浓缩抗体制剂的制作方法

专利名称：浓缩抗体制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种浓缩抗体制剂、含这种制剂的药用制剂、它在人类治疗中的应用及其制备方法。
大多数以高浓度生产的商用免疫球蛋白得自人血清并通过血液制品工业生产。用于临床的第一种纯化的人免疫球蛋白G(IgG)制品是于二十世纪四十年代制备的免疫血清球蛋白(Cohn,E.J.等“血清和血浆蛋白的制备和性质”J.Am.Chem Soc.第68,459-475页(1946)和Oncley,J.L等“人血浆亚部分中抗体、同种凝集素(isoagglutinin)、凝血酶原、血纤溶酶原和β-脂蛋白的分离。”J.Am.Chem.Soc.71,541-550(1949))。
在二十世纪六十年代发展了第二代纯化的IgG，并且将焦点集中在适于静脉内给药的制剂(Barandun,S.等“人γ-球蛋白的静脉内给药”Vox.Sang.7,157-174(1962))。这些IgG静脉内制剂的第一个制剂(Gamimune,Cutter Biological)配制为0.2M甘氨酸、10％麦芽糖，pH6.8中的5％(50mg/ml)IgG溶液。这种溶液在5℃至少稳定2.5年。对静脉内IgG(IVIG)产品的认可关键标准是IgG几乎没有片段化并且不存在高分子量聚集物。
今天，人类治疗的免疫球蛋白产品或者适用于肌内(IMIG)给药，或者适用于静脉内(IVIG)给药。IMIG原则上用于甲型肝炎预防以及有时用于缺乏丙种球蛋白血症病人的治疗。IVIG用于原发性免疫缺陷和特发性血小板减少性紫癜的治疗，以及用于继发性免疫缺陷、各种感染、血液病和其它自身免疫疾病的治疗。一般的IMIG产品标签为16％(w/v)(160mg/ml)溶液，而IVIG产品为5％(w/v)溶液(50mg/ml)。
厂商对IVIG的经验表明，在相对稀的溶液中(＜10％(w/v))这些制剂不稳定，并且当该材料贮存于室温时，通过已知的“脱出(shedding)”过程形成不溶性颗粒而显出不稳定性(Fernandes,P.M.和Lundband,J.L.“稳定的静脉内γ-球蛋白的制备方法设计和放大试验”Vox.Sang.39,101-112(1980)。商用的16.5％的γ-球蛋白在缓冲的甘氨酸-盐水溶液中通常是稳定的。用5-10％的麦芽糖作为稳定剂在阻止5％IVIG形成颗粒方面已显示出有效(Fernandes等，见上述)。
除了脱出，浓(16.5％)IVIG溶液在长时间贮存中具有聚集的趋势。浓度高达10-30％(w/w)的IVIG溶液可能包含聚集物(Gronski,P.等，“IgG二聚体的性质。I.人多克隆IgG制剂中的二聚体动力学研究”Behring Inst.Mitt.82,127-143(1988))。
这些聚集物的大多数是由独特型抗体和抗-独特型的抗体复合物产生的二聚体。由于从组织培养的上清液中制备的单克隆抗体不含抗-遗传型抗体，因此缺乏这些类型的二聚体。然而，通过在部分变性的单体抗体分子之间的复合可导致这些制剂中二聚体的形成。如在用于浓缩抗体制剂的切向流超滤中遇到的机械压力也可导致聚集物的增加(Wang,Y.C.J.和Hanson,M.A.“蛋白质和多肽的非肠道配方稳定性和稳定剂”J.Parenteral Sci.Technol.42，增刊S3-S26(1988))。
因此可得到免疫球蛋白的浓缩制剂(＞100mg/ml)，但至今这些制剂都是得自血液加工工业的多克隆抗体制剂，并且通过加入如甘氨酸和麦芽糖的各种赋形剂使其稳定。
因此，在缺乏赋形剂并且没有伴随聚集物的增加，令人惊奇地获得浓度大于100mg/ml的单克隆抗体制剂。
