专利名称：聚乙二醇修饰的甾醇共聚物及其应用的制作方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，具体涉及一类聚乙二醇(PEG)修饰的甾醇共聚物以及该共聚物作为辅料方面的应用。
背景技术：
聚乙二醇(PEG)为环氧乙烷和水缩聚而成的混合物，其分子量范围为200-20000。
聚乙二醇(PEG)是最常用的一种修饰剂，其毒性小、无抗原性、具有良好的两亲性，且生物相容性已获FDA认可。常用来修饰磷脂酰胆碱以及脂肪酸作为制备乳剂或脂质体的辅料；也用聚乙二醇修饰蛋白类(亦称蛋白的PEG化)包括PEG与蛋白质与多肽类药物的物理结合物和化学修饰物，药物的聚乙二醇化给药物带来的优点包括增加溶解度、降低免疫原性和消除速度、增加蛋白药物的治疗指数以及扩大临床应用等。
甾醇是一种环戊烷多氢菲的衍生物，人体和动物内最重要的甾醇类化合物包括胆固醇、7-脱氢胆固醇、麦角固醇、维生素D3、维生素D2等。
检索与本发明相关的专利和文献，发现发明专利00110157.9公开了一种聚乙二醇和胆固醇用丁二酸以酯键相连的化合物，我们研究发现该化合物注射具有很强的溶血性，基本不能作为注射用辅料。
本发明经过大量研究发现聚乙二醇(PEG)和甾醇通过小分子的化合物以醚键连接，具有优良的表面活性作用，其载药能力大大提高，同时实现了药物在体内的缓慢释放。
发明内容
本发明是将PEG通过小分子的化合物以醚键接枝于甾醇(ChOL)合成共聚物(PGC)，该共聚物(PGC)可以作为表面活性剂用来制备水溶液分散体比如纳米乳剂，脂质体；也可以作为载体成分之一用来制备能分散于水的胶束、固体脂质纳米粒或纳米粒；还可以作为长循环纳米、温度或PH敏感性纳米载体成分之一；也可以作为高级化妆品的辅料，作为化妆品的辅料，具有非常优良的保湿效果，也可以用于皮下注射消除皱纹。
其结构为R1-PEG-R2-ChOL，结构式如下
其中ChOL包括胆固醇、7-脱氢胆固醇、麦角固醇、维生素D3及维生素D2中的一种，具体结构式如下 维生素D3 维生素D2 7-脱氢胆固醇 麦角固醇其中PEG分子量范围为200-20000，其中R1的作用可以包括以下一种或几种调节亲水性和亲脂性，水溶性和脂溶性等；R2的作用包括调节极性和溶解性。可以根据不同的目的进行不同的结构修饰；R2可以是直链或支链烷、烯、炔类，如-CH2-，-CH2CH2CH2-，-CH2CH(CH2CH2)nCH2-，-CH＝CHCH2-，-CH2C＝CH-等等，包括但不局限于以上结构；R2结构中也可以带有其他的官能团，其中包括酮、醚、酯、胺、酰胺类，如-CH2OCH2-，-CH2COCH2-，-CH2O(CH2CH2)nCH2-，-CH2COOCH2-，-CH2C(CH3)2-CH2-(CH2)n-、-CH2CH2NH CH2-等，包括但不局限于以上结构。
其中n为整数，范围为2-30基本合成路线如下
例举以下合成方案合成方案1当R2＝-CH2(CH2)6CH2-(直链烷烃)时，即M1为1，8-辛二醇将M1 1mol加入反应瓶中，搅拌下加入二氯亚砜(3mol)，然后加热回流3小时，稍冷，减压蒸馏，蒸出多余的二氯亚砜，然后冷却，将反应液倒入200ml冰水，用二氯甲烷300mL分三次萃取。5％碳酸钠100ml洗两次，饱和氯化钠洗，无水硫酸钠干燥，过滤，回收溶剂至尽，得淡黄色油状物M2。
