技术领域本发明涉及一种黄杞苷衍生物及其制备方法，具体涉及一种乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯及其制备方法。
背景技术：
黄杞苷是一种二氢黄酮类天然活性成分，具有多方面的药理活性，但存在水溶性差、空气中易氧化变色等缺点，限制了进一步的药用开发。而针对特定活性的天然产物进行结构改造，以增强其成药性，是新药研究的重要途径。本申请人针对黄杞苷进行了化学衍生化研究，以邻乙酰氧苯甲酸(阿司匹林)取代原结构中的鼠李糖，得到一个新的化合物，命名为乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯。研究发现该化合物与黄杞苷相比，水溶性大大提高，在高温、光照下的稳定性均优于黄杞苷，适合进行口服、粉针等药物剂型开发。
技术实现要素：
本发明提供了一种新的黄杞苷衍生物，该化合物为乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯，分子式C24H18O9，化学结构式为：本发明还提供了乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯的制备方法：①乙酰氧苯甲酰氯的制备：取一定量的阿司匹林(邻乙酰氧苯甲酸)，加入到适量反应溶剂中，再加入3～5倍量(分子质量)的卤代试剂中，搅拌使全部溶解。60～80℃回流反应1～5小时，至尾气中不再有酸性气体产生为止。停止反应，减压脱除溶剂，得乙酰氧苯甲酰氯。为提高溶剂脱除效率，可加入适量挥发性溶剂作夹带剂；②黄杞苷元制备：取黄杞苷，加入10～20倍量的适当浓度的氢氧化钠溶液，形成混悬液，80℃搅拌反应8小时，乙酸乙酯萃取3次，将乙酸乙酯相减压干燥，即得；③乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯的合成：取一定量的黄杞苷元，加入到3～5倍量(质量)的0.1～0.5mol/L的Na2CO3溶液中，稍加热，使其全部溶解。将溶液冰浴降至0～10℃，搅拌下，缓缓加入1～3倍量(分子质量)的乙酰氧苯甲酰氯。保持溶液pH约为8～10，继续反应，直至溶液中略有黄色沉淀生成，会后继续反应0.5小时；④乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯的精制：反应结束后，用盐酸迅速调pH至3～5左右，放置0.5小时，待生成大量沉淀后，滤除沉淀。用氢氧化钠调溶液pH6～7，并在50℃下减压挥干溶剂，残余物用适量萃取剂提取，合并萃取液，减压脱除溶剂，残余物溶于无水结晶溶剂中，室温放置得到淡黄色结晶，即得目标产物。必要时，可将粗晶溶于适量溶剂中重结晶。若溶液体系中有水分存在，可加入干燥剂脱水后再结晶。为降低反应副产物的产生，本工艺所用原料纯度尽可能不低于95％。本工艺中所采用的反应溶剂可以是二氯甲烷、苯、甲苯、四氯化碳等对阿司匹林具有良好的溶解性和化学惰性的溶剂中的一种或几种，也可直接以卤代剂作溶剂；本工艺中所采用的卤代剂，可以是氯化亚砜、三氯化磷、五氯化磷等中的一种；本工艺中样品精制过程中所采用萃取剂可以是乙酸乙酯、氯仿、丙酮、正丁醇等可与水形成两相的有机溶剂，也可采用聚乙二醇、葡聚糖等水溶液形成的双水相萃取体系进行萃取；本工艺中在样品精制过程中所采用的结晶溶剂可以甲醇、乙醇、乙酸乙酯等溶剂中的一种或几种；本工艺在样品结晶精制过程中，结晶溶剂若含少量水，应加入干燥剂脱水后滤除，滤液放置结晶。干燥剂可以是无水硫酸钠、氧化钙、氯化钙、无水硫酸铜等中的一种或几种。附图说明图1是乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯的纯度检测图(HPLC)图2是乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯结构式具体实施例下面的实验例用以解释本发明，但是并非对本发明实质内容的限制。实施例1.乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯的制备①乙酰氧苯甲酰氯的制备：取一定量的阿司匹林，加入到5倍量(分子质量)的SOCl2中，70℃回流反应3小时，至尾气中不再有酸性气体产生为止。停止反应，减压脱除溶剂，得阿司匹林酰氯。为提高溶剂脱除效率，可加入适量干苯作夹带剂；②黄杞苷元的制备：取黄杞苷，加入10倍量0.1mol/L的氢氧化钠溶液，形成混悬液，80℃搅拌反应8小时，乙酸乙酯萃取3次，将乙酸乙酯相减压干燥，即得；③乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯的合成：取一定量的黄杞苷元，加入到3倍量(质量)的0.1mol/L的Na2CO3溶液中，稍加热，使黄杞苷全部溶解。将溶液冰浴降至10℃，搅拌下，缓缓加入1.5倍量(分子质量)的乙酰氧苯甲酰氯。保持溶液pH约为9，继续反应，直至溶液中略有黄色沉淀生成，会后继续反应0.5小时；④乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯的精制：反应结束后，用盐酸迅速调pH至3.5左右，放置0.5小时，待生成大量沉淀后，滤除沉淀。用氢氧化钠调溶液pH6～7，并在50℃下减压挥干溶剂，残余物用适量丙酮提取，合并萃取液，减压脱除溶剂，残余物溶于无水乙醇中，室温放置得到淡黄色结晶，即得目标产物。必要时，可将粗晶溶于适量无水乙醇中重结晶。为尽量减少反应副产物，制备乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯所用原料黄杞苷和丹参素的纯度应在95％以上。