包含α‑淀粉酶的液体洗涤剂组合物的制作方法

本发明涉及包含表面活性剂体系和α-淀粉酶的液体洗涤剂组合物。更特别地，本发明涉及液体洗涤剂组合物，其包含至少3wt.%的表面活性剂体系和α-淀粉酶，所述表面活性剂体系包含10至60wt.%的直链烷基苯磺酸盐(LAS)表面活性剂。
背景技术：
：包含阴离子表面活性剂如烷基苯磺酸盐(LAS)和α-淀粉酶的水性液体洗涤剂组合物是本领域公知的。例如，US-A-4537706(Severson)公开了多种液体洗涤剂组合物，其包含至少5wt.%的表面活性剂体系和α-淀粉酶，所述表面活性剂体系包含直链烷基苯磺酸盐(LAS)表面活性剂、月桂基乙氧基硫酸钠(SLES)、非离子型、脂肪酸。α-淀粉酶(α-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶，E.C.3.2.1.1)构成一组催化淀粉和其他直链或支链的1,4-糖苷寡糖和多糖水解的酶。在第一细菌α-淀粉酶中，待使用的是来自地衣芽孢杆菌的α-淀粉酶，也被称为Termamyl™，其已被广泛地表征并且已经确定了该酶的晶体结构。Termamyl™和许多其他高度有效的α-淀粉酶需要钙用于活性。对于Termamyl™，已发现在由带负电荷的氨基酸残基配位的α-淀粉酶结构中结合四个钙原子。在其他α-淀粉酶中，结合在结构中的钙离子的量可以是不同的。在其中存在强螯合化合物的应用中，如洗涤剂中，对钙的这种要求是不利的，而在其他应用，如淀粉的液化和生物燃料的生产中通常不添加螯合剂。含这样的α-淀粉酶的液体洗涤剂组合物所遇到的主要问题在于，常常期望酶在洗涤剂组合物中的储存稳定性。在蛋白酶的存在下特别难以稳定淀粉酶，所述蛋白酶在水性液体或凝胶洗涤剂组合物中可以容易地降解淀粉酶。与含这样的液体洗涤剂的洗涤剂组合物相关的另一个问题在于，阴离子表面活性剂，特别是烷基苯磺酸盐(LAS)具有使酶，如α-淀粉酶失活的倾向。出于这个原因，US-A-4537706(Severson)利用了酶稳定体系，其包含硼酸或碱金属硼酸盐与钙离子、以及优选的多元醇的混合物。这样的包含硼酸或碱金属硼酸盐与钙离子、以及优选的多元醇的混合物的酶稳定体系具有的缺点在于，这些成分本身对清洁活性没有贡献。此外，在其中存在强螯合化合物的应用中，如洗涤剂和清洁组合物中，对钙的要求是不利的。将钙添加到液体洗涤剂中还可能存在制剂方面，即洗涤剂的物理稳定性的问题。出于环境的原因，硼是较不优选的。近来，已开发了在螯合剂的存在下更稳定的α-淀粉酶。例如，WO-A-2011/100410(Procter&Gamble)公开了清洁组合物，其包含可由芽孢杆菌菌株NCIB12289、NCIB12512、NCIB12513和DSM9375中的任一种获得的α-淀粉酶SP722的变体。这些α-淀粉酶变体中的一些在阴离子表面活性剂和螯合剂的存在下在pH8.2下表现出良好的储存稳定性。WO-A-2011/082429(Novozymes)公开了大量的其他具有降低的钙敏感性的α-淀粉酶变体，其包含钙敏感的α-淀粉酶的A-结构域、钙不敏感的α-淀粉酶的B-结构域、和钙敏感的α-淀粉酶的C-结构域。这些变体据称可用于多种应用，即可用于淀粉加工(例如液化)；湿磨工艺；由碳水化合物源进行的醇生产；洗涤剂；洗餐具组合物；纺织工业中的淀粉退浆；烘焙应用；饮料工业；钻井工艺中的油田；回收工艺，例如用于脱墨纸，和动物饲料。由于这些不同的α-淀粉酶的应用中的条件相当不同，因此对于各特定应用开发不同的α-淀粉酶。因此，针对碱性pH(高于8)和相对低的温度(15-60℃)的应用优化洗涤剂α-淀粉酶，而针对酸性pH(低于6)和高于80℃的温度优化用于生产生物燃料或淀粉液化的α-淀粉酶。因此，不期望被设计用于液化或生物燃料生产的淀粉酶会适合用于洗涤剂。仍存在对提供进一步的或改进的包含阴离子表面活性剂的液体洗涤剂组合物的需求，所述液体洗涤剂组合物是储存稳定的并显示出良好的清洁性能，而不需要酶稳定体系，即使所述组合物包含螯合剂。将螯合剂并入洗涤剂组合物中以降低洗涤过程中的水硬度，它们保护了还可能存在的漂白剂，并且它们还可能进一步对某些污渍的去除具有直接影响。另外，发现α-淀粉酶有时在含有它们的液体洗涤剂组合物中引起恶臭问题。因此，本发明的一个目的在于提供包含α-淀粉酶和阴离子表面活性剂的液体洗涤剂组合物，所述组合物与含有紧密相关的α-淀粉酶的组合物相比具有改进的储存稳定性和/或储存后的洗涤性能。本发明的另一个目的在于提供包含α-淀粉酶的液体洗涤剂组合物，其可以用于包含螯合剂的洗衣清洁组合物中。最后，本发明的另一个目的在于提供包含α-淀粉酶的液体洗涤剂组合物，其避免了有时观察到的恶臭问题。我们现已出乎意料地发现，这些目的中的一个或多个可以通过根据本发明的液体洗涤剂组合物来实现，所述组合物包含：a)至少5wt.%的水；b)至少3wt.%的表面活性剂体系，其包含以表面活性剂体系的重量计10至100%的阴离子性表面活性剂；c)具有与SEQIDNO:1至少85%的序列一致性的α-淀粉酶，并且当使用SEQIDNO:1进行编号时，所述α-淀粉酶包含取代G46A+T47I+G105A+I199F。还已出乎意料地发现，根据本发明的液体洗涤剂组合物可以克服某些恶臭问题。技术实现要素：根据本发明的第一个方面，提供液体洗涤剂组合物，其包含：a)至少5wt.%的水，b)至少3wt.%的混合表面活性剂体系，其包含以表面活性剂体系的重量计10至100%的阴离子性表面活性剂，c)具有与SEQIDNO:1至少85%的序列一致性的α-淀粉酶，并且当使用SEQIDNO:1进行编号时，所述α-淀粉酶包含取代G46A+T47I+G105A+I199F。本发明的第二个方面涉及这样的α-淀粉酶用于洗衣的用途。根据本发明的第三个方面，提供洗涤织物的方法，其包括用上述液体洗涤剂组合物、优选在40℃或更低的温度下洗涤织物。具体实施方式定义α-淀粉酶:(α-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶，E.C.3.2.1.1)构成一组催化淀粉以及其他直链和支链的1,4-糖苷寡糖和多糖水解的酶。如在本文中使用的，“α-淀粉酶”意指具有α-淀粉酶活性的酶。SEQIDNO:1的α-淀粉酶：该SEQIDNO1的淀粉酶是人造的并且可以通过本领域已知的方法来制造。SEQIDNO:2的α-淀粉酶：其是SEQIDNO:1的淀粉酶但具有取代G46A+T47I+G105A+I199F。等位基因变体：术语“等位基因变体”意指占据相同的染色体基因座的基因的两种或更多种可替代形式中的任一种。等位基因变异通过突变自然产生，并可能导致种群内的多态性。基因突变可以是沉默的(在编码的多肽中没有变化)或者可以编码具有改变的氨基酸序列的多肽。多肽的等位基因变体是由基因的等位基因变体编码的多肽。cDNA：术语“cDNA”意指可以通过获自真核细胞或原核细胞的成熟的、剪接的mRNA分子进行逆转录来制备的DNA分子。cDNA缺少可存在于相应的基因组DNA中的内含子序列。初始的初级RNA转录物是mRNA的前体，其在表现为成熟的剪接的mRNA之前通过包括剪接的一系列步骤进行处理。编码序列：术语“编码序列”意指多核苷酸，其直接指定变体的氨基酸序列。编码序列的边界通常由开放阅读框确定，其以起始密码子，如ATG、GTG或TTG开始并以终止密码子，如TAA、TAG或TGA结束。编码序列可以是基因组DNA、cDNA、合成DNA、或者它们的组合。控制序列：术语“控制序列”意指编码本发明的变体的多核苷酸的表达所需要的核酸序列。每个控制序列可以对于编码变体的多核苷酸而言是天然的(即来自相同的基因)或外源的(即来自不同的基因)，或者对于彼此而言是天然的或外源的。这样的控制序列包括但不限于前导序列、聚腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号肽序列、和转录终止子。在最低限度的情况下，控制序列包括启动子、以及转录和翻译的终止信号。出于引入促进控制序列与编码变体的多核苷酸的编码区相连接的特异性限制位点的目的，控制序列可以提供有接头。表达：术语“表达”包括在产生变体中涉及的任何步骤，包括但不限于转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰、和分泌。表达载体：术语“表达载体”意指包含编码变体的多核苷酸且可操作地与提供其表达的控制序列连接的线性或环状DNA分子。宿主细胞：术语“宿主细胞”意指易受包含本发明的多核苷酸的核酸构建体或表达载体的转化、转染、转导等影响的任何细胞类型。术语“宿主细胞”涵盖由于在复制过程中发生变异而不同于亲本细胞的亲本细胞的后代。改进的特性：术语“改进的特性”意指与亲本或者最接近的现有技术的淀粉酶相比改进的与变体或α-淀粉酶相关的特征。这样的改进的特性包括但不限于催化效率、催化速率、化学稳定性、pH活性、pH稳定性、比活性、储存条件下的稳定性、洗涤性能和储存后的洗涤性能，其中储存期可以为在30、37、40或45℃下1、2、3、4、5、6、7、8或更多周。分离的：术语“分离的”意指在非天然生成的形式或环境中的物质。分离的物质的非限制性实例包括：(1)任何非天然生成的物质；(2)至少部分从一种或多种或者所有在自然界中与其相关的天然生成的成分中除去的任何物质，包括但不限于任何酶、变体、核酸、蛋白质、肽、或辅因子；(3)相对于自然界中发现的物质，通过人工修饰的任何物质；或者(4)通过提高物质相对于与其天然相关的其他组分的量来修饰的任何物质(例如，编码所述物质的基因的多重副本；使用比与编码所述物质的基因天然相关的启动子更强的启动子)。分离的物质可以存在于发酵液样品中。突变体：术语“突变体”意指编码变体的多核苷酸。核酸构建体：术语“核酸构建体”意指包含一个或多个控制序列的单链或双链的核酸分子，其从天然生成的基因中分离，或者将其以本来不存在于自然界中的方式修饰以含有核酸的区段，或者其是合成的。亲本或亲本α-淀粉酶:术语“亲本”或“亲本α-淀粉酶”意指对其进行改变以产生酶变体的α-淀粉酶。SEQIDNO:1的α-淀粉酶可以被称为亲本，而例如含有取代G46A、T47I、G105A和I199F中的一个或多个的SEQIDNO:1的α-淀粉酶可以被称为SEQIDNO:1的α-淀粉酶的变体。亲本也可以是天然生成的(野生型)多肽或其变体或片段、或者具有与SEQIDNO:1的α-淀粉酶至少80%的序列一致性的另一种α-淀粉酶，例如具有与SEQIDNO:1的α-淀粉酶至少85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、或至少99%的序列一致性。序列一致性：两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的相关性由参数“序列一致性”来描述。出于本发明的目的，两个氨基酸序列之间的序列一致性通过使用如在EMBOSS包(EMBOSS：TheEuropeanMolecularBiologyOpenSoftwareSuite，Rice等人，2000，TrendsGenet.16：276-277)(优选5.0.0版本或更新的版本)的Needle程序中执行的Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch，1970，J.Mol.Biol.48：443453)来确定。所使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5、以及EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)取代矩阵。标记为“最长一致性”的Needle的输出(使用-nobrief选项得到)作为百分比一致性使用，并计算如下：(相同的残基×100)/(比对长度-比对中的空位总数)。变体：术语“变体”意指在一个或多个(例如数个)位置处包含改变(即，取代、插入、和/或缺失)的具有α-淀粉酶活性的多肽。取代意指用不同的氨基酸替代占据某位置的氨基酸；缺失意指除去占据某位置的氨基酸；并且插入意指邻接并紧接着占据某位置的氨基酸添加氨基酸。本发明的α-淀粉酶变体优选在37℃下在液体洗涤剂模型B中储存两周后具有初始α-淀粉酶活性的至少90%、至少95%、或至少100%。野生型α-淀粉酶：术语“野生型”α-淀粉酶意指由天然存在的微生物，如在自然界中发现的细菌、酵母或丝状真菌表达的α-淀粉酶。洗涤性能：术语“洗涤性能”被用作酶在例如洗涤或硬表面清洁过程中除去存在于待清洁的物体上的污渍的能力。洗涤性能可以通过计算如在本文的定义中所描述的所谓的Δ缓解(remission)值(ΔRem)来进行量化。Δ缓解值(ΔRem)：术语“Δ缓解”或“Δ缓解值”在本文中被定义为在460nm下对受试材料，如样本CS-28(CenterForTestmaterialsBV，P.O.Box120，3133KTVlaardingen，theNetherlands)进行的反射率或缓解测量的结果。将样本与至少一个在相同条件下洗涤的作为背景的其他样本一起测量。Δ缓解是用淀粉酶洗涤的受试材料的缓解值减去未用淀粉酶洗涤的受试材料的缓解值。改进的洗涤性能：术语“改进的洗涤性能”在本文中被定义为(变体)酶(还有酶的共混物，其不一定只是变体而且还有骨架，并且与某些清洁组合物等组合)显示出洗涤性能的改变，例如通过提高的污渍去除。洗涤剂组合物本发明的洗涤剂组合物在环境温度(例如25℃)下为液体。它们可以是各向同性的或者结构化的，并且它们的粘度可以为相当低至非常高，使得它们可以类似于凝胶。它们包含至少5wt.%的水，并且优选是水性的，由此水形成组合物中的大部分溶剂。