将胆固醇1mol溶于500mlDMF中，室温搅拌冷水浴加入1.2mol氢化钠，搅拌1小时，然后加入M2 2.0mol搅拌，然后80度反应3小时，TLC点样反应完全，然后冷却，倒入800ml冰水中，用二氯甲烷1000ml分三次萃取，合并有机层，然后水洗三次，饱和氯化钠洗一次，有机层无水硫酸钠干燥，过滤，回收溶剂至尽，得产品M3。
将PEG 1mol溶入300mlDMF中，室温搅拌下加入1.2mol氢化钠，搅拌1小时，然后加入0.8molM3，搅拌，然后80度反应3小时，TLC点样反应完全，然后冷却，倒入800ml冰水中，用二氯甲烷1000ml分三次萃取，合并有机层，然后水洗三次，饱和氯化钠洗一次，有机层无水硫酸钠干燥，过滤，回收溶剂至尽，以甲醇柱层析得浅黄色粘稠状固体，结构式如下
合成方案2当R2＝-CH2C(CH3)2(CH2)5CH2-时(支链烷烃)，即M1为2，2-二甲基-1，8-辛二醇，将M1 1mol加入反应瓶中，搅拌下加入二氯亚砜(3mol)，然后加热回流4小时，稍冷，减压蒸馏，蒸出多余的二氯亚砜，然后冷却，将反应液倒入200ml冰水，用二氯甲烷300mL分三次萃取。5％碳酸钠100ml洗两次，饱和氯化钠洗，无水硫酸钠干燥，过滤，回收溶剂至尽，得淡黄色油状物M2。
将胆固醇1mol溶于500mlDMF中，室温搅拌冷水浴加入1.2mol氢化钠，搅拌1小时，然后加入M2 2.0mol搅拌，然后80度反应4小时，TLC点样反应完全，然后冷却，倒入800ml冰水中，用二氯甲烷1000ml分三次萃取，合并有机层，然后水洗三次，饱和氯化钠洗一次，有机层无水硫酸钠干燥，过滤，回收溶剂至尽，得产品M3。
将PEG 1mol溶入300mlDMF中，室温搅拌下加入1.2mol氢化钠，搅拌1小时，然后加入0.8mol M3，搅拌，然后80度反应4小时，TLC点样反应完全，然后冷却，倒入800ml冰水中，用二氯甲烷1000ml分三次萃取，合并有机层，然后水洗三次，饱和氯化钠洗一次，有机层无水硫酸钠干燥，过滤，回收溶剂至尽，以甲醇柱层析得浅黄色粘稠状固体，结构式如下 合成方案3当R2＝-CH2CH2COCH2CH2-时(酮)，即M1为2，2-二甲基-3-羰基-1，5-戊二醇，将M1 1mol加入反应瓶中，搅拌下加入二氯亚砜(3mol)，然后加热回流3小时，稍冷，减压蒸馏，蒸出多余的二氯亚砜，然后冷却，将反应液倒入200ml冰水，用二氯甲烷300mL分三次萃取。5％碳酸钠100ml洗两次，饱和氯化钠洗，无水硫酸钠干燥，过滤，回收溶剂至尽，得淡黄色油状物M2。
将胆固醇1mol溶于500mlDMF中，室温搅拌冷水浴加入1.2mol氢化钠，搅拌1小时，然后加入M2 2.0mol搅拌，然后80度反应4小时，TLC点样反应完全，然后冷却，倒入800ml冰水中，用二氯甲烷1000ml分三次萃取，合并有机层，然后水洗三次，饱和氯化钠洗一次，有机层无水硫酸钠干燥，过滤，回收溶剂至尽，得产品M3。
