专利名称：通过抑制木瓜蛋白酶超家族的半胱氨酸蛋白酶治疗寄生虫病的制作方法
技术领域：
本发明涉及治疗疟疾的方法、化合物和药用组合物。具体为该组合物含有用作专一抑制木瓜蛋白酶超家族的半胱氨酸蛋白酶的抑制剂的化合物。本发明化合物用于治疗由这些蛋白酶活性诱发的疾病，尤其是寄生虫病。特别是，本发明涉及通过抑制falcipain治疗疟疾的方法。
背景技术：
2亿8千万以上的人感染恶性疟原虫(最烈性人体疟疾病原体)，据估计它使每年1百万以上的人死亡(Gibbons,A.Science 1992,256,1135；Walsh,J.A.Ann.N.Y.Acad Sci.1989,569,1135)。恶性疟原虫寄生虫在宿主红细胞内具有48小时的生活周期，这是造成恶性疟疾所有临床特征的原因。在该周期内，红细胞被裂殖子侵染，然后细胞内寄生虫从环状体时期进化为代谢活性更高的滋养体，无性分裂，变成裂殖体，最后使宿主红细胞破裂，释放出子代裂殖子进行侵染其它的红细胞再从新开始该循环。在滋养体阶段，宿主红细胞中的血红蛋白被降解用作寄生虫主要的氨基酸来源。
Rosenthal及合作者已从疟疾寄生虫中鉴别出可诱发血红蛋白降解的28kD滋养体半胱氨酸蛋白酶(TCP或falcipain)(Rosenthal,P.J.；McKerrow,J.H.；Aikawa,M.；Nagasawa,H.；Leech,J.H.J.Clin.Invest.1988,82,1560)，并且它只表达在滋养体阶段(Rosenthal,P.J.；Kim,J.H.；McKerrow,J.H.；Leech,J.H.J.Exp.Med.1987,166,816)。抑制该酶能阻断血红蛋白的降解并杀死培养的寄生虫(Rosenthal,P.J.；Wollish,W.S.；Palmer,J.T.；Rasnick,D.J.J.Clin.Invest.1991,88,1467；Li,R.；Kenyon,G.L.；Cohen,F.E；Chen,X.；Gong,B.；Dominguez,J.N.；Davidson,E.；Kurzban,G.；Miller,R.E.；Nuzum,E.O；Rosenthal,P.J.；McKerrow,J.H.J.Med.Chem.1995,38,5031)。在由P.vinckei(类似鼠疟疾寄生虫)感染的小鼠模型中，用半胱氨酸蛋白酶抑制剂治疗，80％的动物具有达到长期的治愈作用(＞75天)(Rosenthal,P.J.；Lee,G.K.；Smith,R.E.J.Clin.Invest.1993,91,1052)。因此，falcipain的选择性抑制剂可以是有效的抗疟治疗剂，其或者与喹啉衍生药物合用或者作为喹啉衍生药物的替代物。
除恶性疟原虫外，其它寄生虫也可在它们生活周期中利用半胱氨酸蛋白酶。这些寄生虫包括克氏锥虫、布氏锥虫[锥虫病(非洲睡眠病、Chagas病)]、墨西哥利什曼原虫、pifanoi利什曼原虫、硕大利什曼原虫(利什曼病)、曼氏血吸虫(血吸虫病)、旋盘尾丝虫[盘尾丝虫病(河盲症)]、彭氏丝虫、溶组织内阿米巴虫、肠兰佰氏鞭毛虫、蠕虫、捻转血矛线虫和肝片吸虫、以及蠕虫类迭宫绦虫、毛线虫、板口线虫和蛔虫以及原生动物类隐孢子虫、艾美球虫、弓形虫和纳归虫(McKerrow,J.H.(1995)的Perspect,Drug Dis.Des.第2版；Craik,C.S.,Debouck,C.,第437-444页；Robertson,C.D.,Coombs,G.H.,North,M.J.,Mottram,J.C.(1996)的Perspect,Drug Dis.Des.第6版，McKerrow,J.H.和James,M.N.G.，第99-118页)。
现已发现某些化合物是蛋白酶抑制剂，特别是falcipain的抑制剂，这些化合物能用于治疗由半胱氨酸蛋白酶引起的疾病，尤其是疟疾。
发明概述本发明的目的是提供蛋白酶抑制剂，如半胱氨酸蛋白酶抑制剂。尤其是，本发明涉及能抑制半胱氨酸蛋白酶，特别是木瓜蛋白酶超家族的半胱氨酸蛋白酶的化合物。本发明化合物可用于治疗疾病，尤其是寄生虫病，它通过改变这些蛋白酶的活性进行治疗上的变化。特别是，本发明涉及通过抑制falcipain治疗疟疾的方法。
因此，第一方面，本发明提供用一种或多种下列化合物治疗其中可通过抑制蛋白酶(如半胱氨酸蛋白酶)改变该疾病病理学的疾病的方法2-[N-(N-苄氧基羰基甘氨酰基)]-2’-[N’-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼；(3RS)-1-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰基)-3-[N-(4-苯氧基苯甲酰基)氨基]吡咯烷-4-酮；(1S)-N-[2-[1-(N-苄氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基)]酰肼；l-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰氨基)-3-(2-苄氧基苯磺酰基)氨基-丙-2-酮；N-[2-(2-苄氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；(1S)-N-[2-[1-(N-苄氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；1-[N-(4-吗啉代氨基甲酰基)-L-亮氨酰氨基]-3-(4-苯氧基苯磺酰基)氨基-丙-2-酮；N-[2-(1-萘基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；N-[2-(2-苄氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-(N-吡嗪羰基-L-亮氨酰基)酰肼；N-[N-(1-苄基-5-甲基咪唑-4-基羰基)-L-亮氨酰基]-N’-[2-(1-萘基)噻唑-4-基羰基]酰肼；(3RS)-3-[N-(3-苄氧基苯甲酰基)-L-亮氨酰氨基]四氢呋喃-4-酮；N-[2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(5-甲基-2-苯基噁唑-4-基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；1-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]-3-[N-(2-噻吩羰基)-L-亮氨酰氨基]丙-2-酮；(3S)-3-[N-(苯并噻唑-6-基羰基)-L-亮氨酰氨基]-1-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丁-2-酮；N-[2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(7-甲氧基苯并呋喃-2-基羰基)-L-b-环丙基丙氨酰基]酰肼；1-[N-(苯并噁唑-5-基羰基)-L-亮氨酰氨基]-3-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丙-2-酮；1-[N-[4-[2-(N,N-二甲氨基)乙氧基]苯甲酰基]-L-亮氨酰氨基]-3-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丙-2-酮；和N-[2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-[5-[2-(N,N-二甲氨基)乙氧基]苯并呋喃-2-基羰基]-L-b-环丙基丙氨酰基]酰肼。
尤其是，这些化合物可用于通过抑制木瓜蛋白酶超家族的半胱氨酸蛋白酶治疗疾病(尤其寄生虫病)的本发明的方法中。特别是，本发明提供通过使用这些化合物抑制falcipain来治疗疟疾的方法。
发明详述本发明提供通过给予需要此种治疗的患者(优选动物，更优选哺乳动物，最优选人)一或多个下列化合物，来治疗疾病(尤其寄生虫病)的方法，它通过改变半胱氨酸蛋白酶的活性进行治疗上变化。 2-[N-(N-苄氧基羰基甘氨酰基)]-2’-[N’-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼； (3RS)-1-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰基)-3-[N-(4-苯氧基苯甲酰基)氨基]吡咯烷-4-酮； (1S)-N-[2-[1-(N-苄氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基)]酰肼； 1-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰氨基)-3-(2-苄氧基苯磺酰基)氨基-丙-2-酮； N-[2-(2-苄氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼； (1S)-N-[2-[1-(N-苄氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼； 1-[N-(4-吗啉代氨基甲酰基)-L-亮氨酰氨基]-3-(4-苯氧基苯磺酰基)氨基-丙-2-酮； N-[2-(1-萘基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼； N-[2-(2-苄氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-(N-吡嗪羰基-L-亮氨酰基)酰肼； N-[N-(1-苄基-5-甲基咪唑-4-基羰基)-L-亮氨酰基]-N’-[2-(1-萘基)噻唑-4-基羰基]酰肼； (3RS)-3-[N-(3-苄氧基苯甲酰基)-L-亮氨酰氨基]四氢呋喃-4-酮； N-[2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]-N’[N-(5-甲基-2-苯基噁唑-4-基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼； 1-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]-3-[N-(2-噻吩羰基)-L-亮氨酰氨基]丙-2-酮； (3S)-3-[N-(苯并噻唑-6-基羰基)-L-亮氨酰氨基]-1-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丁-2-酮； N-[2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(7-甲氧基苯并呋喃-2-基羰基)-L-b-环丙基丙氨酰基]酰肼； 1-[N-(苯并噁唑-5-基羰基)-L-亮氨酰氨基]-3-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丙-2-酮； 1-[N-[4-[2-(N,N-二甲氨基)乙氧基]苯甲酰基]-L-亮氨酰氨基]-3-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丙-2-酮；和 N-[2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-[5-[2-(N,N-二-甲氨基)乙氧基]苯并呋喃-2-基羰基]-L-b-环丙基丙氨酰基]酰肼。
尤其是，本发明方法提供通过给予需要此种治疗的患者(优选动物，更优选哺乳动物，最优选人)一个或多个以上所列的化合物，通过抑制木瓜蛋白酶超家族的半胱氨酸蛋白酶来治疗疾病(尤其寄生虫病)。
已知的可利用其生活周期中的半胱氨酸蛋白酶的寄生虫包括克氏锥虫、布氏锥虫[锥虫病(非洲睡眠病、Chagas病)]、墨西哥利什曼原虫、pifanoi利什曼原虫、硕大利什曼原虫(利什曼病)、曼氏血吸虫(血吸虫病)、旋盘尾丝虫[盘尾丝虫病(河盲症)]、彭氏丝虫、溶组织内阿米巴虫、肠兰佰氏鞭毛虫、蠕虫、捻转血矛线虫和肝片吸虫、以及蠕虫类迭宫绦虫、毛线虫、板口线虫和蛔虫以及原生动物类隐孢子虫、艾美球虫、弓形虫和纳归虫。本发明方法提供通过给予需要此种治疗的患者(优选动物，更优选哺乳动物，最优选人)一个或多个以上所列的化合物，通过抑制木瓜蛋白酶超家族的半胱氨酸蛋白酶来治疗由这些寄生虫感染引起的疾病。
更特别的是，本发明提供通过给予需要此种治疗的患者(优选动物，更优选哺乳动物，最优选人)一个或多个以上所列的化合物，通过抑制falcipain来治疗由恶性疟原虫感染引起的疟疾的方法。
本发明方法可通过单独给予以上所列的化合物或者与其它治疗上有效的化合物结合应用来进行。
此处某些基团采用缩写形式。t-Bu指叔丁基，Boc指叔丁氧基羰基，Fmoc指芴基甲氧基羰基，Ph指苯基，Cbz指苄氧基羰基。
本发明包括本发明方法中所用的以上所列化合物的所有酯、水合物、溶剂化物、复合物和前药。前药是能在体内释放出活性母体药物的任何共价键合的化合物。如果本发明化合物中存在手性中心或其它形式的异构中心，这些异构体的所有形式，包括对映体和非对映体，也包括在本发明范围之内。可将含有手性中心的发明化合物用作外消旋混合物、富含对映体的混合物，或者可用熟知的技术将外消旋混合物拆分，还可单独应用单一的对映体。在其中化合物具有不饱和碳-碳双键的情况下，顺式(Z)和反式(E)异构体都在本发明的范围之内。在其中化合物存在互变异构体形式的情况下，如酮-烯醇互变异构体，无论是以平衡或一种形式为主导的形式存在，每种互变异构体都包括在本发明的范围之内。
合成方法以下合成草案指本说明书中和本合成方案中所确定的中间体化合物和终产物。应用以下实施例详细说明本发明化合物的制备，但是是按照制备本发明半胱氨酸蛋白酶抑制化合物的通用原则来公开所述化学反应。对于本发明公开范围内所包括的每一个化合物，有时不能应用于该反应。本领域技术熟练人员很容易识别出所出现的这些化合物。在所有这些情况下，这些反应或者可以通过本领域技术熟练人员所知的一般修饰成功地进行(即通过适当保护干扰基团，通过变成其它的常用试剂)，或者通过常规改变反应条件成功地进行。另外，本发明所公开的其它反应或者其它常用反应也适于制备本发明对应的化合物。在所有的制备方法中，所有起始原料都是已知或者易于用已知原料制备的化合物；所有温度均为摄氏温度；除非另有说明，所有份数和百分率都以重量计。
试剂从供货商处购买，如Aldrich Chemical Company、TCI、Sigma、Lancaster Synthesis、Bionet、Fluka、Maybridge或Bachem，除另有说明外，试剂使用时不经进一步的纯化。除另有说明外，所有溶剂可用本领域技术熟练人员易知的标准方法纯化。原料可从市售获得或者可按标准参考书中的常规方法制备，参考书如Compendium of Organic Synthetic Methods,Ⅰ-Ⅳ卷(Wiley-Interscience出版)。