可以少于水的量包含水溶助长剂，如丙二醇和丙三醇/甘油作为助溶剂。在组合物中需要水，从而将表面活性剂、任何聚合物、可溶性助洗剂、酶等保持在溶液中。所述的水量包括游离水和任何结合水两者。组合物中的水量优选为至少20wt.%，更优选为至少30wt.%。表面活性剂体系根据本发明的液体洗涤剂包含至少3wt.%的表面活性剂体系，所述表面活性剂体系包含以表面活性剂体系的重量计10至100%的阴离子性表面活性剂。优选地，液体洗涤剂包含至少3wt.%至约40wt.%的表面活性剂体系，例如约5%至约30%、包括约5%至约15%、或者约20%至约25%的表面活性剂体系。表面活性剂体系可以完全由一种或多种阴离子表面活性剂构成，但其还可以包含其他表面活性剂，例如非离子表面活性剂和/或阳离子表面活性剂。基于应用的类型来选择一种或多种表面活性剂，并且其包括本领域中已知的任何常规的一种或多种表面活性剂。形成表面活性剂体系的表面活性剂可以选自在下述中描述的表面活性剂：“SurfaceActiveAgents”卷1，Schwartz和Perry著，Interscience1949，卷2，Schwartz、Perry和Berch著，Interscience1958；“McCutcheon'sEmulsifiersandDetergents”，ManufacturingConfectionersCompany出版；或者“TensideTaschenbuch”，H.Stache，第二版，CarlHauserVerlag，1981。阴离子表面活性剂的非限制性实例包括硫酸盐和磺酸盐，特别是直链烷基苯磺酸盐(LAS)、LAS的异构体、支链烷基苯磺酸盐(BABS)、苯基烷烃磺酸盐、α-烯烃磺酸盐(AOS)、烯烃磺酸盐(olefinsulfonate)、链烯烃磺酸盐(alkenesulfonate)、烷烃-2,3-二基双(硫酸盐)、羟基烷烃磺酸盐和二磺酸盐、烷基硫酸盐(AS)如十二烷基硫酸钠(SDS)、脂肪醇硫酸盐(FAS)、伯醇硫酸盐(PAS)、醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES，也被称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐)、仲烷烃磺酸盐(SAS)、链烷烃磺酸盐(PS)、酯磺酸盐、磺化的脂肪酸甘油酯、α-磺基脂肪酸甲酯(α-SFMe或SES)包括甲酯磺酸盐(MES)、烷基-或烯基-琥珀酸、十二烯基/十四烯基琥珀酸(DTSA)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺基琥珀酸的二酯或单酯或者皂、以及它们的组合。优选的醇醚硫酸盐是月桂基醚硫酸钠或者SLES。高度优选的表面活性剂体系包含两种不同的阴离子表面活性剂，优选直链烷基苯磺酸盐和硫酸盐，例如LAS和SLES。阴离子表面活性剂还可以包括皂(脂肪酸的盐)。优选的皂通过中和氢化椰子脂肪酸如Prifac(R)5908(来自Croda)来制造。还可以使用饱和和不饱和的脂肪酸的混合物。优选地，表面活性剂体系包含以表面活性剂体系的重量计10至100%、更优选25至50%的直链烷基苯磺酸盐(LAS)。甚至更优选地，表面活性剂体系包含以表面活性剂体系的重量计5至75%的直链烷基苯磺酸盐(LAS)和以表面活性剂体系的重量计5至90%的月桂基醚硫酸钠(SLES)。除了阴离子表面活性剂之外，洗涤剂组合物通常将含有以表面活性剂体系的重量计约0.2%至约50%的的非离子表面活性剂，例如表面活性剂体系的约0.5%至约30%、特别是约1%至约20%、约3%至约10%、例如约3%至约5%、或约8%至约12%。合适的非离子表面活性剂包括醇乙氧基化物(AE或AEO)、醇丙氧基化物、丙氧基化脂肪醇(PFA)、烷氧基化脂肪酸烷基酯如乙氧基化和/或丙氧基化脂肪酸烷基酯、烷基酚乙氧基化物(APE)、壬基酚乙氧基化物(NPE)、烷基多糖苷(APG)、烷氧基化胺、脂肪酸单乙醇酰胺(FAM)、脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)、乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM)、丙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM)、多羟基烷基脂肪酸酰胺、或氨基葡萄糖的N-酰基N-烷基衍生物(葡糖酰胺，GA或脂肪酸葡糖酰胺，FAGA)、以及可以商品名SPAN和TWEEN获得的产品、以及它们的组合。优选的非离子表面活性剂是每分子包含3至9个环氧乙烷单元的C12-C18乙氧基化醇。更优选的是具有平均5至9个环氧乙烷基团、更优选平均7个环氧乙烷基团的C12-C15伯、直链乙氧基化醇。根据本发明的特别优选的液体洗涤剂包含以表面活性剂体系的重量计5至75%的直链烷基苯磺酸盐(LAS)、以表面活性剂体系的重量计5至90%的月桂基醚硫酸钠(SLES)、和以表面活性剂体系的重量计5至60%的非离子表面活性剂。一种或多种表面活性剂通常以重量计约0.1%至60%、例如约1%至约40%、或约3%至约20%、或约3%至约10%的水平存在。基于所需的清洁应用来选择一种或多种表面活性剂，并且其包括本领域已知的任何常规的一种或多种表面活性剂。可以利用本领域已知的用于洗涤剂的任何表面活性剂。如果需要，根据本发明的液体洗涤剂组合物还可以含有以重量计约0%至约10%的阳离子表面活性剂。阳离子表面活性剂的非限制性实例包括烷基二甲基乙醇胺季铵(ADMEAQ)、鲸蜡基三甲基溴化铵(CTAB)、二甲基二硬脂基氯化铵(DSDMAC)、和烷基苯甲基二甲基铵、烷基季铵化合物、烷氧基化季铵(AQA)化合物、以及它们的组合。根据本发明的液体洗涤剂组合物还可以含有以重量计约0%至约10%的半极性表面活性剂。半极性表面活性剂的非限制性实例包括胺氧化物(AO)如烷基二甲基氧化胺、N-(椰油烷基)-N,N-二甲基氧化胺、和N-(牛油-烷基)-N,N-双(2-羟基乙基)氧化胺、脂肪酸烷醇酰胺、和乙氧基化脂肪酸烷醇酰胺、以及它们的组合。最后，根据本发明的液体洗涤剂组合物还可以含有以重量计约0%至约10%的两性离子表面活性剂。两性离子表面活性剂的非限制性实例包括内铵盐(betaine)、烷基二甲基内铵盐、磺基内铵盐、以及它们的组合。α-淀粉酶变体的命名惯例和氨基酸位置编号出于本发明的目的，使用在SEQIDNO:1中公开的成熟多肽来确定另一种α-淀粉酶中的对应的氨基酸残基。将另一种α-淀粉酶的氨基酸序列与SEQIDNO:1中公开的成熟多肽比对，并且基于该比对，使用如在EMBOSS包(EMBOSS：TheEuropeanMolecularBiologyOpenSoftwareSuite，Rice等人，2000，TrendsGenet.16：276277)(优选5.0.0版本或更新的版本)的Needle程序中执行的Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch，1970，J.Mol.Biol.48：443453)来确定与SEQIDNO:1中所公开的成熟多肽中的任何氨基酸残基对应的氨基酸位置编号。所使用的参数：空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5、以及EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)取代矩阵。可以使用多个计算机程序、使用其各自的默认参数通过多个多肽序列的比对来确定在另一种α-淀粉酶中的对应氨基酸残基的识别，所述计算机程序包括但不限于MUSCLE(通过对数预期进行的多个序列比较；版本3.5或更新；Edgar，2004，NucleicAcidsResearch32：1792-1797)、MAFFT(版本6.857或更新；Katoh和Kuma，2002，NucleicAcidsResearch30：3059-3066；Katoh等人，2005，NucleicAcidsResearch33：511-518；Katoh和Toh，2007，Bioinformatics23：372-374；Katoh等人，2009，MethodsinMolecularBiology537：39-64；Katoh和Toh，2010，Bioinformatics26：1899-1900)、以及采用ClustalW的EMBOSSEMMA(1.83或更新；Thompson等人，1994，NucleicAcidsResearch22：4673-4680)。当其他酶与SEQIDNO:1的成熟多肽相背离使得传统的基于序列的比较不能检测它们的关系时(Lindahl和Elofsson，2000，J.Mol.Biol.295：613-615)，可以使用其他的成对序列比较算法。可以使用搜索程序来获得基于序列的搜索中的更大灵敏度，所述搜索程序利用多肽家族的概率表示(谱)来搜索数据库。例如，PSI-BLAST程序通过迭代数据库搜索方法来生成谱，并且能够检测远距离同源物(Atschul等人，1997，NucleicAcidsRes.25：3389-3402)。如果多肽的家族或超家族在蛋白质结构数据库中具有一个或多个代表，则可以实现甚至更大的灵敏度。程序如GenTHREADER(Jones，1999，J.Mol.Biol.287：797-815；McGuffin和Jones，2003，Bioinformatics19：874-881)利用来自不同来源(PSI-BLAST、二级结构预测、结构比对谱以及溶剂化势)的信息作为预测查询序列的结构折叠的神经网络的输入。类似地，Gough等人，2000，J.Mol.Biol.313：903-919的方法可以用于比对未知结构的序列与存在于SCOP数据库中的超家族模型。这些比对反过来可以用于生成多肽的同源性模型，并且可以可以使用出于该目的而开发的多种工具来评定这样的模型的准确度。对于已知结构的蛋白质，多种工具和资源可用于检索并生成结构比对。例如，蛋白质的SCOP超家族已经在结构上进行比对，并且那些比对是可访问并可下载的。可以使用多种算法如距离比对矩阵(Holm和Sander，1998，Proteins33：88-96)或组合延伸(Shindyalov和Bourne，1998，ProteinEngineering11：739-747)来比对两种或更多种蛋白质结构，并且这些算法的实施可以另外用于查询具有感兴趣结构的结构数据库，以发现可能的结构同源物(例如Holm和Park，2000，Bioinformatics16：566-567)。在描述本发明的变体中，下文所述的命名法适于方便参考。采用已接受的IUPAC单字母或三字母氨基酸缩写。取代。对于氨基酸取代，使用以下命名法：原始氨基酸、位置、取代的氨基酸。相应地，在位置226处用丙氨酸取代苏氨酸表示为“Thr226Ala”或者“T226A”。多个突变由加号(“+”)分开，例如“Gly205Arg+Ser411Phe”或“G205R+S411F”分别代表在位置205和位置411处用精氨酸(R)取代甘氨酸(G)、并且用苯丙氨酸(F)取代丝氨酸(S)。缺失。对于氨基酸缺失，使用以下命名法：原始氨基酸、位置、*。相应地，在位置195处的甘氨酸缺失表示为“Gly195*”或者“G195*”。多重缺失通过加号(“+”)分开，例如，“Gly195*+Ser411*”或“G195*+S411*”。插入。对于氨基酸插入，使用以下命名法：原始氨基酸、位置、原始氨基酸、插入的氨基酸。相应地，在位置195处的甘氨酸之后插入赖氨酸表示为“Gly195GlyLys”或者“G195GK”。多个氨基酸的插入表示为[原始氨基酸、位置、原始氨基酸、插入的氨基酸#1、插入的氨基酸#2；等]。例如，在位置195处的甘氨酸之后插入赖氨酸和丙氨酸表示为“Gly195GlyLysAla”或“G195GKA”。在这样的情况下，通过对插入的一个或多个氨基酸残基之前的氨基酸残基的位置编号添加小写字母来编号插入的一个或多个氨基酸残基。在以上实例中，序列因此将是：亲本：变体：195195195a195bGG–K-A多重改变。包含多重改变的变体由加号(“+”)分开，例如“Arg170Tyr+Gly195Glu”或者“R170Y+G195E”代表在位置170和位置195处分别用酪氨酸和谷氨酸取代精氨酸和甘氨酸。不同改变。在可以在一个位置处引入不同改变的情况下，不同改变由逗号分开，例如“Arg170Tyr,Glu”代表在位置170处用酪氨酸或谷氨酸取代精氨酸。因此，“Tyr167Gly,Ala+Arg170Gly,Ala”表示以下变体：“Tyr167Gly+Arg170Gly”、“Tyr167Gly+Arg170Ala”、“Tyr167Ala+Arg170Gly”以及“Tyr167Ala+Arg170Ala”。本发明涉及包含α-淀粉酶的液体洗涤剂组合物，所述α-淀粉酶至少包括具有与SEQIDNO:1至少85%的序列一致性的α-淀粉酶，并且当使用SEQIDNO:1进行编号时，所述α-淀粉酶包含取代G46A+T47I+G105A+I199F。α-淀粉酶还可以包含进一步的改变。例如，淀粉酶可以进一步包含1-20个改变，例如1-10、或者1-5，如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个进一步的改变，其中，改变独立地为取代、缺失和/或插入，并且改变相对于SEQIDNO:1的氨基酸序列。氨基酸变化或改变可以具有微小性质，即，不会显著地影响蛋白质的折叠和/或活性的保守的氨基酸取代或插入；典型的1-30个氨基酸的小缺失；小的氨基-或羧基-末端延伸，例如氨基末端的蛋氨酸残基；最多20-25个残基的小接头肽；或通过改变净电荷或另一种功能来促进纯化的小延伸，例如聚组氨酸段(tract)、抗原表位或结合结构域。