将PEG 1mol溶入300mlDMF中，室温搅拌下加入1.2mol氢化钠，搅拌1小时，然后加入0.8mol M3，搅拌，然后80度反应4小时，TLC点样反应完全，然后冷却，倒入800ml冰水中，用二氯甲烷1000ml分三次萃取，合并有机层，然后水洗三次，饱和氯化钠洗一次，有机层无水硫酸钠干燥，过滤，回收溶剂至尽，以甲醇柱层析得浅黄色粘稠状固体，结构式如下 合成方案4当R2＝-CH2CH2CH(NH2)CH2CH2-时(胺)，即M1为2，2-二甲基-3-胺基-1，5-戊二醇，将M1 1mol加入反应瓶中，搅拌下加入二氯亚砜(3mol)，然后加热回流3小时，稍冷，减压蒸馏，蒸出多余的二氯亚砜，然后冷却，将反应液倒入200ml冰水，用二氯甲烷300mL分三次萃取。5％碳酸钠100ml洗两次，饱和氯化钠洗，无水硫酸钠干燥，过滤，回收溶剂至尽，得淡黄色油状物M2。
将胆固醇1mol溶于500mlDMF中，室温搅拌冷水浴加入1.2mol氢化钠，搅拌1小时，然后加入M2 2.0mol搅拌，然后80度反应4小时，TLC点样反应完全，然后冷却，倒入800ml冰水中，用二氯甲烷1000ml分三次萃取，合并有机层，然后水洗三次，饱和氯化钠洗一次，有机层无水硫酸钠干燥，过滤，回收溶剂至尽，得产品M3。
将PEG 1mol溶入300mlDMF中，室温搅拌下加入1.2mol氢化钠，搅拌1小时，然后加入0.8mol M3，搅拌，然后80度反应4小时，TLC点样反应完全，然后冷却，倒入800ml冰水中，用二氯甲烷1000ml分三次萃取，合并有机层，然后水洗三次，饱和氯化钠洗一次，有机层无水硫酸钠干燥，过滤，回收溶剂至尽，以甲醇柱层析得浅黄色粘稠状固体，结构式如下 合成方案5当R2＝-CH2CH2CONHCH2CH2-时(酰胺)，将M1 1mol加入反应瓶中，搅拌下加入二氯亚砜(3mol)，然后加热回流3小时，稍冷，减压蒸馏，蒸出多余的二氯亚砜，然后冷却，将反应液倒入200ml冰水，用二氯甲烷300mL分三次萃取。5％碳酸钠100ml洗两次，饱和氯化钠洗，无水硫酸钠干燥，过滤，回收溶剂至尽，得淡黄色油状物M2。
将胆固醇1mol溶于500mlDMF中，室温搅拌冷水浴加入1.2mol氢化钠，搅拌1小时，然后加入M2 2.0mol搅拌，然后80度反应4小时，TLC点样反应完全，然后冷却，倒入800ml冰水中，用二氯甲烷1000ml分三次萃取，合并有机层，然后水洗三次，饱和氯化钠洗一次，有机层无水硫酸钠干燥，过滤，回收溶剂至尽，得产品M3。
将PEG 1mol溶入300mlDMF中，室温搅拌下加入1.2mol氢化钠，搅拌1小时，然后加入0.8mol M3，搅拌，然后80度反应4小时，TLC点样反应完全，然后冷却，倒入800ml冰水中，用二氯甲烷1000ml分三次萃取，合并有机层，然后水洗三次，饱和氯化钠洗一次，有机层无水硫酸钠干燥，过滤，回收溶剂至尽，以甲醇柱层析得浅黄色粘稠状固体，结构式如下 合成方案6当R2＝-CH2CH2OCH2CH2-时(醚)，将M1 1mol加入反应瓶中，搅拌下加入二氯亚砜(3mol)，然后加热回流5小时，稍冷，减压蒸馏，蒸出多余的二氯亚砜，然后冷却，将反应液倒入200ml冰水，用二氯甲烷300mL分三次萃取。5％碳酸钠100ml洗两次，饱和氯化钠洗，无水硫酸钠干燥，过滤，回收溶剂至尽，得淡黄色油状物M2。
将胆固醇1mol溶于500mlDMF中，室温搅拌冷水浴加入1.2mol氢化钠，搅拌2小时，然后加入M2 2.0mol搅拌，然后80度反应4小时，TLC点样反应完全，然后冷却，倒入800ml冰水中，用二氯甲烷1000ml分三次萃取，合并有机层，然后水洗三次，饱和氯化钠洗一次，有机层无水硫酸钠干燥，过滤，回收溶剂至尽，得产品M3。
