)，2. 60-2. 65 (1H, m)，3. 08-3. 12 (1H, m)，3. 39 (1H, q, J = 7. 0Hz) ,3. 74 (1H, dt, J = 2. 4，11. 7Hz)，3. 92-3. 96 (1H, m)，4· 65 (1Η, dd, J = 2. 4，10. 2)， 7. 24-7. 35 (5H, m)，7. 48 (2H, d, J = 7. 8Hz)，7. 63 (2H, d, J = 7. 8Hz)MS :[M+H]+ = 293熔点83.6°C比旋度:[α]D = +46. 23 (c = 0. 5，氯仿)步骤1-14 :4-((2S)_吗啉-2-基)苯甲腈盐酸盐(中间体丛)在室温向4-((2S)-4-((IR)-I-苯乙基)吗啉_2_基)苯甲腈(中间体边，45. 7g， 156mmol)的1，2_ 二氯乙烷(312ml)溶液中添加1_氯乙基氯甲酸酯(66. 9g，468mmol)。在 回流6小时之后，在减压下浓缩该溶液。将残留物溶解在甲醇(312ml)中并将该溶液回流 2小时。减压蒸除溶剂后，该粗产品用丙酮洗涤，在减压下干燥得到4-((2S)-吗啉-2-基) 苯甲腈盐酸盐(中间体边，27. 6g，79% )。1H NMR(400MHz, DMS0_d6) δ 2. 99 (1Η, t, J = 11. 7Hz), 3. 12 (1Η, dt, J = 3· 1， 12. 5Ηζ)，3. 25-3. 28 (1Η, m)，3. 48-3. 52 (1Η, m)，3. 92 (1Η, dt, J = 2. 4，11. 7Ηζ)，4. 15 (1Η, dd, J = 3. 1，12. 5Hz)，4. 86(lH，dd，J = 2. 4，11. 7Ηζ)，7. 60(2H，d，J = 8. 6Ηζ)，7. 90(2H，d， J = 8. 6Ηζ)，9. 37 (2Η, brs)MS :[Μ+Η]+ = 189熔点195.8°C比旋度[α]D = +30. 39 (c = 0. 5，甲醇)步骤1-15 叔丁基(2S)-2_(4-氨基甲酰苯基)吗啉_4_羧酸酯(中间体H)在0°C向4-((2S)_吗啉-2-基)苯甲腈盐酸盐(中间体丛，17. 9g，79. 8mmol)的 四氢呋喃(400ml)溶液中添加三乙胺(24. 2g,240mmol)和二-叔丁基二碳酸酯(19. 2g， 87. Smmol)，混合物在室温搅拌3小时。得到的溶液在水和乙酸乙酯间分配，有机层用盐水 洗，用硫酸钠干燥，且在减压下除去。该残留物用硅胶柱色谱法纯化(洗脱剂己烷/乙酸 乙酯=6/1)得到叔丁基(2S)-2-(4-氨基甲酰苯基)吗啉-4-羧酸酯(中间体H，17.6g， 77% ) ο1H NMR (400MHz，CDCl3) δ 1· 49 (9Η，s)，2· 69-2. 80 (1Η，m)，3· 00_3· 09 (1Η，m)，
3.65-3. 72 (1H, m)，3. 90-4. 23 (3H, m) ,4. 48 (1H, d, J = 11. OHz)，7. 50 (2H, d, J = 7. 8Hz)， 7. 66 (2H, d, J = 7. 8Hz)MS :[M+H]+ = 289熔点104.2°C比旋度[α]D = -37. 35 (c = 0. 5，氯仿)步骤1-16 叔丁基(2S)-2-(4-(5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)苯基)吗啉_4_羧 酸酯(中间体丛)在室温向叔丁基(2S)-2_(4-氨基甲酰苯基)吗啉-4-羧酸酯(中间体H，17. 6g， 61. lmmol)和盐酸羟胺(12. 8g, 183mmol)的乙醇(120ml)溶液中添加碳酸钠(32. 4g，305mmol)的水(120ml)溶液，将该混合物在80°C搅拌3小时。减压蒸除溶剂后，将残留物 在水和乙酸乙酯间分配。有机层用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂。向残留物 中添加二甲苯(150ml)和N，N-二甲基乙酰胺二甲基缩醛(18. lg，122mmol)。在将溶液回 流2小时之后，在共沸状态下采用带有分子筛4A的Dean-Stark分水器去除水。在减压下 浓缩混合物，残留物用硅胶柱色谱法纯化(洗脱剂己烷/乙酸乙酯=3/1)得到叔丁基 (2S)-2-(4-(5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)苯基)吗啉_4_羧酸酯(中间体丛，16. 9g， 80% )。1H NMR (400MHz，CDCl3) δ 1. 49 (9Η, s) , 2. 66 (3Η, s) , 2. 77-2. 90 (1Η, m), 3. 02-3. 11 (1Η, m)，3· 67-3. 74(1Η, m)，3· 89-4. 25 (3Η, m)，4. 48 (1Η, d, J = 11. OHz)，
7.50 (2Η, d, J = 7. 8Ηζ)，8. 00 (2Η, d, J = 7. 8Ηζ)MS [Μ+Η]+ = 246 (-叔 BuOCO)熔点114.4°C比旋度[a]D= -34. 93 (c = 0.5，氯仿)步骤1-17 :(2S)-2-(4-(5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)苯基)吗啉盐酸盐(中 间体在室温向叔丁基(2S)-2-(4_(5-甲基_1，2，4_噁二唑_3_基)苯基)吗啉_4_羧 酸酯(中间体丛，16. 9g，49. Ommol)的乙酸乙酯(60ml)溶液中添加含有4N氯化氢的乙酸乙 酯(150ml)，将溶液搅拌3小时。减压蒸除溶剂，过滤得到沉淀物，用乙酸乙酯洗涤，在减压 下干燥得到(2S)-2-(4-(5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)苯基)吗啉盐酸盐(中间体边， 13. 3g,96% )。1H 匪R(400MHz，DMS0-d6) δ :2. 67 (3Η，s)，3. 00 (1Η，t，J = 12. 5Hz)，3. 12 (1H，dt，J =3. 912. 5Hz)，3. 27 (1H, d, J = 12. 5Hz)，3. 48 (1H, d, J = 12. 5Hz)，3. 97 (1H, dt，J = 2. 4， 12. 5Hz)，4. 15 (1H, dd, J = 3. 1，12. 5Hz)，4. 89 (1H, dd, J = 1. 6，11. 0Hz)，7. 58 (2H, d, J =
