专利名称：一种左旋精氨酸衍生物淫羊藿黄酮结合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种通过化学合成法制备的在治疗骨质疏松和骨代谢疾病的左旋精 氨酸衍生物淫羊藿黄酮结合物，及其制备方法和应用。属于医药技术领域。
背景技术：
在健康个体中，骨的形成和降解过程处于平衡状态，成骨和破骨细胞和活性互 相协调，如果这一平衡被打破，成骨或破骨细胞中任一种的活性偏高，无论倾向破骨或成 骨都会导致骨结构和功能的退化，以及骨质降低，发生骨代谢疾病，常见的有佝偻病、软 骨病、骨质增生、畸形性骨炎等，其中最具有代表性的就是由各种原因导致的骨质疏松症 (Osteoporosis, OP症)，即以骨量降低、骨组织结构退变、骨强度下降、骨脆性增加、骨折危 险性增大为特征的骨代谢疾病。目前全世界约2亿人患有骨质疏松症，WHO把骨质疏松症 列为仅次于心血管疾病的第二大公众健康问题。目前治疗骨质疏松和骨代谢疾病的药物可分为三大类骨吸收抑制剂，如降钙素、 双膦酸盐、雌激素、选择性雌激素受体调节剂等；骨形成刺激剂，如氟化物、甲状旁腺素、生 长激素、同化激素等；以及骨矿化促进剂，如钙制剂、维生素D类等。总的来说，目前市场上 应用的骨代谢治疗药物种类繁多，然而均存在已经证实或尚未证实的缺陷和副作用，且并 不是所有的情况下都能得到期望效果，因此导致没有一种占据绝对优势的药物，只能根据 病患实际情况用药且大部分药物不适宜长期使用。我国传统中医药长期以来也一直作为骨质疏松治疗的有效辅助手段，淫羊藿等补 肾壮阳类中药对骨质疏松的临床疗效已经得到证实，中药以毒副作用小，成本低廉的优势 占据了一部分市场份额。但中药处方混乱，过多依赖临床经验，缺乏现代药理作用研究的现 状使得中药治疗骨质疏松在用药过程中缺乏系统的理论指导和统一标准，极大地抑制了中 药治疗骨质疏松药物的发展。淫羊藿黄酮是中药淫羊藿的主要有效成分——淫羊藿苷的基本结构单元，又名脱 水淫羊藿素，是一种在黄酮环8位具有异戊烯取代基的特殊黄酮，结构式如(I)所示。
对淫羊藿黄酮的药理研究，证实其一方面具有类雌激素样作用，能够有效抑制骨 吸收，减少骨丢失，另一方面具有促进骨组织蛋白质的合成及促进成骨细胞的生长等作用， 即同时具有目前用于治疗骨质疏松的抑制骨吸收类药物和刺激骨形成类药物的药理活性， 因而作为新药先导化合物有非常大的研究价值。
左旋精氨酸(L-Arg)衍生物，则是近年来认为将在骨代谢病理生理过程中发挥重 要作用的一类化合物。L-Arg在人体中一氧化氮合酶(NOS)的催化作用下会生成一氧化 氮NO，NO作为脂溶性小分子，极易通过生物膜，是人体内目前发现的最简单、最基本的信使 分子，不仅可以在细胞间起调节作用，还可以在细胞内的调控中起重要的传递作用。另外 由于NO的合成易于调节，它可以作为理想的对循环、呼吸、消化及内分泌代谢等系统进行 调节的生物信号。近年来，发现NO在参与和促进骨质疏松等骨代谢疾病的病理生理过程 中也占有重要地位，成骨细胞的增殖以及骨基质分泌功能的正常发挥依赖于适当浓度NO 的存在，但过高浓度的NO反而会通过多种机能抑制成骨细胞DNA合成，阻止细胞分裂和生 长。与此同时，NO对破骨细胞的骨吸收作用有着与降钙素类药物机理类似的抑制效果，目 前研究已经证实，低水平NO导致细胞因子诱导性骨吸收增强与绝经后雌激素缺乏妇女骨 质疏松症密切相关(Horowitz MC. , Cytokines and estrogen inbone :anti_osteoporotic effects [J] · Science, 1993，260，5 =626-627)。