将PEG 1mol溶入300mlDMF中，室温搅拌下加入1.2mol氢化钠，搅拌2小时，然后加入0.8mol M3，搅拌，然后80度反应5小时，TLC点样反应完全，然后冷却，倒入800ml冰水中，用二氯甲烷1000ml分三次萃取，合并有机层，然后水洗三次，饱和氯化钠洗一次，有机层无水硫酸钠干燥，过滤，回收溶剂至尽，以甲醇柱层析得浅黄色粘稠状固体，结构式如下 合成方案7当R2＝-CH2CH2CH(COOC2H5)CH2CH2-时(酯)，将M1 1mol加入反应瓶中，搅拌下加入二氯亚砜(3mol)，然后加热回流5小时，稍冷，减压蒸馏，蒸出多余的二氯亚砜，然后冷却，将反应液倒入200ml冰水，用二氯甲烷300mL分三次萃取。5％碳酸钠100ml洗两次，饱和氯化钠洗，无水硫酸钠干燥，过滤，回收溶剂至尽，得淡黄色油状物M2。
将胆固醇1mol溶于500mlDMF中，室温搅拌冷水浴加入1.2mol氢化钠，搅拌2小时，然后加入M2 2.0mol搅拌，然后80度反应5小时，TLC点样反应完全，然后冷却，倒入800ml冰水中，用二氯甲烷1000ml分三次萃取，合并有机层，然后水洗三次，饱和氯化钠洗一次，有机层无水硫酸钠干燥，过滤，回收溶剂至尽，得产品M3。
将PEG 1mol溶入300mlDMF中，室温搅拌下加入1.2mol氢化钠，搅拌2小时，然后加入0.8mol M3，搅拌，然后80度反应5小时，TLC点样反应完全，然后冷却，倒入800ml冰水中，用二氯甲烷1000ml分三次萃取，合并有机层，然后水洗三次，饱和氯化钠洗一次，有机层无水硫酸钠干燥，过滤，回收溶剂至尽，以甲醇柱层析得浅黄色粘稠状固体，结构式如下 R1可以是-H，也可以接直链或支链烷、烯、炔类，如-CH3，-CH2CH2CH3，-CH2CH(CH2CH2)nCH3，-CH＝CHCH3，-CH2C＝CH2等等，包括但不局限于以上结构；R1也可以是直链或支链醇、酮、醚、酯、酸及其盐、胺、酰胺类，如-CH2OH，-CH2COCH3，-CH2O(CH2CH2)nCH3，-CH2COOH，-CH2CH2NH2等等，包括但不局限于以上结构；其中n为整数，范围为2-12例举合成R1的方法如下在PEG的另外一端用醚键接上甲基，其合成方法是取0.5mmol/L以上合成的产物溶于5-10ml水中，加入0.4-1mmol的硫酸二甲酯，冰浴下搅拌，缓慢滴加1mol/L氢氧化钠溶液2ml，反应12h，TLC跟踪反应进程，反应结束后滴加硫酸调节pH2.0，抽滤，获得固体用硅胶柱层析重结晶，即得本发明的2-甲基PEG胆固醇脂肪酸(氨基脂肪酸)醚。
在PEG的另外一端用酯键连接上甲基、乙基等小分子脂肪酸，其合成方法是取1mmol/L以上合成的产物溶于5ml-10ml乙腈中，加入400-600mgDCC，再缓慢滴加0.0012mol冰醋酸，然后滴加2-4ml盐酸，加热回流6-10小时，TLC跟踪反应进程。待反应结束后，加入20ml-40ml水，用等倍量的乙酸乙酯萃取，共2次，分离乙酸乙酯层，饱和食盐水洗涤2次，用无水硫酸钠干燥，蒸干，反复重结晶即得本发明的2-脂肪酸酯化的PEG胆固醇脂肪酸(氨基脂肪酸)醚。