JP01268646A(AN89-3598789)的德温特摘要报告，该申请描述了浓度为0.1μg至100mg/ml的IgG3单克隆抗体的注射制剂。在这些出版物中公开的主题在本发明的范围之外。
因此，本发明提供一种给予人的单克隆抗体制剂，其特征在于所述抗体制剂的浓度为100mg/ml或更高(最好大于100mg/ml)。浓度高于350mg/ml时，该制剂可能非常粘稠并且回收率不可接受地变低。理想的浓度为100至300mg/ml之间。
按照本发明的制剂基本上不聚集。聚集的杂质的可接受水平将不到5％，理想的为不到2％。低达0.2％的水平是能实现的，虽然大约1％更常见。该制剂还最好是不含常规用于稳定多克隆制剂的赋形剂，如甘氨酸和/或麦芽糖。
因此，本发明提供一种给予人的单克隆抗体制剂，其特征在于所述抗体制剂的浓度为100mg/ml或更高(最好大于100mg/ml)，并且该制剂基本上不聚集。
在合成的及非天然细胞培养环境中产生天然状态的重组抗体。对商业上用于产生足够量蛋白质的表达系统常规上是基于骨髓瘤或中国仓鼠卵巢(CHO)宿主细胞。
为了培养这种细胞，已设计了没有污染性动物蛋白的、产生预期不能天然产生的蛋白糖基化形式的复合合成培养基。因此更令人惊奇的是，在这种合成条件下产生的复合糖蛋白可以以高于正常人血清中产生浓度几倍的浓度来制备，而具有其全部缓冲能力。
因此，本发明提供一种给予人的单克隆抗体，其特征在于所述抗体制剂中的抗体是重组抗体，并且其浓度为100mg/ml或更高，最好大于100mg/ml。该制剂最好基本上不含聚集物。
在生产不论是用于治疗还是诊断的纯化抗体过程中，重要的是在贮存时该抗体足够稳定，并且各种化学物可能对抗体的稳定性具有负作用。例如，现在已知痕量的铜(Cu++)在贮存时对免疫球蛋白分子具有使其不稳定的作用(WO93/08837)，并且通过将该免疫球蛋白与合适的铜离子螯合剂(例如EDTA或柠檬酸盐离子)一起配制，可消除这种作用。
本发明适用于所有种类的免疫球蛋白的制备，即IgM、IgG、IgA、IgE和IgD的制备，并且它也可扩展至Fab片段和双特异性抗体的制备。本发明优选用于IgG类免疫球蛋白的制备，包括亚类IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。本发明更优选用于IgG4和IgG1类的免疫球蛋白的制备，最优选用于IgG1的制备。
本发明发现在重组抗体制备中的特别应用，最特别的是嵌合抗体或人化(CDR-移植)抗体制备中的应用。这些抗体的具体例子包括对CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CDlla、CDllb、CD18、CD19、CD23、CD25、CD33、CD54和CDw52抗原的嵌合抗体或人化抗体。其它例子包括对各种肿瘤细胞标志物如40kd(J.Cell Biol.125(2)437-446(1994)、或诸如乙型肝炎病毒或人巨细胞病毒的感染因子抗原的嵌合抗体或人化抗体。特别优选的例子包括对CDw52、CD4和CD23抗原的嵌合抗体或人化抗体。
通常以药用制剂的形式将计划治疗用的免疫球蛋白给予病人。这种制剂除免疫球蛋白外，最好包括可能与一种或多种其它因子(如其它免疫球蛋白)或药物(如抗生素)混合的生理上可接受的载体或稀释剂。合适的载体包括但不限于，生理盐水、磷酸缓冲盐水、葡萄糖及缓冲盐水、柠檬酸盐缓冲盐水、柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液、马来酸盐缓冲液(例如马来酸/氢氧化钠缓冲液)、琥珀酸盐缓冲液(如琥珀酸/氢氧化钠缓冲液)、乙酸盐缓冲液(如乙酸钠/乙酸缓冲液)或磷酸盐缓冲液(如正磷酸二氢钾/正磷酸氢二钠缓冲液)。该制剂可选择地含稳定抗体的聚山梨酸酯。或者可以将该免疫球蛋白冻干(冷冻干燥)，并且当需要时通过加入水和/或以上描述的含水缓冲液进行复制来使用。