8.6Hz)，8. 03 (2H, d, J = 8. 6Hz)，9. 62 (2H, brs)MS :[M+H]+ = 246熔点286.8°C比旋度:[a]D = +29. 98 (c = 0. 5，甲醇)步骤1-18:3-甲基-2-((2S)-2-(4-(5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)苯基)吗啉 基)-6-(嘧啶-4-基)嘧啶-4 (3H)-酮(本发明的化合物)在室温向2-氯-3-甲基-6-(嘧啶-4-基)-3H-嘧啶-4-酮(9. 80g,44. Ommol)和 (2S)-2-(4-(5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)苯基)吗啉盐酸盐(13. 3g，47. 2mmol)的溶液 中添加三乙胺(13.4g，132mm0l)，将溶液在室温搅拌4小时。在减压下浓缩溶液之后，得到 的粗产品用水洗涤，减压干燥得到3-甲基-2-((2S)-2-(4-(5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基) 苯基)吗啉基)-6-(嘧啶-4-基)嘧啶-4(3H)_酮(本发明的化合物，18. Og, 89% )。1H NMR(400MHz, DMS0_d6) δ ；2. 68 (3Η, s), 3. 04(1H, dd, J = 11. 0,13. 3Hz), 3. 21 (1Η, dt, J = 3. 112. 5Ηζ)，3. 49 (3Η, s)，3. 73 (1Η, d, J = 13. 3Ηζ)，3. 80-3. 85 (1Η, m)， 3. 94 (1Η, dt, J = 2. 3，11. 7Hz)，4. 11 (1Η, dd, J = 1. 6，11. 7Ηζ)，4. 86 (1Η，dd, J = 2. 4， 10. 2Ηζ)，7. 02 (1Η, s)，7. 66 (2Η, d, J = 7. 8Ηζ)，8. 03 (2Η, d, J = 7. 8Ηζ)，8. 22 (1Η, dd, J = 1. 6,5. 5Ηζ)，9. 00 (1Η, d, J = 4. 7Ηζ)，9. 30 (1Η, d, J = 1. 6Hz)
13
MS :[M+H] = 432
熔点:191°C (分解)
比旋度:[a]D = -53. 71 (c = 0. 5，氯仿)
手性HPLC的条件
柱DAICEL CHIRALCEL OD-H 250X4. 60mm
洗脱剂乙醇/正-己烷=80/20
流速0. 5ml/min
温度40°C
测定242nm(UV)
保留时间23. 878min(参见其它同分异构体30.615min)
对比化合物的制备
实施例2 制备表1中化合物1 甲基-2-[2-(3唑-5-基)-吗啉-4-基]-1Η-[4，4']双嘧啶基_6_酮
步骤2-1 :4_苄基-2-(3-苯基-1，2，4-噁二唑-5-基)吗啉(中间体 )向搅拌的4-苄基-2-吗啉羧酸盐酸盐(中间体迎，1.5g，5. 82mmol)的N，N-二 甲基甲酰胺(IOml)溶液中添加2-(1Η-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3_四甲基脲四氟硼酸盐 (2. 2g，6. 98mmol)、l-羟基苯三唑水合物(236mg, 1. 74mmol)和 N，N-二异丙基乙胺(5. Iml, 29. Immol)，反应混合物在室温搅拌30分钟。在添加N’ -羟基苯甲脒(792mg，5. 82mmol) 之后，反应混合物在室温搅拌1小时，然后加热到110°C。当反应完成(通过薄层色谱法检 测)之后，通过添加水分解过量的反应物，并用乙酸乙酯萃取含水层。提取物用水和盐水洗 涤，用硫酸镁干燥，真空浓缩。得到的残留物用硅胶柱状色谱法纯化(洗脱剂含25%乙酸 乙酯的己烷)得到无色油状的4-苄基-2-(3-苯基-1，2，4-噁二唑-5-基)吗啉(中间体 21,1.44g,77% )。1H NMR(400MHz, CDCl3) δ :2. 41-2. 47 (1Η，m)，2. 60 (1Η，dd, J = 9. 8,11. 1Hz), 2. 73 (1H, dd, J = 1. 2，11. 7Hz)，3. 13 (1H, d, J = 11. 7Hz)，3. 61 (2H, s)，3. 85-3. 91 (1H, m)，4. 11 (1H, dt, J = 3· 0，11. 5Hz)，4· 99 (1H，dd, J = 2. 8,9. 4Hz) ,7. 26-7. 38 (5H, m)， 7. 45-7. 52 (3H, m)，8. 09-8. 12 (2H, m)MS :[M+H]+ = 322
步骤2-2:2-(3-苯基-[1，2，4]噁二唑_5_基)-吗啉盐酸盐(中间体丝)向搅拌着的4-苄基-2-(3_苯基-1，2，4-噁二唑-5-基)吗啉(中间体豇，2. 0g， 6. 22mmol)的1，2-二氯乙烷(IOml)溶液中添加氯乙基氯甲酸酯(2. 0ml，18. 7mmol)，将反 应混合物在70°C搅拌4小时。将反应混合物真空浓缩。在去除溶剂之后，将残留物溶解在 甲醇(IOml)中，并将反应溶液在回流下搅拌1小时。当反应完成时(通过薄层色谱法检 测)，将反应混合物真空浓缩。得到的2-(3_苯基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-吗啉盐酸盐 (中间体丝)用于下一反应而不用进一步纯化。1H NMR (400MHz, DMS0_d6) δ :3. 15—3. 22 (1Η，m)，3. 29—3. 32 (1Η，m), 3. 47 (1Η, dd, J= 10. 2，12. 6Ηζ)，3. 72 (1Η, dd，J = 2. 6，12. 8Ηζ)，4. 00-4. 06 (1Η, m)，4. 12-4. 17 (1H, m)，
5.40 (1H, dd，J = 2. 8，10. OHz)，7. 58-7. 66 (3H, m)，8. 03-8. 05 (2H, m)，9. 65 (2H, br)MS :[M+H]+ = 232熔点194.1°C步骤2-3 1-甲基-2-(2-(3-苯基-[1，2，4]噁二唑 _5_ 基)-吗啉 _4_基)_1Η_[4， 4']双嘧啶基-6-酮(表1的化合物1)向以上得到的2-(3_苯基-[1，2，4]噁二唑-5-基)_吗啉盐酸盐(中间体丝)的四 氢呋喃(IOml)溶液中添加2-氯-3-甲基-6-(嘧啶-4-基)嘧啶_4_酮(中间体丄，1. 3g，