本发明PEG接枝修饰的甾醇共聚物的应用，可以作为疏水药物的载体，比如与疏水药物组合成纳米乳剂，脂质体以及能分散于水的胶束或纳米粒，其中药物占总固体物的0.001-30％，粒径分布在10～1000nm；也可以作为高级化妆品的辅料，作为化妆品的辅料，具有非常优良的保湿效果，也可以用于皮下注射消除皱纹。
可以使用本发明PEG接枝修饰的共聚物的药物包括但不限于以下疏水药物抗菌药，抗病毒药，抗真菌药，抗炎物质，冠脉扩张药，脑血管扩张剂，血管收缩剂，拟精神药物，抗肿瘤药物，兴奋剂，抗组胺药物、抗高血压药物，血管收缩药，抗偏头痛药物、抗血栓药、抗心律失常药，维生素，止泄药，镇痛药，神经肌肉药，作用于中枢神经系统的试剂以及溶解性很差的蛋白、多肽、肽等生物药。比如紫杉醇、多稀紫杉醇、布洛芬、阿霉素系列、替尼泊苷、依托泊苷、道诺霉素、丝裂霉素、甲氨蝶呤、丝裂霉素C、茚甲新、环孢菌素、前列地尔、丙泊酚、尼莫地平、异长春花碱、羟基喜树碱、阿糖胞苷、雷替曲塞、克拉霉素、伏立康唑、伊曲康唑、两性霉素B、卡泊、顺泊、奥沙利泊、奈达泊等。
本发明PEG接枝修饰的共聚物与药物制成的制剂，其给药途径可以口服、注射、经皮或粘膜给药，现将制备方法介绍如下一、本发明PEG接枝修饰的共聚物(PGC)，其与疏水药物组合制备成纳米乳剂的方法如下1、本发明的注射用亚纳米乳制剂，其制备方法如下a)将药物溶于适量溶剂中，加入脂肪酸甘油酯、甘油三酯、脂肪酸、PGC和磷脂，加热熔融制成油相，除去挥发性溶剂，甘油适量溶于适量水(PH10-11)中，于50～90℃高速搅拌制成水相，油水两相混合于50～90℃高速搅拌制成初乳剂，调节PH值4.5～8.0。
b)取上述(a)中初乳剂，注射用水定容至处方量，转移至高压乳匀机中，反复乳化。至乳滴平均粒径≤0.5微米。
C)取上述(b)的乳剂过滤后，充氮气灌装，灭菌既得。
2、本发明PEG接枝修饰的共聚物(PGC)制成的纳米乳制剂，其制备方法如下a)将药物用适量溶剂溶解，加入PGC，加热熔融，再加入处方量的水(PH10-11)，充分搅拌，加入适量助表面活性剂(乙醇或丙二醇)得澄明或半澄明溶液，调节PH值4.0～9.0。
b)取上述(a)的微乳制剂除菌过滤后，充氮气灌装，灭菌既得。
口服乳剂中还可以含芳香剂和防腐剂，其中芳香剂包括橘子香精、香蕉香精、草莓香精、奶油香精中的一种或几种，防腐剂包括尼泊金酯类、苯甲酸类中的一种或几种。
二、本发明PEG接枝修饰的共聚物(PGC)，其与疏水药物组合制备成胶束的制备方法如下a)将疏水药物和PEG接枝修饰的共聚物、适量稳定剂如聚乳酸与聚乙二醇的嵌段共聚物或聚氧乙烯-聚氨基酸共聚物用适量溶剂溶解，减压蒸去溶剂，加入处方量的水溶液，搅拌均匀，高速搅拌至乳滴平均粒径≤0.5微米。
b)取上述的乳剂过滤后，充氮气灌装，灭菌既得。
三、本发明PEG接枝修饰的共聚物(PGC)，其与疏水药物组合制备成脂质体的方法如下a)将药物和PEG接枝修饰的共聚物加入适量处方量的卵磷脂用适量溶剂溶解，减压蒸去溶剂，加入处方量的磷酸缓冲盐溶液，充分搅拌，形成多室脂质体。
b)取上述(a)中的多室脂质体，转移至高压乳匀机中，反复乳化。至乳滴平均粒径≤0.5微米。
C)取上述(b)的乳剂过滤后，充氮气灌装，灭菌既得。