保守取代的实例是在下组的范围内：碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸和组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸)、芳族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸)及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸和蛋氨酸)。通常不会改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的并且例如由H.Neurath和R.L.Hill，1979，在“TheProteins”，AcademicPress，NewYork中所描述。常见取代是Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu以及Asp/Gly。可替代地，氨基酸变化具有使多肽的物理化学特性改变的性质。例如，氨基酸变化可以提高多肽的热稳定性、改变底物特异性、改变最适pH等。可以根据本领域中已知的程序，例如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(Cunningham和Wells，1989，Science244：1081-1085)来识别多肽中的必需氨基酸。在后一种技术中，在分子中的每个残基处引入单个丙氨酸突变，并且测试所得突变分子的α-淀粉酶活性以识别对分子的活性而言关键的氨基酸残基。还参见Hilton等人，1996，J.Biol.Chem.271：4699-4708。也可结合推定的接触位点氨基酸的突变，如通过例如核磁共振、结晶学、电子衍射、或光亲和标记的技术确定的结构的物理学分析来确定酶的活性位点或其他生物学相互作用。参见例如deVos等人，1992，Science255：306-312；Smith等人，1992，J.Mol.Biol.224：899-904；Wlodaver等人，1992，FEBSLett.309：59-64。还可以由与相关多肽的比对来推断识别必需氨基酸。在另外的实施方案中，本发明的液体洗涤剂组合物的淀粉酶具有与SEQIDNO:1的淀粉酶至少86%、或至少87%、或至少88%、或至少89%、或至少90%、或至少91%、或至少92%、或至少93%、或至少94%、或至少95%、或至少96%、或至少97%、或至少98%、或至少99%但少于100%的序列一致性，并包含取代G46A+T47I+G105A+I199F。由此，提供了在储存后具有改进的稳定性和/或活性、和/或在储存液体洗涤剂后对含淀粉的污渍具有改进的洗涤性能的液体洗涤剂组合物。储存期可以为至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、或至少26周，或者甚至更长的时间段。储存过程中的温度可以是任何相关的温度，例如20和40℃之间，例如20、22、25、30、35、37、或40℃。本发明人已发现，例如在40℃下储存1周后或者在37℃下储存2周后，本发明的液体洗涤剂与包含SEQIDNO:1的α-淀粉酶的相同液体洗涤剂相比具有改进的洗涤性能，特别是对含淀粉的污渍(参见下述实施例)。在洗涤性能方面的这种改进的一个原因可能在于具有上述在SEQIDNO:1中的取代的淀粉酶与SEQIDNO:1的淀粉酶相比具有在液体洗涤剂中的改进的稳定性。因此，在一个实施方案中，本发明涉及包含如上所定义的α-淀粉酶的液体洗涤剂组合物，所述α-淀粉酶相对于SEQIDNO:1的α-淀粉酶而言具有在液体洗涤剂中的改进的储存稳定性。改进的储存稳定性可以被确定为1至8周，例如2-6周，优选2、3、4、5或6周的储存期后的残留活性(参见实施例)。在另一个实施方案中，本发明涉及包含如上所描述的淀粉酶的液体洗涤剂组合物，其中，所述液体洗涤剂组合物相对于包含SEQIDNO:1的α-淀粉酶的液体洗涤剂组合物而言具有将液体洗涤剂在37℃下储存2周后的改进的洗涤性能。在本发明的其他实施方案中，液体洗涤剂组合物进一步包含一种或多种螯合剂。如上所述，可以将螯合剂添加至洗涤剂组合物。这些试剂起降低组合物中的游离钙离子浓度的作用。但是，大多数α-淀粉酶需要钙离子用于活性。本发明人已发现，如权利要求1中定义的α-淀粉酶在包含螯合剂的液体洗涤剂中出乎意料地稳定，并且其甚至在包含高或者非常高浓度的螯合剂的液体洗涤剂中是稳定的。螯合剂用于降低游离钙离子浓度的能力可以根据实施例5来表征(还参见表12.1)。在一个实施方案中，根据本发明的液体洗涤剂以至少0.25%w/w，例如至少0.3%、或至少0.4，如至少0.5、或0.6、0.7、0.8、0.9、1.0%w/w、或甚至至少1.5%w/w的浓度包含螯合剂。优选的是，螯合剂具有的降低游离钙离子浓度的能力等于或好于0.25%w/w下的螯合剂HEDP的降低游离钙离子浓度的能力。该降低游离钙的能力可以在21℃或在37℃下在模型洗涤剂2的液体洗涤剂中测量。因此，螯合剂应当以使得降低游离钙离子浓度的能力至少等于0.25%w/w下的HEDP的所述能力的浓度来添加。即，如果在液体洗涤剂或如下所述的缓冲液中使用具有的降低游离钙离子浓度的能力低于同等浓度下的HEDP的所述能力的螯合剂，则螯合剂应当以更高的浓度来添加从而达到至少等于0.25%w/w下的HEDP的所述能力的降低游离钙离子浓度的能力。影响降低游离钙离子浓度的能力的因素是本领域技术人员公知的。它们包括对钙的结合亲和力以及螯合剂的浓度。在另一个实施方案中，螯合剂以对应于添加至少0.3%、或至少0.4，例如至少0.5、或0.6、0.7、0.8、0.9、或1.0%w/w的HEDP、或者甚至至少1.5%、1.7%、1.8%、1.9%、或至少2.0%w/w的HEDP的量添加至液体洗涤剂。因此，螯合剂应当以使得液体洗涤剂中的降低游离钙离子浓度的能力至少等于至少0.3%、或至少0.4，例如至少0.5、或0.6、0.7、0.8、0.9、或1.0%w/w的HEDP、或者甚至至少1.5%、1.7%、1.8%、1.9%、或至少2.0%w/w的浓度下的HEDP的所述能力的浓度来添加。在另一个实施方案中，降低游离钙离子浓度的能力通过在21℃和pH8.0下测量80mM的氯化钾和49mM的EPPS中的所述能力来进行比较。螯合剂的降低游离钙离子浓度的能力进一步在下述“表征螯合剂”下进行描述。在一个实施方案中，螯合剂是HEDP。在其他实施方案中，本发明的液体洗涤剂包含至少0.25%w/wHEDP，例如至少0.3%、或至少0.4，如至少0.5、或0.6、0.7、0.8、0.9、或1.0%w/w、或者至少1.2%、1.3%、1.4%、1.5%、1.6%、1.7%、1.8%、1.9%、或至少2.0%w/w的HEDP。在另一个实施方案中，本发明的液体洗涤剂以使得所述洗涤剂中的螯合能力至少对应于添加0.25%w/wHEDP时所获得的螯合能力的浓度包含一种或多种螯合剂。在另一个实施方案中，本发明的液体洗涤剂以使得所述洗涤剂中的螯合能力至少对应于添加0.3%w/wHEDP时所获得的螯合能力的浓度包含一种或多种螯合剂。在另一个实施方案中，本发明的液体洗涤剂以使得所述洗涤剂中的螯合能力至少对应于添加0.4%w/wHEDP时所获得的螯合能力的浓度包含一种或多种螯合剂。在另一个实施方案中，本发明的液体洗涤剂以使得所述洗涤剂中的螯合能力至少对应于添加0.5%w/wHEDP时所获得的螯合能力的浓度包含一种或多种螯合剂。在另一个实施方案中，本发明的液体洗涤剂以使得所述洗涤剂中的螯合能力至少对应于添加0.6%w/wHEDP时所获得的螯合能力的浓度包含一种或多种螯合剂。在另一个实施方案中，本发明的液体洗涤剂以使得所述洗涤剂中的螯合能力至少对应于添加0.7%w/wHEDP时所获得的螯合能力的浓度包含一种或多种螯合剂。在另一个实施方案中，本发明的液体洗涤剂以使得所述洗涤剂中的螯合能力至少对应于添加1.0%w/wHEDP时所获得的螯合能力的浓度包含一种或多种螯合剂。在另一个实施方案中，本发明的液体洗涤剂以使得所述洗涤剂中的螯合能力至少对应于添加1.5%w/wHEDP时所获得的螯合能力的浓度包含一种或多种螯合剂。在另一个实施方案中，本发明的液体洗涤剂以使得所述洗涤剂中的螯合能力至少对应于添加2.0%w/wHEDP时所获得的螯合能力的浓度包含一种或多种螯合剂。在另一个实施方案中，螯合剂是DTMPA，其浓度为至少0.25w/w、或至少0.3%、或至少0.4，例如至少0.5、或0.6、0.7、0.8、0.9、或1.0%w/w的HEDP、或者甚至至少1.5%、1.7%、1.8%、1.9%、或至少2.0%w/w。在实例中，可见的是，与包含SEQIDNO:1的淀粉酶的液体洗涤剂相比在包含高浓度的螯合剂的液体洗涤剂(模型洗涤剂2)中，本发明的液体洗涤剂的淀粉酶(例如具有突变G46A+T47I+G105A+I199F的SEQIDNO:1的淀粉酶)具有改进的稳定性和改进的洗涤性能。在更长的储存期和更高的温度下，该差异将会更加明显。因此，本发明的液体洗涤剂组合物具有的优点在于，甚至在高螯合剂能力(对于降低游离钙离子浓度而言)下，淀粉酶也是稳定的，并且具有良好的性能和比Termamyl™或SEQIDNO1的淀粉酶更好的性能。本发明的液体洗涤剂组合物是洗衣洗涤剂组合物。本发明的液体洗涤剂组合物的pH可以是至少7.5、8.0、8.5、或9.0。液体洗涤剂组合物可以进一步以优选0.01至99.9wt%的量包含一种或多种如下所述的清洁助剂。在其他实施方案中，本发明的液体洗涤剂组合物额外地包含一种或多种其他的酶，例如蛋白酶、脂肪酶、过氧化物酶、另外的淀粉水解酶、葡糖淀粉酶、麦芽糖淀粉酶、CGT酶、甘露聚糖酶、角质酶、漆酶和/或纤维素酶。α-淀粉酶可以对应于每升洗涤液0.001-200mg的蛋白质，例如0.005-100mg的蛋白质、优选0.01-50mg的蛋白质，如0.028mg的蛋白质、或更优选0.05-20mg的蛋白质、甚至更优选0.1-10mg的蛋白质的量来添加至液体洗涤剂组合物。尽管这不是严格必须的，可以使用常规的稳定剂来使本发明的洗涤剂组合物的α-淀粉酶稳定，所述稳定剂例如多元醇如丙二醇或丙三醇、糖或糖醇、乳酸、硼酸、或硼酸衍生物如芳族硼酸酯、或苯基硼酸衍生物如4-甲酰基苯基硼酸，并且组合物可以如在例如WO92/19709和WO92/19708中所述的那样进行配制。另外的成分。水溶助长剂水溶助长剂是使疏水化合物溶于水性溶液中(或者相反地，使极性物质溶于非极性环境中)的化合物。典型地，水溶助长剂具有亲水特征和疏水特征两者(如由表面活性剂可知的所谓两亲特性)；但水溶助长剂的分子结构通常不利于自发的自聚集，参见例如Hodgdon和Kaler的综述(2007)，CurrentOpinioninColloid&InterfaceScience12：121-128。水溶助长剂不显示出临界浓度，高于所述临界浓度会发生如对于形成胶束、层状、或其他明确定义的中间相的表面活性剂和脂质而言所发现的自聚集。替代的是，许多水溶助长剂显示出连续型聚集过程，其中聚集体的尺寸随着浓度增加而增加。但是，许多水溶助长剂改变含有极性和非极性特征的物质的体系(包括水、油、表面活性剂和聚合物的混合物)的相行为、稳定性和胶体特性。水溶助长剂典型地用于从制药、个人护理、食品至技术应用的各个行业。在清洁或洗涤剂组合物中使用水溶助长剂允许例如更浓缩的表面活性剂的制剂(如在通过除去水来压缩液体洗涤剂的处理中)，而不引发不期望的现象，例如相分离或高粘度。洗涤剂可以包含以重量计0-25%，例如约0.5至约10%、或约2%至约5%的水溶助长剂。可以利用在本领域中已知的用于洗涤剂的任何水溶助长剂。水溶助长剂的非限制性实例包括苯磺酸钠、对甲苯磺酸钠(STS)、二甲苯磺酸钠(SXS)、异丙苯磺酸钠(SCS)、伞花烃磺酸钠、胺氧化物、醇和聚乙二醇醚、羟基萘甲酸钠、羟基萘磺酸钠、乙基己基硫酸钠、单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、以及它们的组合。助洗剂和共助洗剂洗涤剂组合物可以含有以重量计约0-65%，例如约5%至约45%的洗涤剂助洗剂、或共助洗剂、或者它们的混合物。助洗剂和/或共助洗剂可以特别地是与Ca和Mg形成水溶性配合物的螯合剂。螯合剂或螯合试剂是与某些金属离子形成分子的化学品，其使离子失活使得它们不能与其他元素反应，因此是通过形成螯合物来抑制化学活性的结合剂。螯合是在配体和单个中心原子之间形成或存在两个或多个单独的结合。配体可以是任何有机化合物、硅酸根、或磷酸根。在本上下文中，术语“螯合剂”包括与金属离子如钙和镁形成水溶性配合物的螯合掩蔽剂(chelant)、一种螯合剂、多种螯合剂、配位剂、或多价螯合剂(sequesteringagent)。螯合效应描述了螯合配体对金属离子与相似的非螯合配体的集合对相同金属的亲和力相比提高的亲和力。螯合剂具有与金属离子，特别是钙(Ca2+)离子的结合能力，并已被广泛地在通常用于洗涤，如洗衣、洗餐具的洗涤剂和组合物中使用。但是，螯合剂本身已显示出抑制酶活性。在本申请中，术语螯合剂可与“配位剂”、或“螯合试剂”、或“螯合掩蔽剂”互换地使用。由于大多数α-淀粉酶是钙敏感性的，螯合剂的存在可能损害酶活性。α-淀粉酶的钙敏感性可以通过在强螯合剂的存在下温育给定的α-淀粉酶并分析该温育对所讨论的α-淀粉酶的活性的影响来确定。钙敏感性的α-淀粉酶将在温育过程中失去其主要部分或者全部活性。