按照本发明的该药用制剂的优选pH取决于特定的给药途径。然而，为了使在浓缩溶液中的抗体的溶解度达到最大，该溶液的pH应当与该抗体等电点的pH不同。
因此，按照另一方面，本发明提供一种给予人的单克隆抗体制剂，其特征在于所述抗体制剂是100mg/ml或更高的浓度，并且该制剂的pH与该抗体等电点的pH不同。
给药途径常规是非肠道途径，包括静脉内、肌内和腹膜内注射或传送。然而，该制剂在体积必须低(如每个剂量体积大约1ml)的皮下制剂的生产中特别有用。为保证在这种制剂中能达到治疗剂量，必定需要浓缩的制剂。皮下制剂的优选浓度是例如在100mg/ml至200mg/ml范围内。皮下制剂具有优点是它可以自我给予，因此避免了为入院静脉内给药的需要。
按照本发明的皮下制剂最好是等渗的，并且缓冲至特定的pH。对皮下制剂的优选pH范围在pH4至pH9的通常范围内。所述优选pH和因此的缓冲液将取决于涉及以上讨论的抗体的等电点。因此，至于含抗-CD4抗体的皮下制剂，该pH将最好是在pH4至pH5.5的范围内，例如pH5.0至pH5.5，如pH5.5，而至于抗-CD23抗体，该pH则在pH4至pH6.5的范围内。因此，用于含抗-CD4抗体的皮下制剂的优选缓冲液为马来酸盐、琥珀酸盐、乙酸盐缓冲液或，更优选为磷酸盐缓冲液。缓冲液最好以50mM至100mM的浓度使用。
按照本发明的皮下制剂也可以选择地含氯化钠以调节该溶液的张力。
因此，按照本发明的又一方面，提供一种皮下给予人的单克隆抗体制剂，其特征在于所述制剂中所述抗体的浓度为100mg/ml或更高，并且该制剂的pH与该抗体等电点的pH不同。
在本发明的又一方面，计划将该单克隆制剂用于人的治疗。可治疗的各种人类疾病例如为癌或感染疾病，例如那些以上提到的疾病，以及免疫机能障碍，如T-细胞介导的疾病，包括严重的脉管炎、类风湿性关节炎、系统性狼疮(systemic lupis)、还有自身免疫疾病，如多发性硬化、移植物抗宿主病、牛皮癣(psoriarsis)、青少年糖尿病、Sjogren氏病、甲状腺病、重症肌无力、移植排斥、炎性肠疾病和哮喘。
因此本发明提供在治疗任何上述疾病的药品的生产中，本文描述的浓缩的单克隆抗体制剂的用法。还提供治疗患任何这类疾病的人的方法，该方法包含给予所述个体治疗有效量的按照本发明的制剂。
这种抗体制剂的剂量将随待治疗疾病和治疗接受者而变化，但对成年病人应在50至大约2000mg范围内，对在1至30天的时期中，优选每日或每周给药100-1000mg，并且当需要时重复。所述剂量可给予单个剂量或多个剂量。
可通过各种方法如交叉流(切向的)或搅拌超滤浓缩抗体制剂，优选途径是通过切向流超滤。当浓缩抗体时，低回收率和沉淀形成可能是一个难题。本发明通过涉及以高循环速率(500ml/min)减小交叉流超滤的剪切应力的浓缩方法解决这个特别的难题。将循环减少例如至250ml/min导致成功地就抗体浓缩至＞150mg/ml并且达到了材料的高回收率。
因此本发明提供一种制备本文描述的浓缩抗体制剂的方法。在该浓缩制剂中该抗体的回收率最好大于70％，但一般大于90％。
按照以上方法制备的浓缩抗体制剂可包含另外的成分如缓冲液、盐、聚山梨酸酯和/或EDTA。在最终的药用制剂中可能不需要这些另外的试剂，在这种情况中，可按照本领域的常规方法采用渗滤将它们除去或交换。例如，用该方法可将含柠檬酸盐缓冲液和EDTA的浓缩抗体制剂转化成含磷酸盐或马来酸盐缓冲液的浓缩抗体制剂。