实施例2.乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯的制备①乙酰氧苯甲酰氯的制备：取一定量的阿司匹林，加入到适量干苯中，搅拌使全部溶解。再加入3倍量(分子质量)的三氯化磷中，80℃回流反应3小时，至尾气中不再有酸性气体产生为止。停止反应，减压脱除溶剂，得乙酰氧苯甲酰氯。为提高溶剂脱除效率，可加入适量乙酸乙酯作夹带剂；②黄杞苷元的制备：取黄杞苷，加入20倍量0.1mol/L的氢氧化钠溶液，形成混悬液，80℃搅拌反应8小时，乙酸乙酯萃取3次，将乙酸乙酯相减压干燥，即得；③乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯的合成：取一定量的黄杞苷元，加入到5倍量(质量)的0.1mol/L的Na2CO3溶液中，稍加热，使黄杞苷全部溶解。将溶液冰浴降至5℃，搅拌下，缓缓加入2倍量(分子质量)的乙酰氧苯甲酰氯。保持溶液pH约为9.5，继续反应，直至溶液中略有黄色沉淀生成，会后继续反应0.5小时；④乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯的精制：反应结束后，用盐酸迅速调pH至3左右，放置0.5小时，待生成大量沉淀后，滤除沉淀。用氢氧化钠调溶液pH6～7，并在50℃下减压挥干溶剂，残余物用适量乙酸乙酯提取，合并萃取液，减压脱除溶剂，残余物溶于无水甲醇中，室温放置得到淡黄色结晶，即得目标产物。必要时，可将粗晶溶于适量无水甲醇中重结晶。为尽量减少反应副产物，制备乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯所用原料黄杞苷和丹参素的纯度应在95％以上。实施例3.乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯的制备①乙酰氧苯甲酰氯的制备：取一定量的阿司匹林，加入到4倍量的干苯中，搅拌使全部溶解。再加入3倍量(分子质量)的五氯化磷中，70℃回流反应3小时，至尾气中不再有酸性气体产生为止。停止反应，减压脱除溶剂，得乙酰氧苯甲酰氯。为提高溶剂脱除效率，可加入适量干苯作夹带剂；②黄杞苷元的制备：取黄杞苷，加入10倍量0.2mol/L的氢氧化钠溶液，形成混悬液，80℃搅拌反应8小时，乙酸乙酯萃取3次，将乙酸乙酯相减压干燥，即得；③乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯的合成：取一定量的黄杞苷元，加入到3倍量(质量)的0.1mol/L的Na2CO3溶液中，稍加热，使黄杞苷全部溶解。将溶液冰浴降至10℃，搅拌下，缓缓加入1倍量(分子质量)的阿司匹林酰氯。保持溶液pH约为9，继续反应，直至溶液中略有黄色沉淀生成，会后继续反应0.5小时；④乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯的精制：反应结束后，用盐酸迅速调pH至3.5左右，放置0.5小时，待生成大量沉淀后，滤除沉淀。用氢氧化钠调溶液pH6～7，并在50℃下减压挥干溶剂，残余物用适量聚乙二醇水溶液溶解，再以葡聚糖水溶萃取，合并萃取液，减压脱除溶剂，残余物溶于无水乙醇中，加适量无水硫酸钠脱水后滤除，滤液室温放置得到淡黄色结晶，即得目标产物。必要时，可将粗晶溶于适量无水乙醇中重结晶。为尽量减少反应副产物，制备乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯所用原料黄杞苷和丹参素的纯度应在95％以上。实施例4.乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯纯度检查仪器与试药：Agilent1100型高效液相色谱仪(包括一元泵、柱温箱、手动进样器、VWD检测器、HP-ChemStation)；色谱柱：AgilentZORBAXEclipseSB-C18(4.6mm×250mm，5μm)；甲醇(色谱纯，天津市四友生物医学技术有限公司出品，批号：120508101)；乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯(自制，批号：201300406)；实验所用水为去离子水。检查方法：以甲醇(A)-水(B)为流动相；梯度洗脱：0→20min内由10％A→100％A，然后100％A冲柱5min。检测波长290nm；理论板数按乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯峰计算不低于4000。精密称取乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯适量，以甲醇溶解并配制成每ml含1mg的溶液，作供试液。精密吸取供试液20μl，注入液相色谱仪，测定，面积归一化法考察黄杞苷乙酰氧苯甲酯纯度。检查结果：见图1。黄杞苷乙酰氧苯甲酯纯度为100％(面积归一法)。实施例5.乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯结构确证仪器与试剂：PEMarinerESI，X4型显微熔点测定仪(温度未校正)，AV400核磁共振仪，溶剂为DMSO，内标TMS。乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯，自制，批号：201300406.