本发明形成酰胺键的偶合方法通常在本领域是熟知的。肽合成的方法一般可见Bodansky等的THE PRACTICE OF PEPTIDESYNTHESIS,Springer-Verlag,Berlin,1984；E.Gross和J.Meienhofer,THE PEPTIDES，第1卷，第1-284页(1979)；和J.M.Stewart和J.D.Young,SOLID PHASE PEPTIDE SYNTHESIS，第2版，PierceChemical Co.,Rockford,Ⅲ.,1984，它们一般进行技术说明，并结合到本发明中作为参考。
制备本发明化合物的合成方法一般采用保护基来保护反应官能团或者将不需要的副反应降低到最小。这些保护基一般见Green,T.WPROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SYNTHESIS,John Wiley &Sons,New York(1981)中所述。术语“氨基保护基”一般是指本领域所熟悉的Boc、乙酰基、苯甲酰基、Fmoc和Cbz基团及其衍生物。氨基保护基的保护和脱保护以及用其它基团置换的方法是众所周知的。
本发明方法中所用的以上所提的化合物的酸加成盐可以按标准方法，在适当的溶剂中，用该母体化合物和酸，如盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、磷酸、乙酸、三氟乙酸、马来酸、琥珀酸或甲磺酸来制备。
本发明所述的某些化合物含有一或多个不对称中心，因此可产生对映体、非对映体以及其它立体异构体形式。本发明包括所有的可能的立体异构体及其外消旋体和光学纯的形式。光学活性(R)和(S)异构体可用手性合成子、手性试剂制备，或者可用常用的技术拆分。当本发明化合物含有烯双键时，其包括E和Z几何异构体。
方案1 a)H2NNH2·H2O,MeOH；b)Cl2CO,PhMe；c)R2CO2H,EDC·HCl,1-HOBT,DMF。
在质子溶剂(如甲醇或乙醇)中，将1-方案1用水合肼处理得到2-方案1，在甲苯中将后者用光气处理得到3-方案1。在质子溶剂(如甲醇或乙醇)中，将该物质用水合肼处理得到4-方案1。在非质子溶剂(如DMF)中，将4-方案1用羧酸(如N-苄氧基羰基甘氨酸)和肽偶合剂(如EDC·HCl/1-HOBT)处理得到5-方案1。
方案2 a)Boc2O,CH2Cl2；b)m-CPBA,CH2Cl2；c)NaN3,NH4Cl,MeOH/H2O；d)H2,10％Pd/C,MeOH；e)R1CO2H,EDC·HCl,1-HOBT,DMF；f)HCl R2CO2H,EDC·HCl,1-HOBT,DMF；h)Jones试剂，丙酮。
在二氯甲烷中，将1-方案2用碳酸氢二叔丁基酯处理得到2-方案2，在二氯甲烷中将后者用间氯过苯甲酸处理得到3-方案2。在甲醇/水中，将该物质用叠氮化钠和氯化铵处理得到4-方案2，再在甲醇中，在10％钯-碳的存在下用氢气处理得到5-方案2。在非质子溶剂(如DMF)中，将该物质用羧酸(如4-苯氧基苯甲酸)和肽偶合剂(如EDC.HCl/1-HOBT)处理得到6-方案2，在乙酸乙酯中将其用HCl气处理得到7-方案2。在非质子溶剂(如DMF)中，将7-方案2用羧酸(如N-苄氧基羰基-L-亮氨酸)和肽偶合剂(如EDC·HCl/1-HOBT)处理得到8-方案2，在丙酮中将其用Jones试剂处理得到9-方案2。
方案3 a)i-BuOCOCl,NMM,NH3,THF；b)Lawesson氏试剂，THF；c)ⅰ.EtO2CCOCH2Br；ⅱ.TFAA,Py,CH2Cl2；d)H2NNH2·H2O,EtOH；e)R1CO2H,EDC·HCl,1-HOBT,DMF。
在THF中，通过用氯甲酸异丁基酯、N-甲基吗啉和氨处理，将1-方案3转化成2-方案3。在THF中，将2-方案3用Lawesson氏试剂处理得到硫代酰胺3-方案3。将该物质通过与酮酯缩合转化为噻唑，接着在二氯甲烷中，用三氟乙酸酐和吡啶处理得到4-方案3，再用肼单水合物处理转化成5-方案3。在非质子溶剂(如DMF)中，将5-方案3用羧酸(如N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸或N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸)和肽偶合剂(如EDC·HCl/1-HOBT)处理得到6-方案2。
方案4 a)R1CO2H,EDC·MeI,1-HOBT,DMF；b)R2SO2Cl,N-甲基吗啉，DMF或R2CO2H,EDC·MeI,1-HOBT,DMF；c)Jones试剂，丙酮或Dess-Martin试剂，CH2Cl2；d)R1=N-苄氧基羰基-氨基酸，H2,10％Pd/C,EtOH；R1=N-叔丁氧基羰基-氨基酸，TFA,CH2Cl2；e)R4CO2H,EDC·MeI,1-HOBT,DMF。
在非质子溶剂(如DMF)中，将1-方案4用羧酸(如N-苄氧基羰基-L-亮氨酸或N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酸)和肽偶合剂(如EDC·HCl/1-HOBT,EDC·MeI/1-HOBT或HBTU)处理得到2-方案4，在非质子溶剂(如DMF)中，将后者用磺酰氯(如2-苄氧基苯磺酰氯或4-苯氧基苯磺酰氯)和N-甲基吗啉处理得到3-方案4。另外，在非质子溶剂(如DMF)中，将2-方案4用羧酸(如3-(2-吡啶基)苯乙酸)和肽偶合剂(如EDC·HCl/1-HOBT,EDC·MeI/1-HOBT或HBTU)处理得到3-方案4。然后将3-方案4在丙酮中用Jones试剂或者在二氯甲烷中用Dess-Martin试剂处理得到4-方案4。当R1CO是N-苄氧基羰基-氨基酸时，在乙醇中，在10％钯-碳的存在下，将3-方案4用氢气处理得到5-方案4。另外，当R1CO是N-叔丁氧基羰基-氨基酸时，在二氯甲烷中，将3-方案4用三氟乙酸处理得到5-方案4。在非质子溶剂(如DMF)中，将5-方案4用氨基甲酰氯(如4-吗啉甲酰氯)和叔胺碱(如N-甲基吗啉)处理得到6-方案4。另外，在非质子溶剂(如DMF)中，将5-方案4用羧酸(如噻吩-2-羧酸、苯并噁唑-5-羧酸或4-[2-(N,N-二甲氨基)乙氧基]苯甲酸)和肽偶合剂(如EDC·HCl/1-HOBT,EDC·MeI/1-HOBT或HBTU)处理得到6-方案4。在二氯甲烷中，将6-方案4用Dess-Martin试剂处理得到7-方案4。
方案5 a)硫脲，EtOH；b)ⅰ.NaNO2,16％HBr水溶液；ⅱ.CuBr,16％HBr水溶液；ⅲ.HBr(催化)，EtOH；c)ArB(OH)2,Pd(PPh3)4,CsF,DME；d)H2NNH2·H2O,EtOH；e)R1CO2H,EDC·HCl,1-HOBT,DMF；f)R1CO2H=N-叔丁氧基羰基-氨基酸，TFA,CH2Cl2；g)R3CO2H,EDC·HCl,1-HOBT,DMF。
在回流的乙醇中，将溴代丙酮酸乙酯(1-方案5)用硫脲处理得到2-方案5，将后者连续用亚硝酸钠和溴化亚铜(Ⅰ)的16％HBr水溶液处理，再在乙醇中，将该产物与催化量的HBr加热得到3-方案5。在回流DME中，将该物质用芳基硼酸(如2-苄氧基苯基硼酸或1-萘基硼酸)、四(三苯膦)钯(0)和氟化铯处理得到4-方案5。在乙醇中，将4-方案5用水合肼处理得到5-方案5，再在非质子溶剂(如DMF)中，将5-方案5用羧酸(如N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酸、N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸或N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸)和肽偶合剂(如EDC·HCl/1-HOBT)处理得到6-方案5。当R1CO是N-叔丁氧基羰基-氨基酸时，在二氯甲烷中，将6-方案5用三氟乙酸处理得到7-方案5，在非质子溶剂(如DMF)中，将后者用羧酸(如吡嗪羧酸或1-苄基-5-甲基咪唑-4-羧酸)和肽偶合剂(如EDC·HCl/1-HOBT)处理得到8-方案5。
方案6 a)NaN3,NH4Cl,MeOH/水；b)H2,10％Pd/C,EtOH；c)BocNHCH(R1)CO2H,Me3COCl,N,N-二异丙基乙胺，CH2Cl2；d)TFA,CH2Cl2；e)R2CO2H,(EtO)2POCN,Et3N,CH2Cl2；f)Dess-Martin试剂，CH2Cl2。
在甲醇/水中，将1-方案6用叠氮化钠和氯化铵处理得到2-方案6，在乙醇中，在10％钯-碳的存在下，将后者用氢气处理得到3-方案6。在非质子溶剂(如二氯甲烷)中，将3-方案6用N-叔丁氧基羰基氨基酸、新戊酰氯和叔胺碱(如N,N-二异丙基胺)得到4-方案6，再在二氯甲烷中用三氟乙酸处理得到5-方案6。在非质子溶剂(如DMF或二氯甲烷)中，将5-方案6用羧酸(如3-苄氧基苯甲酸)和肽偶合剂(如EDC·HCl/1-HOBT、EDC·MeI/1-HOBT、HBTU或氰基膦酸二乙酯)处理得到6-方案6，再在二氯甲烷中用Dess-Martin试剂处理得到7-方案6。
方案7 a)ⅰ.R1NH2,CH2Cl2；ⅱ.Na(OAc)3BH；b)PhCONCS,CHCl3；c)K2CO3,MeOH,H2O；d)EtO2CCOCH2Br,EtOH；e)H2NNH2·H2O,EtOH；f)R3CO2H,EDC·HCl,1-HOBT,DMF；g)R3CO2H=N-叔丁氧基羰基-氨基酸，TFA,CH2Cl2；h)R5CO2H,EDC·HCl,1-HOBT,DMF。
在非质子溶剂(如二氯甲烷)中，将醛(1-方案7)用伯胺(如环丙胺)处理，接着用还原剂(如三乙酰氧基硼氢化钠)处理得到2-方案7，再在氯仿中用异硫氰酸苯甲酰酯处理得到3-方案7。在甲醇/水中，将3-方案7用碳酸钾处理得到4-方案7，再在回流乙醇中，用溴代丙酮酸乙酯处理得到5-方案7，接着在乙醇中用水合肼处理得到6-方案7。在非质子溶剂(如DMF)中，将6-方案7用羧酸(如N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酸)和肽偶合剂(如EDC·HCl/1-HOBT)处理得到7-方案7。当R3CO是N-叔丁氧基羰基-氨基酸时，在二氯甲烷中，将7-方案7用三氟乙酸处理得到8-方案7，在非质子溶剂(如DMF)中，将后者用羧酸(如5-甲基-2-苯基噁唑-4-甲酸、7-甲氧基苯并呋喃-2-羧酸或5-[2-(N,N-二甲氨基)乙氧基]苯并呋喃-2-羧酸)和肽偶合剂(如EDC·HCl/1-HOBT)处理得到9-方案7。
方案8 a)ⅰ.氯甲酸异丁基酯，N-甲基吗啉，THF；ⅱ.CH2N2,Et2O；ⅲ.30％HBr/HOAc；b)NaN3,KF,DMF；c)NaBH4,MeOH；d)1,3-丙二硫醇，Et3N,MeOH；e)R2CO2H,EDC·MeI,1-HOBT,DMF；f)H2,10％Pd/C,EtOH；g)BocNHCH(R3)CO2H,HBTU,DMF；h)HCl,二氧六环，CH2Cl2；i)R4CO2H,HBTU,DMF；j)Dess-Martin试剂，CH2Cl2。
将1-方案8在THF中用氯甲酸异丁基酯和N-甲基吗啉、在乙醚中用重氮甲烷、以及在乙酸中用30％HBr顺次处理得到2-方案8，再在DMF中将后者用叠氮化钠和氟化钾处理得到3-方案8。在甲醇中，将3-方案8用硼氢化钠处理得到4-方案8，再在甲醇中，将后者用1,3-丙二硫醇和三乙胺处理得到5-方案8。在非质子溶剂(如DMF)中，将5-方案8用羧酸(如3-(2-吡啶基)苯基乙酸)和肽偶合剂(如EDC·HCl/1-HOBT、EDC·MeI/1-HOBT或HBTU)处理得到6-方案8，再在乙醇中，在10％钯-碳的存在下用氢气处理得到7-方案8。在非质子溶剂(如DMF)中，将7-方案8用N-叔丁氧基羰基氨基酸(如N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酸)和肽偶合剂(如EDC·HCl/1-HOBT、EDC·MeI/1-HOBT或HBTU)处理得到8-方案8，再在二氧六环/二氯甲烷中用HCl处理得到9-方案8。在非质子溶剂(如DMF)中，将9-方案8用羧酸(如苯并噻唑-6-羧酸)和肽偶合剂(如EDC·HCl/1-HOBT、EDC·MeI/1-HOBT或HBTU)处理得到10-方案8，再在二氯甲烷中用Dess-Martin试剂处理得到11-方案8。
本发明还提供药用组合物，它包含一个或多个下列化合物以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂2-[N-(N-苄氧基羰基甘氨酰基)]-2’-[N’-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼；(3RS)-1-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰基)-3-[N-(4-苯氧基苯甲酰基)氨基]吡咯烷-4-酮；(1S)-N-[2-[1-(N-苄氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基)]酰肼；1-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰氨基)-3-(2-苄氧基苯磺酰基)氨基-丙-2-酮；N-[2-(2-苄氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；(1S)-N-[2-[1-(N-苄氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；1-[N-(4-吗啉代氨基甲酰基)-L-亮氨酰氨基]-3-(4-苯氧基苯磺酰基)氨基-丙-2-酮；N-[2-(1-萘基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；N-[2-(2-苄氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-(N-吡嗪羰基-L-亮氨酰基)酰肼；N-[N-(1-苄基-5-甲基咪唑-4-基羰基)-L-亮氨酰基]-N’-[2-(1-萘基)噻唑-4-基羰基]酰肼；(3RS)-3-[N-(3-苄氧基苯甲酰基)-L-亮氨酰氨基]四氢呋喃-4-酮；N-[2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(5-甲基-2-苯基噁唑-4-基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；1-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]-3-[N-(2-噻吩羰基)-L-亮氨酰氨基]丙-2-酮；(3S)-3-[N-(苯并噻唑-6-基羰基)-L-亮氨酰氨基]-1-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丁-2-酮；N-[2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(7-甲氧基苯并呋喃-2-基羰基)-L-b-环丙基丙氨酰基]酰肼；1-[N-(苯并噁唑-5-基羰基)-L-亮氨酰氨基]-3-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丙-2-酮；1-[N-[4-[2-N,N-二甲氨基)乙氧基]苯甲酰基]-L-亮氨酰氨基]-3-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丙-2-酮；和N-[2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-[5-[2-(N,N-二甲氨基)乙氧基]苯并呋喃-2-基羰基]-L-b-环丙基丙氨酰基]酰肼。