6.22mmol)和三乙胺(4. 3ml, 31. lmmol)，反应混合物在室温搅拌2小时。将溶液在水和氯 仿间分配，有机层用水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，并真空浓缩。得到的残留物用硅胶柱状 色谱法纯化(洗脱剂在氯仿中含有5%甲醇)得到固体1-甲基-2-(2-(3-苯基-[1，2，4] 噁二唑-5-基)-吗啉-4-基)-1Η-[4，4']双嘧啶基-6-酮(表1的化合物l，1.53g，二 步骤的产率为59% )。1H NMR (400MHz, DMS0_d6) δ 3. 47 (3Η, s)，3· 60-3. 70 (3Η，m)，3· 89-4. 11 (3Η, m)， 5. 28-5. 39 (1H, m)，7. 02 (1H, s)，7. 56-7. 62 (3H, m)，8. 00-8. 02 (2H, m)，8. 24 (1H, d, J = 4. 6Hz)，9. 00 (1H, d, J = 4. 6Hz)，9. 29 (1H, s) ·MS :418(M++1).熔点166.7°C实施例3 制备表1中的化合物2 1-甲基-2-[2-(5-苯基-[1，2，4]噁二唑-3-基)-吗啉-4-基]-1!1-[4，4']双 嘧啶基-6-酮
表1中的化合物2步骤3-1 4-苄基吗啉-2-腈(中间体巡)N-苄基乙醇胺(中间体监，44. 8ml，314mmol)和2_氯丙烯腈(中间体M，25ml， 314mmol)的混合物在室温搅拌24小时。在将混合物冷却到0°C之后，向混合物添加四氢呋 喃(300ml)，接着添加叔丁醇钾，混合物在0°C搅拌1小时。用乙醚稀释混合物，然后用水和 盐水洗涤并用硫酸镁干燥。减压蒸除溶剂，残留物用硅胶柱色谱法纯化(洗脱剂含5%乙 酸乙酯的正己烷)得到无色油状4-苄基吗啉-2-腈(中间体巡)。1H NMR(400MHz, CDCl3) δ :2. 41 (1Η，ddd，J = 3. 1，8. 8，11. 8Hz)，2. 56 (1H，dd，J = 3. 2，11. 9Hz) ,2. 64 (1H, d, J = 11. 8Hz)，2. 76 (1H, dd, J = 3. 8，11. 8Hz)，3. 57 (2H, q, J = 12. 9Hz)，3. 77 (1H, dt, J = 3.6,11. 7Hz)，4. 03 (1H, ddd, J = 2. 7,8. 9,11. 7Hz)，4. 60 (1H, t, J = 3. 6Hz)，7. 26-7. 36 (5H, m)MS :[M+H]+ = 203步骤3-2 4-苄基-N，-羟基吗啉-2-甲脒(中间体巡)向搅拌着的4-苄基吗啉-2-腈(中间体距，5. Og, 24. 7mmol)的乙醇和水的混合 溶液中(2/1，75ml)添加盐酸羟胺(5. 2g，74. 2mmol)和碳酸氢钠(13. Ig, 123. 5mmol)，反应 混合物在回流状态下搅拌12小时。用氯仿稀释反应，反应混合物用水和盐水洗涤。有机层 用硫酸镁干燥，真空浓缩。得到的4-苄基-N’ -羟基吗啉-2-甲脒(中间体巡)用于下一 反应而不用进一步纯化。步骤3-3 :4_苄基-2-(5-苯基-1，2，4-噁二唑-3-基)吗啉(中间体巡)向搅拌着的苯甲酸(2. 30g，19. Immo 1)的N，N-二甲基甲酰胺(20ml)溶液中添加 2-(1Η-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3_四甲基脲四氟硼酸盐(6. 15g，19. lmmol)、1-羟基苯三 唑水合物(518mg,3. 83mmol)和N，N-二异丙基乙胺(11. 0ml，63. 8mmol)，反应混合物在室 温搅拌30分钟。在添加4-苄基-N，-羟基吗啉-2-甲脒(中间体巡，3. Og, 12. 8mmol)之 后，反应混合物在室温搅拌1小时，然后加热到110°C。当反应完成之后(通过薄层色谱法 检测)，过量的反应物通过添加水分解，并用乙酸乙酯萃取水层。提取物用水和盐水洗，用 硫酸镁干燥，真空浓缩。得到的残留物用硅胶柱状色谱法纯化(洗脱剂含30%乙酸乙酯 的正己烷)得到无色油状4-苄基-2-(5-苯基-1，2，4-噁二唑-3-基)吗啉(中间体丑， 3. 08g,75% )。1H NMR (400MHz，CDC13) δ 2. 42 (1Η, dt, J = 3. 3，11. 4Hz)，2. 54 (1H，dd, J =10. 7Hz)，2. 76 (1H, dd, J = 1.7，11. 5Hz)，3. 13 (1H, dd, J = 2. 0，9. 6Hz)，3. 61 (2H, s)，
3.89 (1H, dt, J = 2. 5，11. 2Hz)，4. 07-4. 11 (1H，m)，4. 90(1H，dd, J = 2. 5，10. 2Hz)， 7. 26-7. 36 (5H, m)，7. 50-7. 53 (2H, m)，7. 57-7. 61 (1H, m)，8. 15-8. 16 (2H, m)MS :[M+H]+ = 322步骤3-4:2-(5-苯基-[1，2，4]噁二唑_3_基)-吗啉盐酸盐(中间体巡)向搅拌着的4-苄基-2-(5-苯基-1，2，4-噁二唑-3-基)吗啉(中间体^I，900mg， 2. 80mmol)的1，2_ 二氯乙烷(2. Oml)溶液中添加氯乙基氯甲酸酯(0. 46ml，4. 20mmol)，反 应混合物在70°C搅拌4小时。将反应混合物真空浓缩。除去溶剂后将残留物溶解在甲醇 (2. Oml)中，溶液搅拌回流1小时。当反应完成之后(通过薄层色谱法检测)，将反应混合 物真空浓缩。得到的2-(5_苯基-[1，2，4]噁二唑-3-基)-吗啉盐酸盐(中间体巡)用于 下一反应而不用进一步纯化。1H 匪R(400MHz，DMS0-d6) δ :3· 17-3. 24 (1Η，m)，3· 30-3. 44 (2H，m)，3· 60-3. 64 (1Η， m)，3. 99 (1H, dt, J = 2. 3，12. 0Hz)，4. 11-4. 15 (1H，m)，5. 16 (1H, dd. J = 2. 6，10. 7Hz)， 7. 66 (2H, t, J = 7. 7Hz)，7. 73-7. 77 (1H, m)，8. 12-8. 15 (2H, m)，9. 