表征螯合剂：如所提到的螯合效应或螯合作用描述了螯合配体对金属离子与相似的非螯合配体对相同金属的亲和力相比提高的亲和力。但是，该螯合效应的强度可以通过多种类型的测定或测量方法来确定，由此根据它们的螯合效应(或强度)来对螯合剂进行区分或者分级。在一种测定中，螯合剂可以通过它们在pH8.0下将游离钙离子(Ca2+)的浓度由2.0mM降低至0.10mM或更低的能力来表征，例如通过使用基于由M.K.Nagarajan等人，JAOCS，卷61，第9号(1984年9月)，第1475-1478页所描述的方法。使用基于Nagarajan等人的方法的表征螯合剂的一个实例在实施例3a中描述。优选地，根据本发明的螯合剂涵盖能够以下述浓度将游离钙离子浓度由2.0mM降低至0.1mM的螯合剂：所述浓度等于或低于在相同条件下将游离钙离子浓度由2.0mM降低至0.1mM所需的HEDP的浓度。因此，本发明的螯合剂可以具有在相似或相同的条件下与HEDP相等或更好的“游离钙”降低能力。优选地，根据本发明所述的螯合剂涵盖在pH8、21℃下在80mM氯化钾和49mMEPPS((4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-丙磺酸))中测量时，能够以低于10mM、优选低于9.5mM、优选低于9mM、优选低于8.5mM、优选低于8mM、优选低于7.5mM、优选低于7mM、优选低于6.5mM、优选低于6mM、优选低于5.5mM、优选低于5mM、优选低于4.5mM、优选低于4mM、优选低于3.5mM、优选低于3mM、优选低于2.5mM、优选低于2mM、优选低于1.5mM、或优选低于1mM的浓度将游离钙离子浓度由2.0mM降低至0.1mM的螯合剂。在一个特别优选的实施方案中，螯合剂在pH8和21℃下在80mM氯化钾和49mMEPPS中测量并使用钙离子选择性电极来确定游离钙浓度时，能够将游离钙离子浓度由2.0mM降低至0.1mM，如在“材料和方法”下所描述的那样。因此优选地，螯合剂涵盖在pH8和21℃下测试时能够以低于10mM、优选低于9.5mM、优选低于9.0mM、优选低于8.5mM、优选低于8.0mM、优选低于7.5mM、优选低于7.0mM、优选低于6.5mM、优选低于6.0mM、优选低于5.5mM、优选低于5.0mM、优选低于4.5mM、优选低于4.0mM、优选低于3.5mM、优选低于3.0mM、优选低于2.5mM、优选低于2.0mM、优选低于1.5mM、或优选低于1.0mM的浓度将游离钙离子浓度由2.0mM降低至0.1mM的螯合剂，如在“材料和方法”下所描述的那样。在一个特别优选的实施方案中，螯合剂在pH8和21℃下在80mM氯化钾和49mMEPPS中能够以9mM至0.5mM、优选9mM至1mM、优选8mM至1mM、优选7mM至1mM、优选6mM至1mM、优选5mM至1mM、优选4mM至1mM、优选3mM至1mM、优选2mM至1mM、优选9.0mM至1.5mM、优选8.0mM至1.5mM、优选7.0mM至1.5mM、优选6.0mM至1.5mM、优选5.0mM至1.5mM、优选4.0mM至1.5mM、优选3.0至1.5mM、优选2.5mM至1.0mM、优选2.0mM至1.1mM、优选1.85mM至1.0mM的浓度将游离钙离子浓度由2.0mM降低至0.1mM。将游离钙离子浓度由2.0mMCa2+降低至0.10mM对应于将水硬度由200ppm(以CaCO3计，在酸性CO2的存在下呈Ca(HCO3)2的形式)降低至10ppm。最低助洗剂水平由螯合剂的钠盐计算并且基于100%干燥螯合剂计。螯合剂的螯合效应还可以相对于柠檬酸盐进行测量。将能够将游离钙离子浓度的量由2.0mM降低至0.10mM的柠檬酸盐的浓度指定为值1，并将螯合剂的结果与该值进行比较。根据本发明的优选的螯合剂在pH8.0和21℃下测量时能够以与柠檬酸盐的浓度相比低于0.9、例如低于0.8、例如低于0.7、例如低于0.6、例如低于0.5、例如低于0.4、例如低于0.3、例如低于0.2、例如低于0.1倍的更低浓度将游离钙离子浓度由2.0mM降低至0.10mM。根据本发明的优选的螯合剂在21℃和pH8.0下在80mM氯化钾和49mMEPPS中测量并在pH8.0和21℃下使用钙离子选择性电极来确定游离钙离子浓度时，能够以与柠檬酸盐的浓度相比低于0.9、例如低于0.8、例如低于0.7、例如低于0.6、例如低于0.5、例如低于0.4、例如低于0.3、例如低于0.2、例如低于0.1倍的更低浓度将游离钙离子浓度由2.0mM降低至0.10mM。在一个特别优选的实施方案中，螯合剂在pH8.0和21℃下测量时能够以与能够将游离钙离子浓度由2.0mM降低至0.10mM的柠檬酸盐的浓度相比低于1.0至0.1、例如低于0.9至0.1、例如低于0.8至0.1、例如低于0.7至0.1、例如低于0.6至0.1、例如低于0.5至0.1、例如低于0.4至0.1、例如低于0.35至0.1、例如低于0.3至0.1倍的更低浓度将游离钙离子浓度由2.0mM降低至0.10mM。因此，根据本发明的螯合剂能够以下述浓度将游离钙离子浓度由2.0mM降低至0.10mM，所述浓度低于在相同条件下将游离钙离子浓度由2.0mM降低至0.10mM所需的HEDP的浓度。替代地，螯合剂和金属离子如钙和/或镁之间形成的配合物的强度被表达为logK值(平衡或结合或解离或稳定常数)。该常数可以在给定的pH、给定的温度和给定的离子强度下测量。如上所述，螯合剂和金属离子如钙和/或镁之间形成的配合物的强度可以被表达为logK值(平衡或结合或解离或稳定常数)，所述常数可以通过如在A.Nielsen等人，Anal.Biochem.卷314，(2003)，第227-234页中所描述的等温滴定量热法(ITC)来测量，并通过K值可以将logK计算为K值的对数(以10为底数)。通过该方法测量的logK值将取决于温度、pH、离子强度，因此在比较logK值时，重要的是使它们在相似、优选相同的条件下确定。此外，通过引入标准物作为参考，例如柠檬酸盐，可以减少来自实验中的变化的影响。优选将logK如在本申请的“材料和方法”下所述的那样进行确定，因此在本发明的一个实施方案中，当logK在pH10和19℃下如在“材料和方法”下所述的那样进行测量时，根据本发明的组合物中的螯合剂具有至少3、例如至少4、例如至少5、例如至少6、例如至少7、例如至少8、例如至少9、例如至少10、例如至少11的logK。根据本发明的组合物中的螯合剂的logK值还可以为3-11、例如3-10、例如3-9、例如3-8、例如4-11、例如5-11例如6-11、例如4-10、例如5-10、例如4-9、例如5-9、例如4-8、特别是5-8。优选地，根据本发明的组合物中的螯合剂的logK是至少1、例如至少1.33、例如至少1.67、例如至少2、例如至少2.33、例如至少2.67、例如至少3、例如至少3.33、例如至少3.67倍的如在“材料和方法”下所述的那样确定的柠檬酸盐的logK的因子。根据本发明的组合物中的螯合剂还可以具有1-3.67、例如1-3.33、例如1-3.00、例如1-2.67、例如1.33–3.67、例如1.33-3.33、例如1.33-3.00、例如1.33-2.67、例如1.67-3.67、例如1.67-3.33、例如1.67-3、特别是1.67-2.67倍的如在“材料和方法”下所述的那样确定的柠檬酸盐的logK的因子。有用的螯合剂可以是但不限于下述物质：N-(1,2-二羧基乙基)-D,L-天冬氨酸(IDS)、N-(2-羟基乙基)亚氨基二乙酸(EDG)、天冬氨酸-N-单乙酸(ASMA)、天冬氨酸-N,N-二乙酸(ASDA)、天冬氨酸-N-单丙酸(ASMP)、亚氨基二琥珀酸(IDA)、N-(2-磺基甲基)天冬氨酸(SMAS)、N-(2-磺基乙基)天冬氨酸(SEAS)、N-(2-磺基甲基)谷氨酸(SMGL)、N-(2-磺基乙基)谷氨酸(SEGL)、N-甲基亚氨基二乙酸(MIDA)、α-丙氨酸-N,N-二乙酸(α-ALDA)、丝氨酸-N,N-二乙酸(SEDA)、异丝氨酸-N,N-二乙酸(ISDA)、苯丙氨酸-N,N-二乙酸(PHDA)、邻氨基苯甲酸-N,N-二乙酸(ANDA)、磺胺酸-N,N-二乙酸(SLDA)、牛磺酸-N,N-二乙酸(TUDA)、磺基甲基-N,N-二乙酸(SMDA)、N-(羟基乙基)-乙二胺三乙酸(HEDTA)、二乙醇甘氨酸(DEG)、氨基三(亚甲基膦酸)(ATMP)。优选的螯合剂可以含有氨基基团，并可以是例如氨基多羧酸盐或膦酸盐。其可以是包含一个、两个或三个氨基基团(通常为仲或叔氨基基团)的单体分子，并且可以含有两个、三个、四个、或五个羧基基团、或者甚至更多的羧基基团。螯合剂可以是含磷的，或者不含磷的。存在多种将螯合剂分组的方式，一种方式可以如下所述：螯合剂可以是羧酸盐或者基于羧酸根基团，例如EDTA(乙二胺四乙酸盐)、NTA(2,2',2''-次氮基三乙酸盐)、柠檬酸盐、2-羟基丙烷-1,2,3-三羧酸盐、DTPA(二亚乙基三胺五乙酸)、MGDA(甲基甘氨酸二乙酸或N,N’-双(羧基甲基)丙氨酸)、EGTA(乙二醇四乙酸)、EDDS(乙二胺-N,N’-二琥珀酸)、GLDA(L-谷氨酸-N,N-二乙酸)、聚羧酸盐如PAA[聚(丙烯酸)]、PAA/PMA[共聚(丙烯酸/马来酸)]。含磷的螯合剂可以使多聚磷酸盐或膦酸盐，例如三聚磷酸钠(STP)、HEDP(1-羟基乙叉基-1,1-二膦酸)、EDTMP[双(膦酰基甲基)氨基]甲基膦酸]或(乙二胺四(亚甲基膦酸))、EDTMPA(乙二胺四亚甲基四膦酸)、DTPMP(二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)、DTMPA(二亚乙基三胺五(亚甲基-膦酸))。螯合剂可以含氮，例如在EDTA、NTA、DTPA、PDTA、GLDA、MGDA、EDDS、EDTMP、EDTMPA、和DTPMP、或ASMA、ASDA、ASMP、IDA、SMAS、SEAS、SMGL、SEGL、MIDA、α-ALDA、SEDA、ISDA、PHDA、ANDA、SLDA、TUDA、SMDA、HEDTA、DEG、ATMP、或它们的混合物中。因此，优选的螯合剂可以是但不限于下述物质：乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五亚甲基膦酸(DTMPA、DTPMP)、羟基乙烷二膦酸(HEDP)、乙二胺N,N'-二琥珀酸(EDDS)、甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、丙二胺四乙酸(PDTA)、2-羟基吡啶-N-氧化物(HPNO)、甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、谷氨酸N,N-二乙酸(N,N-二羧基甲基谷氨酸四钠盐)(GLDA)、和次氮基三乙酸(NTA)、或它们的混合物。螯合剂可以它们的酸的形式、或者盐的形式存在，优选螯合剂可以钠盐、钾盐、铵盐、或胺(例如三乙醇胺和单乙醇胺)盐的形式存在。另外的螯合剂可以是源自植物材料，例如如下详细描述的含淀粉材料的螯合剂。这样的天然螯合剂的实例是但不限于植酸(也被称为肌醇六磷酸(IP6)、或非丁、或当成盐时为植酸盐)、肌醇二磷酸、肌醇三磷酸、或肌醇五磷酸。螯合剂可以0.0001wt%至20wt%、优选0.01至10wt%、更优选0.1至5wt%的量存在于组合物中。漂白体系本发明的液体洗涤剂组合物可以含有以重量计0-50%，例如约0.1%至约25%的漂白体系。可以利用在本领域中已知的用于液体洗衣洗涤剂的任何漂白体系。合适的漂白体系的组分包括漂白催化剂、光漂白剂、漂白活化剂、过氧化氢源如过碳酸钠和过硼酸钠、预形成的过酸和它们的混合物。合适的预形成的过酸包括但不限于过氧羧酸和盐、过碳酸和盐、过亚氨酸和盐、过氧单硫酸和盐如Oxone(R)、和它们的混合物。漂白体系的非限制性实例包括基于过氧化物的漂白体系，其可以包含例如结合有形成过酸的漂白活化剂的无机盐，所述无机盐包括碱金属盐，如过硼酸盐(通常为一水合物或四水合物)、过碳酸盐、过硫酸盐、过磷酸盐、过硅酸盐的钠盐。术语漂白活化剂在本文中意指与过氧漂白剂如过氧化氢反应以形成过酸的化合物。因此，所形成的过酸构成活化的漂白剂。在本文中待使用的合适的漂白活化剂包括属于酯酰胺、酰亚胺或酸酐类别的那些。合适的实例是四乙酰基乙二胺(TAED)、4-[(3,5,5-三甲基己酰基)氧基]苯磺酸钠(ISONOBS)、二过氧基十二烷酸、4-(十二酰氧基)苯磺酸盐(LOBS)、4-(癸酰氧基)苯磺酸盐、4-(癸酰氧基)苯甲酸盐(DOBS)、4-(壬酰氧基)苯磺酸盐(NOBS)、和/或在WO98/17767中公开的那些。一个特别的令人感兴趣的漂白活化剂的家族被公开在EP624154中，并且该家族中特别优选的是乙酰基柠檬酸三乙酯(ATC)。ATC或短链甘油三酯如三乙酸甘油酯具有的优点在于，由于其最终降解为柠檬酸和醇，因此其是环境友好的。此外，乙酰基柠檬酸三乙酯和三乙酸甘油酯在储存时在产品中具有良好的水解稳定性，并且其是有效的漂白活化剂。最后，ATC提供对于洗衣添加剂良好的助洗能力。替代地，漂白体系可以包含例如酰胺、酰亚胺或砜型的过氧酸。漂白体系还可以包含过酸，例如6-(邻苯二甲酰亚氨基)过氧己酸(PAP)。漂白体系还可以包含漂白催化剂。在一些实施方案中，漂白组分可以是有机催化剂，其选自具有下式的有机催化剂：(iii)和它们的混合物；其中每个R1独立地为含有9至24个碳原子的支链烷基基团、或者含有11至24个碳原子的直链烷基基团，优选每个R1独立地为含有9至18个碳原子的支链烷基基团、或者含有11至18个碳原子的直链烷基基团，更优选每个R1独立地选自2-丙基庚基、2-丁基辛基、2-戊基壬基、2-己基癸基、正十二烷基、正十四烷基、正十六烷基、正十八烷基、异壬基、异癸基、异十三烷基、和异十五烷基。