因此，可用以上所列的化合物制备药物。可将按以上所述制备的以上所列化合物的药用组合物制成供胃肠外给药的溶液或冷冻干燥粉末制剂。可在使用前，通过加入适当的稀释剂或其它的药学上可接受的载体，重组粉末制剂。液体制剂可以是缓冲、等渗、水溶性溶液。适当稀释剂的实例为生理等渗盐水溶液、标准的5％葡萄糖水溶液或者缓冲的乙酸钠或乙酸铵溶液。这些制剂特别适于胃肠外给药，但也可供口服给药或者装于定量吸入器或喷雾器中供喷注给药。可按要求加入赋形剂，如聚乙烯吡咯烷酮、明胶、羟基纤维素、阿拉伯树胶、聚乙二醇、甘露糖醇、氯化钠或柠檬酸钠。
另外，可将这些化合物包囊、压片或制成乳剂或糖浆剂以供口服给药。可加入药学上可接受的固体或液体载体以改进或稳定该组合物或者易于制备该组合物。固体载体包括淀粉、乳糖、硫酸钙二水合物、石膏粉、硬脂酸镁或硬脂酸、滑石粉、果胶、阿拉伯树胶、琼脂或明胶。液体载体包括糖浆、花生油、橄榄油、盐水和水。该载体还包括缓释物质，如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯本身或与蜡的混合物。可变化固体载体的量，但优选每单位剂量在约20mg至约1g之间。药用制剂可按照常用的药学技术制备，包括研磨、混合、制粒和压制，必要时压成片型；或者研磨、混合并填充成硬明胶胶囊形式。当使用液体载体时，剂型可以是糖浆剂、酏剂、乳剂或水溶性或非水溶性的混悬剂的形式。可将这些液体制剂直接给药或者填充入软明胶胶囊中。
对于直肠给药，还可将本发明化合物与赋形剂(如可可脂、甘油、明胶或聚乙二醇)混合，然后压模制成栓剂。
根据本发明，给予有效量的一或多个以上所列的化合物以抑制与特定症状或疾病有关的蛋白酶。当然，该剂量将根据所给予化合物的类型而改变。例如，对于急性治疗，优选胃肠外给予有效量的本发明化合物。虽然肌内注射也有效，但最有效的是静脉注射本发明化合物的5％葡萄糖水溶液或生理盐水溶液，或者带有适当赋形剂的类似制剂。一般地，胃肠外给药的剂量大约为0.01-100mg/kg；优选在0.1-20mg/kg，这种方式能保持血浆中药物的浓度在能抑制蛋白酶(如falcipain)的有效浓度上。每日给予本发明化合物1-4次的水平以达到每日的总剂量约为0.4-400mg/kg/日。对于所给予治疗上有效的本发明化合物的准确量以及本发明化合物的最佳给药途径，很容易由本领域一般技术人员根据比较该试剂的血液水平与所需要达到治疗效果的浓度来确定。
该化合物可以以前药形式给药，前药是一般被设计成能增强吸收并在体内能断裂形成有效成分的化合物。有效的水平还可通过给予该化合物的药学活性的代谢物或生物同构体实现。本发明化合物的前药可通过任何适当的方法制备。
还可以以口服的方式给予患者本发明化合物，而使药物的浓度足以抑制半胱氨酸蛋白酶(特别是falcipain)或者达到本文所公开的任何其它治疗指标。一般地，根据患者的症状，含有该化合物的药用组合物的口服给药剂量约在0.1-50mg/lg之间。口服剂量优选约为0.1-50mg/kg，每日1-2次。
根据本发明给予本发明化合物时，没有不能接受的毒副作用。
可用一些生物试验中的一种对本发明化合物进行实验，来确定需要具有所要求药理效果的化合物的浓度。例如，提供了确定恶性疟原虫半胱氨酸蛋白酶催化活性试验以及确定本发明化合物抑制半胱氨酸蛋白酶的量的试验。
所有恶性疟原虫半胱氨酸蛋白酶试验都用滋养体提取物进行(Rosenthal,P.J.等，J.Clin.Invest.1991,88,1467-1472)。测定动力常数的标准实验条件使用荧光肽底物，Cbz-Phe-Arg-AMC(Bachem)，在pH5.5的含有5mM半胱氨酸的100mM乙酸钠中测定。实验中储备底物溶液用10mM的DMSO溶液制备，最终底物浓度为10μM。最终DMSO浓度为2％，最终体积为100μL。所有实验都在室温下行。在形成AMC产物后，在20-30分钟内绘制产物进程曲线。
用该进程曲线方法评估潜在的抑制剂。试验在各种浓度的试验化合物的存在下进行。通过向抑制剂和底物的缓冲溶液中加入酶启动反应。依据抑制剂存在下该进程曲线的形状而定，根据两个方法中的一个方法进行数据分析。对于进程曲线是线性的化合物，根据方程(1)(Brandt等，Biochemistry,1989,28,140)来计算表观抑制常数(ki,app):
v=VmA/[ka(I+I/ki,app)+A](1)其中v是反应速度，Vm是最大反应速度，A是底物浓度，ka是Michaelis常数，I是抑制剂浓度。
对于进程曲线显示出是依据抑制时间而向下的曲线特征的化合物，根据方程(2)分析得出的单个数据计算出kobs[AMC]=vsst+(v0-vss)[I-exp(-kobst)]kobs(2)其中[AMC]是随t时间形成的产物浓度，v0是初始反应速度，vss是最终稳态速率。然后分析kobs值(抑制剂浓度线性函数项)以产生描述依据时间的抑制的表观二级速率常数(kobs/抑制剂浓度或kobs/[I])。该动力学处理的完整讨论已被详尽说明(Morrison等，Adv.Enzymol.Relat.Areas Mol,Biol.,1988,61,201)。
下表Ⅰ中列出根据以上所述的方法所收集的本发明化合物的示例抑制数据。
表Ⅰ化合物 Ki(nM)2-[N-(N-苄氧基羰基甘氨酰基)]-2’-[N’-(N-苄氧基羰基- 9.5L-亮氨酰基)]碳酰肼；(3RS)-1-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰基)-3-[N-(4-苯氧基 15苯甲酰基)氨基]吡咯烷-4-酮；(1S)-N-[2-[1-(N-苄氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-55基羰基]-N’-[N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基)]酰肼；1-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰氨基)-3-(2-苄氧基苯磺酰 54基)氨基-丙-2-酮；N-[2-(2-苄氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(3-吡啶基41甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；(1S)-N-[2-[1-(N-苄氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-75基羰基]-N’-[N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；1-[N-(4-吗啉代氨基甲酰基)-L-亮氨酰氨基]-3-(4-苯氧 130基苯磺酰基)氨基-丙-2-酮；N-[2-(1-萘基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基18羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；N-[2-(2-苄氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-(N-吡嗪羰基-28L-亮氨酰基)酰肼；N-[N-(1-苄基-5-甲基咪唑-4-基羰基)-L-亮氨酰基]-N’-35[2-(1-萘基)噻唑-4-基羰基]酰肼；(3RS)-3-[N-(3-苄氧基苯甲酰基)-L-亮氨酰氨基]四氢呋 230喃-4-酮；N-[2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]- 38N’-[N-(5-甲基-2-苯基噁唑-4-基羰基)-L-亮氨基]酰肼；1-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]-3-[N-(2-噻吩羰基)-L-亮 94氨酰氨基]丙-2-酮；(3S)-3-[N-(苯并噻唑-6-基羰基)-L-亮氨酰氨基]-1-[3-(2- 81吡啶基)苯基乙酰氨基]丁-2-酮；N-[2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]- 550N’-[N-(7-甲氧基苯并呋喃-2-基羰基)-L-b-环丙基丙氨酰基]酰肼；1-[N-(苯并噁唑-5-基羰基)-L-亮氨酰氨基]-3-[3-(2-吡啶 47基)苯基乙酰氨基]丙-2-酮；1-[N-[4-[2-(N,N-二甲氨基)乙氧基]苯甲酰基]-L-亮氨酰77氨基]-3-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丙-2-酮；和N-[2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]- 22N’-[N-[5-[2-(N,N-二甲氨基)乙氧基]苯并呋喃-2-基羰基]-L-b-环丙基丙氨酰基]酰肼。
表Ⅰ中数据表明本发明化合物是恶性疟原虫半胱氨酸蛋白酶的有效抑制剂，因此，如果根据本发明方法给予该化合物，可以有效治疗动物(尤其哺乳动物，特别人)的疟疾和其它以上所提到的寄生虫病。
实施例在下列合成实施例中，除另有说明外，所有的原料都从市售获得。未经详细描述，确信本领域技术人员能够应用以上的说明最大程度的利用本发明。这些实施例仅供说明本发明之用，并不限定本快速层析采用硅胶60(Merck Art 9385)进行。1H NMR(300MHz)光谱在CDCl3中测定，采用Varian 300仪器，用Varian UNITYplus300操作软件进行测定。化学位移是以四甲基硅烷为内标记录在每百万分之一(ppm)低场的部分，偶合常数用赫兹表示。采用以下缩写表示自旋多重性br=宽峰，s=单峰，d=双重峰，t=三重峰，q=四重峰，m=多重峰，cm=复杂多重峰。红外(IR)光谱用Perkin-Elmer 1600系列FTIR光谱仪测定，以波数(cm-1)己录。
实施例1制备2-[N-(N-苄氧基羰基甘氨酰基)]-2’[N’-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼a)N-苄氧基羰基-L-亮氨酸甲酯向搅拌的L-亮氨酸甲酯盐酸盐(2.0g,11.0mmol)的1,4-二-氧六环(20mL)溶液中加入Na2CO3(12.1ml,2M水溶液)，接着加入氯甲酸苄酯(1.96g,11.5mmol)。室温下将该混合液搅拌4小时，然后在乙酸乙酯和水之间分配。有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩得到无色油状的标题化合物(3.1g,100％)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)d7.34(m,5H),5.27(d,1H),5.12(s,2H),4.41(s,2H),3.75(s,3H),1.65(m,3H),0.96(m,6H)。b) N-苄氧基羰基-L-亮氨酸基酰肼向搅拌的实施例1(a)化合物(3.1g,11.0mmol)的15mL甲醇溶液中加入酰肼水合物(5.9g,118mmol)。室温下将该溶液搅拌16小时，然后浓缩得到灰白色固体的标题化合物(3.1g,100％)。MS(ESI):280.2(M+H)+。c)(1S)-1-苄氧基羰基氨基-3-甲基-1-(1,3,4-噁二唑-2-酮-5-基)丁烷向搅拌的实施例1(b)化合物(3.0g,10.8mmol)的甲苯(50mL)溶液中加入光气(56mL,1.93M的甲苯液)。将该溶液加热回流4小时，然后浓缩得到灰黄色泡沫状的标题化合物(3.15g,96％)。MS(ESI):306.1(M+H)+。d)2-[N-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼按照实施例1(b)的方法，但用(1S)-1-苄氧基羰基氨基-3-甲基-1-(1,3,4-噁二唑-2-酮-5-基)丁烷代替N-苄氧基羰基-L-亮氨酸甲酯，制备标题化合物，其为白色泡沫状物(0.097g,60％)。MS(ESI):338.2(M+H)+。e)2-[N-(N-苄氧基羰基甘氨酰基)]-2’-[N’-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼向实施例1(d)化合物(0.2g,0.593mmol)、N-苄氧基羰基甘氨酸(0.137g,0.653mmol)和1-羟基苯并三唑(0.016g,0.119mmol)的DMF(6mL)溶液中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.125g,0.653mmol)。室温下搅拌16小时后，将该溶液用乙酸乙酯稀释，顺次用饱和碳酸氢钠水溶液、水和盐水洗涤。将有机层干燥(MgSO4)，过滤，浓缩。残留物经柱层析(硅胶；二氯甲烷/甲醇)得到白色固体的标题化合物(0.204g,65％)。MS(ESI):529.2(M+H+)。