四、本发明PEG接枝修饰的共聚物(PGC)，其与疏水药物组合制备成钠米粒的方法如下a)将处方量的单硬脂酸甘油脂、脂肪酸、卵磷脂、PEG胆固醇酯及药物加热熔融，加入处方量的注射用水(PH10-11)和甘露醇搅拌制成初乳，调节PH值4.5～8.0，再用高压均质机对初乳体系进行循环高压均质乳化至粒度符合规定。
b)上述乳剂过滤后，加入适量冻干保护剂低分子右旋糖苷，冷冻干燥充氮气压盖既得。
具体实施例实施例一(亚纳米乳剂型)组方1紫杉醇0.01％～3.0％、共溶剂0.01％～5.0％、磷脂0.5％～6.0％、PGC0.1％～5.0％、甘油三酯5％～30％、甘油1.0％～6.0％、油酸1.0％～6.0％，注射用水添至100ml。
称取紫杉醇100-500mg溶于适量共溶剂(无水乙醇)1中，溶入15g甘油三酯和0.1-5g油酸中，于50℃～80℃高速搅拌使混合均匀，制成油相；蒸发除去乙醇；称取蛋黄卵磷脂1.0g、PGC1.0g、甘油3g，加入处方量的水于50℃～80℃高速搅拌使充分分散，制成水相。油水两相混合，于50℃～80℃高速搅拌制成初乳剂。取初乳剂，注射用水定容至处方量，调节PH值为5.0～7.0，转移至高压乳匀机中，反复乳化至乳滴平均粒径≤0.5微米，除菌过滤，充氮气灌装，灭菌既得。
实施例二(纳米微乳剂型)组方1阿霉素0.01％～2.0％、阿霉素共溶剂0.01％～5.0％、PGC0.1％～5.0％、助表面活性剂(无水乙醇、丙二醇)适量，注射用水添至100ml。
称取阿霉素100-500mg溶于阿霉素共溶剂(无水乙醇)中，加入PGC2.0g、丙二醇1.0g及适量水于20℃-80℃搅拌使混合均匀，不断搅拌，加适量无水乙醇滴定至呈半透明溶液，调节PH值为5.0～7.0，除菌过滤充氮气灌装，灭菌既得。
实施例三(胶束)组方1尼莫地平0.01％～2.0％、尼莫地平共溶剂0.01％～5.0％、PGC0.1％～5.0％、聚氧乙烯-聚氨基酸共聚物适量，注射用水添至100ml。
尼莫地平、PGC和聚氧乙烯-聚氨基酸共聚物用适量溶剂溶解，减压蒸去溶剂，加入处方量的水溶液，搅拌均匀，高速搅拌至乳滴平均粒径≤0.5微米，乳剂过滤后，充氮气灌装，灭菌既得。
实施例四(脂质体)组方1异长春花碱0.01％～2.0％、PGC0.1％～5.0％、卵磷脂2.0％～6.0％，甘露醇5.0％～15.0％注射用水添至100ml。
称取异长春花碱50-100mg、PGC2.0g、卵磷脂4.0g溶于溶于适量有机溶剂中，减压蒸去溶剂，加入处方量的溶有甘露醇的磷酸缓冲盐溶液，充分搅拌，形成多室脂质体，转移至高压乳匀机中，反复乳化至乳滴平均粒径≤0.5微米，乳剂过滤后，充氮气灌装，灭菌既得。
实施例五(固体脂质纳米粒)组方1羟基喜树碱0.01％～2.0％、PGC0.1％～5.0％、单硬脂酸甘油酯1.0％～6.0％、脂肪酸1.0％～6.0％、卵磷脂2.0％～6.0％、甘露醇2.0％～6.0％，注射用水添至30ml。
a)将处方量的单硬脂酸甘油酯2.0g、脂肪酸1.0g、卵磷脂1.0g、PGC2.0g及羟基喜树碱100mg加热熔融，加入处方量的注射用水(PH10-11)和甘露醇5.0g搅拌制成初乳，调节PH值4.5～8.0，再用高压均质机对初乳体系进行循环高压均质乳化至粒度符合规定。
b)上述乳剂加入适量冻干保护剂低分子右旋糖苷，过滤后，冷冻干燥，充氮气压盖既得。