本发明也提供一种通过这种方法获得的新的浓缩抗体。
以下是本发明的非限制性实施例。实施例1Campath 1H的浓缩给Minitan超滤设备(Minitan XX42 ASY MT超滤系统，Millipore)装上2个聚砜30K NMWCO滤板(Minitan PTTK 30K NMWCO,Millipore)，并且按照厂商说明书(Minitan超滤系统安装、操作、维护说明。Milipore Corporation,P15076)用0.1M NaOH清洁所述管和板30分钟。通过用1-2升pH7.2的磷酸盐缓冲盐水(PBS)冲洗除去卫生洗涤剂(sanitant)。
将Campath-1H(一种抗CDw52抗原的人化抗体Reichmann等，Nature,332,323-327(1988)(2200ml，在50mMpH6.0柠檬酸钠中为16.4mg/ml)以600ml/min的流速、2-2.5巴的背压循环通过膜的渗余物侧。在余下的实验过程中将背压维持在这个值，并且在不同时间间隔测定该渗透物流速。从在各种时间点的渗余物容器中取出抗体样品，并对抗体浓度、浊度、聚集物％和粘度进行分析。
因为在这个实验中过滤速度太慢，所以需要进行超过3天的浓缩。用PBS冲洗该系统，并将浓缩物于4℃贮存过夜。2天后，在过夜贮存前向浓缩物中加入0.01％(w/v)硫柳汞防止微生物污染。在浓缩结束时，用500ml PBS冲洗该系统，然后将另外500ml PBS冲洗液绕膜的渗余物侧再循环30分钟。通过测定在280nm处的吸收测定这些冲洗物中抗体的浓度。
仅用2个板在Minitan中将Campath-1H从16.4mg/ml浓缩至257mg/ml需要的总时间为17.25小时。表1(a)显示在该时间范围内Campath-1H抗体浓度的变化。在17小时后该浓度以指数方式增加至
表1(a)300mg/ml的峰值。终浓度为略低于该峰值，该偏差值可能是由于从非常粘稠的液体中获得有代表性样品的困难引起的。表1(b)显示Campath-1H的浓度伴随有渗透物流速相反地减低。该表也显示在189mg/ml以上的浓度，剩余浓缩物的粘度显著增加。
表1(b)表1(c)显示在190mg/ml的浓度范围内回收率高，但在此浓度以上开始明显下降，由于粘度增加导致材料粘附在玻璃器皿和管子上，并且在过夜贮存前的冲洗中损失。257mg/ml材料的最终回收率(排除在取样中取出和洗涤中丢失的材料)为63.4％。在该系统的第一次PBS洗涤中回收率为另外的14.6％，以及在第二次循环PBS洗涤中为0.5％。因此，在本实验结束时总计回收原始材料的78.5％(排除在取样中取出和洗涤中丢失的材料)，损失的21.5％主要是由于粘性材料粘附在玻璃器皿和塑料上。　<
表1(c)计算了浓缩过程中Campath-1H溶液的浊度。将适当地稀释的1.0ml等份的抗体样品在650nm处的吸收作为浊度的度量标准。表1(d)显示浊度没有增加。
表1(d)将用于聚集物测定的样品用PBS稀释至1mg/ml的蛋白浓度，并且将50μl或100μl等份注射到TSK-GEL G3000SWXL尺寸排阻HPLC柱上。该柱用0.1M pH6.7磷酸缓冲液中的0.05％NaN3和0.1M Na2SO4以1.0ml/min的流速展层。通过求在280nm的吸收峰的积分测定聚集物的量，发现它自始至终保持在1％左右。实施例2抗-CD4抗体的浓缩-方法A如实施例1安装和清洁Minitan超滤设备，除了用8个聚砜30KNMWCO滤板代替2个滤板，并且将整个设备放置在灭菌罩中。抗-CD4抗体(2142ml、在50mM pH6.0柠檬酸钠中浓度为13.9mg/ml)以190ml/min的流速、2-2.5巴的背压循环通过膜的渗余物侧。在余下的实验过程中将背压维持在这个值，并且在不同时间间隔测定该渗透物流速。从在各种时间点的渗余物容器中取出抗体样品，并对抗体浓度、CD4结合、浊度、聚集物％和粘度进行分析。