因此NO作为一种细胞因子诱导的骨代谢调 节剂，为预防和治疗以骨质疏松为代表的骨代谢类疾病提供了一种可能性，即通过抑制和 刺激NO合成来从细胞水平调节和影响骨转化和代谢过程。而左旋精氨酸是NO的内源性前 体和主要来源，左旋精氨酸的胍基N位上低级烷基或硝基的单取代和不对称二取代衍生物 (结构式如(II)所示)。 则已被证实对人体中一氧化氮合酶NOS的活性有着抑制作用或其他不同 的调节作用，作为首选的NO水平调控药物，它们可能成为具有广阔前景的新一代 骨代谢疾病治疗药物的先导化合物(Wimalawansa，SJ, etc.，Nitric Oxide Donor AlleviatesOvariectomy-Induced Bone Loss, Bone,1996,18,4 :301_304)淫羊藿黄酮和精氨酸衍生物这两种化合物在促进骨生成和抑制骨吸收方面具有 不同机理的药物活性，因此，如果有一种候选药物能兼具两者的特征结构和功能，那么该药 物将有两个不同药理活性的位点，在受体结合过程中，两个位点的药理活性产生协同效应， 发挥一加一大于二的效果，成为一种具有独特疗效的优势药物。而目前国内外对于此类药 物的研究尚未见报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种左旋精氨酸衍生物淫羊藿黄酮结合物。本发明的另一目的是提供一种通过化学合成制备在治疗骨质疏松和骨代谢疾病 的左旋精氨酸衍生物淫羊藿黄酮结合物的方法。为了实现本发明目的，本发明的一种具有如下通式(III)的左旋精氨酸衍生物淫
羊藿黄酮结合物
(III)其中，Rl, R2在以下几种组合方式中选择，分别对应不同种类的精氨酸衍生物左旋精氨酸Rl，R2为H;NG-单烷基左旋精氨酸R1为C1-C4的简单直链或支链烷基，优选甲基，R2为H ；NG-不对称二烷基左旋精氨酸R1，R2为相同或不同的C1-C4的简单直链或支链烷 基，优选甲基。本发明提供的合成路线以淫羊藿黄酮(I)和精氨酸衍生物(II)为初始原料，制备 通式为(III)的目标化合物。初始原料淫羊藿黄酮⑴可使用天然产物提取纯化得到的产品，也可以按 CN101205223(申请号200610165354. 7)公开的全合成方法得到。另一种初始原料精氨酸衍 生物(II)也可通过已知方法制备或采用市售原料。本发明的合成路线为 上述路线图中所用的缩写对应的基团或化合物如下Boc 叔丁氧羰基；di-Boc 二碳酸二叔丁酯；Me 甲基；DCM 二氯甲烷；
EDCI 1-乙基-3- (3_ 二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐DMAP :N, N- 二甲基氨基吡啶TEA 三乙胺TFA:三氟乙酸。本发明所述的通式为(III)的精氨酸衍生物淫羊藿黄酮结合物的合成方法，其包 括如下步骤1)精氨酸衍生物(II)与二碳酸二叔丁酯按摩尔数比为1 1 2混合，在碱水
中，在10 40°C反应6 24小时，得到Ν-α -叔丁氧羰基保护的精氨酸衍生物(化合物
1)；精氨酸衍生物结构式为R2』γΝ^^^γΜ Rl, R2如通式(III)所述；