实施例2制备(3RS)-1-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰基)-3-[N-(4-苯氧基苯甲酰基)氨基]吡咯烷-4-酮a)1-叔丁氧基羰基-3-吡咯啉向室温下的3-吡咯啉(5.0g,72.35mmol)的CH2Cl2(25mL)溶液中加入碳酸氢二叔丁基酯(16.58g,75.97mmol)的CH2Cl2(50mL)溶液。将该反应搅拌1小时，真空浓缩得到标题化合物，不经纯化直接用于下一步骤中。1H NMR(200MHz,CD3OD)d 5.12(m,2H),3.92(m,4H),1.38(s,9H)。b)1-叔丁氧基羰基-3,4-环氧吡咯烷向实施例2(a)化合物(5.0g,29.5mmol)的CH2Cl2(200mL)溶液中加入NaHCO3(9.03g,118.2mmol)和间氯过苯甲酸(15.29g,88.6mmol)。将该反应室温下搅拌过夜，然后浓缩，用石油醚过滤。将石油醚层用饱和K2CO3(2x)、水和饱和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩得到澄清无色油状物。该油状物经柱层析(4∶1己烷∶乙酸乙酯)得到标题化合物，直接用于下一步骤。1H NMR(200MHz,CDCl3)3.85-3.20(m,6H),1.43(s,9H)。c)反-3-叠氮基-1-叔丁氧基羰基-4-羟基吡咯烷向搅拌的实施例2(b)化合物(2.03g,10.96mmol)的甲烷∶水(18mL的8∶1溶液)溶液中加入氯化铵(2.5g,10.96mmol)和叠氮钠(3.56g,54.8mmol)。在60℃下，将该反应加热过夜，然后用石油醚稀释，用pH4缓冲液、饱和碳酸氢钠和饱和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩得到2.12g标题化合物，不经纯化直接用于下一步骤。1H NMR(400MHz,CDCl3)4.21(brs,1H),3.92(brs,1H),3.71-3.30(m,4H),1.43(s,9H)。d)反-3-氨基-1-叔丁氧基羰基-4-羟基吡咯烷向实施例2(c)化合物(210mg,0.92mmol)的CH3OH(10mL)溶液中加入10％的Pd-C。将该混合物在氢气下搅拌直至TLC分析表明原料完全消失。将该反应通过硅藻土垫用CH2Cl2过滤，浓缩得到202mg标题化合物，将其直接用于下一步骤。e)反-(3RS,4RS)-1-叔丁氧基羰基-4-羟基-3-[N-(4-苯氧基苯甲酰基)氨基]吡咯烷按照实施例1(e)的方法，但用反-3-氨基-1-叔丁氧基羰基-4-羟基吡咯烷代替2-[N-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼并用4-苯氧基苯甲酸代替N-苄氧基羰基甘氨酸，制备标题化合物并进行下一步反应。f)反-(3RS,4RS)-4-羟基-3-[N-(4-苯氧基苯甲酰基)氨基]吡咯烷盐酸盐向实施例2(e)化合物(228mg,0.57mmol)的干燥EtOAc(5.0mL)溶液中通入HCl气体约5分钟。搅拌该反应直至TLC分析表明完全消耗掉原料。然后真空浓缩该反应得到168mg(88％)标题化合物，将其用于下一步骤。g)反-(3RS,4RS)-1-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰基)-4-羟基-3-[N-(4-苯氧基苯甲酰基)氨基]吡咯烷按照实施例1(e)的方法，但用反-(3RS,4RS)-4-羟基-3-[N-(4-苯氧基苯甲酰基)氨基]吡咯烷盐酸盐代替2-[N-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼并用N-苄氧基羰基-L-亮氨酸代替N-苄氧基羰基甘氨酸，制备标题化合物。MS(ESI):546.3(M+H)+,568.2(M+Na)+。h)(3RS)-1-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰基)-3-[N-(4-苯氧基苯甲酰基)氨基]吡咯烷-4-酮向0℃下的实施例2(g)化合物(150mg)的丙酮(5mL)溶液中滴加Jones试剂直至溶液保持棕色。将该反应温热至室温，搅拌大约18小时，然后用异丙醇猝灭该反应，用EtOAc稀释，依次用饱和K2CO3、水和饱和盐水洗涤。将有机层干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。残留物经柱层析(2∶1 EtOAc∶己烷)得到49mg标题化合物。MS(ESI):544.2(M+H)+。
实施例3制备(1S)-N-[2-[1-(N-苄氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基)]酰肼a)N-苄氧基羰基-L-亮氨酰胺向冷却至-40℃下搅拌的N-苄氧基羰基-L-亮氨酸(4.6g,17.3mmol)的THF溶液中加入N-甲基吗啉(3.68g,36.4mmol；4.0mL)和氯甲酸异丁基酯(2.37g,17.3mmol；2.25mL)。搅拌15分钟后，向该溶液中通入氨5分钟。将该溶液温热至室温，蒸发，将残留物溶于乙酸乙酯中，用0.1N HCl洗涤，再用饱和盐水洗涤，然后干燥(MgSO4)，过滤，蒸发至干得到白色固体的标题化合物(4.58g,100％)。b)N-苄氧基羰基-L-亮氨酸硫代酰胺室温下，将实施例化合物3(a)(4.58g,17.3mmol)和Lawesson氏试剂(4.21g,10.4mmol)的THF溶液搅拌16小时。将该溶液浓缩，残留物经在230-400目硅胶上快速层析，用1∶3 EtOAc/己烷洗脱得到浅黄色固体的标题化合物(3.74g,77％)。c)(1S)-1-苄氧基羰基氨基-1-(4-乙氧羰基噻唑-2-基)-3-甲基丁烷将实施例化合物3(b)(2.20g,7.83mmol)溶于丙酮(35mL)中，冷却至-10℃，加入溴代丙酮酸乙酯(1.68g,8.62mmol,1.08mL)。搅拌1小时后，将该溶液倒入二氯甲烷/水中，然后倒入饱和NaHCO3水溶液中。水层用二氯甲烷萃取，再将合并的有机层用饱和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩。将残留物溶于二氯甲烷中，冷却至-20℃，加入吡啶(1.36g,17.2mmol,1.39mL)和三氟乙酸酐(1.81g,8.62mmol,1.22mL)。搅拌1小时后，将该溶液用饱和NaHCO3水溶液和饱和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩。残留物经在90g的230-400目硅胶上快速层析，用1∶3 EtOAc/己烷洗脱得到浅黄色油状的标题化合物(2.36g,80％)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)d 8.08(s,1H),7.38(m,5H),5.42(s,3H),5.23-5.07(m,3H),4.42(q,2H),2.01-1.62(m,3H),1.41(t,3H),0.99(d,6H)。d)(1S)-1-苄氧基羰基氨基-1-(4-肼基羰基噻唑-2-基)-3-甲基丁烷将实施例化合物3(c)(2.16g,5.73mmol)溶于乙醇(60mL)中，加入水合肼(2.87g,57.3mmol,2.8mL)，在75℃下，将该溶液搅拌1小时。将该溶液冷却，蒸发至干得到浅黄色泡沫状的标题化合物，(2.01g,97％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)d 8.35(bs,1H),8.03(s,1H),7.37(m,5H),5.29(d,1H),5.14-5.09(m,3H),4.07(bs,2H),1.92-1.82(m,1H),1.79-1.66(m,2H),1.00(d,6H)。e)α-[-异氰酸基(isocyanato)-L-亮氨酸甲酯将L-亮氨酸甲酯盐酸盐(25g,0.14mol)溶于二氯甲烷(450mL)中，冷却至0℃，加入吡啶(43.5g,0.55mol,44.5mL)，再慢慢加入1.93M光气的甲苯溶液(0.18mol,92.7mL)。在0℃下搅拌2小时后,将该混合液倒入0.5N HCl(1400mL)和冰(900mL)中。将有机层用0.5NHCl(1400mL)和冰(900mL)洗涤。水层用二氯甲烷(450mL)提取，将合并的有机层用饱和盐水(1400mL)和冰(900mL)洗涤，随后干燥(MgSO4)，过滤，浓缩。将残留物蒸馏(56-58℃；0.78mmHg)得到无色液体的标题化合物(20.4g,86％)。1H NMR(250MHz,CDCl3)d 4.04(dd,1H),3.82(s,3H),1.92-1.72(m,1H),1.69-1.62(m,2H),0.96(d,3H),0.94(d,3H)。f)N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸甲酯将实施例化合物3(e)(5.5g,32.3mmol)和2-吡啶基甲醇(3.5g,32.3mmol)的甲苯(35mL)溶液加热回流24小时。将该溶液浓缩，残留物经在60g的230-400目硅胶上快速层析，用己烷中30％的乙酸乙酯洗脱得到浅黄色油状的标题化合物(8.06g,89％)。MS(ESI):281.2(M+H)+。g)N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸向搅拌的实施例化合物3(f)(745mg,2.6mmol)的THF(3mL)溶液中加入3mL的水，然后加入LiOH·H2O(120mg,2.86mmol)。将该混合物搅拌30分钟，然后浓缩。将残留物再溶于水(4mL)中，加入3N HCl(0.95mL)。将该溶液冷冻干燥得到白色固体(680mg,94％)。MS(ESI):267.2(M+H)+。h)(1S)-N-[2-[1-(N-苄氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基)]酰肼按照实施例1(e)的方法，但用(1S)-1-苄氧基羰基氨基-1-(4-肼基羰基噻唑-2-基)-3-甲基丁烷代替2-[N-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼并用N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-苄氧基羰基甘氨酸，制备白色固体的标题化合物。(125mg,65％),MS(ESI):611.2(M+H)+。
实施例4制备1-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰氨基)-3-(2-苄氧基苯磺酰基)氨基-丙-2-酮a)1-氨基-3-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰氨基)丙-2-醇将1,3-二氨基-丙-2-醇(6.75g,75mmol)溶于DMF(100mL)中。然后加入1-羟基苯并三唑水合物(11.0g,81.5mmol)、N-苄氧基羰基-L-亮氨酸(20g,75.5mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺甲碘化物(15.5g,81.2mmol)，将该反应混合物搅拌过夜。然后真空除去DMF，将该反应混合物用乙醚(150mL)和MeOH(90mL)稀释。然后加入1M HCl乙醚液(1M,100mL)，形成胶浆，再用乙醚(200mL)提取。真空浓缩合并的有机相，然后层析(硅胶；1∶10∶89三氟乙酸∶MeOH∶二氯甲烷)得到标题化合物。MS(ESI):338.3(M+H+)。b)2-苄氧基苯磺酰氯将碘的小结晶加入到镁粉(0.63g,26.25mmol)和2-苄氧基溴苯(Friesen,Richard W.；Sturino,Claudio F.；J.Org.Chem.55；9；1990；2572-2574,6.0g,22.8mmol)的THF(20mL)淤浆中，然后加热回流1小时。将该反应冷却至0℃，加入SO2Cl2(3.5ml,43.6mmol)，室温下将该反应搅拌2小时。将该反应用冰水猝灭，用乙醚提取。将合并的有机层用饱和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，浓缩得到固体，不经纯化直接用于下一步反应。1H NMR(CDCl3)d 8.0-6.8(9H,m),5.35(3H,s)。c)1-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰氨基)-3-(2-苄氧基苯磺酰基)氨基-丙-2-醇将实施例化合物4(a)(0.4g,1mmol)溶于DMF(4mL)中，加入N-甲基吗啉(0.3g,0.35mL,3mmol)。然后加入实施例化合物4(b)(0.28g,1mmol)，将该反应搅拌4小时。真空浓缩该反应混合物，然后经在硅胶上层析得到标题化合物。MS(ESI):584.2(M+H)+。d)1-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰氨基)-3-(2-苄氧基苯磺酰基)氨基-丙-2-酮按照实施例2(h)的方法，但用1-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰氨基)-3-(2-苄氧基苯磺酰基)氨基-丙-2-醇代替反-(3RS,4RS)-1-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰基)-4-羟基-3-[N-(4-苯氧基苯甲酰基)氨基]吡咯烷，制备白色固体的标题化合物(35mg,70％)。MS(ESI):582.5(M+H)+。