在实验结束时，将渗余物抽出Minitan设备并用500ml的50mM柠檬酸钠、0.05mMEDTA,pH6.0冲洗膜的渗余物侧，并收集冲洗的50ml部分。最后通过循环500ml的50mM柠檬酸钠、0.05mM EDTA,pH6.0绕膜的渗余物侧30分钟冲洗该系统。通过测定在280nm的吸收测定这些冲洗部分的抗体浓度。
结果显示于表2(a)-(d)。增加用于浓缩的板数导致获得250μg/ml-250mg/ml的浓度的时间缩短，与Campath-1H浓缩用的17.25小时比较缩短至6小时(见表2(a))。表2(a)还显示直至获得113mg/ml的浓度，该抗-CD4抗体的粘度没有可测定的增加。在此浓度以上，粘度明显增加。
表2(a)在83mg/ml以上的浓度下，在浓缩材料中有一种值得注意的乳色，并且这种现象在浓度增加到该值以上时引起沉淀的形成。这导致表2(b)中所示的渗透物流速的下降，并且也使显示表2(c)所示的浊度上升。在所有的浓度下，聚集物水平保持很低，在整个过程中不到0.2％(见表2(c))。表2(b)显示回收率都很高，直至粘度增加并且发生沉淀，这时在从该设备中取出后回收率明显降低至渗余物的最终回收率50％。
表2(b)
表2(c)
这种很低的回收率归因于浓缩抗-CD4抗体的高粘度使它粘附在超滤系统的管和膜上。所有以该方式损失的抗-CD4抗体都可以通过随后用缓冲液冲洗出该系统来回收。表2(d)显示实验结束时在Minitan设备的冲洗过程中连续的50ml冲洗部分中抗-CD4抗体的回收率。第一部分含11.7g浓度为235mg/ml的抗-CD4抗体，因此可将这部分合并到最初从设备中回收的12.6g 252mg/ml的浓缩物中，而不会明显稀释整个浓度。剩余的冲洗部分含总计5.1g的抗-CD4抗体，但这部分的浓度低于57mg/ml，因此不能与浓缩材料合并。在浓缩物和第一洗涤部分冲洗中的总回收率为90％。值得注意的是最终浓缩的抗-CD4抗体于4℃过夜贮存后导致某些沉淀重新溶解。
表2(d)因此设置了一个实验测定沉淀的抗-CD4抗体完全溶解的浓度。将10ml等份的抗-CD4抗体在250mg/ml下通过加入50mM柠檬酸钠、0.05mMEDTA,pH6.0逐次稀释。将适当稀释的1.0ml等份分抗体样品在650nm的吸收用作浊度的度量标准。所述结果显示于表3。
表3沉淀重新溶解，但混浊和乳色直至抗-CD4抗体浓度达到大约80mg/ml时才完全消失。正是在该浓度以上，在浓缩中首次观察到乳色，因此所述沉淀似乎是可逆的和依赖于浓度的。
实施例3抗-CD4抗体的浓缩-方法B抗-CD4抗体的缓冲调节在50mM柠檬酸钠、0.05mM EDTA,pH6.0中制备抗-CD4抗体(1460ml；24g)。通过加入固体柠檬酸至所述抗体制剂中，并用NaOH调节pH至6.0，将该缓冲液配制成100mM柠檬酸钠、0.05mM EDTA,pH6.0。将得到的制剂通过0.22μ滤膜过滤灭菌并以～12g的2个等份贮存。在Filtron Ultrasette中浓缩抗-CD4抗体将Filtron Mini-Ultrasette和Watson-Marow泵放置在冷房间中。按照厂商说明书用水冲洗Mini-Ultrasette(30K截留交叉流超滤Filtron)，然后用0.1M NaOH清洁30分钟。(Mini Ultrasette切向流设备操作说明书和Mini Ultrasette养护和使用手册，Filtron TechnologyCorporation)。通过用无菌水冲洗除去卫生洗涤剂，然后用1-2升无菌pH7.2的PBS冲洗，直至流出液的pH为7.2。将抗-CD4抗体始终以250ml/min的流速循环通过膜的渗余物侧。