其他示例性漂白体系被描述在例如WO2007/087258、WO2007/087244、WO2007/087259和WO2007/087242中。合适的光漂白剂可以例如为磺化的锌酞菁。聚合物本发明的液体洗涤剂组合物可以包含以重量计0-10%，例如0.5-5%、2-5%、0.5-2%、或0.2-1%的聚合物。可以利用在本领域中已知的用于洗涤剂的任何聚合物。聚合物可以起上述共助洗剂的作用，或者可以提供抗再沉积、纤维保护、去污、染料转移抑制、油脂清洁和/或消泡特性。一些聚合物可以具有多于一种上述特性和/或多于一种下述基序(motif)。示例性聚合物包括(羧基甲基)纤维素(CMC)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚(乙烯基吡咯烷酮)(PVP)、聚(乙二醇)或聚(环氧乙烷)(PEG)、乙氧基化聚(亚乙基亚胺)、羧基甲基菊粉(CMI)，以及聚羧酸盐如PAA、PAA/PMA、聚天冬氨酸、和甲基丙烯酸月桂基酯/丙烯酸共聚物、疏水改性的CMC(HM-CMC)和硅氧烷、对苯二甲酸和低聚二醇的共聚物、聚(对苯二甲酸乙二醇酯)和聚(对苯二甲酸氧乙烯酯)的共聚物(PET-POET)、PVP、聚(乙烯基咪唑)(PVI)、聚(乙烯基吡啶-N-氧化物)(PVPO或PVPNO)、和聚乙烯基吡咯烷酮-乙烯基咪唑(PVPVI)。另外的示例性聚合物包括磺化的聚羧酸盐、聚环氧乙烷和聚环氧丙烷(PEO-PPO)、以及乙氧基硫酸二季铵盐。其他示例性聚合物被公开于例如WO2006/130575中。还考虑了上述聚合物的盐。织物调色剂本发明的液体洗涤剂组合物可以还包含织物调色剂，例如染料或颜料，当将所述织物调色剂配制于洗涤剂组合物中时，其可以在所述织物与包含所述洗涤剂组合物的洗涤液接触时沉积在织物上，并由此通过吸收/反射可见光来改变所述织物的色调。荧光增白剂发射至少一些可见光。相反地，织物调色剂由于它们吸收至少一部分可见光光谱从而改变表面的色调。合适的织物调色剂包括染料和染料-粘土缀合物，并且还可以包括颜料。合适的染料包括小分子染料和聚合物染料。合适的小分子染料包括选自落入直接蓝、直接红、直接紫、酸性蓝、酸性红、酸性紫、碱性蓝、碱性紫和碱性红的比色指数(C.I.)分类的染料或它们的混合物的小分子染料，如在WO2005/03274、WO2005/03275、WO2005/03276和EP1876226(在此通过引用并入)中所描述的那样。洗涤剂组合物优选包含约0.00003wt%至约0.2wt%、约0.00008wt%至约0.05wt%、或甚至约0.0001wt%至约0.04wt%的织物调色剂。组合物可以包含0.0001wt%至0.2wt%的织物调色剂，当组合物呈单位剂量小袋的形式时这是特别优选的。合适的调色剂还被公开于例如WO2007/087257和WO2007/087243中。额外的酶液体洗涤剂组合物可以包含一种或多种额外的酶，例如蛋白酶、脂肪酶、角质酶、额外的淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶如漆酶、和/或过氧化物酶。总体而言，所选择的一种或多种酶的特性应当与所选择的洗涤剂相容(即，最佳pH、与其他酶成分或非酶成分相容等)，并且一种或多种酶应当以有效量存在。纤维素酶：合适的纤维素酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学改性的或者蛋白质工程化的突变体。合适的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属、假单胞菌属、腐质霉属、镰刀菌属、梭孢壳属、枝顶孢属的纤维素酶，例如在US4,435,307、US5,648,263、US5,691,178、US5,776,757、和WO89/09259中公开的由特异腐质霉、嗜热毁丝霉和尖孢镰刀菌产生的真菌纤维素酶。特别合适的纤维素酶是具有颜色护理益处的碱性或中性纤维素酶。这样的纤维素酶的实例是在EP0495257、EP0531372、WO96/11262、WO96/29397、WO98/08940、WO02/099091中所描述的纤维素酶。其他实例是纤维素酶变体，例如被描述在WO94/07998、EP0531315、US5,457,046、US5,686,593、US5,763,254、WO95/24471、WO98/12307、和PCT/DK98/00299中所描述的那些。商业可获得的纤维素酶包括Celluzyme®、和Carezyme®、CarezymePremium®、Celluclean®(NovozymesA/S)、Clazinase™、和PuradaxHA™(GenencorInternationalInc.)、和KAC-500(B)™(KaoCorporation)。蛋白酶：合适的蛋白酶包括动物、植物或微生物来源的那些。优选为微生物来源。包括化学改性的或者蛋白质工程化的突变体。蛋白酶可以是丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶，优选为碱性微生物蛋白酶或胰蛋白酶样蛋白酶。碱性蛋白酶的实例是枯草杆菌蛋白酶，特别是源自芽孢杆菌属的那些，例如枯草杆菌蛋白酶Novo、枯草杆菌蛋白酶Carlsberg、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168(在WO89/06279中描述的)。胰蛋白酶样蛋白酶的实例是胰蛋白酶(例如，猪或牛来源的)以及被描述在WO89/06270和WO94/25583中的镰刀菌属蛋白酶。有用的蛋白酶的实例是被描述于WO92/19729、WO98/20115、WO98/20116、和WO98/34946中的变体，特别是在下述位置中的一处或多处具有取代的变体：27、36、57、76、87、97、101、104、120、123、167、170、194、206、218、222、224、235、和274。优选的商业可获得的蛋白酶包括Alcalase™、Savinase™、Primase™、Duralase™、Esperase™、和Kannase™(NovozymesA/S)、Maxatase™、Maxacal™、Maxapem™、Properase™、Purafect™、PurafectOxP™、FN2™、和FN3™(GenencorInternationalInc.)。脂肪酶和角质酶：合适的脂肪酶和角质酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学改性的或者蛋白质工程化的突变体。实例包括来自嗜热真菌属，例如来自如在EP258068和EP305216中描述的来自疏棉状嗜热丝孢菌(曾名为疏棉状腐质霉)的脂肪酶；来自腐质霉属，例如来自如在WO96/13580中描述的特异腐质霉的角质酶；假单胞菌脂肪酶，例如来自产碱假单胞菌、或类产碱假单胞菌(EP218272)、洋葱假单胞菌(EP331376)、施氏假单胞菌(GB1,372,034)、荧光假单胞菌、假单胞菌属菌株SD705(WO95/06720和WO96/27002)、威斯康星假单胞菌(WO96/12012)；芽孢杆菌脂肪酶，例如来自枯草芽胞杆菌(Dartois等人，1993，BiochemicaetBiophysicaActa，1131：253-360)、嗜热脂肪芽胞杆菌(JP64/744992)、或短小芽胞杆菌(WO91/16422)。其他的实例是脂肪酶变体，例如被描述于WO92/05249、WO94/01541、EP407225、EP260105、WO95/35381、WO96/00292、WO95/30744、WO94/25578、WO95/14783、WO95/22615、WO97/04079、WO97/07202、WO00/060063、WO2007/087508和WO2009/109500中的那些。优选的商业可获得的脂肪酶包括LipolaseTM、LipolaseUltraTM、和Lipex™；LecitaseTM、LipolexTM；LipocleanTM、LipoprimeTM(NovozymesA/S)。其他商业可获得的脂肪酶包括Lumafast(GenencorIntInc)；Lipomax(Gist-Brocades/GenencorIntInc)和来自Solvay的芽孢杆菌属脂肪酶。过氧化物酶/氧化酶：合适的过氧化物酶/氧化酶包括植物、细菌或真菌来源的那些。包括化学改性的或者蛋白质工程化的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自鬼伞属，例如来自灰盖鬼伞的过氧化物酶以及它们的变体，如在WO93/24618、WO95/10602、和WO98/15257中描述的那些。商业可获得的过氧化物酶包括Guardzyme™(NovozymesA/S)。可以将一种或多种洗涤剂酶通过添加含一种或多种酶的单独的添加剂、或者通过添加包含所有这些酶的组合的添加剂来包含在洗涤剂组合物中。可以将本发明的洗涤剂添加剂，即单独的添加剂或者组合的添加剂配制为例如颗粒、液体、浆料等。优选的洗涤剂添加剂制剂是颗粒，特别是无尘颗粒；液体，特别是稳定的液体；或者浆料。无尘颗粒可以如例如在US4,106,991和4,661,452中所公开的那样来生产，并且可以任选地通过本领域已知的方法来涂布。蜡质涂层材料的实例是具有1000至20000的平均摩尔重量的聚(环氧乙烷)产物(聚乙二醇，PEG)；具有16至50个环氧乙烷单元的乙氧基化壬基酚；乙氧基化脂肪醇，其中所述醇含有12至20个碳原子并且存在15至80个环氧乙烷单元；脂肪醇；脂肪酸；以及脂肪酸的甘油单酯和甘油二酯和甘油三酯。适合于通过流化床技术来施用的成膜涂层材料的实例在GB1483591中给出。可以使液体酶制剂例如通过根据已建立的方法添加多元醇如丙二醇、糖或糖醇、乳酸或硼酸来稳定。受保护的酶可以根据在EP238,216中公开的方法来制备。辅助材料还可以利用在本领域中已知的用于液体洗衣洗涤剂的任何洗涤剂组分。其他任选的洗涤剂组分包括防腐蚀剂、抗收缩剂、防污垢再沉积剂、防皱剂、杀菌剂、粘合剂、腐蚀抑制剂、松散剂(disintegrant)/崩解剂、染料、酶稳定剂(包括硼酸、硼酸盐、CMC、和/或多元醇如丙二醇)、包括粘土的织物调理剂、填料/加工助剂、荧光增白剂/光亮剂、泡沫促进剂、泡沫(泡)调节剂、香料、污垢悬浮剂、软化剂、抑泡剂、晦暗抑制剂、和芯吸剂，其单独或组合使用。这样的成分的选择是本领域技术人员公知的。分散剂-本发明的洗涤剂组合物还可以含有分散剂。特别地，粉末洗涤剂可以包含分散剂。合适的水溶性有机材料包括均聚或共聚酸或它们的盐，其中聚羧酸包含至少两个彼此被不多于两个碳原子分开的羧基基团。合适的分散剂是例如被描述于PowderedDetergents，Surfactantscienceseries卷71，MarcelDekker,Inc中。染料转移抑制剂-本发明的洗涤剂组合物还可以包含一种或多种染料转移抑制剂。合适的聚合染料转移抑制剂包括但不限于聚乙烯基吡咯烷酮聚合物、聚胺N-氧化物聚合物、N-乙烯基吡咯烷酮和N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯基噁唑烷酮和聚乙烯基咪唑、或者它们的混合物。当存在于主题组合物中时，染料转移抑制剂可以组合物的重量计约0.0001%至约10%、约0.01%至约5%、或甚至约0.1%至约3%的水平存在。荧光增白剂-本发明的洗涤剂组合物还将优选含有额外的可以对被清洁的制品着色的组分，例如荧光增白剂或光亮剂。在存在的情况下，增白剂优选以约0.01%至约0.5%的水平。可以将适合用于洗衣洗涤剂组合物的任何荧光增白剂用于本发明的组合物中。最常用的荧光增白剂是属于二氨基芪-磺酸衍生物、二芳基吡唑啉衍生物和联苯基-二苯乙烯基衍生物的类别的那些。二氨基芪-磺酸衍生物型的荧光增白剂的实例包括下述的钠盐：4,4'-双-(2-二乙醇氨基-4-苯胺基-均-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐、4,4'-双-(2,4-二苯胺基-均-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐、4,4'-双-(2-苯胺基-4-(N-甲基-N-2-羟基-乙基氨基)-均-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐、4,4'-双-(4-苯基-1,2,3-三唑-2-基)芪-2,2'-二磺酸盐、和5-(2H-萘并[1,2-d][1,2,3]三唑-2-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]苯磺酸钠。优选的荧光增白剂是TinopalDMS和TinopalCBS，其可获自Ciba-GeigyAG，Basel，Switzerland。TinopalDMS是4,4'-双-(2-吗啉基-4-苯胺基-均-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐的二钠盐。TinopalCBS是2,2'-双-(苯基-苯乙烯基)-二磺酸盐的二钠盐。还优选的是作为商业可获得的ParawhiteKX的荧光增白剂，其由ParamountMineralsandChemicals，Mumbai，India供应。其他的适合用于本发明的荧光剂包括1-3-二芳基吡唑啉和7-烷基氨基香豆素。