实施例六(口服自乳化载药系统)组方1醋酸甲地孕酮0.1％～10.0％、PGC2.0％～10.0％、癸酸20.0％～40.0％、Fluronic F685.0％～20.0％、聚氧乙烯蓖麻油10.0％～20.0％。
将处方量的醋酸甲地孕酮、PGC、癸酸、Fluronic F68、聚氧乙烯蓖麻油反复研磨混合均匀，加热熔融既得口服自乳化载药体系统。
将该系统按照常规方法可以稀释成口服乳液，也可压制成软胶囊或罐装成液体硬胶囊。
实施例七(血管刺激性试验)试验药物按照实施例(一、二、四、五)提供方法制备，羟基喜树碱注射液，从市场购得，试验时用0.9％氯化钠注射液配制成5％溶液。
试验动物健康家兔，体重2.3～2.4kg。
试验方法取健康家兔10只，雌雄各半。按体重及性别分为0.9％氯化钠注射液对照组、羟基喜树碱注射液组和实施例(一、二、四、五)组，每组2只，于家兔左耳耳缘按临床给药浓度静脉滴注10ml/kg，滴注速度1ml/分，每日1次，连续7日。对照组同法静脉滴注0.9％氯化钠注射液。除每次给药时及给药后观察给药局部表现外，于末次静脉滴注后剪下药侧耳廓，常规固定后，在距静脉滴注入针近心端1cm处，每隔1cm切取0.5cm宽标本，共取3块标本。切片染色，进行镜下病理观察，结果见下表血管刺激性试验
备注“++”严重、“+”少许、“-”无以上试验结果表明，本发明制备的制剂具有刺激性小的优点。
实施例8(PGC用于制备伏立康唑纳米制剂的初步药代动力学研究)健康SD大鼠12只，雌雄各半，体重220g左右，随机分为2组，自由进食与饮水。一组以36mg/kg的剂量经大鼠尾静脉缓慢注射给予采用PGC作为辅料的伏立康唑纳米制剂制剂溶液(给药体积9mL/kg)；另一组以36mg/kg的剂量经大鼠尾静脉缓慢注射给予未采用PGC作为辅料的按高压乳匀法制备的伏立康唑亚纳米制剂制剂(给药体积9mL/kg)。分别于药前及给药后5，10，30，60min，2，4，6，8，10，12，24h采集血浆，依法测定。
大鼠静脉注射给予两种伏立康唑制剂36mg/kg后伏立康唑的平均血药浓度-时间曲线见
图1，其中PGC代表采用PGC作为辅料的伏立康唑纳米制剂制剂，Normal代表未采用PGC作为辅料制备的伏立康唑亚纳米制剂。
由图可知采用PGC作为辅料的伏立康唑纳米制剂制剂给药后，血浆药物浓度缓慢下降，24h后仍能检测到伏立康唑的存在，表明本制剂具有一定的缓释特征，如采用静脉滴注方式，可达到一天给药一次缓慢释放的效果，从而减少了给药次数，增加了病人的顺应性；而未采用PGC作为辅料的按高压乳匀法制备的伏立康唑亚纳米制剂制剂给药后，血浆浓度快速下降，12h已经接近定量限的浓度，基本检测不到伏立康唑，表明其药代动力学性质较差。
结论伏立康唑具有较大的分子空间结构，3个大的环状结构，因而很难被完全包封于纳米级的磷脂小球中而不泄漏或析出。而本公司采用新型辅料PGC则能有效包裹药物，包封率高达98％以上，取得良好效果。并且制剂性状为白色半透明液体，有蓝色乳光，性状良好。通过药代动力学研究发现，采用新型辅料PGC制备纳米制剂具有较好的药动学特征，药物在动物体内延缓消除，达到较长的循环起效时间，缓释效果明显。
总之，采用PGC制备的纳米制剂经评价在各方面均优于普通的乳剂和注射液、冻干粉针，具有广阔的开发前景和无可比拟的市场竞争力。
