专利名称：一种制备高纯度狼毒乙素的方法
技术领域：
本发明涉及一种化合物的提取和纯化方法，特别涉及一种制备高纯度狼毒乙素的方法。
背景技术：
狼毒乙素是狼毒药材中主要的抗结核成份之一，在醇中易溶，在水中微溶。作为狼毒药材的一种化学对照品，狼毒乙素的纯度直接影响着药品质量控制的准确性和可靠度。常规的狼毒乙素提取和纯化操作，一般是先将狼毒大戟破碎，之后水煮，将水煮液过滤，浓缩，之后进行醇提和硅胶柱层析。何南生等报道的“狼毒大戟化学对照品的研究”中采用的就是这种方法，其公开的方法具体为取狼毒大戟加水蒸煮2次，每次2 h， 合并煎液、滤过、滤液浓缩，低温烘干、粉碎、加75%乙醇回流提取3次，每次3 h，合并醇提取液，浓缩成稠膏状，拌入70 g硅胶，烘干，进行硅胶柱层析，以石油醚丙酮(10:3)洗脱，9 12流份，得粗结晶，合并后经数次层析分离，95%的乙醇重结晶，得到狼毒乙素含量为98%纯品。本发明人根据其公开的方法操作，发现要获得进行4 5次硅胶柱层析，才能获得纯度在98%左右的狼毒乙素，提取效率在10 15%之间。此方法提取和纯化过程操作复杂，狼毒乙素的得率也较低，有必要对现有方法进行改进。
发明内容
本发明的目的在于提供一种高纯度狼毒乙素的制备方法。本发明所采取的技术方案是
一种制备高纯度狼毒乙素的方法，包括如下步骤
1)将狼毒大戟粉碎，用乙醇回流提取，提取液过滤，得滤液；
2)将滤液浓缩，回收乙醇，得到稠膏；
3)在稠膏中加入5 10倍量的硅胶，混匀，烘干，以硅胶为载体进行柱层析，用洗脱液洗脱并收集洗脱液；
4)将洗脱液浓缩，回收溶剂，得到狼毒乙素粗结晶；
5)将粗结晶用乙醇溶解，加入硅胶混匀，烘干，再进行硅胶柱层析2 3次，得到狼毒乙素纯品。优选的，上述方法包括如下步骤
1)将狼毒大戟粉碎为20目的粗粉，用60 80%(v/v)的乙醇回流提取3次，每次2小时，提取液合并过滤，得滤液；
2)将滤液浓缩，回收乙醇，得到稠膏；
3)在稠膏中加入5 10倍量的硅胶，混匀，60°C烘干，以硅胶为载体进行柱层析，用洗脱液洗脱并收集洗脱液，洗脱液为石油醚乙酸乙酯=10 4 (v/v)的混合液；
4)将收集的洗脱液浓缩，回收溶剂，得到狼毒乙素粗结晶；5)将粗结晶用5 10倍量浓度为60 80% (v/v)的こ醇溶解，加入5 10倍量的硅胶，60°C烘干，之后再按上述方法进行硅胶柱层析2 3次，得到狼毒こ素纯品。优选的，上述方法中，回流提取使用的こ醇浓度为70%(v/v)，回流提取使用的こ醇的量为狼毒大戟质量的10 15倍。特别的，得到狼毒こ素粗结晶后再次进行3次硅胶柱层析。本发明的有益效果是
本发明方法，直接使用こ醇回流，大大減少了粗提物中的杂质含量，有利于减少后续的纯化工艺；采用石油醚こ酸こ酯=10 4 (v/v)的混合液进行洗脱，洗脱效果好，仅需洗脱2 3次即可使狼毒こ素的纯度达99%以上。本发明方法较何南生等公开的方法相比，提取纯化成本可降低约20%，同时，可以大幅減少能耗，并使狼毒こ素的提取效率提高到30%以上。本发明方法制备得到的狼毒こ素纯度高，在99%以上，特别适用于作为狼毒药材及相关制剂结核灵片的含量測定的标准物质。
具体实施例方式下面结合实施例，进ー步说明本发明。实施例I
一种制备高纯度狼毒こ素的方法，包括如下步骤
1)将狼毒大戟粉碎为20目的粗粉，用13倍量70%(v/v)的こ醇回流提取3次，毎次2小时，提取液合并过滤，得滤液；
2)将滤液浓缩，回收こ醇，得到密度为I.15 g/ml的稠膏；
3)在稠膏中加入7倍质量的硅胶，混匀，60°C烘干，以硅胶为载体进行柱层析，用洗脱液洗脱并收集洗脱液，洗脱液为石油醚こ酸こ酯=10 4 (v/v)的混合液；
4)将收集的洗脱液浓缩，回收溶剂，得到狼毒こ素粗结晶；
5)将粗结晶用7倍质量浓度为70%(v/v)的こ醇溶解，加入7倍质量的硅胶，60°C烘干，之后使用相同的洗脱液进行硅胶柱层析3次，得到狼毒こ素纯品。经检测,得到的狼毒こ素纯品的纯度为99. 5%,狼毒こ素的提取效率为32. 4%。实施例2
一种制备高纯度狼毒こ素的方法，包括如下步骤