42 (2H, br)MS :[M+H]+ = 232熔点111.0°C步骤3-5 1-甲基-2-[2-(5-苯基-[1，2，4]噁二唑_3_基)-吗啉_4_基]_1Η_[4， 4']双嘧啶基-6-酮(表1的化合物2)向得到的2-(5_苯基-[1，2，4]噁二唑_3_基)-吗啉盐酸盐(中间体巡)的四氢 呋喃(6. Oml)溶液中添加2-氯-3-甲基-6-(嘧啶-4-基)嘧啶_4_酮(中间体丄，260mg, 2. 34mmol)和三乙胺(1. 81ml, 13. Ommo 1)，反应混合物在室温搅拌2小时。将溶液在水和氯 仿间分配，有机层用水和盐水洗，用硫酸镁干燥，真空浓缩。得到的残留物用硅胶柱状色谱 法纯化(洗脱剂含有5%甲醇的氯仿)得到固体1-甲基-2-[2-(5-苯基-[1，2，4]噁二 唑-3-基)-吗啉-4-基]-1Η-[4，4']双嘧啶基-6-酮(表1的化合物2，749mg，二步骤 的产率为64% )。1H NMR (400MHz, DMS0_d6) δ 3. 47 (3Η, s)，3· 51-3. 68 (3Η，m)，3· 96-4. 10 (3Η, m)， 5. 15-5. 17 (1H, m)，7. 02 (1H, s)，7. 67-7. 74 (3H, m)，8. 13-8. 24 (3H, m)，9. 00 (1H, d, J =
4.8Hz) ,9. 30 (1H, s).MS :418(M++1).熔点207.6°C实施例4 制备表1中的化合物3 2-[2-(4-呋喃-3-基-苯基)_吗啉-4-基]-1-甲基-IH-[4，4']双嘧啶基_6_酮
17 步骤4-1 :2_(4-溴苯基)环氧乙烷(中间体迎)将4-溴代苯甲醛(中间体巡，25. 25g，136mmoD、三甲基碘代磺酸(28. 71g， 141mmol)、水(6. 5ml,361mmol)和含有氢氧化钾(15. 56g,277mmol)的乙腈(140ml)的混合 物升温至55°C并保持2. 5小时。得到的溶液在水和乙醚间分配，有机层用水、稀盐酸、和盐 水洗，并用硫酸钠干燥。减压除去有机溶剂得到2-(4_溴-苯基)-环氧乙烷(中间体巡) 的粗产品，其用于下一反应而不用纯化。步骤4-2 :2_苄基氨基-1-(4-溴-苯基)_乙醇(中间体丑)将上述获得的2-(4_溴-苯基)_环氧乙烷(中间体巡)的粗产品和苄胺(47.00g， 439mmol)的混合物在下70°C加热8小时，减压蒸馏除去过量的苄胺(约65°C在IOmmHg)。 将残留物冷却形成固体，用二异丙醚洗得到白色固体2-苄基氨基-1- (4-溴-苯基)-乙醇 (中间体丑，23. 63g，从4-溴代苯甲醛得到的产率为57% )。1H NMR (400MHz，CDCl3) δ 2. 68 (1Η, dd, J = 9. 0,12. 2Hz) ,2. 92 (1H, dd, J = 3. 6, 12. 2Hz)，3. 79-3. 87 (2H, m)，4. 67 (1H, dd, J = 3. 6,8. 9Hz)，7. 22-7. 36 (7H, m)， 7. 44-7. 47 (2H, m)MS :[M+H]+ = 306熔点108.8°C步骤4-3 4-苄基-6- (4-溴-苯基)-吗啉_3_酮(中间体巡)将含有氯乙酰氯(8.49g，75. 2mmol)的甲苯(30ml)添加到冰冷的2_苄基氨 基-l-(4-溴-苯基)-乙醇(中间体^i，21.85g，71.4mm0l)的甲苯(300ml)溶液中之后， 将三乙胺(10. 25g，lOlmmol)的甲苯(20ml)溶液添加到该混合物并搅拌1小时。然后将在 甲醇(30ml)中的甲醇钠(28%的甲醇溶液，45. 73g,237mmol)添加到该溶液中搅拌2小时。 通过添加稀盐酸淬灭反应调节PH约7. 0，在水和乙酸乙酯之间分配。有机层用稀盐酸、水、 饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，并用硫酸钠干燥。在减压下去除溶剂，残留物用硅胶柱色 谱法纯化(洗脱剂己烷/乙酸乙酯=1/1)得到无色油状4-苄基-6-(4-溴-苯基)-吗 啉-3-酮(中间体鉴，21. 26g，86% )。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ :3. 26(lH，dd，J = 3. 4，12. 3Hz)，3. 35(lH，dd，J = 10. 4， 12. 3Hz)，4. 47 (1H, d, J = 16. 8Hz)，4. 51 (1H, d, J = 16. 6Hz)，4. 56 (1H, d, J = 14. 6Hz)， 4. 72 (1H, d, J = 14. 8Hz)，7. 19 (2H, d, J = 8. 4Hz)，7. 27-7. 38 (5H, m)，7. 47 (2H, d, J = 8. 5Hz)MS :[M+H]+ = 346步骤4-4 4-苄基-2- (4-溴-苯基)_吗啉(中间体迎) 在氮气气氛于0°C向4-苄基-6- (4-溴-苯基)-吗啉-3-酮(中间体型，18. 70g， 54mmol)的四氢呋喃(IOOml)溶液中滴加硼烷-四氢呋喃络合物的四氢呋喃溶液(0. 9M， 170ml，153mmol)。得到的混合物升温至室温搅拌3小时。冷却0°C后，通过缓慢添加甲 醇(30ml)淬灭反应。将清澈的混合物在减压下蒸发，残留的油状用IN氢氧化钠水溶液 (300ml)稀释。得到的含水的混合物在100°C搅拌3小时并冷却到室温。得到的有机物用 乙酸乙酯萃取，合并的萃取物用无水硫酸钠干燥。在浓缩之后，残留物用硅胶柱色谱法纯化 (洗脱剂己烷/乙酸乙酯=3/1)得到无色油状的4-苄基-2- (4-溴-苯基)_吗啉(中 间体迎，17. 30g,52mmol,96% )。1H NMR(400MHz, CDCl3) δ :2. 26 (1Η, dt, J = 3. 4，11. 5Hz)，2. 74 (1Η, dd, J = 1. 6， 11. 5Hz)，2. 85-2. 89(lH，m)，3. 82 (1Η, dt, J = 2. 5，11. 4Ηζ)，3. 98-4. 02(lH，m)，4. 53(lH，d， J = 2· 2，10. 2Ηζ) ,7. 21 (2Η, d, J = 8. 3Ηζ)，7. 45 (2Η, d, J = 8. 2Ηζ)MS :[Μ+Η]+ = 332步骤4-5 2- (4-溴-苯基)-吗啉_4_羧酸叔丁基酯(中间体巡)在室温向4-苄基-2-(4-溴-苯基)_吗啉(中间体迎，10.0g，30mmol)的二氯乙 烷(90ml)溶液中添加氯乙基氯甲酸酯(4. 