NHO (II),2)化合物1在强碱性溶液中与2，4，6_三甲基苯磺酰氯按摩尔数比为1 1 2 混合，在-10 5°C下反应1 6小时，得到N- α -叔丁氧羰基-NG-2，4，6-三甲基苯磺酰基 保护的精氨酸衍生物(化合物2)，3)淫羊藿黄酮(I)与二碳酸二叔丁酯、有机碱按摩尔数比为1 1 1. 2 1 2混合，以二氯甲烷为溶剂，在0 30°C下反应12 24小时，得到7位0-叔丁氧羰基保护 的淫羊藿黄酮(化合物3)；4)化合物3与化合物2、1_乙基-3-(3- 二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)、 N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)按摩尔数比为1 1 1. 5 1 1. 5 0. 1 0. 3混合，以 二氯甲烷为溶剂，在0 30°C下反应12 48小时，得到3位结合N- α -叔丁氧羰基-NG-2， 4，6-三甲基苯磺酰基保护精氨酸衍生物且7位0-叔丁氧羰基保护的淫羊藿黄酮(化合物 4)；5)化合物4与三氟乙酸及苯甲醚按摩尔数比为1 2 10 2 10混合，以甲 醇为溶剂，在0 30°C下反应1 4个小时，得到7位结合精氨酸衍生物的淫羊藿黄酮(目 标化合物III)。其中，步骤1)中，所述的碱水包括碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸钠、氢氧化钠等常见无 机碱水溶液。步骤2)中，所述的强碱性溶液包括氢氧化钾、氢氧化钠等常见无机强碱的浓度为 1 4M的水溶液与丙酮、四氢呋喃、二氧六环等溶剂配成的溶液。步骤3)中，所述的有机碱包括三乙胺、二异丙基乙基胺或吡啶。本发明所述的精氨酸衍生物与淫羊藿黄酮结合物的制备方法，首次将对骨代谢疾 病具有不同作用机理的药理活性的两种结构单元结合在一起，合成了一类全新的新药化合 物，该类化合物由于两种药理机制的协同作用而对骨质疏松和骨代谢疾病具有更加突出的 药理活性。本发明所述的合成方法收率较高，合成速度较快，产品易于纯化，使用此方法，应 用组合化学技术可以平行合成大批此类化合物用于新药开发过程中的药理活性筛选。
图1为本发明左旋精氨酸衍生物淫羊藿黄酮结合物及其他对照组对骨密度的影 响；Γ与Sham组比较P < 0. 05 ;*与OVX比较P < 0. 05)
图2为本发明左旋精氨酸衍生物淫羊藿黄酮结合物及其他对照组对去卵巢小鼠 脾脏与子宫的脏器系数的影响。(与假手术组比较* <0.05，** <0.01 ；与去卵巢模型 组比较 #P < 0. 05，##P < 0. 01)
具体实施例方式以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。实施例1合成左旋精氨酸-3-脱水淫羊藿素酯(通式III中Rl = H，R2 = H):1)合成N- α -叔丁氧羰基精氨酸将左旋精氨酸(17. 4g，IOOmmol)溶于饱和碳酸 氢钠水溶液(500ml)中，加入二碳酸二叔丁酯(24.0g，110mmol)，室温搅拌24小时。停止搅 拌后将生成的白色固体滤出，依次用水、乙醇、乙醚各IOOml洗涤后晾干，得到N- α -叔丁氧 羰基左旋精氨酸(钠盐)粗品32g，该粗品可不经纯化直接用于下步反应。2)合成N- α -叔丁氧羰基_队_2，4，6_三甲基苯磺酰基精氨酸将N- α -叔丁氧 羰基左旋精氨酸(钠盐)粗品(32g，约IOOmmol)溶于NaOH水溶液(浓度4M，100ml)和丙 酮(200ml)中，在冰浴保持0°C下搅拌并逐滴加入2，4，6_三甲基苯磺酰氯(26g，120mmol) 溶在100ml丙酮中得到的溶液，滴加完毕后撤去冰浴，升至室温，搅拌2小时后，减压蒸去丙 酮，加入500mll摩尔/升盐酸，用3X200ml乙酸乙酯提取，有机相合并用饱和氯化钠溶液 洗涤后，经无水硫酸镁干燥、过滤并浓缩后，硅胶柱层析纯化(梯度洗脱，洗脱剂配比为甲 醇氯仿=5 95-10 90)得到36g白色固体N-α -叔丁氧羰基-Ne-2，4，6-三甲基苯 磺酰基左旋精氨酸，以上两步总收率为78%。