实施例5制备N-[2-(2-苄氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼a)2-氨基噻唑-4-羧酸乙酯氢溴酸盐向搅拌的硫脲(6.0g,78.8mmol)的乙醇(80mL)混悬液中加入溴代丙酮酸乙酯(15.4g,78.8mmol)。在45℃，将得到的溶液加热23小时。将该溶液冷却至0℃24小时，然后过滤收集晶体，用冷乙醇洗涤得到标题化合物(15.8g,79％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)d 7.70(s,1H),4.41(q,2H),1.38(t,3H)。b)2-溴噻唑-4-羧酸乙酯向冷却至0℃的、搅拌的实施例化合物5(a)(12.15g,4.8mmol)的16％HBr水溶液(150mL)混悬液中滴加入亚硝酸钠(3.44g,49.8mmol)的水溶液(6mL)。搅拌35分钟后，加入溴化亚铜(Ⅰ)(7.83g,54.6mmol)和16％HBr水溶液(60mL)，在70℃，将该混合液加热1小时。将该混合液过滤，滤液用NaCl饱和，然后用乙酸乙酯提取(2×170mL)。将合并的提取液干燥(MgSO4)，过滤，蒸发至干。将该残留物与第一次过滤收集的固体合并，在乙醇(500mL)中加热回流5分钟，然后过滤。向该滤液中加入1.5mL的48％HBr水溶液，再将该溶液加热回流16小时，然后浓缩。将该残留物在饱和NaHCO3水溶液和乙酸乙酯之间分配。将有机层用饱和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，活性炭脱色，过滤，浓缩得到浅黄色固体的标题化合物(7.46g,75％)。MS(ESI):236.0(M+H)+。c)2-苄氧基苯基硼酸向-78℃的、搅拌的2-苄氧基溴苯化合物(15.2g,57.8mmol)的THF(100mL)溶液中滴加入正丁基锂(23.1mL,2.5M的已烷液，57.8mmol)。在-78℃下，将该混合液搅拌25分钟，通过套管加入到-78℃下搅拌的硼酸三异丙基酯(54.4g,289mmol)的THF(100mL)溶液中。温热至室温后，搅拌3小时，将该混合液倒入3N HCl(100mL)中，用乙酸乙酯(3×200mL)提取。合并有机层，顺次用水和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩。该残留物经柱层析(硅胶，乙酸乙酯/己烷)纯化得到浅黄色固体的标题化合物(6.9g,30.3mmol)。1H NMR(400MHz,CDCl3)d 7.90(d,1H),7.42(m,6H),7.07(t,1H),7.02(d,1H),6.05(s,2H),5.16(s,2H)。d)2-(2-苄氧基苯基)噻唑-4-甲酸乙酯向搅拌的实施例化合物5(b)(4.0g,16.9mmol)、实施例化合物5(d)(4.29g,18.8mmol)、四(三苯膦)钯(0)(0.65g,0.57mmol)的二甲氧基乙烷(60mL)溶液中加入氟化铯(8.58g,56.5mmol),在85℃下，将该混合液加热16小时。加入四(三苯膦)钯(O)(0.65g,0.57mmol)，在85℃下，继续加热5小时。将该混合液用水(60mL)稀释，用乙酸乙酯(2×120mL)提取。将合并的提取液用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩。该残留物经在180g的230-400目硅胶上快速层析，用15％乙酸乙酯的己烷液洗脱纯化得到白色固体的标题化合物(3.22g,56％)。MS(ESI):340.3(M+H)+。e)2-(2-苄氧基苯基)噻唑-4-羰基酰肼按照实施例3(d)的方法，但用2-(2-苄氧基苯基)噻唑-4-羧酸乙酯代替(1S)-1-苄氧基羰基氨基-1-(4-乙氧羰基噻唑-2-基)-3-甲基丁烷，制备白色固体的标题化合物。MS(ESI):326.2(M+H)+。f)N-[2-(2-苄氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼按照实施例3(e)-3(h)的方法，但用3-吡啶基甲醇代替步骤(f)中的2-吡啶基甲醇，用N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸代替N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸以及用2-(2-苄氧基苯基)噻唑-4-基羰基酰肼代替步骤(h)中的(1S)-1-苄氧基羰基氨基-1-(4-肼基羰基噻唑-2-基)-3-甲基丁烷，制备白色固体的标题化合物(93.8mg,53％)。MS(ESI):574.3(M+H)+。
实施例6制备(1S)-N-[2-[1-(N-苄氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼按照实施例3(a)-3(h)的方法，但用3-吡啶基甲醇代替2-吡啶基甲醇(f)，制备白色固体的标题化合物(63mg,42％)。MS(ESI):611.5(M+H)+。
实施例7制备1-[N-(4-吗啉代氨基甲酰基)-L-亮氨酰氨基]-3-(4-苯氧基苯磺酰基)氨基-丙-2-酮a)1-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰氨基)-3-(4-苯氧基苯磺酰基)氨基-丙-2-醇按照实施例4(a)-4(c)的方法，但用4-苯氧基溴苯代替步骤(a)中的2-苄氧基溴苯，制备标题化合物。MS(ESI):570.1(M+H+)。b)1-(L-亮氨酰氨基)-3-(4-苯氧基苯磺酰基)氨基丙-2-醇在通入氢气下，将实施例化合物7(a)(5.0g,8.79mmol)和10％Pd/C(1.03g)的EtOH(140ml)溶液搅拌4小时。通过Celite过滤该反应混合物，浓缩，不经进一步纯化直接用于下一步反应。MS(ESI):436(M+H)+。c)1-[N-(4-吗啉代氨基甲酰基)-L-亮氨酰氨基]-3-(4-苯氧基苯磺酰基)氨基-丙-2-醇将实施例化合物7(b)(0.24g,0.5mmol)、N-甲基吗啉(0.15g,0.16mL,1.5mmol)和吗啉-4-甲酰氯(J.Chem.Soc.1947；307,313；0.076g,0.5mmol)的DMF(3ml)反应混合物搅拌过夜，然后浓缩。层析(硅胶，4∶1 EtOAc∶已烷)得到标题化合物。MS(ESI):549.4(M+H)+。d)1-[N-(4-吗啉代氨基甲酰基)-L-亮氨酰氨基]-3-(4-苯氧基苯磺酰基)氨基-丙-2-酮按照实施例2(h)的方法，但用1-[N-(4-吗啉代氨基甲酰基)-L-亮氨酰氨基]-3-(4-苯氧基苯磺酰基)氨基-丙-2-醇代替反-(3RS,4RS)-1-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰基)-4-羟基-3-[N-(4-苯氧基苯甲酰基)氨基]吡咯烷，制备标题化合物。MS(ESI):547.3(M+H)+。
实施例8制备N-[2-(1-萘基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼按照实施例5(a)-5(b)和5(d)-5(f)的方法，但用1-萘基硼酸代替步骤(d)中的2-苄氧基苯基硼酸并且用4-吡啶基甲醇代替步骤(f)中的3-吡啶基甲醇，制备白色固体的标题化合物(0.094g,58％)。MS(ESI):518.4(M+H)+实施例9制备N-[2-(2-苄氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-(N-吡嗪羰基-L-亮氨酰基)酰肼a)N-[2-(2-苄氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-(N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酰基)酰肼按照实施例5(a)-5(f)的方法，但用N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酸代替步骤(f)中的N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸，制备白色固体的标题化合物(1.015g,94％)。MS(ESI):539.1(M+H)+。b)N-[2-(2-苄氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-(L-亮氨酰基)酰肼向搅拌的实施例化合物9(a)(1.012g,1.88mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中加三氟乙酸(2mL)。室温下搅拌2小时后，将该溶液浓缩，残留物溶于乙酸乙酯中。将该溶液顺次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和盐水洗涤。将有机层干燥(MgSO4)，过滤，浓缩得到白色泡沫状的标题化合物(0.766g,93％)。MS(ESI):439.3(M+H)+。c)N-[2-(2-苄氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-(N-吡嗪羰基-L-亮氨酰基)酰肼按照实施例1(e)的方法，但用N-[2-(2-苄氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-(L-亮氨酰基)酰肼代替2-[N-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼并用吡嗪羧酸代替N-苄氧基羰基甘氨酸，制备白色固体的标题化合物(0.146g,94％)。MS(ESI):545.4(M+H)+。
实施例10制备N-[N-(1-苄基-5-甲基咪唑-4-基羰基)-L-亮氨酰基]-N’-[2-(1-萘基)噻唑-4-基羰基]酰肼a)N-(N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酰基)-N’-[2-(1-萘基)噻唑-4-基羰基]酰肼按照实施例5(a)-5(b)和5(d)-5(f)的方法，但用1-萘基硼酸代替步骤(d)中的2-苄氧基苯基硼酸并且用N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酸代替步骤(f)中的N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酸，制备白色固体的标题化合物(2.2g,96％)。MS(ESI):483.2(M+H)+。b)N-[N-(1-苄基-5-甲基咪唑-4-基羰基)-L-亮氨酰基]-N’-[2-(1-萘基)噻唑-4-基羰基]酰肼按照实施例9(b)-9(c)的方法，但用N-(N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酰基)-N’-[2-(1-萘基)噻唑-4-基羰基]酰肼代替步骤(b)中的N-[2-(2-苄氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-(N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酰基)酰肼并且用1-苄基-5-甲基咪唑-4-羧酸代替步骤(c)中的吡嗪羧酸，制备白色固体的标题化合物(0.115g,75％)。MS(ESI):581.1(M+H)+。
实施例11制备(3RS)-3-[N-(3-苄氧基苯甲酰基)-L-亮氨酰氨基]四氢呋喃-4-酮a)反-3-叠氮基-4-羟基四氢呋喃将3,4-环氧四氢呋喃(9g,105mmol)加入到搅拌的叠氮钠(27g,415mmol)和氯化铵(9g,159mmol)的甲醇水溶液(95％,200mL)中。在75℃下，将该反应加热并搅拌20小时。将该反应冷却，过滤，减压蒸发。将残留物用水稀释，用乙酸乙酯提取，干燥(MgSO4)，过滤，减压蒸发得到无色油状物的标题化合物(10g,74％)。1H NMR d(CDCl3)4.32(m,1H),4.09(dd,1H,J=4.8,9.9Hz),3.99(dd,1H,J=4.3,10.1Hz),3.94(m,1H),3.81(dd,1H,J=2.1,9.9Hz),3.73(dd,1H,J=1.8,10.1Hz),2.72(d,1H,J=4.6Hz)。b)反-3-氨基-4-羟基四氢呋喃盐酸盐通氢气(35psi)下，将实施例化合物11(a)(10g,77mmol)和10％Pd-C(1g)的乙醇(150mL)混合物搅拌12小时。将该混合物过滤，用100ml的乙醇化HCl处理，经减压蒸发后得到标题化合物，其为棕色固体(10.5g,97％收率)。m.p.132℃。1H NMR d(d6DMSO)8.37(s,3H),4.13(m,1H),3.84(dd,1H,J=4.9,14.3),3.76(dd,1H,J=5.5,10.0Hz),3.58(dd,1H,J=2.7,10.0Hz),3.34(m,3H)。c)反-(3RS,4RS)-3-[N-(叔丁氧基羰基)-L-亮氨酰氨基]-4-羟基四氢呋喃将三甲基乙酰氯(3.5ml,29mmol)加入到搅拌的N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酸(7.3g,31mmol)和N,N-二异丙基乙胺(9ml,52mmol)的二氯甲烷(200mL)溶液中。1小时后，加入实施例化合物11(b)(4g,28mmol)，将该混合物搅拌过夜。将该反应混合物倒入水中，用二氯甲烷提取。将合并的有机层用0.5N HCl、饱和碳酸氢钠和饱和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤。减压蒸发得到标题化合物，其为黄色泡沫状物(5g,44％)。1H NMR d(CDCl3)8.08(d,0.5H,J=4.8Hz),7.89(d,0.5H,J=7.4Hz),6.20(d,0.5H,J=8.3Hz),6.09(d,0.5H,J=8.7Hz),4.81(d,1H,J=16.0Hz),4.40(m,2H),4.20(m,2H),3.77(m,2H),1.60(m,3H),1.50(s,9H),0.92(m,6H)。d)反-(3RS,4RS)-3-(L-亮氨酰氨基)-4-羟基四氢呋喃三氟乙酸盐按照实施例9(b)的方法，但用反-(3RS)-3-[N-(叔丁氧基羰基)-L-亮氨酰氨基]-4-羟基四氢呋喃代替N-[2-(2-苄氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-(N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酰基)酰肼，制备标题化合物，其为白色浆状物(2.6g,100％)。1H NMR d(MeOD)4.18(m,2H),4.08(m,2H),3.97(m,2H),3.86(表观t,2H,J=7.1Hz),3.69(dd,2H,J=1.6,7.4Hz),1.68(m,3H),0.99(d,6H,J=2.1Hz)。e)3-苄氧基苯甲酸甲酯向NaH(0.395g,9.87mmol,60％矿油中)的DMF(20mL)混悬液加入到3-羟基苯甲酸甲酯(1.0g,6.58mmol)。室温下搅拌15分钟后，加入苄基溴(1.1g,6.58mmol)。室温下搅拌3小时后，将该溶液在乙酸乙酯和水之间分配。将有机层用水(2×75mL)、饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，随后干燥(MgSO4)，过滤，浓缩得到标题化合物，其为灰白色固体(1.013g,4.2mmol)。