实验结果：淡黄色针状晶体，熔点217℃(分解)，HR-ESI-MSm/z：450.0951[M+Na]+；1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ：5.46(1H,d,J＝12.20Hz,H-C2)，5.97(1H,d,J＝12.20Hz,H-C3)，6.04(1H,s,H-C6)，6.00(1H,s,H-C8)，7.47(1H,d,J＝8.31,H-C2’)，6.91(1H,d,J＝8.31Hz,H-C3’)，6.91(1H,d,J＝8.31Hz,H-C6’)，7.47(1H,d,J＝8.31Hz,H-C7’)，8.12(1H,d,J＝8.14Hz,H-C4”)，7.40(1H,dd,J＝8.14Hz,7.49Hz,H-C5”)，7.52(1H,dd,J＝7.49Hz,8.10Hz,H-C6”)，7.17(1H,d,J＝8.10Hz,H-C7”)，2.27(3H,-CH3),9.96(3H,-OH)。13CNMR(DMSO-d6，400MHz)δ：80.12(C2)，72.43(C3)，191.85(C4)，164.20(C5)，97.18(C6)，165.23(C7)，95.34(C8)，161.30(C9)，101.40(C10)，128.37(C1’)，129.02(C2’)，116.23(C3’)，158.31(C4’)，116.23(C5’)，129.02(C6’)，165.05(C2”)，123.96(C3’)，131.48(C4’)，128.07(C5’)，135.30(C6’)，125.82(C7’)，150.19(C8’)，171.40(C10’)，21.00(-CH3)。元素分析结果(％，计算值)：C，64.00；H，4.03；O，31.97。HR-ESI-MS测得分子式C24H18O9，分子量450.0591。实施例6.乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯与黄杞苷在水中的溶解度比较材料与试剂：乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯，自制，批号：201300406，黄杞苷，自制，批号：20121201；正辛醇(分析纯，天津市四友生物医学技术有限公司出品，批号：100406101)；实验中所用水为去离子水。实验结果：见表1.表1.黄杞苷和乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯的溶解度及其正辛醇-水分配系数实施例7.乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯与黄杞苷稳定性比较材料与试剂：电热恒温培养箱360型(山东潍纺医药集团股份公司医疗器械厂)，人工气候箱LRH-250-GS(广东省医疗器械厂)，PHS-3C型pH计(上海雷磁仪器厂)，Agilent1100型高效液相色谱仪(包括一元泵、柱温箱、手动进样器、VWD检测器、HP-ChemStation)；色谱柱：AgilentZORBAXEclipseSB-C18(4.6mm×250mm，5μm)，乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯，自制，批号：201300406。实验方法：取乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯三份，分别置高温(120℃恒温培养箱)、光照4500LX(人工气候箱)条件下，分别于规定保存时间间隔取样，查看外观变化，并HPLC法检查样品纯度。实验结果：见表2～表3.数据显示，乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯与黄杞苷在120℃的条件下放置，4小时内含量均未见显示变化，4小时后均呈现下降趋势。但从外观看，黄杞苷放置2小时左右，颜色由无色变黄色，并随时间延长而加深至红色，而乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯的颜色在考察期间未见明显变化；乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯与黄杞苷在光照的条件下稳定性较好，乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯在考察周期内含量下降不到1％，黄杞苷含量下降2.2％，但基本在该方法允许的测量误差范围内。但从外观看，黄杞苷在考察周期内颜色由无色变黄色，并随时间延长而加深至红色，而乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯的颜色在考察期间未见明显变化。表2.乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯与黄杞苷高温状态下的稳定性比较考察温度：120℃，考察时间：6h表3.乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯与黄杞苷光照(4500LX)状态下的稳定性比较考察温度：30℃，考察时间：6d本发明所涉及的乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯的合成工艺简单，易于产业放大；乙酰氧苯甲酸黄杞苷酯在水中的溶解度优于黄杞苷，且有合适的酯/水分配系数，另外其在高温、光照下的稳定性更好，便于进行新药开发。以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。