0ml，36mmol)，并将得到的溶液回流1小时。冷却 到室温后，在减压下浓缩混合物。残留物用甲醇(IOOml)稀释，得到的溶液回流1小时。蒸 除甲醇并向残留的固体中加入乙酸乙酯。在研磨之后，通过过滤收集白色固体并在减压下 干燥。将得到的固体悬浮在四氢呋喃(60ml)中，在室温向得到混合物中添加二叔丁基二碳 酸酯(6. 50g,30mmol)和IN氢氧化钠水溶液(60ml，60mmol)。在搅拌2小时之后，用乙酸 乙酯实施萃取处理，合并的有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩。得到的固体用己烷洗涤得到 2_ (4-溴-苯基)-吗啉-4-羧酸叔丁基酯(中间体巡，9.088，26.5讓01，88%)白色固体， 其用于下一反应而不用进一步纯化。1H NMR (400MHz，CDCl3) δ 1. 48 (9Η, s)，2. 77 (2H, br)，3. 03 (1H, br)，3. 67 (1H, dt, J = 2. 4，11. 7Hz) ,3. 94 (2H, br), 4. 01 (1H, d, J = 10. 8Ηζ)，4· 37 (1Η, d, J = 10. 2Hz)， 7. 24-7. 26 (2H, m)，7. 48-7. 50 (2H, m)MS [M+H] + = 242 (-叔丁氧羰基)熔点97.50C步骤4-6 :2-[4-(4，4，5，5_四甲基_[1，3，2] 二氧杂戊硼烷_2_基)-苯基]-吗 啉-4-羧酸叔丁基酯(中间体迪)在氮气气氛下将2-(4_溴-苯基)_吗啉-4-羧酸叔丁基酯(中间体M，6g， 17. 5mmol)、联硼酸频那醇酯(bis (pinacolato) diboron) (5. lg，20mmol)、乙酸钾(3. 5g, 36mmol)和[1，1，_双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II) (1. 2g, 1. 5mmol)的混合物在N， N-二甲基甲酰胺(40ml)中加热到80°C。在搅拌3小时之后，反应混合物冷却到室温，倒入水中。用乙酸乙酯实施萃取后，用盐水洗涤有机相。收集的有机层用硫酸钠干燥，浓缩。通过 快速硅胶柱色谱法纯化得到的物质(己烷/乙酸乙酯=5/1作为洗脱剂)。得到2-[4_(4， 4，5，5-四甲基-[1，3，2] 二氧杂戊硼烷-2-基)-苯基]-吗啉-4-羧酸叔丁基酯(中间体 迪，5.6g，14. 5mmol，产率83% )白色固体。1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 1. 34 (12Η, s), 1. 48 (9H, s), 2. 80 (1H, br), 3. 05 (1H, br), 3. 68 (1H, dt, J = 2. 3，11. 7Hz)，3. 94 (2H, br), 4. 03 (1H, d, J = 10. 4Hz), 4. 43 (1Η, d, J = 9. 8Hz)，7. 38 (2H, d, J = 7. 9Hz) ,7. 81 (2H, d, J = 7. 9Hz)MS [M+H] + = 290 (-叔丁氧基羰基)熔点129.4°C步骤4-7 2- (4-呋喃_3_基-苯基)-吗啉_4_羧酸叔丁基酯(中间体巡)在氮气气氛下将2-[4-(4，4，5，5_四甲基-[1，3，2] 二氧杂戊硼烷_2_基)-苯 基]-吗啉-4-羧酸叔丁基酯(1.0g，2.6mmOl)、3-溴呋喃(0. 27ml，3. Ommol)、四(三苯基 膦)钯(0) (0. 35g，0. 3mmol)和2N碳酸钾水溶液(4. 5ml)的混合物在N，N- 二甲基甲酰胺 (5ml)中加热到80°C搅拌3小时。将反应混合物倒入水中并用乙酸乙酯萃取。有机相用盐 水洗并用硫酸钠干燥。在浓缩之后，通过硅胶柱色谱法(洗脱剂己烷/乙酸乙酯=3/1) 纯化残留物得到2- (4-呋喃-3-基-苯基)-吗啉-4-羧酸叔丁基酯(中间体巡，0. 73g， 2. 2mmol，85%产率)白色固体。1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 1. 49 (9Η，s)，2. 85 (1Η，br)，3. 06 (1Η，br)，3. 69 (1Η，dt，J =2. 6，11. 8Hz)，3. 96(2H,br) ,4. 03(lH，d，J = 10. 1Hz)，4. 43(lH，d，J = 9. 2Hz)，6. 70 (1H, d, J = 1. 3Hz)，7. 38 (2H, d, J = 8. 0Hz)，7. 47-7. 49 (3H, m)，7. 73 (1H, s)MS [M+H] + = 230 (-叔丁氧基羰基)熔点114.0°C步骤4-8:2-[2-(4-呋喃-3-基-苯基)_ 吗啉-4-基]-1-甲基-IH-[4，4']双 嘧啶基-6-酮(表1的化合物3)在室温将2- (4-呋喃-3-基-苯基)-吗啉-4-羧酸叔丁基酯(中间体巡，0. 73g， 2. 2mmol)溶解在4N氯化氢的乙酸乙酯溶液中，混合物搅拌2小时。在浓缩反应混合物之 后，收集得到的固体物质。将得到的固体悬浮在四氢呋喃(IOml)中。在室温向混合物中 添加2-氯-3-甲基-6-(嘧啶-4-基)-3H-嘧啶-4-酮(中间体1,0. 33g，1. 5mmol)和三 乙胺(0.62ml，4.5mmol)。在搅拌6小时之后，将得到的混合物倒入水中并用氯仿萃取。有 机溶液用硫酸钠干燥，浓缩。残留物通过快速硅胶柱色谱法纯化(氯仿/甲醇=95/5作为 洗脱剂)得到2-[2-(4-呋喃-3-基-苯基)-吗啉-4-基]-1-甲基-IH-[4，4']双嘧啶 基-6-酮(表1的化合物3，0. 55g，l. 3mmol,87% )白色固体。1H NMR(400MHz, DMS0_d6) δ :3·04(1Η，dd, J= 10. 8，12. 8Hz)，3· 20 (1Η，dt, J = 2. 8，12. 4Ηζ)，3. 49 (3Η, s)，3. 71 (1Η, d, J = 13. 4Ηζ)，3. 76 (1Η, d, J = 12. 9Ηζ)，3. 92 (1Η, dt, J = 1. 8，11. 7Hz)，4. 10(lH，dd，J = 1. 8，11. 6Hz)，4. 76(lH，dd，J = 1. 9，10. 6Ηζ)，6. 98 (1Η, s)，7. 02 (1Η, s)，7. 47 (1Η, d, 8. 2Ηζ)，7. 64 (1Η, d, J = 8. 3Ηζ)，7. 75 (1Η, d, J = 1. 6Ηζ)， 8. 21-8. 22 (2Η, m)，8. 99 (1Η, d, J = 5. IHz)，9. 30 (1H, s)MS :[M+H]+ = 416熔点219.4°C(分解)