在抗-CD4抗体浓缩至～150mg/ml后，将渗余物抽出Mini-Ultrasette，并用3×20ml的50mM柠檬酸钠、0.05mM EDTA,pH6.0冲洗膜的渗余物侧，并且收集每20ml的冲洗部分。如实施例1中描述通过测定280nm的吸收来测定冲洗部分的抗体浓度。
结果提示，减小渗余物流速可以提供通过交叉流超滤将抗-CD4浓缩至～150mg/ml并避免了任何沉淀的方法。用所述Filtron Mini-Ultrasette和250ml/min的渗余物循环速率检测该方法。
该工作的一种适合的等渗缓冲液为100mm柠檬酸钠、0.05mMEDTA,pH6.0。因此，通过加入16.8g柠檬酸并用NaOH调节溶液的最终pH，将重新配制1460ml剩余的50mM柠檬酸钠、0.05mMEDTA,pH6.0中的抗-CD4。将这个材料过滤灭菌并分成2等份，然后在Filtron Mini-Ultrasette设备中用250ml/min的再循环速率分别浓缩。结果显示于表4。表4在交叉流超滤槽中以250ml/min的循环速率将抗-CD4浓缩至大于100mg/ml
>*通过尺寸排阻HPLC分析聚集物用PBS将用于聚集物测定的样品稀释至1mg/ml的蛋白浓度，并将50μl或100μl等份注射到TSK-GEL G3000SWXL尺寸排阻HPLC柱上。该柱用含0.05％NaN3和0.1M Na2SO4的0.1M pH6.7磷酸缓冲液中以1.0ml/min的流速展层。通过求在280nm的吸收峰的积分测定聚集物的量。
在超滤装置中两个浓缩都获得了＞150mg/ml的最大浓度，而对抗体的溶解度无有害的影响。该浓缩需要9-11小时。-100mg/ml的终浓度是从超滤装置中最大限度回收需要的用冲洗液稀释的结果。总回收率为90-95％，并且没有观察到可见的沉淀或聚集物水平的增加。当测定在650nm的吸收时，浓缩后浊度轻微上升导致终浓度的轻微不透明，但这种现象在用聚山梨酸酯80配制并灭菌过滤时可消除，并且不重要。
正如预期的，浓缩1的CD4结合活性几乎为100mg/ml，但从浓缩2获得的值低得多。从浓缩1和2合并的材料的最终容积渗克分子浓度为大约297mOs/kg，并且合并物为透明、清亮的溶液，可容易地通过无菌0.22μm滤膜。在搅拌单元(stirred cell)中抗-CD4抗体的浓缩通过用氮气施加1.5巴的压力，将330ml等份的抗-CD4抗体(如上述)于5℃在Amicon搅拌式超滤槽(备有YM30膜Amicon)中浓缩至170mg/ml的终浓度。将该抗-CD4抗体在超滤槽中间歇取样，通过测定280nm的吸收测定浓度，以及通过测定650nm的吸收测定测定浊度。在实验结束时，从超滤槽中取出浓缩材料并通过0.22μm滤膜过滤灭菌。
为了克服在Filtron交叉-流超滤装置上产生的高剪切力，在搅拌式超滤槽中用50mM柠檬酸钠、0.05mM EDTA，pH6.0作为缓冲液进行浓缩。表5显示从该实验获得的结果。
表5在Amicon搅拌单元中通过抗-CD4的超滤的浓缩