权利要求
1.一类聚乙二醇修饰的甾醇共聚物，其特征在于结构式为 其中ChOL代表一种甾醇类化合物；R1可以是-H，也可以接直链或支链烷、烯、炔类，如-CH3、-CH2CH2CH3、-CH2CH(CH2CH2)nCH3、-CH＝CHCH3、-CH2C＝CH2等等，包括但不局限于以上结构；R1也可以是直链或支链醇、酮、醚、酯、酸及其盐、胺、酰胺类，如-CH2OH、-CH2COCH3、-CH2O(CH2CH2)nCH3、-CH2COOH、-CH2CH2NH2-COCH3等，包括但不局限于以上结构；R2可以是直链或支链烷、烯、炔类，如-CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2C(CH3)2-CH2-(CH2)n-、-CH2CH(CH2CH2)nCH2-、-CH＝CHCH2-、-CH2C＝CH-等等，包括但不局限于以上结构；R2结构中也可以带有其他的官能团，其中包括酮、醚、酯、胺、酰胺类，如-CH2OCH2-、-CH2COCH2-、-CH2O(CH2CH2)nCH2-、-CH2COOCH2-、-CH2CH2NH CH2-等等，包括但不局限于以上结构；其中ChOL与R2和PEG均以醚键相连接；其中n为整数，范围为2-30。
2.根据权利要求1的共聚物，其中甾醇包括胆固醇、7-脱氢胆固醇、麦角固醇、维生素D3及维生素D2中的一种；
3.根据权利要求1的共聚物，其中R1的作用可以包括以下一种或几种调节亲水性和亲脂性，水溶性和脂溶性等；R2的作用包括调节极性和溶解性；可以根据不同的目的进行不同的结构修饰；
4.根据权利要求1的聚乙二醇(PEG)为环氧乙烷和水缩聚而成的混合物，其分子量范围为200-20000。
5.根据权利要求2中的甾醇，其特征在于优选胆固醇。
6.根据权利要求1中的R1，其特征在于优选-H、-CH3或-COCH3。
7.根据权利要求1中的R2，其特征在于优选直链或支链烷，-CH2(CH2)nCH2-，-CH2C(CH3)2-CH2-(CH2)n-，其中n在2-12之间。
8.根据权利要求1的共聚物，聚乙二醇与甾醇之间通过R2用醚键相连，基本合成路线为R2与二氯亚砜反应生成氯化物，再与甾醇反应得到R2-O-ChOL，然后与PEG形成醚；合成过程中二氯亚砜为卤化剂，氢化钠为碱，中和反应生成的HCl，此处碱不局限于NaH，还包括其他的有机或无机碱，如甲醇钠、碳酸钾、氢氧化钠、三乙胺和吡啶等。
9.根据权利要求1的共聚物的应用，可以作为疏水药物的载体，也可以作为高级化妆品的辅料，也可以用于皮下注射消除皱纹。
全文摘要
本发明是将PEG通过小分子的化合物以醚键接枝于甾醇(ChOL)合成共聚物(PGC)，该共聚物(PGC)可以作为表面活性剂用来制备水溶液分散体比如纳米乳剂，脂质体；也可以作为载体成分之一用来制备能分散于水的胶束、固体脂质纳米粒或纳米粒；还可以作为长循环纳米、温度或pH敏感性纳米载体成分之一；也可以作为高级化妆品的辅料；也可以用于皮下注射消除皱纹。
文档编号C08G65/06GK1962683SQ200610168130
公开日2007年5月16日 申请日期2006年12月18日 优先权日2006年12月18日
发明者张文芳 申请人:张文芳