实例5 制备表1中的化合物4 1-甲基-2-{2-[4-(l-甲基-IH-咪唑-2-基)-苯基]-吗啉-4-基}-1Η-[4，4']
双嘧啶基-6-酮
表1中的化合物4步骤5-1 :2_[4-(1-甲基-IH-咪唑-2-基)_苯基]-吗啉-4-羧酸叔丁基酯(中 间体丑)在氮气气氛下将2-[4-(4，4，5，5_四甲基-[1，3，2] 二氧杂戊硼烷_2_基)-苯 基]-吗啉-4-羧酸叔丁基酯(中间体迆，1.0g，2.6mmOl)、2-溴-1-甲基咪唑(0. 29mL， 3. Ommol)、四(三苯基膦)钯(0) (0. 35g，0. 3mmol)和2N碳酸钾水溶液(4. 5ml)的混合物在 N，N-二甲基甲酰胺(5ml)中加热到80°C搅拌3小时。将反应混合物倒入水中并用乙酸乙 酯萃取。有机相用盐水洗并用硫酸钠干燥。在浓缩之后，残留物通过硅胶柱色谱法纯化(洗 脱剂乙酸乙酯)得到无色油状的2-[4- (1-甲基-IH-咪唑-2-基)-苯基]-吗啉-4-羧 酸叔丁基酯(中间体丑，0. 40g，1.2mmol，45% )。1H NMR(400MHz，CDCl3) δ 1. 49 (9Η, s) , 2. 85 (1Η, br) , 3. 07 (1H, br), 3. 66-3. 76 (1Η, m)，3. 75 (3Η, s)，3. 95 (2Η, br)，4. 05 (1H, d, J = 9. 8Hz)，4. 47 (1H, d, J = 9. 1Hz)，6. 97 (1H, s)，7. 12 (1H, d, J = 1. OHz)，7. 47 (2H, d, J = 8. IHz)，7. 64 (2H, d, 8. 3Hz)MS :[M+H]+ = 344步骤5-2 1-甲基-2-{2-[4-(l-甲基-IH-咪唑_2_基)-苯基]-吗 啉-4-基}-IH-[4,4']双嘧啶基-6-酮(表1的化合物4)在室温将2-[4-(1_甲基-IH-咪唑-2-基)_苯基]-吗啉-4-羧酸叔丁基酯(中间 体丑，0.40g，1.2mmOl)溶解在4N氯化氢的乙酸乙酯(5ml)溶液中，混合物搅拌2小时。在 浓缩反应混合物之后，收集得到的固体材料。将获得的固体悬浮在四氢呋喃(体IOml)中。 在室温向混合物添加2-氯-3-甲基-6-(嘧啶-4-基)-3H-嘧啶-4-酮(中间体丄，0. 18g， 0. 8mmol)和三乙胺(0. 42ml,3mmol)。在搅拌6小时之后，得到的混合物倒入水中并用氯仿 萃取。有机溶液用硫酸钠干燥，浓缩。残留物通过硅胶柱色谱法纯化(洗脱剂氯仿/甲醇 =95/5)得到1-甲基-2-{2-[4-(1-甲基-IH-咪唑-2-基)-苯基]-吗啉-4-基}-IH-[4， 4']双嘧啶基-6-酮(表1的化合物4，0. 12g，0.3mmol，35% )白色固体。
1H NMR(400MHz, DMS0_d6) δ :3. 07 (1Η, dd, J = 10. 8，12. 8Hz)，3. 18-3. 26 (1Η, m)， 3. 50 (3Η, s)，3. 73 (1H, d, J = 13. 1Hz)，3. 76 (3H, s)，3. 82 (1H, d, J = 13. OHz)，3. 94 (1H, dt, J = 2. 1，11. 7Hz) ,4. 10 (1H, d, J = 13. 1Hz) ,4. 82 (1H, dd, J = 1. 9，10. 3Hz)，6. 98 (1H, s)， 7. 02 (1H, s)，7. 26 (1H, s)，7. 57 (2H, d, J = 8. 3Hz)，7. 71 (2H, d, J = 8. 4Hz)，8. 23 (1H, dd, J =1. 2，5. 4Hz)，9. 00 (1H, d, J = 5. OHz)，9. 30 (1H, d, J = 1. IHz)MS :[M+H]+ = 430熔点179.8°C(分解)实施例6:制备表1中的化合物5 1-甲基-2-[2_(4-吡唑-1-基-苯基)_吗 啉-4-基]-IH-[4，4']双嘧啶基-6-酮 步骤6-1 2- (4-吡唑-1-基-苯基)-吗啉-4-羧酸叔丁基酯(中间体巡)在氮气气氛下将2- (4-溴-苯基)_吗啉-4-羧酸叔丁基酯(中间体M，3. Og, 8.8mmol)、碘化亚铜(I) (0. 05g,0. 3mmol)、碘化钠(1. 8g，12mmol)和反式-N，N，-二甲基 环己烷-1，2-二胺(0. lml，0.6mmol)的混合物在甲苯(IOml)中回流3小时。在混合物冷 却到室温之后，将吡唑(0. 68g，IOmrnol)和磷酸钾(6. 4g，30mmol)添加到混合物中。得到的 混合物回流3小时然后冷却到室温。在过滤去除固体物质之后，将滤液倒入水中并用乙酸 乙酯萃取。有机层用硫酸钠干燥，浓缩。残留物通过快速硅胶柱色谱法纯化得到2-(4-吡 唑-1-基-苯基)-吗啉-4-羧酸叔丁基酯(中间体巡，1.7g，5. 3mmol，60%)白色固体。1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 1. 49 (9Η，s)，2. 84 (1Η，br)，3. 06 (1Η，br)，3. 70 (1Η，dt，J =2. 4，11. 7Hz)，4. 04 (1H, d, J = 10. 1Hz)，4. 46 (1H, d，J = 8. 8Hz)，6. 47 (1H, t, J = 2. OHz)， 7. 47 (2H, d, J = 8. 6Hz)，7. 70 (2H, d, J = 8. 5Hz)，7. 72 (1H, d, J = 1. 3Hz)，7. 93 (1H, d, J = 2. 4Hz) MS [M+H] + = 230 (-叔丁氧基羰基)熔点87.3°C步骤6-2:1-甲基-2-[2-(4-吡唑-1-基-苯基)_ 吗啉-4-基]-IH-[4，4']双 嘧啶基-6-酮(表1的化合物5)在室温将2- (4-吡唑-1-基-苯基)-吗啉-4-羧酸叔丁基酯(中间体巡，1. 74g， 5. 3mmol)溶解在含4N氯化氢的乙酸乙酯(IOml)溶液中，混合物搅拌2小时。