专利名称：氰脲酸半抗原、人工抗原和抗体及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明属于食品安全技术领域。具体涉及氰脲酸半抗原、人工抗原和抗体的制备 方法及应用。
背景技术：
氰脲酸又名1，3，5-三嗪-2，4，6- (1H，3H，5H)-三酮，S-三嗪-2，4，6-三醇，异氰脲 酸，2，4，6-三(2-羟基-4-正丁氧基苯基)-1，3，5-三嗪，对称三羟基三氮杂苯，2，4，6-三羟 基-1，3，5-三嗪，均三嗪三醇，2,4,6-三羟基-1,3,5-三嗪，CAS号108-80-5，结构式为
权利要求
一种氰脲酸人工半抗原，其特征在于是将1，3，5 三嗪 2，4，6 (1H，3H，5H) 三酮与溴代羧酸苄酯反应制备得到，具有式(I)所示分子结构其中，n为 CH2基团数目，n＝1～8。FSA00000234623100011.tif
2.—种权利要求1所述氰脲酸人工半抗原的制备方法，其特征在于包括以下步骤(1)将氰脲酸和溴代羧酸苄酯装入圆底烧瓶中，加入少量Ν，Ν-二甲基甲酰胺溶解反应物；(2)往步骤(1)溶解好的体系中加入与氰脲酸等物质量的催化剂，反应后减压蒸除N， N- 二甲基甲酰胺，用四氢呋喃溶解残渣Α，过滤，滤液浓缩至干，得残渣B ；(3)残渣B用二氯甲烷+甲醇(95+5)为展开剂柱层析，获得中间产物，用过量氢氧化钾 溶液充分水解中间产物，再用浓盐酸酸化，蒸干溶剂得白色固体，白色固体用冷水洗涤后得 目标半抗原。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于步骤(1)所述氰脲酸和溴代羧酸苄酯 的投料摩尔比为6 1 1 1 ；步骤(1)所述溴代羧酸苄酯为η = 1 8的溴代羧酸苄
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于步骤(2)所述催化剂为碳酸钾、三乙胺 或4-二甲氨基吡啶。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于步骤(2)所述反应的反应温度为40 80°C，反应时间为5 24h。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于步骤(3)所述浓盐酸酸化是将中间产 物酸化至pH值为3 6。
7.一种氰脲酸人工抗原，其特征在于是将权利要求1所述的氰脲酸半抗原与蛋白质偶 联制备得到，具有式(II)所示分子结构(II)
8. —种权利要求7所述氰脲酸人工抗原的制备方法，其特征在于采用活泼脂法或者混 合酸酐法将权利要求1所述的氰脲酸半抗原与蛋白质偶联。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于包括以下步骤(1)将所述半抗原溶解于溶剂中，所述溶剂优选二氧六环或二甲基甲酰胺；(2)往步骤(1)溶解好的体系中加入二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺，室温反 应后离心除去沉淀，得上清液；二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺加入量优选按照摩 尔比11的比例确定；(3)将上清液滴入pH值为7.4 9. 55的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液中，缓冲液中含有 10mg/mL的载体蛋白，反应2 4h后，将反应液装入透析袋，用0. 85%的生理盐水透析3 4天，得人工抗原；或者包括以下步骤(1)将权利要求2或3制备得到的半抗原溶解于溶剂中；所述溶剂优选二氧六环或二 甲基甲酰胺；(2)往步骤(1)体系中加入氯甲酸异丁酯，4°C反应得甲液；将载体蛋白溶于lmol/L pH值为9. 6的碳酸氢钠缓冲液中，得乙液；载体蛋白优选BSA 或 KLH 或 CONA 或 THY 或 OVA ；(3)将甲液缓慢滴加到乙液中，4°C搅拌反应过夜，将反应液装入透析袋，用0.85%的 生理盐水透析3d，得人工抗原。
10.一种权利要求7所述抗原的应用，其特征在于应用于制备特异性抗体或氰脲酸免 疫检测方面。
全文摘要
本发明提供了一种氰脲酸半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法和应用。本发明以1，3，5-三嗪-2，4，6-(1H，3H，5H)-三酮与溴代羧酸苄酯反应生成含羧基的半抗原；然后通过活泼脂法或者混合酸酐法与蛋白质偶联制备人工抗原。将人工抗原免疫动物后，获得氰脲酸特异性抗体。本发明所述抗体可用于氰脲酸免疫检测，实现氰脲酸现场快速检测，保障食品安全。
文档编号C07K14/795GK101962368SQ20101025692
公开日2011年2月2日 申请日期2010年8月17日 优先权日2010年8月17日
发明者孙远明, 沈玉栋, 雷红涛 申请人:华南农业大学