1H NMR(400MHz,CDCl3)d 7.67(m,2H),7.48-7.34(m,6H),7.19(m,1H),5.12(s,2H),3.95(s,3H)。f)3-苄氧基苯甲酸向实施例化合物11(e)(0.400g,1.65mmol)的THF(2mL)和水(2mL)溶液中加入氢氧化锂单水合物(0.076g,1.82mmol)。回流下搅拌5小时后，将该溶液在乙酸乙酯和3N HCl之间分配。将有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩得到白色固体(0.355g,1.56mmol)。1H NMR(400MHz,CD3OD)d 7.58(m,2H),7.36-7.24(m,6H),7.10(m,1H),5.04(s,2H)。g)反-(3RS,4RS)-3-[N-(3-苄氧基苯甲酰基)-L-亮氨酰氨基]-4-羟基四氢呋喃将实施例化合物11(f)(251mg,1.0mmol)加入到搅拌的实施例化合物11(d)(329mg,1.0mmol)、氰基膦酸二乙酯(0.16ml,1.0mmol)和三乙胺(0.3ml,2.1mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中。将该反应搅拌1小时，然后用乙醚稀释。将有机层用1N盐酸、碳酸氢钠和饱和盐水洗涤，随后干燥(MgSO4)，过滤。蒸发溶剂得到无色油状的标题化合物(302mg,71％)。1H NMR d(CDCl3)8.17(d,0.5H,J=5.1Hz),8.03(d,0.5H,J=7.5Hz),7.87(d,0.5H,J=7.8Hz),7.56(d,0.5H,J=7.5Hz),7.46-6.80(m,9H),5.08(表观d,2H,J=10.1Hz),5.07-4.70(m,1H),4.45(brs,1H),4.17(brs,1H),4.12-3.80(m,4H),3.70-3.50(m,4H),1.81-1.62(m,3H),0.93-0.88(m,6H)。MS(ESI):425(M+H)+。h)(3RS)-3-[N-(3-苄氧基苯甲酰基)-L-亮氨酰氨基]四氢呋喃-4-酮将Dress-Martin全碘烷(periodinane)(500mg,1.2mmol)加入到搅拌的实施例化合物11(g)(280mg,0.7mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中。1小时后，加入乙醚，接着加入硫代硫酸钠(570mg,3.6mmol)。再经15分钟后，将该反应用饱和碳酸氢钠和饱和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤。蒸发溶剂得到白色泡沫状的标题化合物(270mg,93％)。1H NMR d(CDCl3)7.92(d,0.5H,J=6.7Hz),7.83(d,0.5H,J=6.7Hz),7.48-7.04(m,10H),5.04(表观d,2H,J=4.2Hz),4.99-4.81(m,1H),4.48-3.68(m,5H),1.81-1.62(m,3H),0.93-0.84(m,6H)。MS(ESI):423(M+H)+。
实施例12制备N-[2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基装基]-N’-[N-(5-甲基-2-苯基噁唑-4-基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼a)N-环丙基异丁基胺将环丙胺(12.0mL,173mmol)和异丁醛(15.8mL,173mmol)溶于二氯甲烷(50mL)中，室温下搅拌1小时。随后将该溶液冷却至0℃，将三乙酰氧基硼氢化钠(73g,346mmol)与400mL二氯甲烷一起加入。将该反应混合液搅拌4小时，然后用碳酸氢钠(5％水溶液)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，浓缩得到无色液体的标题化合物(14.0g,71％)。MS(ESI):113.7(M+H)+。b)N-环丙基-N-(2-甲基丙基)-N’-苯甲酰硫脲将实施例化合物12(a)(14.0g,123mmol)溶于氯仿(100mL)中，加入苯甲酰基异硫氰酸酯(20g,123mmol,18mL)。室温下搅拌45分钟后，浓缩该溶液得到黄色固体的标题化合物(29g,85％)。MS(ESI):257.1(M+H)+。c)N-环丙基-N-(2-甲基丙基)硫脲将实施例化合物12(b)(29g,105mmol)溶于甲醇(100mL)和水(100mL)中，加入碳酸钾(43g,315mmol)，将该溶液加热回流过夜。浓缩该反应混合液，再溶于乙酸乙酯中，用碳酸氢钠、水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，浓缩得到黄色固体的标题化合物(13.42g,75％)。MS(ESI):172.9(M+H)+。d)2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-羧酸乙酯加热下，将实施例化合物12(c)(13.42g,77.7mmol)溶于乙醇(30mL)中。将该溶液冷却至室温，加入溴代丙酮酸乙酯(9.7mL,77.7mmol)。将该反应混合液加热回流30分钟，然后浓缩将残留物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠水溶液之间分配。将水相用乙酸乙酯提取，将合并的有机相用饱和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩得到黄色油状物。将该粗产物通过硅胶，用乙酸乙酯/己烷(1∶3)洗脱标题化合物，其为黄色油状物(9.9g,48％)。MS(ESI):269.4(M+H)+。e)2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基酰肼按照实施例3(d)的方法，但用2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-羧酸乙酯代替(1S)-1-苄氧基羰基氨基-1-(4-乙氧羰基噻唑-2-基)-3-甲基丁烷，制备白色固体的标题化合物(7.5g,80％)。MS(ESI):255.2(M+H)+。f)N’-(N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酰基)-N’-[2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]酰肼按照实施例1(e)的方法，但用2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基酰肼代替2-[N-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼并用N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酸代替N-苄氧基羰基甘氨酸，制备标题化合物，其为白色固体(7.5g,(100％))。MS(ESI):468.3(M+H)+。g)N-[2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(5-甲基-2-苯基噁唑-4-基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼按照实施例9(b)-9(c)的方法，但用N’-(N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酰基)-N’-[2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]酰肼代替步骤(b)的N-[2-(2-苄氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-(N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酰基)酰肼并用5-甲基-2-苯基噁唑-4-羧酸代替步骤(c)的吡嗪羧酸，制备标题化合物，其为白色固体(340mg)。MS(ESI):553.4(M+H)+。
实施例13制备1-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]-3-[N-(2-噻吩羰基)-L-亮氨酰氨基]丙-2-酮a)3-(三氟甲基磺酰氧基)苯乙酸甲酯向通氩气的、烘箱干燥的、装有氢化钠(2.54g,60％矿油中的分散液，63.5mmol)的烧瓶中加入无水戊烷(20mL)。将该浆状物搅拌5分钟，放置，除去大部分戊烷，加入无水THF(40mL)。向该悬浮液中加入3-羟基苯乙酸甲酯(9.99g,60.1mmol)的无水THF(20mL)溶液，室温下将该反应搅拌20分钟。然后向该混合物中加入N-苯基三氟甲基磺酰亚胺(22.53g,63.1mmol)的无水THF(40mL)溶液，室温下搅拌该反应液直至TLC分析表明原料完全消耗掉(1.5小时)。加入H2O(10mL)猝灭该反应，浓缩至原体积的一半，然后用CHCl3(200mL)稀释，用H2O洗涤。将水层用新鲜CHCl3(50mL)洗涤，将合并的有机层用10％Na2CO3、水和饱和盐水洗涤，然后干燥(MgSO4)，过滤，浓缩。残留物经柱层析(硅胶，5∶95 EtOAc∶己烷，然后10∶90 EtOAc∶己烷)得到17.47g标题化合物。1H NMR(400MHz,CDCl3)7.42(m,1H), 7.31-7.19(m,3H),3.72(s,3H),3.68(s,2H)。b)3-(2-吡啶基)苯乙酸甲酯向实施例化合物13(a)(6.86g,23.0mmol)的无水二氧六环(100mL)溶液中加入2-吡啶基三丁基锡烷(8.89g,24.1mmol)、LiCl(2.94g,69.3mmol)、2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(一些结晶)和Pd(PPh3)4(632.1mg,0.55mmol)。将该反应用箔纸避光保护并加热回流过夜。将该反应冷却至室温，浓缩。残留物经柱层析(硅胶，1∶3 EtOAc∶己烷，然后1∶2EtOAc∶己烷)得到3.85g标题化合物。MS(ESI):228.1(M+H)+。c)3-(2-吡啶基)苯乙酸向实施例化合物13(b)(3.8g,16.7mmol)的THF(50mL)溶液中加入LiOH·H2O(780.2mg,18.6mmol)的水(10mL)溶液。室温下放置该反应液直至TLC分析表明原料完全消耗掉(2小时)。将该反应混合液浓缩除去THF，然后加入1N HCl中和至pH7，用盐水(50mL)稀释，用CHCl3(100mL)洗涤。通过加入1N NaOH将水层再调节至pH7，用新鲜CHCl3(100mL)洗涤。再将该过程重复一次，将有机层合并，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩得到3.79g标题化合物。MS(ESI):214.3(M+H)+。d)1-[N-(叔丁氧基羰基)-L-亮氨酰氨基]-3[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丙-2-醇将1,3-二氨基丙-2-醇(5.61g,22.5mmol)溶于DMF(36mL)中。然后加入1-羟基苯并三唑水合物(3.34g,24.75mmol)、N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酸(5.61g,22.5mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺甲碘化物(4.73g,24.75mmol)，将该反应混合物搅拌4小时。加入实施例化合物13(c)(1.68g,7.875mmol)，接着加入1-羟基苯并三唑水合物(1.276g,9.45mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺甲碘化物(1.81g,9.45mmol)，再将该反应搅拌12小时。将该反应混合液真空浓缩，然后经硅胶层析得到标题化合物，其为白色固体(1.70g,43％)。MS(ESI):499.3(M+H+)。e)1-L-亮氨酰氨基-3[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丙-2-醇三氟乙酸盐按照实施例9(b)的方法，但用1-[N-(叔丁氧基羰基)-L-亮氨酰氨基]-3[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丙-2-醇代替N-[2-(2-苄氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-(N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酰基)酰肼，制备标题化合物，不用进一步纯化直接用于下一步反应。MS(ESI):399.2(M+H)+。f)1-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]-3-[N-(2-噻吩羰基)-L-亮氨酰氨基]丙-2-醇将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺甲碘化物(0.138g,0.722mmol)加入到实施例化合物13(e)(0.6mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.23g,0.315mL,1.81mmol)、1-羟基苯并三唑水合物(0.097g,0.722mmol)和2-噻吩羧酸(0.077g,0.6mmol)的DMF(10mL)溶液中。将该反应混合液搅拌过夜，然后用饱和盐水/EtOAc洗涤。将合并的有机层干燥(MgSO4)，过滤，浓缩，经硅胶层析得到标题化合物，其为白色泡沫状物(0.15g,49％)。MS(ESI):509.3(M+H+)。g)1-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]-3-[N-(2-噻吩羰基)-L-亮氨酰氨基]丙-2-酮按照实施例11(h)的方法，但用1-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]-3-[N-(2-噻吩羰基)-L-亮氨酰氨基]丙-2-醇代替反-(3RS,4RS)-3-[N-(3-苄氧基苯甲酰基)-L-亮氨酰氨基]-4-羟基四氢呋喃，制备标题化合物，其为白色固体(70mg,64％)。MS(ESI):507.4(M+H)+。
