专利名称：连续提取分离蛋白多糖的方法
技术领域：
本发明涉及一种生化技术，特别是连续提取分离蛋白多糖的方法。
背景技术：
海水珍珠作为名贵的药材、营养滋补品和装饰品已有二千多年的历史，《本草纲目》指出，珍珠和珍珠贝壳可入药，具有镇静、安神、清热解毒、生肌收敛、润肤光泽洁白等作用。珍珠养殖均为采珠弃贝，开珠贝只是以采珠为目的，珍珠贝母一般是作为食用，珍珠资源未能得到充分利用。牛磺酸(Tanrine Tau)为含硫氨基酸代谢的终产物，化学名称为2-氨基乙磺酸，又名牛胆碱，牛胆素。在体内由蛋氨酸，半胱氨酸通过脱羧，氧化作用合成。是一种人体必需的营养素，具有多种生物功能。它能够提高机体疫功能，增强体质、解除疲劳，提高工作效率；是胆汁酸的组成成分，胆汁酸在脂类物质的消化吸收和维持胆汁中胆固醇的溶解方面都起到重要作用；对心脏肌肉组织和细胞有明显的保护作用。具有清除自由基和抗脂质过氧化物，还有抗衰老的作用；可调节中枢神经系统功能，尤其对婴幼儿大脑发育，神经传导、视觉能力的完善以及钙的吸收有良好作用等等。美国、日本等发达国家在婴幼儿食用牛奶、奶粉中均加入适量牛磺酸，被列为合法的食品添加剂。国内外牛磺酸的制取多用化学合成法，如乙撑亚胺与二氧化硫和水反应合成，这种方法中原料乙撑亚胺毒性非常大、价格高，二氧化硫气体吸入也会造成胸痛、咳嗽、呼吸困难等，操作上有较大的危险性；用环氧乙烷与亚硫酸氢钠反应制得2-羟基乙磺酸钠，再用盐酸酸化制得牛磺酸，这种方法由于在加压加热下反应，工业装置造价较高；2，2-二取代噻唑烷氧制取，必须使用非常危险的过氧化氢，且需回收副产物酮类，操作烦杂。同时合成法制取牛磺酸必然会在生产中产生中间体，对人体造成不良影响。中国专利ZL01109816.3中提出了一种天然牛磺酸的生产方法，它是以珍珠贝壳为主料、以食用乳酸、蛋白酶、NaOH、胰酶、蒸馏水为辅料，将珍珠贝壳内的珍珠层粉碎，在反应釜内加入蒸馏水，食用乳酸，在一定温度下搅拌并同时加入珍珠层粉进行反应，反应完毕PH值达到4.2-5.7时加入蛋白酶，搅动，将反应后用NaOH将调节溶液PH值，加入胰酶，恒温反应并升温得酶解珍珠层粉液，超滤后冷冻结晶，低温真空干燥、粉碎后得含有天然牛磺酸的成品。运用这种方法可以得到天然牛磺酸产品，但生产过程中的物质中仍然含有牛磺酸和蛋白多糖等多种有用的物质，所述的这些原料包括海水珍珠贝母(软体部分)、珍珠贝壳(珍珠质层)、珍珠液法(采珠时流出的粘液)等三种或者单一种或者任二种的混合物。牛磺酸可以用上述方法进行连续多次的提取。蛋白多糖(Proteoglycan)是蛋白质和多糖结合成的大分子复合物，其中多糖分子远超过蛋白分子。据药理活性测定证实，蛋白多糖对多种动物肿瘤生长有较强的抑制作用和防止肿瘤转移作用，同时它还能增强巨噬细胞的巨噬功能，此外还具有抗凝血、抗病毒、降血脂及增强免疫力等多种药理活性，它已成为当今医药界瞩目的一类生物高分子。
发明内容
本发明的目的在于提供一种可靠的连续提取分离蛋白多糖的方法。这种连续提取分离蛋白多糖的方法是利用海水珍珠贝母提取分离天然牛磺酸晶体后的母液，将其母液减压浓缩至原体积的1/5至1/10，并将浓缩液PH值调至6.8-7.2，在不断地搅拌下缓慢加入乙醇，使乙醇终至浓度达到65-75％，此时溶液中会产生大量的絮状聚集物，将此含有絮状聚集物的溶液于5℃下存放5小时以上，离心分离此沉淀物，依次用无水乙醇、丙酮洗涤，抛干脱水后放入盛有五氧化二磷的真空中干燥器内真空干燥，得到一种深褐色沉淀物，此乃蛋白多糖粗品；将该粗品溶于少量蒸馏水中制成5-6％的水溶液，再用20％NaOH调PH值至9.00，在50-60℃水温下加热恒温，缓慢滴加30％过氧化氢(H2O2用量15％V/V)，水溶液PH值保持8.00-9.00之间，50-60℃水浴恒温5-6小时，使蛋白多糖氧化脱色并冷至室温，用稀盐酸将脱色液PH值调至7.00，加盐(氯化钠或者醋酸钠)使水溶液的盐浓度达4％，在搅拌下缓慢地加入乙醇，使乙醇终至浓度达到65-75％，此时会产生大量浅黄色的絮状凝聚物沉淀，于5℃下存放5小时以上后离心分离，依次用无水乙醇、丙酮洗涤，抛干脱水后放入盛有五氧化二磷的真空中干燥器内真空干燥，获得的浅黄色的蛋白多糖脱色制品，所述的原料包括海水珍珠贝母(软体部分)、珍珠贝壳(珍珠质层)、珍珠液法(采珠时流出的粘液)等三种或者单一种或者任二种的混合物。本发明有如下有益效果变废为宝，工艺稳定可靠，回收效果好。本发明具有如下优点提取分离天然牛磺酸晶体后的母液又直接提取分离蛋白多糖，使天然牛磺酸和蛋白多糖生产成本大幅度降低，变废为宝，有利于环境保护。
