一种三苄糖苷异构单体的制备方法
【专利摘要】本发明公开一种三苄糖苷光学异构单体的制备方法，采用三苄糖苷合成粗品为原料，通过HPLC优化条件得到合适的流动相和柱分离条件，进一步放大到工业制备级液相色谱分离系统，得到两种高纯度三苄糖苷光学异构体α和β。本发明的优点是，合成后粗品直接使用工业制备级液相色谱分离系统获取α和β单体，即可达到较好的分离提纯效果，操作简单，周期短，效率高，纯度可达99.5%以上，单杂可控制在0.2%以下。
【专利说明】一种三苄糖苷异构单体的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物医药【技术领域】，具体涉及一种三苄糖苷异构单体的制备方法。
【背景技术】
[0002]三苄糖苷(Tribenoside，TBS)，即乙基_3，5，6_三苄氧基_D_呋喃葡萄糖苷，由两种光学异构体α体(α-乙基-3，5，6-三苄氧基-D-呋喃葡萄糖苷)和β体(β-乙基-3，5，6-三苄氧基-D-呋喃葡萄糖苷)组成的混合物。它具有抗炎、抗毒素、增强毛细血管韧力、保护创伤组织并促使其愈合的作用及较弱的镇痛作用，与神经鞘氨醇合用可预防性地对抗革兰氏阴性及阳性菌。该药于上世纪50年代发现并合成，于1999年由日本首先开发为治疗痔疮的口服药物，由于其具有极强的脂溶性，易于被小肠吸收，药物利用率较高，故其临床疗效较其它同类药物有很大提高。国内迄今尚未见到对TBS分离纯化的研究报道。通常可以采用传统低压层析的方法制备得到TBS产品，但是工艺技术耗时长，生产量也受到限制，同时纯度不高。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于针对目前在制备三苄糖苷异构单体的过程中所存在的时间长以及纯度不高的问题，提供一种采用制备液相色谱分离系统制备高纯度三苄糖苷异构单体的新方法，该方法包括以下步骤:
a.将三苄糖苷粗品与体积 比为1-9:1的正己烷/乙酸乙酯溶液混合后进行过滤，一般将三苄糖苷配置成饱和溶液，具体实施时，可根据实际溶解效果进行调整；
b.采用HPLC优化三苄糖苷溶液中异构单体的最佳分离洗脱条件，将其等比例放大，应用在填充硅胶填料的色谱柱上进行分离，在线收集三苄糖苷异构体α体和β体对应谱带的馏分；
c.将步骤b中收集的α体和β体对应谱带的洗脱液中的溶剂蒸干，即可得到色谱纯为99.5%的α体和β体。
[0004]本发明的有益效果是可直接采用合成后的三苄糖苷粗品来制备三苄糖苷异构单体，不需要大量的前处理过程，简单、易控制，工艺技术简化，适用于大规模制备。高效液相色谱测定中，总杂质峰小于0.5%，单一杂质峰不超过0.2%，完全可用于药物的开发。
【专利附图】
【附图说明】
[0005]图1是三苄糖苷粗品液相色谱法测定图谱。
[0006]图2是用填充硅胶填料的动态轴向压缩柱分离纯化三苄糖苷的色谱图，进样50g。
[0007]图3是用填充硅胶填料的动态轴向压缩柱分离纯化三苄糖苷的色谱图，进样120g。
[0008]图4是用填充硅胶填料的动态轴向压缩柱分离纯化三苄糖苷的色谱图，进样 250go[0009]图5是三苄糖苷α体液相色谱法测定图谱。
[0010]图6是三苄糖苷β体液相色谱法测定图谱。
【具体实施方式】
[0011]实施例1
1.取50g三苄糖苷粗品与体积比为4:1的正己烷/乙酸乙酯溶液混合，配置成饱和溶液，置于过滤装置中，过滤除去固体颗粒；