实施例14制备(3S)-3-[N-(苯并噻唑-6-基羰基)-L-亮氨酰氨基]-1-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丁-2-酮a)N-苄氧基羰基-L-丙氨酰基溴甲基酮将氯甲酸异丁酯(2.90g,21.2mmol,2.74mL)滴加到-40℃下的N-苄氧基羰基-L-丙氨酸(4.7g,21.2mmol)和N-甲基吗啉(2.14g,21.2mmol,2.32mL)的THF(40mL)溶液中。将该反应搅拌15分钟，然后过滤，用乙醚洗涤。加入用12g的1-甲基-3-硝基-亚硝基-胍和36ml的40％KOH的乙醚(300mL)制备的重氮甲烷，将该反应置于冰箱中(0℃)过夜。向该粗品反应混合物中滴加30％HBr/AcOH(14mL)，搅拌5分钟。将该溶液用柠檬酸水溶液(2×50mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(3×150mL)、饱和盐水(100mL)顺次洗涤。将合并的有机液干燥(MgSO4)，过滤，真空浓缩得到固体的标题化合物，不经进一步纯化直接用于下一步反应。MS(ESI):360.3(M+H+)。b)N-苄氧基羰基-L-丙氨酰基叠氮基甲基酮将实施例化合物14(a)(1.5g,5mmol)溶于DMF(10mL)中，然后加入叠氮化钠(0.39g,6mmol)和氟化钾(0.58g,7.5mmol),将该反应搅拌过夜。将该反应在EtOAc和水之间分配，然后将合并的有机提取液干燥(MgSO4)，过滤，真空浓缩，再经层析(2-5％ MeOH，二氯甲烷，硅胶)得到标题化合物，其为白色固体(0.5g,38％)。IR(薄膜法)2106.4cm-1。c)(3S)-1-叠氮基-3-苄氧基羰基氨基丁-2-醇将实施例化合物14(b)(0.5g,1.9mmol)溶于MeOH(10mL)中，在10℃下，加入硼氢化钠(0.144g,3.8mmol)，将该反应搅拌15分钟。将该反应用水(10mL)猝灭，再用EtOAc(25mL)提取。将合并的有机提取液干燥(MgSO4)，过滤，浓缩得到标题化合物，不经进一步纯化直接用于下一步反应(0.5g,100％)。d)(3S)-1-氨基-3-苄氧基羰基氨基丁-2-醇将实施例化合物14(c)(0.5g,1.9mmol)溶于MeOH(7.5mL)和三乙胺(0.72g,7.1mmol,1.0mL)，加入1,3-丙二硫醇(1.08g,10mmol,1.07mL)，将该反应混合液搅拌过夜，真空浓缩，然后将该白色固体用己烷洗涤得到标题化合物，不经进一步纯化直接用于下一步反应。MS(ESI):239.3(M+H+)。e)(3S)-3-苄氧基羰基氨基-1-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丁-2-醇将实施例化合物14(d)(0.452g,1.9mmol)和实施例化合物13(c)(0.4g,1.9mmol)溶于DMF(15mL)中，加入1-羟基苯并三唑水合物(0.27g,2mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺甲碘化物(0.38g,2mmol)，将该反应混合物搅拌过夜。将该反应在EtOAc和1N NaOH之间分配，将合并的有机层干燥(MgSO4)，过滤，浓缩得到标题化合物(0.33g,40％)。MS(ESI):434.2(M+H+)。f)(3S)-3-氨基-1-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丁-2-醇按照实施例7(b)的方法，但用(3S)-1-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]-3-苄氧基羰基氨基丁-2-醇代替1-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰氨基)-3-(4-苯氧基苯磺酰基)氨基-丙-2-醇，制备标题化合物，不经进一步纯化直接用于下一步反应。MS(ESI):300.3(M+H)+。g)(3S)-3-叔丁氧基羰基-L-亮氨酰氨基-1-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丁-2-醇将实施例化合物14(f)(0.28g,0.75mmol)溶于DMF(10mL)中。加入HBTU(0.3g,0.8mmol)、N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酸(0.2g,0.8mmol)和N-甲基吗啉(0.34g,3.37mmol,0.37mL)，将该反应混合液搅拌过夜。真空浓缩该反应混合物，然后经硅胶层析得到标题化合物，其为白色固体。MS(ESI):513.2(M+H)+。h)(3S)-3-(L-亮氨酰氨基)-1-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丁-2-醇将实施例化合物14(g)(2.0g,3.9mmol)溶于二氯甲烷(140mL)和4M HCl的二氧六环(85mL)中，室温下搅拌2小时。加入甲苯(100mL)，将该反应混合液真空浓缩得到标题化合物，不经进一步纯化直接用于下一步反应。MS(ESI):413.2(M+H)+。i)(3S)-3-(苯并噻唑-6-基羰基-L-亮氨酰氨基)-1-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丁-2-醇按照实施例14(g)的方法，但用(3S)-3-(L-亮氨酰氨基)-1-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丁-2-醇代替(3S)-3-氨基-1-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丁-2-醇并用苯并噻唑-6-羧酸代替N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酸，制备标题化合物，不经进一步纯化直接用于下一步反应。MS(ESI):574.3(M+H)+。j)(3S)-3-[N-(苯并噻唑-6-基羰基)-L-亮氨酰氨基]-1-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丁-2-酮按照实施例11(h)的方法，但用(3S)-3-(苯并噻唑-6-基羰基-L-亮氨酰氨基)-1-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丁-2-醇代替反-(3RS,4RS)-3-[N-(3-苄氧基苯甲酰基)-L-亮氨酰氨基]-4-羟基四氢呋喃，制备标题化合物，其为白色固体(30.1mg,20％)。MS(ESI):572.3(M+H)+。
实施例15制备N-[2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(7-甲氧基苯并呋喃-2-基羰基)-L-b-环丙基丙氨酰基]酰肼a)(S)-2-(N-叔丁氧基羰基氨基)-4-戊烯酸向0℃、搅拌下的(S)-2-氨基-4-戊烯酸(6.0g,52.2mmol)的1,4-二氧六环(105mL)、水(53mL)和1N NaOH(53mL)溶液中加入碳酸氢二叔丁酯(12.5g,57.4mmol)。在0℃下，将该反应搅拌2小时后，将该混合液浓缩，残留物溶于水(75mL)中。加入一层乙酸乙酯，将水层用0.3N KHSO4酸化至pH3。将水层用乙酸乙酯(2x)提取，将有机层合并，用水(2x)洗涤，随后干燥(MgSO4)，过滤，浓缩得到标题化合物，其为无色油状物(10.6g,95％)。MS(ESI):214.0(M+H+)。b)(S)-2-(N-叔丁氧基羰基氨基)-3-环丙基丙酸甲酯将实施例化合物15(a)(10.6g,49.5mmol)的乙醚(500mL)溶液冷却至0℃。同时，偶尔振摇下，向1-甲基-3-硝基-亚硝基-胍(36g,247mmol)的乙醚(500mL)混悬液中慢慢加入40％NaOH(700mL)。加入NaOH后，将该混合物在0℃下放置20分钟。然后除去水层，振摇下向该酸性溶液中滴加该有机层。当滴加完成后，在0℃下，将该溶液搅拌20分钟。20分钟后，加入乙酸钯(1.0g,4.4mmol)，将得到的混合物再搅拌15分钟。然后浓缩该混合物，残留物重复所述步骤得到标题化合物，其为褐色油状物(9.8g,82％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)d 5.17(d,1H),4.38(m,1H),3.72(s,3H),1.62(t,2H),1.42(s,9H),0.68(m,1H),0.42(m,2H),0.08(m,2H)。c)(S)-2-(N-叔丁氧基羰基氨基)-3-环丙基丙酸向搅拌的实施例化合物15(b)(7.5g,30.6mmol)的THF(40mL)和水(40mL)溶液中，加入氢氧化锂单水合物(1.4g,33.7mmol)。加热回流16小时后，浓缩该溶液。将残留物溶于乙酸乙酯中，用1N HCl洗涤。将有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩得到标题化合物，其为褐色油状物(5.9g,85％)。MS(ESI):252.2(M+Na)+。d)N-[2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(7-甲氧基苯并呋喃-2-基羰基)-L-b-环丙基丙氨酰基]酰肼按照实施例12(f)-12(g)的方法，但用(S)-2-(N-叔丁氧基羰基氨基)-3-环丙基丙酸代替步骤(f)中的N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酸并用7-甲氧基苯并呋喃-2-羧酸代替步骤(g)中的5-甲基-2-苯基噁唑-4-羧酸，制备标题化合物，其为白色固体(0.120g,74％)。MS(ESI):540.3(M+H+)。
实施例16制备1-[N-(苯并噁唑-5-基羰基)-L-亮氨酰氨基]-3-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丙-2-酮按照实施例13(a)-13(g)的方法，但用苯并噁唑-5-羧酸代替步骤(f)中的噻吩-2-羧酸，制备标题化合物。MS(ESI):542(M+H)+。
实施例17制备1-[N-[4-[2-(N,N-二甲氨基)乙氧基]苯甲酰基]-L-亮氨酰氨基]-3-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丙-2-酮按照实施例13(a)-13(g)的方法，但用4-[2-(N,N-二甲氨基)乙氧基]苯甲酸(J.Med.Chem.27；8；1984；1057-1066)代替步骤(f)中的噻吩-2-羧酸，制备标题化合物。MS(ESI):588(M+H)+。
实施例18制备N-[2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-[5-[2-(N,N-二甲氨基)乙氧基]苯并呋喃-2-基羰基]-L-b-环丙基丙氨酰基]酰肼a)5-羟基苯并呋喃-2-羧酸乙酯向0℃下的氯化铝(6.3g,47.7mmol)和乙硫醇(4.5g,72.9mmol,5.4mL)的混合液中加入5-甲氧基苯并呋喃-2-羧酸乙酯(3.0g,13.6mmol)。室温下搅拌16小时后，将该混合物倒入水中，用3N HCl酸化，再用二氯甲烷(2x)提取。将有机层合并，用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩。残留物经柱层析(硅胶乙酸乙酯/己烷)纯化得到标题化合物，其为白色固体(2.2g,77％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)d 7.53(s,1H),7.30-7.18(m,2H),7.02(d,1H),5.26(sb,1H),4.43(q,2H),1.41(t,3H)。b)5-[2-(N,N-二甲氨基)乙氧基]苯并呋喃-2-羧酸乙酯向0℃、搅拌下的实施例化合物18(a)(0.20g,0.971mmol)、N,N-二甲基乙醇胺(0.122g,1.26mmol,0.127mL)和三苯基膦(0.331g,1.26mmol)的THF(3mL)溶液中滴加偶氮二羧酸二异丙基酯(0.254g,12.6mmol,0.248mL)。室温下搅拌16小时后，将该溶液浓缩，残留物经柱层析(硅胶乙酸乙酯/己烷)纯化得到标题化合物，其为白色固体(0.161g,60％)。MS(ESI):278.2(M+H+)。c)5-[2-(N,N-二甲氨基)乙氧基]苯并呋喃-2-羧酸按照实施例15(c)的方法，但用5-[2-(N,N-二甲氨基)乙氧基]苯并呋喃-2-羧酸乙酯代替(S)-2-(N-叔丁氧基羰基氨基)-3-环丙基丙酸甲酯，制备标题化合物，其为白色固体(0.139g,96％)。1H NMR(400MHz,MeOH-d)d 7.37(m,1H),7.12(m,2H),6.99(m,1H),4.31(t,2H),3.55(t,2H),2.96(s,6H)。d)N-[2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-[5-[2-(N,N-二甲氨基)乙氧基]苯并呋喃-2-基羰基]-L-b-环丙基丙氨酰基]酰肼按照实施例12(f)-12(g)的方法，但用(S)-2-(N-叔丁氧基羰基氨基)-3-环丙基丙酸代替步骤(f)中的N-叔丁氧基羰基-L-亮氨酸并用5-[2-(N,N-二甲氨基)乙氧基]苯并呋喃-2-羧酸代替步骤(g)中的5-甲基-2-苯基噁唑-4-羧酸，制备标题化合物，其为白色固体(0.131g,73％)。MS(ESI):597.3(M+H+)。
以上说明和实施例全面公开了如何制备和应用本发明的化合物。但是，本发明并不限于以上所述的具体实施方案，而是包括以下权利要求范围内的所有改变。本文中所引用的各种参考的期刊、专利和其它出版物都包括该技术领域的现状，并将其全部内容结合到本发明中作为参考。
权利要求