具体实施例方式
下面将结合实施例对本发明的实质性内容作进一步详细的描述。
这种连续提取分离蛋白多糖的方法是利用包括海水珍珠贝母(软体部分)、珍珠贝壳(珍珠质层)、珍珠液法(采珠时流出的粘液)等三种或者单一种或者任二种的混合物为原料提取分离天然牛磺酸晶体后的母液，取10升母液，减压浓缩至0.62升呈褐黑色糖浆状浓度液，在搅拌机搅拌下，缓慢加入88.2％浓度的乙醇，随着乙醇的不断加入，溶液中会产生大量的颗粒絮状物，停止搅拌后颗粒状物沉淀，总体积约为4700毫升，乙醇浓度约75％左右。将含有沉淀物的乙醇混合液置于5℃下冰柜中冷藏过夜，离心分离收集此沉淀物，依次用无水乙醇、丙酮顺序沉淀洗涤，抛干脱水后放入盛有五氧化二磷的真空中干燥器内真空干燥，得到一种深褐色沉淀物，此乃蛋白多糖粗品，得率402克(湿重)；用500毫升蒸馏水溶解上述蛋白多糖粗品，在低温水浴中(约50℃)加热溶解。溶液PH值7.83，用20％NaOH调PH值至9.00，总体积达650毫升，在55℃±5℃的温度在水浴锅上加热蛋白多糖，分次分批缓慢滴加30％过氧化氢97.5毫升(按15％V/V计算)。在水浴上保温5小时，其氧化脱色期间保持溶液PH值保持8.00-8.50之间，溶液颜色由深褐色退为浅棕黄色。置于室温冷却后用稀盐酸(1+1)调节PH值调至7.01，并加入20克氯化钠使溶液中的的氯化钠浓度在4％左右，在不断搅拌下缓慢地加入90.5％乙醇2500毫升，产生大量浅黄色的絮状凝聚物，乙醇浓度72.8％停止搅拌，置于5℃冰柜中过夜，次日离心收集沉淀物，用无水乙醇和丙酮顺序洗涤，抛干脱水后放入盛有五氧化二磷的真空中干燥器内真空干燥，脱色得浅黄色的蛋白多糖133克。
经实际使用验证其效果良好。
权利要求
1.一种连续提取分离蛋白多糖的方法，其特征在于利用海水珍珠贝母等原料提取分离天然牛磺酸晶体后的母液，将其母液减压浓缩至原体积的1/5至1/10，并将浓缩液PH值调至6.8-7.2，在不断地搅拌下缓慢加入乙醇，使乙醇终至浓度达到65-75％，此时溶液中会产生大量的絮状聚集物，将此含有絮状聚集物的溶液于5℃下存放5小时以上，离心分离此沉淀物，依次用无水乙醇、丙酮洗涤，抛干脱水后放入盛有五氧化二磷的真空中干燥器内真空干燥，得到一种深褐色沉淀物，此乃蛋白多糖粗品；将该粗品溶于少量蒸馏水中制成5-6％的水溶液，再用20％NaOH调PH值至9.00，在50-60℃水温下加热恒温，缓慢滴加30％过氧化氢(H2O2用量15％V/V)，水溶液PH值保持8.00-9.00之间，50-60℃水浴恒温5-6小时，使蛋白多糖氧化脱色并冷至室温，用稀盐酸将脱色液PH值调至7.00，加盐(氯化钠或者醋酸钠)使水溶液的盐浓度达4％，在不断搅拌下缓慢地加入乙醇，使乙醇终至浓度达到65-75％，此时会产生大量浅黄色的絮状凝聚物沉淀，于5℃下存放5小时以上后离心分离，依次用无水乙醇、丙酮洗涤，抛干脱水后放入盛有五氧化二磷的真空中干燥器内真空干燥，获得的浅黄色的蛋白多糖脱色制品。
2.根据权利要求1所述的连续提取分离蛋白多糖的方法，其特征在于所述的原料包括海水珍珠贝母(软体部分)、珍珠贝壳(珍珠质层)、珍珠液法(采珠时流出的粘液)等三种或者单一种或者任二种的混合物。
全文摘要
本发明涉及一种生化技术，特别是连续提取分离蛋白多糖的方法。该方法是利用提取分离天然牛磺酸晶体后的母液减压浓缩调pH值，加入乙醇，分离洗涤真空干燥，得蛋白多糖粗品，将该粗品溶解加热后滴加过氧化氢，水浴恒温使其氧化脱色冷却，用稀酸调pH值后加盐加乙醇，得浅黄色絮状凝聚物沉淀，离心分离后用无水乙醇、丙酮洗涤并真空干燥，获得的浅黄色的蛋白多糖脱色制品。本发明有如下有益效果变废为宝，工艺稳定可靠，回收效果好。本发明具有如下优点提取分离天然牛磺酸晶体后的母液又直接提取分离蛋白多糖，使天然牛磺酸和蛋白多糖生产成本大幅度降低，变废为宝，有利于环境保护。
文档编号C08B37/00GK1687140SQ20051007071
公开日2005年10月26日 申请日期2005年5月18日 优先权日2005年5月18日
发明者石子聪, 赵士均, 唐咸来 申请人:石子聪