2.将三苄糖苷溶液注入制备液相制备色谱分离系统，动态轴向压缩柱尺寸为Φ50X 250mm,硅胶填料为日本富士公司产品，粒径为2(T45um，上样量30g，流动相流速为80ml/min。分离初期，流动相正己烷/乙酸乙酯体积比范围为98/2~90/10，洗脱40min后，流动相正己烷/乙酸乙酯的体积比切换为80/20-70/30，洗脱至65min时，将流动相切换成纯乙酸乙酯，使后端杂质冲洗出来，一个分离周期结束。采用的紫外光度检测器的检测波长为254nm，收集保留时间在45~47min (与三苄糖苷α体对应)和51~53min (与三苄糖苷β体对应)的馏分，如图2所示，经HPLC分析纯度≥99.8%。
[0012]实施例2
1.取150g三苄糖苷粗品与体积比为6:1的正己烷/乙酸乙酯溶液混合，配置成饱和溶液，置于过滤装置中，过滤除去固体颗粒；
2.将三苄糖苷溶液注入制备液相制备色谱分离系统，动态轴向压缩柱尺寸为Φ100Χ250πιπι，硅胶填料为日本富士公司产品，粒径为2(T45um，上样量120g，流动相流速为300ml/min。分离初期，流动相正己烷/乙酸乙酯体积比为98/2、0/10，洗脱40min后，流动相正己烷/乙酸乙酯的体积比切换为85/15~70/30，洗脱65min时，将流动相切换成纯乙酸乙酯，使后端杂质冲洗出来，一个分离周期结束。采用的紫外光度检测器的检测波长为254nm，收集保留时间在37~46min (与三苄糖苷α体对应)和49~52min (与三苄糖苷β体对应)的馏分，如图3所示，经HPLC分析纯度≥99.5%。
[0013]实施例3
1.取300g三苄糖苷粗品与体积比为8:1的正己烷/乙酸乙酯溶液混合，配置成饱和溶液，置于过滤装置中，过滤除去固体颗粒；
2.将三苄糖苷溶液注入制备液相制备色谱分离系统，动态轴向压缩柱尺寸为Φ 150X 300mm,硅胶填料为日本富士公司产品，粒径为2(T45um，上样量250g，流动相流速为650ml/min。分离初期，流动相正己烷/乙酸乙酯体积比为98/2~90/10，洗脱40min后，流动相正己烷/乙酸乙酯的体积比切换成为85/15~70/30，洗脱65min时，将流动相切换成纯乙酸乙酯，使后端杂质冲洗出来，一个分离周期结束。采用的紫外光度检测器的检测波长为254nm，收集保留时间在36~47min (与三苄糖苷α体对应)和5(T53min (与三苄糖苷β体对应)的馏分，如图4所示，经HPLC分析纯度≥99.5%。
【权利要求】
1.一种三苄糖苷光学异构单体的制备方法，其特征在于包括以下步骤: (1)将三苄糖苷粗品与体积比为1-9:1的正己烷/乙酸乙酯溶液混合后进行过滤，除去微小的固体不溶物，得到滤液作为分离粗品； (2)将过滤产物通过进样泵或者进样阀注入制备液相色谱系统； (3)采用正己烷和乙酸乙酯做流动相，梯度洗脱得到三苄糖苷光学异构单体。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是:所述步骤(2)中，在制备色谱系统中，采用色谱柱的规格:内径5(T300mm、长度15(T300mm，且所填充固定相为硅胶填料。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征是:所述步骤(3)中，采用梯度洗脱时，流动相正己烷与乙酸乙酯的体积比(V/V)范围为95/5、/100。
【文档编号】C07H15/18GK103588829SQ201210290659
【公开日】2014年2月19日 申请日期:2012年8月16日 优先权日:2012年8月16日
【发明者】张大兵, 张宇, 王亚辉, 居延娟, 沈健增 申请人:江苏汉邦科技有限公司