合适的荧光增白剂水平包括约0.01、0.05、约0.1、或甚至约0.2wt%的下限至0.5、或甚至0.75wt%的上限。去污聚合物-本发明的洗涤剂组合物还可以包含一种或多种去污聚合物，其助于从织物，例如基于棉和聚酯的织物中除去污垢，特别是从基于聚酯的织物中除去疏水性污垢。去污聚合物可以例如为非离子或阴离子的基于对苯二甲酸酯的聚合物、聚乙烯基己内酰胺和相关的共聚物、乙烯基接枝共聚物、聚酯聚酰胺，参见例如PowderedDetergents，Surfactantscienceseries卷71，MarcelDekker,Inc中的第7章。另一种类型的去污聚合物是两亲性烷氧基化油脂清洁聚合物，其含有芯结构和多个与该芯结构连接的烷氧基化物基团。芯结构可以包含聚亚烷基亚胺结构或聚烷醇胺结构，如在WO2009/087523中详细描述的那样(在此通过引用并入)。此外，无规接枝共聚物是合适的去污聚合物。合适的接枝共聚物更详细地被描述于WO2007/138054、WO2006/108856和WO2006/113314中(在此通过引用并入)。其他去污聚合物是取代的多糖结构，特别是取代的纤维素结构，例如改性纤维素衍生物，如在EP1867808或WO2003/040279中描述的那些(两者在此通过引用并入)。合适的纤维素聚合物包括纤维素、纤维素醚、纤维素酯、纤维素酰胺和它们的混合物。合适的纤维素聚合物包括阴离子改性的纤维素、非离子改性的纤维素、阳离子改性的纤维素、两性离子改性的纤维素、以及它们的混合物。合适的纤维素聚合物包括甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、酯羧甲基纤维素、以及它们的混合物。抗再沉积剂-本发明的洗涤剂组合物还可以包含一种或多种抗再沉积剂，例如羧甲基纤维素(CMC)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)、聚氧乙烯和/或聚乙二醇(PEG)、丙烯酸的均聚物、丙烯酸和马来酸的共聚物、以及乙氧基化聚亚乙基亚胺。在上述去污聚合物下描述的基于纤维素的聚合物也可以起抗再沉积剂的作用。其他合适的辅助材料包括但不限于用于液体洗涤剂的抗收缩剂、防皱剂、杀菌剂、粘合剂、载体、染料、酶稳定剂、织物软化剂、填料、泡沫调节剂、水溶助长剂、香料、颜料、抑泡剂、溶剂、和用于液体洗涤剂的结构化剂和/或结构弹性化剂。液体洗涤剂产品的形成本发明的液体洗涤剂组合物可以呈任何方便的形式，例如具有一个或多个隔室的小袋、糊状物、凝胶、或常规的、压缩或浓缩的液体。存在多种洗涤剂制剂形式，例如层(相同或不同相)、小袋、以及用于机器定量给料单元的形式。小袋可以被配置为单隔室或多隔室。其可以具有任何适合于保持组合物(例如，不允许组合物在与水接触之前从小袋中释放)的形式、形状和材料。小袋由包围内体积的水溶性膜制成。所述内体积可以被分成小袋的隔室。优选的膜是聚合材料，优选形成膜或片材的聚合物。优选的聚合物、共聚物或它们的衍生物是经选择的聚丙烯酸酯、和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、糊精钠、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糖糊精、聚甲基丙烯酸酯，最优选聚乙烯醇共聚物和羟丙基甲基纤维素(HPMC)。优选聚合物在膜如PVA中的水平为至少约60%。优选的平均分子量将典型地为约20,000至约150,000。膜还可以具有共混的组成，其包含水解可降解的且水溶性的聚合物共混物，例如聚交酯和聚乙烯醇(已知为商品条目M8630，由MonoSolLLC，Indiana，USA销售)加上增塑剂，例如甘油、乙二醇、丙二醇、山梨醇和它们的混合物。小袋可以包含被水溶性膜分离的固体洗衣清洁组合物或部分组分和/或液体洗衣清洁组合物或部分组分。用于液体组分的隔室可以在组成方面不同于包含固体的隔室。参照：(US2009/0011970A1)。洗涤剂成分可以在可溶于水的小袋中或在不同的片剂层中通过隔室彼此物理地分离。由此，可以避免组分之间的负面的储存相互作用。每个隔室的不同溶出曲线还可以引起在洗涤溶液中选定组分的延迟溶出。非单位定量给料的液体或凝胶洗涤剂可以是水性的，典型地含有以重量计至少20%且最多95%的水，例如最多约70%的水、最多约65%的水、最多约55%的水、最多约45%的水、最多约35%的水。可以在水性液体或凝胶中包含其他类型的液体，包括但不限于烷醇、胺、二醇、醚和多元醇。水性液体或凝胶洗涤剂可以含有0-30%的有机溶剂。液体或凝胶洗涤剂可以是非水性的，其含有约5%至少于约15或10wt.%的水。可以将本发明的液体洗涤剂组合物配制为例如手洗或机洗洗衣洗涤剂组合物，其包括适合于对有污渍的织物进行预处理的洗衣添加剂组合物和漂洗添加的织物软化剂组合物。本发明的α-淀粉酶的制备洗涤剂组合物的α-淀粉酶(变体)可以使用本领域已知的任何诱变流程来制备，例如定点诱变、合成基因构建、半合成基因构建、随机诱变、改组等。定点诱变是在编码亲本的多核苷酸中的一个或多个限定位点处引入一个或多个(例如，若干个)突变的技术。可以通过涉及使用含有所期望的突变的寡核苷酸引物的PCR来体外实现定点诱变。也可以通过盒式诱变进行体外定点诱变，所述盒式诱变涉及通过限制酶在包含编码亲本的多核苷酸的质粒中的位点处进行切割并且随后将含有突变的寡核苷酸连接在多核苷酸中。通常，消化质粒与寡核苷酸的限制酶是相同的，从而允许该质粒的粘性末端和插入片段彼此连接。参见例如Scherer和Davis，1979，Proc.Natl.Acad.Sci.USA76：4949-4955；和Barton等人，1990，NucleicAcidsRes.18：7349-4966。还可以通过本领域已知的方法体内实现定点诱变。参见例如美国专利申请第2004/0171154号；Storici等人，2001，NatureBiotechnol.19：773-776；Kren等人，1998，Nat.Med.4：285-290；以及，Calissano和Macino，1996，FungalGenet.Newslett.43：15-16。在本发明中可以使用任何定点诱变流程。存在可以用于制备变体的多种商业可获得的试剂盒。合成基因构建需要体外合成经设计的多核苷酸分子以编码感兴趣的多肽。基因合成可以利用多种技术来进行，例如由Tian等人(2004，Nature432：1050-1054)描述的基于多路微芯片的技术以及其中在光可编程的微流芯片上合成并组装寡核苷酸的类似技术。可以进行单个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入，并且使用诱变、重组和/或改组的已知方法进行测试，随后进行相关筛选程序，例如由Reidhaar-Olson和Sauer，1988，Science241：53-57；Bowie和Sauer，1989，Proc.Natl.Acad.Sci.USA86：2152-2156；WO95/17413；或WO95/22625公开的那些。其他可以使用的方法包括易错PCR、噬菌体展示(例如Lowman等人，1991，Biochemistry30：10832-10837；美国专利第5,223,409号；WO92/06204)、以及区域定向诱变(Derbyshire等人，1986，Gene46：145；Ner等人，1988，DNA7：127)。可以结合诱变/改组方法与高通量自动化筛选方法来检测由宿主细胞表达的克隆的、诱变的多肽的活性(Ness等人，1999，NatureBiotechnology17：893-896)。可以由宿主细胞回收编码活性多肽的诱变的DNA分子，并且使用本领域的标准方法对其进行迅速测序。这些方法允许迅速确定多肽中单个氨基酸残基的重要性。通过组合合成基因构建、和/或定点诱变、和/或随机诱变、和/或改组的多个方面来实现半合成基因构建。半合成构建典型在于结合PCR技术的利用所合成的多核苷酸片段的方法。因此，基因的限定区域可以从头合成，而其他区域可以使用位点特异性诱变引物来扩增，而还有的区域可以经受易错PCR或非易错PCR扩增。然后可以对多核苷酸子序列进行改组。亲本可以是融合多肽或可切割的融合多肽，其中另一种多肽在本发明的多肽的N-末端或C-末端处融合。通过将编码另一种多肽的多核苷酸融合到本发明的多核苷酸来产生融合多肽。用于产生融合多肽的技术在本领域是已知的，并包括连接编码多肽的编码序列，从而使得它们在框内并且使得融合多肽的表达处于相同的一个或多个启动子和终止子的控制下。融合多肽还可以使用内含肽技术来构建，其中融合多肽在翻译后生成(Cooper等人，1993，EMBOJ.12：2575-2583；Dawson等人，1994，Science266：776-779)。融合多肽可以在两种多肽之间进一步包括切割位点。在分泌融合蛋白之时，该位点被切割，从而释放出两种多肽。切割位点的实例包括但不限于在以下文献中公开的位点：Martin等人，2003，J.Ind.Microbiol.Biotechnol.3：568-576；Svetina等人，2000，J.Biotechnol.76：245-251；Rasmussen-Wilson等人，1997，Appl.Environ.Microbiol.63：3488-3493；Ward等人，1995，Biotechnology13：498-503；和Contreras等人，1991，Biotechnology9：378-381；Eaton等人，1986，Biochemistry25：505-512；Collins-Racie等人，1995，Biotechnology13：982-987；Carter等人，1989，Proteins：Structure,Function,andGenetics6：240-248；以及Stevens，2003，DrugDiscoveryWorld4：35-48。亲本可以获自任何属的微生物。出于本发明的目的，如在本文中结合给定来源而使用的术语“获自”应意指由多核苷酸编码的亲本由所述来源或者由其中已经插入来自所述来源的多核苷酸的菌株产生。在一个方面，亲本是胞外分泌的。亲本或者在其他术语中具有与SEQIDNO:1至少85%的序列一致性的α-淀粉酶可以是细菌α-淀粉酶。例如，α-淀粉酶(亲本)可以是革兰氏阳性细菌多肽，例如芽孢杆菌属(Bacillus)、梭菌属(Clostridium)、肠球菌属(Enterococcus)、土芽孢杆菌属(Geobacillus)、乳杆菌属(Lactobacillus)、乳球菌属(Lactococcus)、海洋芽孢杆菌属(Oceanobacillus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、链球菌属(Streptococcus)、或链霉菌属(Streptomyces)α-淀粉酶；或者是革兰氏阴性细菌多肽，例如弯曲杆菌属(Campylobacter)、大肠杆菌(E.coli)、黄杆菌属(Flavobacterium)、梭杆菌属(Fusobacterium)、螺杆菌属(Helicobacter)、泥杆菌属(Ilyobacter)、奈瑟氏菌属(Neisseria)、假单胞菌属(Pseudomonas)、沙门菌属(Salmonella)或脲原体属(Ureaplasma)α-淀粉酶。在一方面，α-淀粉酶(亲本)是嗜碱芽孢杆菌(Bacillusalkalophilus)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)、短芽孢杆菌(Bacillusbrevis)、环状芽孢杆菌(Bacilluscirculans)、克劳氏芽孢杆菌(Bacillusclausii)、凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)、坚硬芽孢杆菌(Bacillusfirmus)、灿烂芽孢杆菌(Bacilluslautus)、迟缓芽孢杆菌(Bacilluslentus)、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)、巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium)、短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillusstearothermophilus)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、或苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)α-淀粉酶。在另一个方面，α-淀粉酶亲本是人造α-淀粉酶，例如SEQIDNO:1的α-淀粉酶。将要理解的是，对于前述物种而言，本发明涵盖完全状态和不完全状态二者、以及其他分类学上的等同物，例如无性型，而不考虑它们已知的物种名称。本领域技术人员将容易地识别适当等同物的身份。这些物种的菌株可以容易地在许多培养物保藏中心为公众所获得，例如AmericanTypeCultureCollection(ATCC)、DeutscheSammlungvonMikroorganismenundZellkulturenGmbH(DSMZ)、CentraalbureauVoorSchimmelcultures(CBS)以及AgriculturalResearchServicePatentCultureCollection,NorthernRegionalResearchCenter(NRRL)。