1．应用选自以下的化合物制备用于抑制半胱氨酸蛋白酶的药物2-[N-(N-苄氧基羰基甘氨酰基)]-2’-[N’-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼；(3RS)-1-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰基)-3-[N-(4-苯氧基苯甲酰基)氨基]吡咯烷-4-酮；(1S)-N-[2-[1-(N-苄氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基)]酰肼；1-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰氨基)-3-(2-苄氧基苯磺酰基)氨基-丙-2-酮；N-[2-(2-苄氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；(1S)-N-[2-[1-(N-苄氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；1-[N-(4-吗啉代氨基甲酰基)-L-亮氨酰氨基]-3-(4-苯氧基苯磺酰基)氨基-丙-2-酮；N-[2-(1-萘基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-比啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；N-[2-(2-苄氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-(N-吡嗪羰基-L-亮氨酰基)酰肼；N-[N-(1-苄基-5-甲基咪唑-4-基羰基)-L-亮氨酰基]-N’-[2-(1-萘基)噻唑-4-基羰基]酰肼；(3RS)-3-[N-(3-苄氧基苯甲酰基)-L-亮氨酰氨基]四氢呋喃-4-酮；N-[2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(5-甲基-2-苯基噁唑-4-基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；1-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]-3-[N-(2-噻吩羰基)-L-亮氨酰氨基]丙-2-酮；(3S)-3-[N-(苯并噻唑-6-基羰基)-L-亮氨酰氨基]-1-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丁-2-酮；N-[2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(7-甲氧基苯并呋喃-2-基羰基)-L-b-环丙基丙氨酰基]酰肼；1-[N-(苯并噁唑-5-基羰基)-L-亮氨酰氨基]-3-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丙-2-酮；1-[N-[4-[2-(N,N-二甲氨基)乙氧基]苯甲酰基]-L-亮氨酰氨基]-3-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丙-2-酮；和N-[2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-[5-[2-(N,N-二甲氨基)乙氧基]苯并呋喃-2-基羰基]-L-β-环丙基丙氨酰基]酰肼。
2．根据权利要求1的应用，其中该半胱氨酸蛋白酶是falcipain。
3．应用选自以下的化合物制备用于治疗由寄生虫感染引起的疾病的药物，寄生虫选自恶性疟原虫、克氏锥虫、布氏锥虫、墨西哥利什曼原虫、pifanoi利什曼原虫、硕大利什曼原虫、曼氏血吸虫、旋盘尾丝虫、彭氏丝虫、溶组织内阿米巴虫、肠兰佰氏鞭毛虫、蠕虫、捻转血矛线虫和肝片吸虫、蠕虫类迭宫绦虫、毛线虫、板口线虫和蛔虫以及原生动物类隐孢子虫、艾美球虫、弓形虫和纳归虫，2-[N-(N-苄氧基羰基甘氨酰基)]-2’-[N’-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼；(3RS)-1-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰基)-3-[N-(4-苯氧基苯甲酰基)氨基]吡咯烷-4-酮；(1S)-N-[2-[1-(N-苄氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基)]酰肼；1-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰氨基)-3-(2-苄氧基苯磺酰基)氨基-丙-2-酮；N-[2-(2-苄氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；(1S)-N-[2-[1-(N-苄氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；1-[N-(4-吗啉代氨基甲酰基)-L-亮氨酰氨基]-3-(4-苯氧基苯磺酰基)氨基-丙-2-酮；N-[2-(1-萘基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；N-[2-(2-苄氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-(N-吡嗪羰基-L-亮氨酰基)酰肼；N-[N-(1-苄基-5-甲基咪唑-4-基羰基)-L-亮氨酰基]-N’-[2-(1-萘基)噻唑-4-基羰基]酰肼；(3RS)-3-[N-(3-苄氧基苯甲酰基)-L-亮氨酰氨基]四氢呋喃-4-酮；N-[2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(5-甲基-2-苯基噁唑-4-基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；1-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]-3-[N-(2-噻吩羰基)-L-亮氨酰氨基]丙-2-酮；(3S)-3-[N-(苯并噻唑-6-基羰基)-L-亮氨酰氨基]-1-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丁-2-酮；N-[2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(7-甲氧基苯并呋喃-2-基羰基)-L-b-环丙基丙氨酰基]酰肼；1-[N-(苯并噁唑-5-基羰基)-L-亮氨酰氨基]-3-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丙-2-酮；1-[N-[4-[2-(N,N-二甲氨基)乙氧基]苯甲酰基]-L-亮氨酰氨基]-3-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丙-2-酮；和N-[2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-[5-[2-(N,N-二甲氨基)乙氧基]苯并呋喃-2-基羰基]-L-β-环丙基丙氨酰基]酰肼。
4．根据权利要求2的应用，其中该疾病选自疟疾、锥虫病(非洲睡眠病、Chagas病)、利什曼原虫病、血吸虫病、盘尾丝虫病(河盲症)和贾第虫病。
5．应用选自以下的化合物制备用于治疗疟疾的药物2-[N-(N-苄氧基羰基甘氨酰基)]-2’-[N’-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼；(3RS)-1-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰基)-3-[N-(4-苯氧基苯甲酰基)氨基]吡咯烷-4-酮；(1S)-N-[2-[1-(N-苄氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基)]酰肼；1-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰氨基)-3-(2-苄氧基苯磺酰基)氨基-丙-2-酮；N-[2-(2-苄氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；(1S)-N-[2-[1-(N-苄氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；1-[N-(4-吗啉代氨基甲酰基)-L-亮氨酰氨基]-3-(4-苯氧基苯磺酰基)氨基-丙-2-酮；N-[2-(1-萘基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；N-[2-(2-苄氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-(N-吡嗪羰基-L-亮氨酰基)酰肼；N-[N-(1-苄基-5-甲基咪唑-4-基羰基)-L-亮氨酰基]-N’-[2-(1-萘基)噻唑-4-基羰基]酰肼；(3RS)-3-[N-(3-苄氧基苯甲酰基)-L-亮氨酰氨基]四氢呋喃-4-酮；N-[2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(5-甲基-2-苯基噁唑-4-基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；1-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]-3-[N-(2-噻吩羰基)-L-亮氨酰氨基]丙-2-酮；(3S)-3-[N-(苯并噻唑-6-基羰基)-L-亮氨酰氨基]-1-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丁-2-酮；N-[2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(7-甲氧基苯并呋喃-2-基羰基)-L-b-环丙基丙氨酰基]酰肼；1-[N-(苯并噁唑-5-基羰基)-L-亮氨酰氨基]-3-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丙-2-酮；1-[N-[4-[2-(N,N-二甲氨基)乙氧基]苯甲酰基]-L-亮氨酰氨基]-3-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丙-2-酮；和N-[2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-[5-[2-(N,N-二甲氨基)乙氧基]苯并呋喃-2-基羰基]-L-β-环丙基丙氨酰基]酰肼。
6．药用组合物，它包括选自以下的化合物和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂2-[N-(N-苄氧基羰基甘氨酰基)]-2’-[N’-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰基)]碳酰肼；(3RS)-1-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰基)-3-[N-(4-苯氧基苯甲酰基)氨基]吡咯烷-4-酮；(1S)-N-[2-[1-(N-苄氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(2-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基)]酰肼；1-(N-苄氧基羰基-L-亮氨酰氨基)-3-(2-苄氧基苯磺酰基)氨基-丙-2-酮；N-[2-(2-苄氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；(1S)-N-[2-[1-(N-苄氧基羰基氨基)-3-甲基丁基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(3-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；1-[N-(4-吗啉代氨基甲酰基)-L-亮氨酰氨基]-3-(4-苯氧基苯磺酰基)氨基-丙-2-酮；N-[2-(1-萘基)噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(4-吡啶基甲氧基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；N-[2-(2-苄氧基苯基)噻唑-4-基羰基]-N’-(N-吡嗪羰基-L-亮氨酰基)酰肼；N-[N-(1-苄基-5-甲基咪唑-4-基羰基)-L-亮氨酰基]-N’-[2-(1-萘基)噻唑-4-基羰基]酰肼；(3RS)-3-[N-(3-苄氧基苯甲酰基)-L-亮氨酰氨基]四氢呋喃-4-酮；N-[2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(5-甲基-2-苯基噁唑-4-基羰基)-L-亮氨酰基]酰肼；1-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]-3-[N-(2-噻吩羰基)-L-亮氨酰氨基]丙-2-酮；(3S)-3-[N-(苯并噻唑-6-基羰基)-L-亮氨酰氨基]-1-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丁-2-酮；N-[2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-(7-甲氧基苯并呋喃-2-基羰基)-L-b-环丙基丙氨酰基]酰肼；1-[N-(苯并噁唑-5-基羰基)-L-亮氨酰氨基]-3-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丙-2-酮；1-[N-[4-[2-(N,N-二甲氨基)乙氧基]苯甲酰基]-L-亮氨酰氨基]-3-[3-(2-吡啶基)苯基乙酰氨基]丙-2-酮；和N-[2-[N-环丙基-N-(2-甲基丙基)氨基]噻唑-4-基羰基]-N’-[N-[5-[2-(N,N-二甲氨基)乙氧基]苯并呋喃-2-基羰基]-L-β-环丙基丙氨酰基]酰肼。
全文摘要
本发明涉及抑制蛋白酶(如半胱氨酸蛋白酶)的化合物和药用组合物。尤其是,本发明涉及抑制木瓜蛋白酶超家族的半胱氨酸蛋白酶的化合物和药用组合物。本发明化合物和药用组合物可用于治疗由这些蛋白酶引起的疾病,尤其是寄生虫病。特别是,本发明涉及通过抑制半胱氨酸蛋白酶falcipain治疗疟疾的方法。
文档编号C07C281/06GK1304447SQ99807012
公开日2001年7月18日 申请日期1999年4月8日 优先权日1998年4月9日
发明者S·K·托姆普逊, D·F·维贝尔, T·A·托马斯泽克, D·G·图 申请人:史密丝克莱恩比彻姆公司