3)合成7-0-叔丁氧羰基脱水淫羊藿素将脱水淫羊藿素(500mg，1. 4mmol)，二 碳酸二叔丁酯(310mg，1.4mmOl)，以及三乙胺(400 μ L，2. 8mmol)溶于IOml干燥的二氯甲 烷中，室温搅拌24小时，加入IOmll摩尔/升盐酸，分出二氯甲烷相，水相再用2X20ml 二 氯甲烷提取，有机相合并，依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠溶液洗涤后，经无水硫 酸镁干燥、过滤并浓缩，使用硅胶柱层析纯化(梯度洗脱，洗脱剂配比为乙酸乙酯石油醚 10 90-20 80)得到470mg黄色固体7-0-叔丁氧羰基脱水淫羊藿素，收率74%。4)合成Ν-α -叔丁氧羰基-Ne-2，4，6-三甲基苯磺酰基左旋精氨酸-3-(7-0-叔丁 氧羰基脱水淫羊藿素)酯7-0_叔丁氧羰基脱水淫羊藿素(470mg，1. Ommol)溶于20ml干 燥的二氯甲烷中，在冰浴保持0°C下向该溶液中依次加入Ν-α-叔丁氧羰基-Ne-2，4，6-三 甲基苯磺酰基左旋精氨酸(685mg，1. 5mmol)，N, N- 二甲基氨基吡啶(30mg，0. 3mmol)，以及 1-乙基-3- (3- 二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(288mg，1. 5mmol)，加完后升至室温搅拌24 小时，再加入50ml 二氯甲烷，用100ml 1摩尔/升盐酸分两次洗涤，再用饱和碳酸氢钠水溶 液和饱和氯化钠水溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥、过滤、浓缩后，硅胶柱层析纯化(梯度洗 脱，洗脱剂配比为乙酸乙酯石油醚50 50-80 20)得到56011^黄色固体^(1-叔丁氧 羰基-Ne-2，4，6-三甲基苯磺酰基左旋精氨酸-3-(7-0-叔丁氧羰基脱水淫羊藿素)酯，收 率 62%。5)合成左旋精氨酸-3-脱水淫羊藿素酯Ν- α -叔丁氧羰基_队_2，4，6_三甲 基苯磺酰基左旋精氨酸-3-(7-0-叔丁氧羰基脱水淫羊藿素)酯(560mg，0.6mmol)溶 于IOml甲醇中，在冰浴保持0°C下向该溶液中加入三氟乙酸(200mg，2mmol)和苯甲醚(200mg, 2mmol)，然后撤去冰浴，升至室温，搅拌4小时后，减压蒸馏去除溶剂和过量的 三氟乙酸，直接用聚酰胺柱层析纯化(梯度洗脱，洗脱剂配比为三乙胺甲醇氯仿= 1 10 90-1 20 80)得到160mg黄色固体左旋精氨酸-3-脱水淫羊藿素酯，收率 49%。左旋精氨酸-3-脱水淫羊藿素酯CIMS数据为m/z = 525. 2[M+H]+， IH-WR(400MHz，DMS0-d6)数据为1. 57 (brs，Arg 2H), 1. 65,1. 70 (br, Arg 2H)，1. 74， 1. 80(2s,6H, Me2C = ), 3. 14 (br, Arg 2H)，ca. 3· 5 (m，2H，ArCH2)，，3· 95 (s，3H，4，OMe)， 4. 26 (br, Arg 1H) ,5. 19(brt, J = 7Hz，lH，CH = )，6. 12 (s，1H，7—0H)，6. 39 (s，1H，H6)， 7. 30 (d, J = 9Hz，2H，H3，，5，)，7. 86 (d, J = 9Hz，2H，H2，，6，)，11. 90，(brs, 1H，5-0H)实施例2合成Ne-单甲基左旋精氨酸-3-脱水淫羊藿素酯(通式III中Rl = Me,R2 = H)1)合成N- α -叔丁氧羰基-Ne-单甲基左旋精氨酸将Ne-单甲基左旋精氨酸 (1.0g ,5. 