1)将狼毒大戟粉碎为20目的粗粉，用10倍量80%(v/v)的こ醇回流提取3次，毎次2小时，提取液合并过滤，得滤液；
2)将滤液浓缩，回收こ醇，得到密度为I.20 g/ml的稠膏；
3)在稠膏中加入10倍质量的硅胶，混匀，60°C烘干，以硅胶为载体进行柱层析，用洗脱液洗脱并收集洗脱液，洗脱液为石油醚こ酸こ酯=10 4 (v/v)的混合液；
4)将收集的洗脱液浓缩，回收溶剂，得到狼毒こ素粗结晶；
5)将粗结晶用5倍质量浓度为70%(v/v)的こ醇溶解，加入10倍质量的硅胶，60°C烘干，之后使用相同的洗脱液进行硅胶柱层析2次，得到狼毒こ素纯品。
经检测,得到的狼毒こ素纯品的纯度为99. 1%,狼毒こ素的提取效率为35. 0%。实施例3一种制备高纯度狼毒こ素的方法，包括如下步骤
1)将狼毒大戟粉碎为20目的粗粉，用15倍量60%(v/v)的こ醇回流提取3次，毎次2小时，提取液合并过滤，得滤液；
2)将滤液浓缩，回收こ醇，得到密度为I.13 g/ml的稠膏；
3)在稠膏中加入5倍质量的硅胶，混匀，60°C烘干，以硅胶为载体进行柱层析，用洗脱液洗脱并收集洗脱液，洗脱液为石油醚こ酸こ酯=10 4 (v/v)的混合液；
4)将收集的洗脱液浓缩，回收溶剂，得到狼毒こ素粗结晶；
5)将粗结晶用5倍质量浓度为70%(v/v)的こ醇溶解，加入5倍质量的硅胶，60°C烘干，之后使用相同的洗脱液进行硅胶柱层析3次，得到狼毒こ素纯品。、经检测,得到的狼毒こ素纯品的纯度为99. 2%,狼毒こ素的提取效率为30. 2%。
权利要求
1.一种制备高纯度狼毒こ素的方法，包括如下步骤 1)将狼毒大戟粉碎，用こ醇回流提取，提取液过滤，得滤液； 2)将滤液浓缩，回收こ醇，得到稠膏； 3)在稠膏中加入5 10倍量的硅胶，混匀，烘干，以硅胶为载体进行柱层析，用洗脱液洗脱并收集洗脱液； 4)将洗脱液浓缩，回收溶剂，得到狼毒こ素粗结晶； 5)将粗结晶用こ醇溶解，加入硅胶混匀，烘干，再进行硅胶柱层析2 3次，得到狼毒こ素纯品。
2.根据权利要求I所述的ー种制备高纯度狼毒こ素的方法，其特征在于所述方法包括如下步骤 1)将狼毒大戟粉碎为20目的粗粉，用60 80%(v/v)的こ醇回流提取3次，毎次2小时，提取液合并过滤，得滤液； 2)将滤液浓缩，回收こ醇，得到稠膏； 3)在稠膏中加入5 10倍量的硅胶，混匀，60°C烘干，以硅胶为载体进行柱层析，用洗脱液洗脱并收集洗脱液，洗脱液为石油醚こ酸こ酷=10 4 (v/v)的混合液； 4)将收集的洗脱液浓缩，回收溶剂，得到狼毒こ素粗结晶； 5)将粗结晶用5 10倍量浓度为60 80%(v/v)的こ醇溶解，加入5 10倍量的硅胶，60°C烘干，之后再按上述方法进行硅胶柱层析2 3次，得到狼毒こ素纯品。
3.根据权利要求2所述的ー种制备高纯度狼毒こ素的方法，其特征在于回流提取使用的こ醇浓度为70% (v/v)。
4.根据权利要求2或3所述的ー种制备高纯度狼毒こ素的方法，其特征在于回流提取使用的こ醇的量为狼毒大戟质量的10 15倍。
5.根据权利要求2所述的ー种制备高纯度狼毒こ素的方法，其特征在于得到狼毒こ素粗结晶后再次进行3次硅胶柱层析。
全文摘要
本发明公开了一种制备高纯度狼毒乙素的方法，包括如下步骤将狼毒大戟粉碎，用乙醇回流提取，提取液过滤，得滤液；将滤液浓缩，回收乙醇，得到稠膏；在稠膏中加入5～10倍量的硅胶，混匀，烘干，以硅胶为载体进行柱层析，用洗脱液洗脱并收集洗脱液；将洗脱液浓缩，回收溶剂，得到狼毒乙素粗结晶；将粗结晶用乙醇溶解，加入硅胶混匀，烘干，再进行硅胶柱层析2～3次，得到狼毒乙素纯品。本发明方法提取纯化成本可降低约20%，同时，可以大幅减少能耗，并使狼毒乙素的提取效率提高到30%以上。制备得到的狼毒乙素纯度在99%以上，特别适用于作为狼毒药材及相关制剂结核灵片的含量测定的标准物质。
文档编号C07D311/32GK102702157SQ201210163870
公开日2012年10月3日 申请日期2012年5月24日 优先权日2012年5月24日
发明者冯淡开, 康丽红, 江志华, 钟慧敏, 黄奇建, 黄聪燕 申请人:广东恒健制药有限公司