可以使用上述探针由其他来源鉴定并获得亲本，所述其他来源包括从自然界(例如，土壤、堆肥、水等)分离的微生物或直接从自然材料(例如，土壤、堆肥、水等)获得的DNA样品。用于从自然环境中直接分离微生物和DNA的技术是本领域公知的。然后，可以通过对另一种微生物或混合DNA样品的基因组DNA或cDNA文库进行类似的筛选来获得编码亲本的多核苷酸。一旦用一种或多种探针检测到编码亲本的多核苷酸，则可以通过使用本领域技术人员已知的技术来分离或克隆所述多核苷酸(参见例如Sambrook等人，1989，同上)。在本文中描述并且要求保护的本发明在范围方面不受在本文中公开的具体方面的限制，因为这些方面意在作为本发明若干方面的说明。任何等同方面意在处于本发明的范围内。实际上，除了在本文中示出和描述的那些之外，本发明的多种修改通过前面的描述对于本领域技术人员而言将变得明确。这样的修改也意在落入所附权利要求书的范围内。在有冲突的情况下，以包括定义的本公开内容为准。本发明现将进一步通过以下非限制性实施例来举例说明，其中，份和百分比为以重量计，除非另有说明。在附图中：图1显示了当使用SEQIDNO:1进行编号时具有取代G46A+T47I+G105A+I199F的SEQNO：1的α-淀粉酶的pH曲线。材料和方法制备模型洗涤剂。制备具有不同螯合剂的模型洗涤剂用于测试多种淀粉酶。两种模型洗涤剂的组成如下所述：模型1模型2组分%w/w%w/wLAS1212AEOS4,94,9皂(可可)2,752,75皂(大豆)2,752,75AEON25-71111NaOH1,751,75乙醇33MPG66丙三醇1,71,7TEA3,33,3甲酸钠11柠檬酸钠22HEDP00,5PCA(SokalanCP-5)0,180,18离子交换水34,234,2DTMPA0,20PNP-G7淀粉酶测定α-淀粉酶活性可以通过利用PNP-G7底物的方法来确定。PNP-G7是4,6-乙叉基(G7)-对硝基苯基(G1)-α,D-麦芽庚糖苷的缩写，其是可以被内淀粉酶如α-淀粉酶切割的封闭寡糖。切割后，试剂盒中包括的α-葡糖苷酶消化水解的底物以进一步释放出游离的PNP分子，所述PNP分子具有黄色的颜色并因此可以通过可见光分光光度法在λ=405nm(400-420nm)下测量。含PNP-G7底物和α-葡糖苷酶的试剂盒由Roche(目录号11876473)制造。试剂：来自该试剂盒的G7-PNP底物含有22mM4,6-乙叉基-G7-PNP和52.4mMHEPES(2-[4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪基]-乙磺酸)，pH7.0)。α-葡糖苷酶试剂含有52.4mMHEPES、87mMNaCl、12.6mMMgCl2、0.075mMCaCl2、>4kU/Lα-葡糖苷酶)。底物工作液通过混合66mL的α-葡糖苷酶试剂与16mL的G7-PNP底物来制造。该底物工作液在使用之前即刻制造。稀释缓冲液：30mMCaCl2+0,0026%BRIJ35(聚氧乙烯-月桂基醚)。程序：通过转移40µl稀释的酶样品至96孔微量滴定板并添加220µl底物工作液来进行测定。将溶液混合并在37℃下预温育15分钟，并且在“Spectramax384plus”Eliza读数器(分子装置)上在OD405nm下经10分钟每20秒对吸收进行测量。在给定的条件组下，时间依赖的吸收曲线的斜率(每分钟的吸光度)与所讨论的α-淀粉酶的比活性(每mg酶的活性)成正比。用于测量游离钙离子的测定下述测定可以用于测量溶液中的游离钙离子，并因此用于确定螯合剂(螯合掩蔽剂)降低游离钙离子(Ca2+)的浓度例如在pH8下由2.0mM至0.10mM的能力。测定原理：将不同量的螯合剂添加至2.0mMCa2+的溶液，并通过在固定pH和温度下使用钙离子选择性电极来确定游离Ca2+浓度。将游离钙浓度由2.0mM降低至0.10mM所需要的螯合剂的浓度可以由所测量的游离钙浓度对螯合剂的浓度的图来确定。在本测定中，将游离钙浓度由2.0mM降低至0.10mM所需要的螯合剂的浓度在pH8、21℃下在氯化钾和49mMEPPS中进行测量。溶液：电解质溶液：超纯水(Milli-Q水)中的4M氯化钾。pH8缓冲液：50mMEPPS(4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-丙磺酸)，使用最低量的1N氢氧化钠调节至pH8.0。钙原液：pH8缓冲液中的25mMCa2+，由CaCl2.2H2O制得。螯合剂原液：pH8缓冲液中的15mM螯合剂(基于100%干燥螯合剂计)，使用最低量的1MNaOH或1MHCl再调节至pH8.0。将超纯水(MilliQ水)用于所有缓冲液和溶液的制备。设备：来自ThermoScientific的钙离子选择性电极(目录号9720BNWP)，针对氯化钙标准溶液进行校准。将电极按照电极后面的准则所述的那样进行校准。程序：准备一系列小瓶，每一个含有4mL的钙原液(终浓度为2.0mM)、1mL的电解质溶液(终浓度为80mM氯化钾)、不同量(0-45mL)的螯合剂原液，并使用pH8缓冲液将总体积调节至50mL。测定中的EPPS的终浓度为49mM。混合后，通过钙电极测量游离Ca2+的浓度。对于各受试的螯合剂，应当在足够数量的不同螯合剂浓度下确定游离钙浓度，从而保证数据组覆盖从2.0mM的游离钙离子至低于0.10mM的值的整个范围或者测定中的最终螯合剂浓度高于10.0mM。数据点的合适数量为8或更多。将初始的2.0mM的游离钙离子降低至0.10mM所需要的螯合剂浓度通过内插法由所测量的游离钙离子浓度对螯合剂浓度的图来获得。将溶液平衡至所需的温度，所述温度在本测定中为21℃。logK的确定螯合剂还可以通过螯合剂(螯合掩蔽剂)与钙离子的结合常数来表征。该常数可以通过如由ADNielsen，CCFuglsang和PWesth，AnalyticalBiochemistry卷314(2003)第227-234页以及由TWiseman，SWilliston，JFBrandts和L-NLin，AnalyticalBiochemistry卷179(1989)第131-137页所描述的ITC(等温滴定量热法)来确定。所有使用的玻璃器具和塑料瓶都用1%(w/w)EDTA溶液洗涤并接着在经Chelex100处理的超纯水(Milli-Q水)中彻底冲洗。将溶液储存在塑料瓶中并在5℃下保存直至使用。缓冲液：20mMHEPES(2-[4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪基]-乙磺酸)，pH8，用超纯水(Milli-Q水)制备；20mM甘氨酸，pH10，用超纯水(Milli-Q水)制备。溶液：-在20mMHEPES中的125µM螯合剂，pH8，或在20mM甘氨酸中的125µM螯合剂，pH10-在20mMHEPES中的4mMCaCl2，pH8，或在20mM甘氨酸中的4mMCaCl2，pH10-超纯水(Milli-Q水)。将所有缓冲液通过Chelex100柱(SigmaAldrichC-7901，基质为1%交联的聚苯乙烯，基质活性基团为亚氨基二乙酸(钠形式)，基质通过甲基基团连接至芳环)从而除去钙离子。在实验之前，将所有溶液通过在真空下搅拌来脱气。仪器：MCS-ITC(MicroCalInc.，Northampton，MA，USA)。程序：参比池填充有超纯水(Milli-Q水)。样品池填充有在选定pH下的螯合剂溶液，并注射器填充有在选定pH下的钙溶液。将溶液平衡至所需温度，例如19℃。然后，用30-40等份的8µL钙溶液对样品池中的螯合剂溶液进行滴定。然后使用由MicroCalInc.供应的Origin软件对从ITC获得的信号进行积分。为了得到结合等温线，使用相同的软件包进行回归例程。然后使用嵌入在Origin软件中的例程将这些数据拟合至模型。目前优选的是“OneSites”模型，其给出对于大多数常用的螯合剂而言最佳的拟合，即残差均匀地在零附近分布。通过K值，计算logK为K值的对数(以10为底数)。用于确定洗涤性能的测定Terg-O-Tometer(TOM)洗涤测定使用Terg-O-Tometer的洗涤性能测试是在洗涤机的中等规模模型中的测试，并且用于评估淀粉酶的洗涤性能。TOM基本上是具有最多12个浸没其中的敞口金属烧杯的大型温度受控的水浴。每个烧杯构成一个小的洗涤机，并且在实验过程中，它们中的每一个将含有特定洗涤剂/酶体系的溶液并且对有污垢和没有污垢的织物测试其性能。通过旋转搅拌臂来获得机械应力，所述旋转搅拌臂在每个烧杯内搅拌液体。由于TOM烧杯没有盖，因此能够在TOM实验的过程中回收样品并在洗涤的过程中在线分析信息。TOM洗涤性能测试使用1000mL烧杯和桨式搅拌器，所述桨式搅拌器以每分钟120的频率提供在每个方向上180°的振荡旋转运动，所述测试包括下述步骤：将500mL洗涤溶液(15°dH，Ca/Mg比率为4:1，含有40mMNaHCO3)添加至烧杯。在达到用于洗涤所选定的温度，例如40℃时，将洗涤剂和酶添加至洗涤溶液。在洗涤过程中，洗涤剂浓度应当为每L洗涤溶液3.3g洗涤剂(3.3g/L，例如如上所述的模型洗涤剂1或2)。在洗涤过程中，酶浓度应当为每L洗涤溶液0和/或0.028mg酶蛋白。将切割成5*5cm的10g预洗涤的压载物WFK80A(wfkTestgewebeGmbH，Christenfeld10；D-41379Brüggen-Bracht；Germany)与四个5x5cm的棉-大米淀粉样本，如CS-28(CenterForTestmaterialsBV，P.O.Box120，3133KT，Vlaardingen，TheNetherlands)添加至洗涤溶液，从而开始洗涤。在选定的洗涤时间如20分钟后，停止洗涤并立即将样本在冷的流动自来水下冲洗5分钟。接着将冲洗过的样本在暗处干燥。干燥后，通过使用如下所述的ColorEye测量在460nm下的入射光的缓解来评估洗涤性能。将用0mg酶蛋白/L的测试用作空白，从而获得Δ缓解值。ColorEye测量将洗涤性能表达为Δ缓解值(ΔRem)。使用具有大的圆孔(25mm直径)的MacbethColorEye7000反射(remission)分光光度计来进行样本的光缓解评估。在入射光中在没有UV的情况下进行测量，并提取在460nm处的缓解。在测量前，将待测量的样本置于三个其他在相同条件下洗涤的相同类型的样本的顶部，从而减少来自将样本推向测量开口的活塞的反射。通过从用淀粉酶(0.028mg酶蛋白/L)洗涤的样本的缓解值中减去在未添加淀粉酶(0mg酶蛋白/L)的情况下洗涤的样本的平均缓解值来计算对于给定洗涤条件的Δ缓解值。用于洗衣的自动机械应力测定(AMSA)可以使用的另一洗涤性能测试是AMSA。为了评估洗衣中的洗涤性能，可以使用自动机械应力测定(AMSA)来进行洗涤实验。使用AMSA，可以检测许多小体积的酶-洗涤剂溶液的洗涤性能。AMSA板具有多个用于受试溶液的槽和牢固地将待洗涤的纺织品挤压向槽开口的盖。在洗涤过程中，将板、受试溶液、纺织品和盖剧烈摇动以使受试溶液与纺织品接触并以有规律的、周期性振荡的方式施加机械应力。对于进一步的描述，参见WO02/42740，特别是第23-24页的段落“特殊方法的实施方案”。洗涤剂剂量5g/L(液体洗涤剂)受试溶液体积160μLpH调节至pH7或pH6(液体洗涤剂)洗涤时间20分钟温度60℃、40℃和20℃或15℃水硬度15°dH模型洗涤剂和受试材料可以如下所述：受试材料获自EMPATestmaterialsAG，Mövenstrasse12，CH-9015St.Gallen，Switzerland；CenterForTestmaterialsBV，P.O.Box120，3133KTVlaardingen，theNetherlands；和WFKTestgewebeGmbH，Christenfeld10，D-41379Brüggen，Germany。水硬度通过向测试体系添加CaCl2、MgCl2和NaHCO3(Ca2+:Mg2+=4:1:7.5)来调节至15°dH。洗涤后，将纺织品在自来水中冲洗并干燥。洗涤性能作为洗涤的纺织品的颜色的亮度来测量。亮度还可以表达为在用白光照射时由样品反射的光的强度。当样品有污渍时，反射光的强度低于清洁样品的反射光的强度。因此，反射光的强度可以用于测量洗涤性能。用专业的平板扫描仪(KodakiQsmart，Kodak，Midtager29，DK-2605Brøndby，Denmark)来进行颜色测量，其用于捕捉洗涤的纺织品的图像。为了从扫描的图像中提取光强度的值，将来自图像的24位像素值转化为红、绿和蓝(RGB)的值。强度值(Int)通过将RGB值作为矢量相加，然后取所得矢量的长度来计算：。实施例1-确定pH曲线。当使用SEQIDNO:1进行编号时，对于具有取代G46A+T47I+G105A+I199F的SEQNO：1的α-淀粉酶确定pH曲线。还原糖测定：用于测量淀粉分解活性(α-淀粉酶活性)的测定。α-淀粉酶活性可以通过利用淀粉底物(例如来自Sigma-Aldrich的大米淀粉S7260)的方法来确定。α-淀粉酶切割底物，并且由淀粉酶形成的还原端通过与对羟基苯甲酸酰肼的反应来确定(还原糖测定)。这导致腙的形成，其可以通过在405nm下的吸光度测量来检测。所形成的还原端的数量与淀粉酶活性成正比。在酶稀释缓冲液(10mMMES，pH7.0，0.01%TritonX100，0.100mMCaCl2)中将酶稀释至在测定中得到线性剂量-响应曲线的酶浓度。使用调节至pH4-11的活性缓冲液(50mMMES，50mM乙酸，50mM甘氨酸)来确定pH活性。