*通过测定280nm的吸收测定的实际浓度浓缩总计需要大约25天，并且随浓缩抗体的粘度增加流速迅速下降。成功地获得171mg/ml的终浓度而没有沉淀的迹象。将这种材料从超滤槽中取出并用足够的50mM柠檬酸钠、0.05mM EDTA,pH6.0洗膜，当合并浓缩物时产生的终浓度达100mg/ml。
该材料很容易通过0.2μm灭菌滤膜。在46ml体积中实际测定的该合并材料的浓度为94.3mg/ml。这相当于通过超滤步骤的回收率为79％。
因此，这个实验提供以下证据对将抗-CD4浓缩至至少171mg/ml而言，50mM柠檬酸钠、0.05mM EDTA,pH6.0是合适的缓冲液，并且可能正是高剪切力在最初的交叉-流超滤实验中，在以上注明的Minitan和Filtron Mini-Ultrasette中引起沉淀。实施例4抗-CD4和抗-CD23抗体的皮下配方a)抗-CD4或抗-CD23抗体0.15g正磷酸二氢钾，KH2PO4(无水) 0.0656g正磷酸氢二钠Na2HPO4.12H2O0.0673gNaCl0.6263g聚山梨酸酯80(总制剂重量的％) 0.01水 至 100gb)抗-CD4或抗-CD23抗体 0.15g醋酸钠 3.674g冰醋酸，10％溶液 0.315gNaCl0.630g聚山梨酸酯80(总制剂重量的％) 0.01水 至 100gc)抗-CD4或抗-CD23抗体 0.15g马来酸 0.227g0.5M NaOH6.090gNaCl 0.777g聚山梨酸酯80(总制剂重量的％) 0.01水 至 100gd)抗-CD4或抗-CD23抗体 0.15g琥珀酸 0.203g0.5M NaOH6.54gNaCl 0.779g聚山梨酸酯80(总制剂重量的％) 0.01水 至 100gNB.每个配方a)、b)、c)或d)都可以可选地含0.05mM EDTA。
权利要求
1．给予人的单克隆抗体制剂，其特征在于所述制剂中的所述抗体的浓度为100mg/ml或更高。
2．给予人的包含浓度为100mg/ml或更高的所述抗体的单克隆抗体制剂，其中所述制剂基本上不含聚集物。
3．按照权利要求1或2的抗体制剂，其中所述抗体是以大于100mg/ml的浓度存在。
4．按照先前权利要求的任何一项的抗体制剂，其中所述抗体是以100-350mg/ml的浓度存在。
5．按照先前权利要求的任何一项的抗体制剂，其中所述抗体是同型IgG的抗体。
6．按照先前权利要求的任何一项的抗体制剂，其中所述抗体是重组抗体。
7．按照权利要求6的抗体制剂，其中所述抗体是改变的抗体。
8．按照权利要求7的抗体制剂，其中所述抗体是嵌合抗体或CDR-移植抗体。
9．按照先前权利要求的任何一项的抗体制剂，该抗体制剂与T细胞或癌症抗原结合。
10．按照先前权利要求的任何一项的抗体制剂，其中所述制剂的pH与所述抗体等电点的pH不同。
11．药用制剂，包含100mg/ml或更高浓度的单克隆抗体和药学上可接受的赋形剂。
12．按照权利要求11用于皮下给药的药用制剂。
13．如权利要求1-10的任何一项定义的用于人类治疗的单克隆抗体制剂。
14．单克隆抗体制剂的用途，其中在用于治疗T细胞介导疾病的药物生产中，所述制剂中所述抗体的浓度为100mg/ml或更高。
15．通过切向流超滤制备单克隆抗体制剂的方法，其中所述制剂中所述抗体的浓度为100mg/ml或更高。
16．单克隆抗体制剂，它包含通过切向流超滤获得的浓度为100mg/ml或更高的所述抗体。
全文摘要
本发明涉及浓缩抗体制剂、含这种制剂的药用制剂、它在人类治疗中的用途及其制备方法。
文档编号C07K1/00GK1219882SQ97194891
公开日1999年6月16日 申请日期1997年5月22日 优先权日1996年5月24日
发明者J·M·雷尔顿 申请人:葛兰素集团有限公司