3mmol)溶于饱和碳酸钠水溶液(50ml)中，加入二碳酸二叔丁酯(2. 2g, IOmmol), 室温搅拌8小时。停止搅拌后将生成的白色固体滤出，依次用水、乙醇、乙醚各20ml洗涤后 晾干，得到N-α-叔丁氧羰基-Ne-单甲基左旋精氨酸(钠盐)粗品1.5g，该粗品可以不经 纯化直接用于下步反应。2)合成N-α-叔丁氧羰基-Ne-单甲基-N/ _2，4，6_三甲基苯磺酰基精氨酸将 N-α-叔丁氧羰基-Ne-单甲基左旋精氨酸(钠盐)粗品(1.5g，约5mmol)溶于NaOH水溶 液(浓度4M，IOml)和四氢呋喃(20ml)中，在冰浴保持0°C下搅拌并逐滴加入2，4，6_三甲 基苯磺酰氯(2. 2g, lOmmol)溶在IOml四氢呋喃中得到的溶液，滴加完毕后撤去冰浴，升至 室温，搅拌2小时后，加入50ml 1摩尔/升盐酸，用3 X 20ml乙酸乙酯提取，有机相合并用饱 和氯化钠溶液洗涤后，经无水硫酸镁干燥、过滤并浓缩后，硅胶柱层析纯化(梯度洗脱，洗 脱剂配比为甲醇氯仿=5 95-10 90)得到2. 2g白色固体N-α-叔丁氧羰基-Ne-单 甲基-Ne，-2，4，6-三甲基苯磺酰基左旋精氨酸，以上两步总收率为88%。3)合成7-0-叔丁氧羰基脱水淫羊藿素同实施例1步骤3)。4)合成Ν-α-叔丁氧羰基-Ne-单甲基-Ne’ _2，4，6_三甲基苯磺酰基左旋精 氨酸-3-(7-0-叔丁氧羰基脱水淫羊藿素)酯7-0_叔丁氧羰基脱水淫羊藿素(300mg， 0. 64mmol)溶于20ml干燥的二氯甲烷中，在冰浴保持0°C下向该溶液中依次加入N-α -叔 丁氧羰基-Ne-单甲基-Ne' -2，4，6-三甲基苯磺酰基左旋精氨酸(300mg，0.64mmol)，N， N-二甲基氨基吡啶(10mg，0.08mmol)，以及1-乙基_3-(3_ 二甲氨基丙基)碳二亚胺盐 酸盐(120mg，0.64mmOl)，加完后升至室温搅拌48小时，再加入20ml 二氯甲烷，用60ml 1 摩尔/升盐酸分两次洗涤，再用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗涤，经无水 硫酸镁干燥、过滤、浓缩后，硅胶柱层析纯化(梯度洗脱，洗脱剂配比为乙酸乙酯石油醚 50 50-80 20)得到400mg黄色固体N-α-叔丁氧羰基-Ne-单甲基-N/ -2，4，6-三甲 基苯磺酰基左旋精氨酸-3-(7-0-叔丁氧羰基脱水淫羊藿素)酯，收率68%。5)合成Ne-单甲基左旋精氨酸-3-脱水淫羊藿素酯Ν- α -叔丁氧羰基-Ne-单 甲基-Ne’ -2，4，6-三甲基苯磺酰基左旋精氨酸-3-(7-0-叔丁氧羰基脱水淫羊藿素)酯 (400mg,0. 43mmol)溶于IOml甲醇中，在冰浴保持0°C下向该溶液中加入三氟乙酸(400mg， 4mmol)和苯甲醚(400mg，4mmol)，然后撤去冰浴，升至室温，搅拌1小时后，减压蒸馏去除溶剂和过量的三氟乙酸，直接用聚酰胺柱层析纯化(梯度洗脱，洗脱剂配比为三乙胺甲 醇氯仿=1 10 90-1 20 80)得到IOOmg黄色固体Ne-单甲基左旋精氨酸-3-脱 水淫羊藿素酯，收率42%。Ne-单甲基左旋精氨酸-3-脱水淫羊藿素酯CIMS数据为m/z = 539.2[M+H]+， IH-WR(400MHz，DMS0-d6)数据为1· 64 (brs，Arg 2H), 1. 78,1. 90 (br, Arg 2H), 1. 71, 1. 77 (2s, 6Η, Me2C = )，2· 82 (s，ArgNG-Me3H)，3. 25 (br, Arg 2H)，ca. 3. 5 (m, 2H, ArCH2)，， 3. 92(s，3H，4，-OMe),4. 49 (t, Arg 1H)，5. 15(brt, J = 7Hz, 1H, CH = )，6· 05 (s, 1H，7-0H)， 6. 34(s, 1H，H6)，7. 28 (d, J = 9Hz，2H，H3，，5，)，7. 85 (d, J = 9Hz，2H，H2，，6，)，11. 82，(brs, 1H,5-0H)