将底物(S7260，来自Sigma-Aldrich)(3mg/ml，在milliQ水中)蒸煮5分钟并在使用前冷却。对于测定，将50µl底物(3mg/ml)转移至PCR-微量滴定板并添加50µl活性缓冲液(50mMMES，50mM乙酸，50mM甘氨酸，pH4-11)。添加50µl的稀释的酶并混合。在40℃下在PCR机中温育5分钟，接着冷却。通过将对羟基苯甲酸酰肼(SigmaH-9882)溶解在Ka-Na-酒石酸盐/NaOH溶液(对于1升：添加50gK-Na-酒石酸(Merck8087)和20gNaOH)中至15mg/ml来制造终止液。添加75µl终止液，并在95℃下在PCR机中温育10分钟。将150µl转移至新的96-微量滴定板，并测量405nm处的吸光度。应当稀释酶使得其在给定pH下处于活性测定的线性范围内。将淀粉酶活性归一化为最大活性。当使用SEQIDNO:1进行编号时，确定具有取代G46A+T47I+G105A+I199F的SEQNO：1的α-淀粉酶的pH曲线，并将结果示于图1中。可见，在pH6和7之间达到最大活性，并且活性在碱性区域中显著下降，使得酶对于在碱性液体洗涤剂中使用似乎不是特别具有吸引力。本发明人已发现，α-淀粉酶的出色稳定性(参见下文)超过补偿了在具有碱性pH值的液体洗涤剂中的较低活性。在下述实施例中，缩写的组分标识具有下述含义：MPG是单丙二醇TEA是三乙醇胺MEA是单乙醇胺NaOH是47%氢氧化钠溶液NI7EO是C12-15醇乙氧基化物7EO，非离子Neodol®25-7(来自ShellChemicals)LAS酸是C12-14直链烷基苯磺酸Prifac®5908是饱和的月桂脂肪酸，来自CrodaSLES3EO是具有3摩尔EO的月桂基醚硫酸钠SLES1EO是具有1摩尔EO的月桂基醚硫酸钠EPEI是SokalanHP20-乙氧基化聚亚乙基亚胺清洁聚合物：PEI(600)20EO，来自BASF香料是游离油香料Dequest®2010是HEDP(1-羟基乙叉基-1,1-二膦酸)防腐剂是ProxelGXL抗微生物防腐剂，1,2-苯并异噻唑啉-3-酮在二丙二醇和水中的20%溶液，来自ArchBiocides荧光剂是Tinopal™CBS-X，来自CibaStainzyme™、TermamylUltra™、SavinaseUltraXL™、Mannaway™是市售的酶，来自Novozymes。实施例2：在液体洗涤剂中的淀粉酶储存稳定性。使用现有技术的淀粉酶(Stainzyme和TermamylUltra)和具有取代G46A+T47I+G105A+I199F的SEQIDNO:1的淀粉酶(即淀粉酶SEQIDNO:2)来配制一系列液体洗涤剂组合物。所使用的组成在表1中给出。将洗涤剂酶样品放入玻璃小瓶中，并接着将玻璃小瓶封闭。将洗涤剂酶样品在37℃或45℃下温育2周和4周，并将相同组的样品冷冻以代表新鲜样品。在储存之后，接着使用PNP-G7淀粉酶活性测定来测量残留的淀粉酶活性。受试的淀粉酶是TermamylUltra、Stainzyme(NovozymesA/S；Krogshoejvej36；2880Bagsvaerd；Denmark)和SEQIDNO:2的淀粉酶。表1-液体洗涤剂组成表2表3表4在受试条件下，明确的是，在所有洗涤剂样品中，具有取代G46A+T47I+G105A+I199F的SEQIDNO:1的淀粉酶(即淀粉酶SEQIDNO:2)显著地比TermamylUltra™和Stainzyme™更稳定。实施例3：液体洗涤剂中的储存稳定性。将受试淀粉酶添加至洗涤剂，从而达到0,084mgEP/g的最终蛋白质浓度。将5克具有所讨论的淀粉酶的洗涤剂样品置于封闭的玻璃小瓶中在40℃下1周或者在37℃下2周。根据上述PNP-G7淀粉酶测定来测量淀粉酶活性。通过与在-18℃下储存1周和2周的参比样品比较来计算淀粉酶的残留活性。表540℃下1周SEQNO1:G46A+T47I+G105A+I199FSEQNO1:Termamyl模型196%100%30%模型294%84%16%表637℃下2周SEQNO1:G46A+T47I+G105A+I199FSEQNO1:Termamyl模型193%95%38%模型293%85%18%通过该实施例明确的是，已经在40℃下储存1周后，SEQIDNO:1的淀粉酶在模型1中具有良好的储存稳定性，但在洗涤剂模型2中显著地丧失活性。还明确的是，具有取代G46A+T47I+G105A+I199F的SEQIDNO:1的淀粉酶在洗涤剂模型1和2两者中均具有高稳定性。因此，具有取代G46A+T47I+G105A+I199F的SEQIDNO:1的淀粉酶在与模型1相比含有更高浓度的螯合剂的模型2中是稳定的。Termamyl在这两个模型洗涤剂中不稳定。实施例4：在洗涤剂中储存后的残留淀粉酶洗涤性能。洗涤剂酶样品制备将含有0.084mg淀粉酶蛋白/g洗涤剂的洗涤剂酶样品，例如洗涤剂模型1或2放入玻璃小瓶中，并接着将玻璃小瓶封闭。将洗涤剂酶样品在40℃下温育1周或在37℃下温育2周，并将相同组的样品冷冻以代表新鲜样品。储存后，接着在Terg-O-Tometer中确定冷冻和温育的样品两者的洗涤性能。受试的淀粉酶为Termamyl(NovozymesA/S；Krogshoejvej36；2880Bagsvaerd；Denmark)、SEQIDNO:1的淀粉酶、和具有下述取代G46A+T47I+G105A+I199F的SEQIDNO:1的淀粉酶。在Terg-O-Tometer中的洗涤性能测试储存后，在下文描述的实验条件下，在Terg-O-Tometer中评估Termamyl、SEQIDNO:1的淀粉酶、和具有下述取代G46A+T47I+G105A+I199F的SEQIDNO:1的淀粉酶的洗涤性能：表7洗涤过程中的洗涤剂浓度3.3g/L洗涤温度40℃洗涤时间20分钟洗涤溶液的水硬度15°dH(4:1Ca/Mg比率，具有40mMNaHCO3)每分钟的振荡数120pH按原样受试溶液中的酶浓度0；0.028mgEP/L受试溶液体积500mL每烧杯的纺织品4个具有大米淀粉的棉样本(CS-28，5*5cm)和10g棉压载物(WFK80A，5*5cm)为了获得最终每升洗涤溶液3.3g洗涤剂，将1.485g的洗涤剂(例如模型1或2)添加至具有15°dH的水硬度的500mL洗涤溶液中，接着添加0.165g的用于洗涤性能研究的淀粉酶/洗涤剂样品。现在，洗涤剂浓度为每升洗涤溶液3.3g洗涤剂，并且淀粉酶浓度为每升洗涤溶液0.028mg酶蛋白。将切割成5*5cm的10g预洗涤的压载物WFK80A(wfkTestgewebeGmbH，Christenfeld10；D-41379Brüggen-Bracht；Germany)与四个5x5cm的样本CS-28(CenterForTestmaterialsBV、P.O.Box120，3133KT，Vlaardingen，TheNetherlands)一起添加至洗涤溶液，从而开始洗涤。在40℃下洗涤20分钟后，停止洗涤，并将CS-28样本立即在流动的冷自来水中冲洗5分钟。干燥后，使用MacbethColorEye7000反射分光光度计来测量CS-28样本的缓解值。得到温育后的洗涤性能(ΔRem)，并将其用于计算作为Termamyl、SEQIDNO:1的淀粉酶、和具有下述取代G46A+T47I+G105A+I199F的SEQIDNO:1的淀粉酶的洗涤性能之间的比率显示的残留洗涤性能。将温育后的SEQIDNO:1的淀粉酶的洗涤性能(ΔRem)设为100%(表2.1和2.2)。除此之外，单独的淀粉酶的残留洗涤性能通过将储存的样品的平均洗涤性能(ΔRem)除以相同的冷冻样品的平均洗涤性能(ΔRem)来计算(表8和9)。表8：在40℃下储存1周后的Termamyl、SEQIDNO:1的淀粉酶、和具有下述取代G46A+T47I+G105A+I199F的SEQIDNO:1的淀粉酶的残留洗涤性能比率。在各洗涤剂中，将SEQIDNO:1的淀粉酶的残留洗涤性能设为100%。表840℃下1周模型洗涤剂1模型洗涤剂2Termamyl24%20%淀粉酶SEQIDNO:1100%100%具有G46A+T47I+G105A+I199F的淀粉酶SEQIDNO:183%119%通过这些结果明确的是，当使用模型洗涤剂2时，在1周的储存后具有下述取代G46A+T47I+G105A+I199F的SEQIDNO:1的淀粉酶的残留洗涤性能与SEQIDNO:1的淀粉酶相比洗涤得更好。当使用模型洗涤剂1时，SEQIDNO:1的淀粉酶在储存后具有最高的残留洗涤性能。据信，该差异是由于模型2相对于模型1而言具有更高浓度的螯合剂所导致。因此，在包含高量的螯合剂的洗涤剂中，具有下述取代G46A+T47I+G105A+I199F的SEQIDNO:1的淀粉酶在储存后具有良好的洗涤性能。表9：在37℃下储存2周后的Termamyl、SEQIDNO:1的淀粉酶、和具有下述取代G46A+T47I+G105A+I199F的SEQIDNO:1的淀粉酶的残留洗涤性能比率。将SEQIDNO:1的淀粉酶的残留洗涤性能设为100%。表937℃下2周模型洗涤剂1模型洗涤剂2Termamyl34%3%淀粉酶SEQIDNO:1100%100%具有G46A+T47I+G105A+I199F的淀粉酶SEQIDNO:1103%138%在37℃下储存2周后的这些结果证实了储存1周后的结果。表10：在40℃下储存1周后的Termamyl、SEQIDNO:1的淀粉酶、和具有下述取代G46A+T47I+G105A+I199F的SEQIDNO:1的淀粉酶的单独的残留洗涤性能。表1040℃下1周模型洗涤剂1模型洗涤剂2Termamyl47%34%淀粉酶SEQIDNO:196%71%具有G46A+T47I+G105A+I199F的淀粉酶SEQIDNO:1107%108%这些结果显示与淀粉酶的冷冻样品相比在两种洗涤剂中的淀粉酶的洗涤性能。因此，将冷冻样品设为100%。由此可见，在模型2中，SEQIDNO:1的淀粉酶损失了洗涤性能，而对于具有取代G46A+T47I+G105A+I199F的SEQIDNO:1的淀粉酶而言不是这样的情况。表11：在37℃下储存2周后的Termamyl、SEQIDNO:1的淀粉酶、和具有下述取代G46A+T47I+G105A+I199F的SEQIDNO:1的淀粉酶的单独的残留洗涤性能。表1137℃下2周模型洗涤剂1模型洗涤剂2Termamyl67%5%淀粉酶SEQIDNO:175%61%具有G46A+T47I+G105A+I199F的淀粉酶SEQIDNO:190%102%在受试条件下，明确的是，SEQIDNO:1的淀粉酶比Termamyl更稳定，并且在模型洗涤剂2中取代(G46A+T47I+G105A+I199F)赋予SEQIDNO:1的淀粉酶改进的稳定性和改进的洗涤性能。实施例5：螯合剂的表征实施例5a-测量游离钙离子。螯合剂(螯合掩蔽剂)可以通过它们在pH8下将游离钙离子(Ca2+)的浓度由2.0mM降低至0.10mM的能力来分级，其由M.K.Nagarajan等人，JAOCS，卷61，第9号(1984年9月)，第1475-1478页所描述的方法开发。使用上述在“材料和方法”下测定用于测量游离钙离子。相应地，如上所述地确定将水硬度由2.0mM降低至0.10mM所需要的螯合剂的浓度。实验在21℃下用pH8缓冲液来进行。所使用的螯合剂的终浓度和测量的游离Ca2+浓度示于下表12.1中。表12.1：在pH8下在2.0mMCa2+和不同量的螯合剂的混合物中确定的游离Ca2+的浓度mL钙原液mL电解质溶液mLpH8缓冲液mL螯合剂mM螯合剂终浓度4145.00.00.004144.01.00.304143.02.00.604141.04.01.204139.06.01.804138.56.51.954138.07.02.104137.57.52.254137.08.02.404136.58.52.554136.09.02.704135.59.52.854135.010.03.004132.512.53.754130.015.04.504125.020.06.004120.025.07.504115.030.09.004110.035.010.50通过这些数据，通过内插法来确定将游离Ca2+浓度由2.0mM降低至低于0.10mM所需要的螯合剂的浓度。使用该测定表征多种螯合剂，并且在pH8.0下在49mMEPPS缓冲液和80mM氯化钾中将游离钙离子浓度由2.0mM降低至0.10mM所需要的螯合剂的浓度示于下表12.2中。因此，该表还可以用于比较螯合剂降低游离钙离子浓度的能力。表12.2mM相对于柠檬酸盐柠檬酸盐8.361.00EGTA2.600.33EDTA1.900.21HEDP1.600.20DTPA1.870.24DTMPA1.170.25MGDA2.560.33实施例5b-logK的确定替代地，螯合剂可以通过螯合剂(螯合试剂)与钙离子的结合常数来表征。该常数可以通过如由ADNielsen，CCFuglsang和PWesth，AnalyticalBiochemistry卷314(2003)第227-234页以及由TWiseman，SWilliston，JFBrandts和L-NLin，AnalyticalBiochemistry卷179(1989)第131-137页所描述的ITC(等温滴定量热法)来确定。用于确定logK的程序在上述“材料和方法”下被详细地描述。使用该用于确定logK的程序，在pH10下对于多种螯合剂确定了下述logK值(表12.3)。表12.3LogK相对于柠檬酸盐的logK计的LogK柠檬酸盐31.00EGTA93.0EDTA82.7HEDP62.0DTPA72.7MGDA2.560.33当前第1页1 2 3