在浓缩反应 混合物之后，收集得到的固体物质。将得到的固体(500mg)悬浮在四氢呋喃(20ml)中。在 室温向混合物中添加2-氯-3-甲基-6-(嘧啶-4-基)-3H-嘧啶-4-酮(中间体丄，0. 33g， 1. 5mmol)和三乙胺(0. 62ml,4. 5mmol)。在搅拌6小时之后，将得到的混合物倒入水中并用 氯仿萃取。有机溶液用硫酸钠干燥，浓缩。残留物通过硅胶柱色谱法纯化(洗脱剂氯仿/ 甲醇=95/5)得到1-甲基-2-[2-(4-吡唑-1-基-苯基)-吗啉-4-基]-IH-[4，4']双嘧啶基-6-酮(表1的化合物5，0.448，1.011111101，70%)白色固体。1H NMR (400MHz, DMS0_d6) δ 3. 05 (1Η, dd, J= 10. 7，12. 8Hz)，3. 21 (1H，dt, J = 2. 5，12. 5Hz)，3. 49 (3H, s)，3. 72 (1H, d, J = 13. OHz)，3. 79 (1H, d, J = 13. OHz)，3. 94 (1H, dt, J = 1. 8，11. 6Hz)，4. 10(lH，dd，J = 1. 9，11. 7Hz)，4. 80(lH，dd，J = 1. 8，10. 4Hz)，6. 56 (1H, t, J = 2. OHz)，7. 02 (1H, s)，7. 59 (2H, d, J = 8. 6Hz)，7. 76 (1H, d, J = 1. 4Hz)，7. 87 (2H, d,
8.6Hz)，8· 22 (1H, dd, J=L 1,5. 3Hz)，8· 52 (1H, d, J = 2. 5Hz)，9· OO (1H, d, J = 5. 2Hz)，
9.30 (1H, d, J = 1. 2Hz)MS :[M+H]+ = 416熔点183.5°C生物测定实验7 在体内对tau蛋白磷酸化(tau phosphorylation)的抑制活性将试验化合物以10mg/kg(0. 5%的聚乙二醇去水山梨醇单月桂酸酯80 (Tween80) / 水悬浮液)的剂量给5-6周龄、重25-35g的雄性⑶-1小鼠(得自日本Charles River公 司)口服，在1小时后，将小鼠头切下，迅速取出皮质，然后冷冻在液氮中。直接用2. 3% 的十二烷基硫酸钠(SDS)均质缓冲液(62. 5mM的2-氨基-2-(羟甲基)-1，3_丙二醇盐酸 盐(Tris-HCl)、2. 3%的SDS、分别为ImM的乙二氨四乙酸(EDTA)、乙二醇-双(2-氨基乙 醚)-N，N，N，，N，_四乙酸(EGTA)和二硫苏糖醇(DTT)、蛋白酶抑制剂混合物(sigma P2714， 其含有0.2μΜ的4-(2_氨基乙基)苯磺酰氟(AEBSF)、13yM的苯丁抑制素、1.4μΜ的 E-64、0. ImM的亮抑酶肽、30ηΜ的抑肽酶，ρΗ为6. 8))将皮质勻浆，并在4°C以15000Xg离 心15分钟。用DC蛋白含量测定试剂盒(BIO-RAD)测定蛋白质浓度。上清液用样品缓冲 液(62. 5mM的Tris-HCl、25%的甘油、2%的SDS、0. 01%的溴酚蓝，ρΗ为6. 8)稀释调节到 蛋白质浓度为约0. 5-2mg/mg，然后煮沸5分钟。将样品(10 μ g)加样到10%的十二烷基 硫酸钠-聚丙烯酰胺电泳(SDS-PAGE)微型板凝胶上，并转印到聚偏氟乙烯(PVDF)膜上。 将该膜用含有5%的脱脂奶的磷酸盐缓冲液(PBS)在室温孵育1小时，然后用pS396抗体 (BI0S0URCE)作为探针在4°C过夜。将偶联抗兔IgG抗体辣根过氧化物酶(HRP)的抗体 (Promega)用作二次抗体。将该膜用增强化学发光(ECL)试剂盒(AmerashamBioscience) 显影并通过LAS 1000 (Fuji Photo Film)进行检测。表1 1)相对于赋形剂的磷酸化％**数据表示在统计学上显著实验8 对CYP2D6的抑制剂活性本药代动学研究的目的是在体外利用人源重组CYPs研究实验化合物对人CYP同 工酶的特有代谢活性的抑制作用。将浓度为0.4、2、10和50ymol/L的该实验化合物(如 果实验化合物在DMSO中的溶解度低，则将浓度设定为0. 2、1、5和25 μ mol/L)或阳性对照 添加到含有CYP2D6的反应混合物中。特异性底物和阳性对照分别为萤光素-6’-甲基醚的 乙二醇酯和奎尼丁。在存在或不存在实验化合物的情况下孵化CYP同工酶的底物和人源重 组CYPs，测定同工酶的代谢活性。在没有NADPH生成系统的情况下在37°C预孵育反应混合 物。通过添加NADPH生成系统开始反应，然后通过添加乙腈结束反应。通过反应混合物的 荧光信号(CYP2D6)测量人CYP同工酶的活性。通过设定不存在化合物的反应混合物的活 性为100%来计算每种化合物的IC5tl值。表2 1) IC50 值实验9 预知(Procognitive)效果
糖原合成酶抑制剂、3-甲基-2-((2S)-2-(4-(5-甲基_1，2，4_噁二唑_3_基)苯 基)吗啉基)-6-(嘧啶-4-基)嘧啶-4(3H)_酮的预知(Procognitive)特性以在普通和 莨若胺处理的小鼠体的情景记忆缺陷为特征。情景记忆在目标识别(OR)实验中进行评价。在照明昏暗(30Lux)的树脂玻璃敞口盒子中实施目标识别任务。要辨别的目标是 黑色塑料球体和黑色塑料盖。将让小鼠接受10分钟获取试验(第一次试验)，在该试验中 它们分别被放置在存在目标A(球形或盖)的敞开区域。采用相机将小鼠的行为记录在录 像带中，并且记录动物走向探测目标A的时间(当动物的鼻子距离目标在#lcm的时候)。 在3小时或24小时后进行10分钟记忆保持试验(第二次试验)。在这次试验期间，将目标 A和另一目标B放置在敞开区域，且记录动物开始探测两个目标的时间(tA和tB)。将识别 指数(RI)定义为(tB/(tA+tB))x 100。没有识别是理论值的50%。通过在获得和记忆保持试验之间的24h延迟或者通过在获得试验之前给药毒蕈 碱型受体抗东直菪碱(muscarinic receptor antagonist scopolamine)来诱导记忆缺陷。对于普通小鼠，获取和记忆保持力试验之间的跨试间隔(inter-trial-interval) 为24h，且在每一时期的Ih前口服给药两次或者在获取时期之后立即口服给药一次3-甲 基-2-((2S)-2-(4-(5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)苯基)吗啉基)_6_ (嘧啶-4-基)嘧 啶-4(3H)_酮。