实施例3合成Nc-不对称二甲基左旋精氨酸-3-脱水淫羊藿素酯(通式III中Rl =Me，R2 =Me)1)合成N- α _叔丁氧羰基-Ne-不对称二甲基左旋精氨酸将Ne-不对称二甲基 左旋精氨酸(1.0g，4.9mmOl)溶于NaOH水溶液(浓度lM，50ml)中，加入二碳酸二叔丁酯 (2.2g，10mmol)，室温搅拌8小时。停止搅拌后将生成的白色固体滤出，依次用水、乙醇、乙 醚各20ml洗涤后晾干，得到N-α-叔丁氧羰基-Ne-不对称二甲基左旋精氨酸(钠盐)粗 品1. 5g，该粗品可以不经纯化直接用于下步反应。2)合成N-α-叔丁氧羰基-Ne-不对称二甲基-Ne’ _2，4，6_三甲基苯磺酰基精氨 酸将N- α -叔丁氧羰基-Ne-不对称二甲基左旋精氨酸(钠盐)粗品(1. 5g，约5mmol)溶 于KOH水溶液(浓度2M，IOml)和四氢呋喃(IOml)中，在冰浴保持0°C下搅拌并逐滴加入 2，4，6-三甲基苯磺酰氯(2. 2g，1 Ommol)溶在IOml四氢呋喃中得到的溶液，滴加完毕后撤去 冰浴，升至室温，搅拌2小时后，加入50mll摩尔/升盐酸，用3X20ml乙酸乙酯提取，有机 相合并用饱和氯化钠溶液洗涤后，经无水硫酸镁干燥、过滤并浓缩后，硅胶柱层析纯化(梯 度洗脱，洗脱剂配比为甲醇氯仿=5 95-10 90)得到2. Og白色固体N-α-叔丁氧羰 基-Ne-不对称二甲基-Ne’ -2，4，6-三甲基苯磺酰基左旋精氨酸，以上两步总收率为83%。3)合成7-0-叔丁氧羰基脱水淫羊藿素同实施例1步骤3)。4)合成N-α -叔丁氧羰基-Ne-不对称二甲基-Ne，_2，4，6_三甲基苯磺酰基左旋 精氨酸-3-(7-0-叔丁氧羰基脱水淫羊藿素)酯7-0_叔丁氧羰基脱水淫羊藿素(300mg， 0. 64mmol)溶于20ml干燥的二氯甲烷中，在冰浴保持0°C下向该溶液中依次加入N-α -叔 丁氧羰基-Ne-不对称二甲基-Ne’ -2，4，6-三甲基苯磺酰基左旋精氨酸(310mg，0. 64mmol)， N，N-二甲基氨基吡啶(10mg，0.08mmol)，以及1-乙基_3-(3_ 二甲氨基丙基)碳二亚胺 盐酸盐(120mg，0. 64mmol)，加完后升至室温搅拌48小时，再加入20ml 二氯甲烷，用60ml 1摩尔/升盐酸分两次洗涤，再用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗涤，经无水 硫酸镁干燥、过滤、浓缩后，硅胶柱层析纯化(梯度洗脱，洗脱剂配比为乙酸乙酯石油醚 50 50-80 20)得到330mg黄色固体N-α-叔丁氧羰基-Ne-不对称二甲基-Ne，-2，4， 6-三甲基苯磺酰基左旋精氨酸-3-(7-0-叔丁氧羰基脱水淫羊藿素)酯，收率56%。5)合成Ne-不对称二甲基左旋精氨酸-3-脱水淫羊藿素酯Ν-α-叔丁氧羰 基-Ne-不对称二甲基-Ne’ -2，4，6-三甲基苯磺酰基左旋精氨酸-3- (7-0-叔丁氧羰基脱水 淫羊藿素)酯(330mg，0. 35mmol)溶于IOml甲醇中，在冰浴保持0°C下向该溶液中加入三氟乙酸(200mg，2mmol)和苯甲醚(200mg，2mmol)，然后撤去冰浴，升至室温，搅拌2小时后，减 压蒸馏去除溶剂和过量的三氟乙酸，直接用聚酰胺柱层析纯化(梯度洗脱，洗脱剂配比为 三乙胺甲醇氯仿=1 10 90-1 20 80)得到IlOmg黄色固体Ne-不对称二甲 基左旋精氨酸-3-脱水淫羊藿素酯，收率56%。Ne-不对称二甲基左旋精氨酸-3-脱水淫羊藿素酯CIMS数据为m/z = 553. 3[M+H]+，IH-NMR(400MHz, DMS0_d6)数据为1· 70，1. 75(2s，6H，Me2C = )，ca. 2. 2(br, Arg4H) ,3. 07, 3. 17 (2s, ArgNG-Me6H)，3. 40 (br, Arg 2H)，ca. 3. 5 (m, 2H, ArCH2)，3. 90 (s, 3H, 4，-OMe),4. 60 (br, ArglH) ,5. 16(brt, J = 7Hz, 1H, CH = )，6· 08 (s, 1H，7_0H)，6· 36 (s, 1H, H6)，7· 23 (d, J = 9Hz，2H，H3，，5，)，7. 80 (d, J = 9Hz，2H，H2，，6，)，11. 80，(brs, 1H，5-0H)试验例1本试验例在于研究本发明左旋精氨酸衍生物淫羊藿黄酮结合物对于抗骨质疏松 方面的药理活性。一.实验方法和结果1.模型建立、给药和处理80只SPF级老龄昆明小鼠(7个月)，称重。戊巴比妥钠麻醉下，消毒背部皮肤、固 定，在躯干下1/3处离脊柱两侧约Icm处分别切口，分离肌层，从淡黄色脂肪团中找到肉色 菜花样组织下连粗大管状子宫角，该组织即为卵巢。在卵巢下用丝线接扎，切除双侧卵巢， 缝合切口，于切口处涂上红霉素软膏。其中部分动物进行麻醉，背部相应部位开口，但不切 除卵巢，作为假手术对照。鼠后动物饲养于SPF级动物房，自幼饮水和摄食，一周后称重、随 机分组，分别为假手术组、模型组、样品E2(雌二醇，用于对照测试样品的雌激素作用)、样 品Ica(脱水淫洋藿素，用于对照Arg的作用)和样品Arg(实施例2)处理组。假手术10 只，其余各组每组14只。每日上午7 30-8 30给药，连续12周，每周给药六天，周日停药一 天。每周称一次体重。给药结束时称体重、麻醉、取血、制备血清备用。收集脾脏和子宫，称 重。收集左右两侧股骨备用。2.实验结果(1)对骨密度的影响图1为本发明左旋精氨酸衍生物淫羊藿黄酮结合物及其他对照组对骨密度的影 响；如图1可见，模型组骨密度较假手术组显著降低，表明老年去卵巢小鼠骨密度降低更加 严重。处理12周后各给药组骨密度均有提高，ARG组与模型组比较骨密度显著提高，E2和 Ica组与模型组比较未出现显著性差别，但也有提高骨密度的趋势。(2)对子宫系数和脾脏系数的影响表1为对去卵巢小鼠脾脏与子宫的脏器系数的影响
12B+ARG5mg/kg 0.49±0.312.34±1.11##与假手术组比较*P < 0. 05,**P < 0. 01 ；与去卵巢模型组比较’ < 0. 05, flflP < 0. 01由表1和图2可见，老年小鼠OVX手术后，子宫系数和脾脏系数均显著下降，E2显 著增加子宫系数和脾脏系数。lea、和Arg也明显增加子宫系数而不影响脾脏系数，但对子 宫系数的作用均较E2弱。二.讨论与结论表2 骨密度是衡量骨质疏松的重要指标，结果显示，Arg取代可增强骨密度。雌激素E2 可显著刺激子宫增生，Arg取代和Ica这一作用较弱，表明后二者对子宫的副作用较轻。E2 组的脾脏系数好于其它处理组。其他取代未影响Ica对脾脏系数的作用。Arg组动物体重 增加最多，另外观察到动物的一般行为和健康状态也是该组动物最好，表明Arg取代可能 会减少长期用药的毒副作用。总之，除脾脏系数外，Arg组动物的各项指标均较好。虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在 本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因 此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