对于东莨菪碱(scopolamine) -处理的小鼠，获取和记忆保持时期之间的 跨试间隔为3h，在获取时期之前30分钟通过腹膜内给药东莨菪碱(lmg/kg)，且在识别时 期之前Ih 口服给药3-甲基-2-((2S)-2-(4-(5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)苯基)吗啉 基)-6-(嘧啶-4-基)嘧啶-4 (3H)-酮。对于普通小鼠，当在获取和记忆保持时期之前Ih 口服给药3-甲 基-2-((2S)-2-(4-(5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)苯基)吗啉基)_6_ (嘧啶-4-基)嘧 啶-4(3H)_酮(l-3-10-30mg/kg 口服)时，从给药10mg/kg剂量开始记忆能力有明显的增 强，显示处理过的小鼠记得24h前探测的目标。在0、1、3、10、30mg/kg时RI值分别为50 %、 50. 3%,52. 6%,60. 4%和 62. 9%。为了区分对记忆获取和记忆巩固的影响，在获取时期之后立即给药一次 (3-10-30mg/kg, 口服)3-甲基-2- ((2S) -2- (4- (5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)苯基)吗啉 基)-6-(嘧啶-4-基)嘧啶-4 (3H)-酮。10 和 30mg/kg 剂量的 3-甲基 _2_ ((2S) -2- (4- (5-甲 基-1，2，4-噁二唑-3-基)苯基)吗啉基)-6-(嘧啶-4-基)嘧啶_4 (3H)-酮明显改善目 标识别，暗示该化合物在10mg/kg的最低有效量巩固情景记忆。在0、3、10、30mg/kg时RI 值分别为 50. 7%,54. 6%,58. 6%和 60. 0%。为了评估3-甲基-2-((2S)-2-(4_(5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)苯基)吗 啉基)-6_(嘧啶-4-基)嘧啶-4(3H)_酮对情景记忆缺陷的预知活性(procognitive activity)，在获取时期之前30分钟用类胆碱能拮抗剂东莨菪碱(cholinergic antagonist scopolamine) (lmg/kg s.c.)处理小鼠。东莨菪碱完全废除情景记忆，处 理的小鼠不能记忆3h前探测的目标。在东莨菪碱处理之前30分钟单独口服给药3-甲 基-2-((25)-2-(4-(5-1^让71-1，2，4-噁二唑-3-基)苯基)吗啉基)_6_(嘧啶-4-基) 嘧啶-4(3H)_酮(10mg/kg)，即在获取时期之前lh，完全逆转了东莨菪碱诱导的情景记忆缺 陷，低于3mg/kg的剂量是无效的。对于普通小鼠在0、10、30mg/kg时RI值分别为63. 5%, 61. 7%和59. 7%，对于东莨菪碱处理的小鼠分别为49. 9%,52. 7%和60. 4%。
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总而言之，我们的行为结果证明对于普通小鼠10mg/kg的最小有效剂量的 TPKl抑制剂3-甲基-2-((2S)-2-(4-(5-甲基_1，2，4_噁二唑-3-基)苯基)吗啉 基)-6_(嘧啶-4-基)嘧啶-4(3H)_酮增强情景记忆和巩固情景记忆痕迹。此外，3-甲 基-2-((2S)-2-(4-(5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)苯基)吗啉基)_6_ (嘧啶-4-基)嘧 啶-4(3H)-酮抑制对于东莨菪碱处理的小鼠(MED 10mg/kg)的情景记忆缺陷。这些行为 数据强有力地支持3-甲基-2-((2S)-2-(4-(5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)苯基)吗啉 基)-6-(嘧啶-4-基)嘧啶-4 (3H)-酮的预知(Procognitive)潜能。配方实施例(1)片剂通过常规方法混合下列成分并用常规设备压片。本发明的化合物 30mg(在制备实施例中制备的)结晶纤维素60mg玉米淀粉IOOmg乳糖200mg硬脂酸镁4mg(2)软胶囊通过常规方法混合下列成分并填充在软胶囊中。本发明的化合物 30mg(在制备实施例中制备的)橄榄油300mg卵磷脂20mg工业实用性本发明的化合物具有TPKl抑制活性，并且可用作药物的活性成分以预防和/或治 疗由TPKl活性异常升高而引起的疾病，例如神经退行性疾病(例如阿尔茨海默病)和上文 提及的疾病。
权利要求
一种结构式(I)表示的化合物或其药学上可接受的盐FPA00001115762800011.tif
2.一种药剂，其包括作为活性成分的物质，该物质选自权利要求1所述的结构式(I)表 示的化合物和其药学上可接受的盐。
3.—种tau蛋白激酶1抑制剂，其包括作为活性成分的物质，该物质选自权利要求1所 述的结构式(I)表示的化合物和其药学上可接受的盐。
4.根据权利要求2所述的药剂，其用于预防和/或治疗由tau蛋白激酶1活性过高导 致的疾病。
5.根据权利要求2所述的药剂，其用于预防和/或治疗神经退行性疾病。
6.根据权利要求5所述的药剂，其中所述疾病选自阿尔茨海默病、缺血性脑血管病、唐 氏综合征、脑淀粉样血管病引起的脑出血、进行性核上性麻痹、亚急性硬化性全脑炎帕金森 氏综合征、脑炎后帕金森氏综合征、拳击手脑炎、关岛震颤麻痹痴呆综合征、路易小体病，皮 克氏病、皮质基底节变性和额颞叶型痴呆症、血管性痴呆、创伤性损伤、脑和脊髓损伤、周围 神经病变、视网膜病变和青光眼。
7.根据权利要求2所述的药剂，其用于预防和/或治疗的疾病选自非胰岛素依赖型 糖尿病、肥胖症、躁狂抑郁症、精神分裂症、秃头症、乳腺癌、非小细胞肺癌、甲状腺癌、T或 B-细胞白血病、骨质疏松、疟疾、癌症化学疗法诱发的中性粒细胞减少症和病毒诱发的肿 瘤。
8.根据权利要求2所述的药剂，其用于治疗以认知和记忆缺陷为特征的疾病。
全文摘要
一种结构式(I)表示的化合物或其药学上可接受的盐其用于预防和/或治疗tau蛋白激酶1活性异常引起的疾病如神经退行性疾病(例如阿尔茨海默病)。
文档编号C07D413/14GK101883770SQ20088011374
公开日2010年11月10日 申请日期2008年9月12日 优先权日2007年9月14日
发明者帕斯卡·巴内乌, 杰里米·柏拉特, 渡邉和俊, 福永谦二, 耶稣·贝纳维德斯 申请人:田边三菱制药株式会社;赛诺菲-安万特公司