权利要求
一种具有如下通式(III)的左旋精氨酸衍生物淫羊藿黄酮结合物其中，R1、R2为H，或R1为C1-C4的简单直链或支链烷基，R2为H，或R1，R2为相同或不同的C1-C4的简单直链或支链烷基。F2010100034156C00011.tif
2.根据权利要求1所述的左旋精氨酸衍生物淫羊藿黄酮结合物，其特征在于，Rl为甲 基，R2为H。
3.根据权利要求1所述的左旋精氨酸衍生物淫羊藿黄酮结合物，其特征在于，R1、R2为甲基。
4.制备权利要求1-3任意一项所述左旋精氨酸衍生物淫羊藿黄酮结合物的方法，其特 征在于，包括如下步骤1)精氨酸衍生物(II)与二碳酸二叔丁酯按摩尔数比为1 1 2混合，在碱水中，在 10 40°C反应6 24小时，得到化合物1 ；精氨酸衍生物结构式为 Rl, R2如权利要求1所述； NHO (II)，2)化合物1在强碱性溶液中与2，4，6_三甲基苯磺酰氯按摩尔数比为1 1 2混合， 在-10 5°C下反应1 6小时，得到化合物2 ；3)淫羊藿黄酮(I)与二碳酸二叔丁酯、有机碱按摩尔数比为1 1 1. 2 1 2混 合，以二氯甲烷为溶剂，在O 30°C下反应12 24小时，得到化合物3 ； 淫羊藿黄酮结构式为' 4)化合物3与化合物2、1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐、N，N-二甲基 氨基吡啶按摩尔数比为1 1 1.5 1 1.5 0. 1 0.3混合，以二氯甲烷为溶剂，在 O 30°C下反应12 48小时，得到化合物4 ；5)化合物4与三氟乙酸及苯甲醚按摩尔数比为1 2 10 2 10混合，以甲醇为 溶剂，在O 30°C下反应1 4个小时，得到7位结合精氨酸衍生物的淫羊藿黄酮(III)。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述的碱水包括碳酸氢 钠、碳酸钾、碳酸钠或氢氧化钠。
6.根据权利要求4或5所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中，所述的强碱性溶液包括氢氧化钾或氢氧化钠无机强碱的浓度为1 4M的水溶液与丙酮、四氢呋喃、二氧六环溶 剂配成的溶液。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中，所述的有机碱包括三乙 胺、二异丙基乙基胺或吡啶。
8.权利要求1-3任意一项所述左旋精氨酸衍生物淫羊藿黄酮结合物在制备治疗骨质 疏松和骨代谢疾病药物中的应用。
全文摘要
本发明提供了一种具有通式(III)的左旋精氨酸衍生物淫羊藿黄酮结合物及其制备方法和应用。本发明所述化合物由于两种药理机制的协同作用而对骨质疏松和骨代谢疾病具有更加突出的药理活性。本发明所述的合成方法收率较高，合成速度较快，产品易于纯化。
文档编号C07D311/30GK101838254SQ20101000341
公开日2010年9月22日 申请日期2010年1月13日 优先权日2009年1月13日
发明者张洁, 朱轶才, 李毅林, 王银叶 申请人:李毅林