本发明涉及一种中药有效成分的提取方法，具体涉及一种能够联合提取、分离枳实中多种有效成分的方法。
背景技术：
枳实是芸香科植物酸橙及其栽培变种或甜橙的干燥幼果，中医用于治疗积滞内停，痞满胀痛，泻痢后重，大便不通，痰滞气阻，胸痹，结胸，脏器下垂。枳实的有效成份有挥发油、生物碱和多种苷类。挥发油主要成份为右旋柠檬烯和右旋芳樟醇；生物碱主要成份为辛弗林和N-甲基酪胺；所含苷类主要为橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷、野漆树苷、忍冬苷等。枳实中的多种有效成份具有不同的生理活性，如何高效的分离其中的各种有效成份，将中药资源综合利用，意义重大。
中国专利CN102106918B公开了一种同时制备枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的方法，该方法用水蒸气蒸馏制备挥发油，用离子交换树脂和大孔树脂分别制备总生物碱和总黄酮。该方法的不足之处是，制备的枳实有效成份纯度都不高，是多种物质的混合物，没有做到彻底的分离纯化。
中国专利CN104230871A公开了一种从分离枳实中多甲氧基黄酮、橙皮苷和辛弗林的方法，该方法用乙醇提取枳实，用大孔吸附树脂吸附之后，再用不同的洗脱剂进行洗脱，得到不同的成份。但该方法并未说明各种成份的纯度和收率，也没有提及枳实中柚皮苷和新橙皮苷的分离方法。
中国专利CN105399787A公开了一种从枳实中提取橙皮苷、新橙皮苷和辛弗林的方法，该方法用乙醇提取枳实，通过阴离子、大孔树脂和碱酸反复处理提取液，但是橙皮苷、新橙皮苷和辛弗林得纯度和收率都偏低，且没有提及枳实中柚皮苷的分离方法。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是针对上面所述缺陷，提供一种能够联合提取、分离枳实中多种有效成分的方法，具体是一种从枳实中分离高纯度橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷和辛弗林的方法。
本发明解决其技术问题采用的技术方案是：一种从枳实中分离高纯度橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷和辛弗林的方法，依次包括以下步骤：
（1）酶解：将枳实破碎，用水浸润，加入果胶酶，酶解一定的时间；
（2）提取：用热水提取酶解后的原料，过滤，冷却，得水提液，水提渣待用；
（3）膜分离：将水提液用纳滤膜过滤，得透过液和截留液；
（4）辛弗林的分离：将纳滤膜透过液用阴离子树脂吸附，氨水解吸，浓缩，有机溶剂重结晶精制，得高纯度辛弗林；
（5）柚皮苷的分离：将纳滤膜截留液浓缩至一定体积，用酸调节浓缩液的PH值，冷却析晶，过滤，有机溶剂重结晶精制，得高纯度柚皮苷；
（6）新橙皮苷的分离：将柚皮苷酸性结晶母液浓干，用有机溶剂重结晶精制，得高纯度新橙皮苷；
（7）橙皮苷的分离：往枳实水提渣中加入稀碱继续提取，过滤，用酸中和，将析出的晶体过滤，干燥，得高纯度橙皮苷。
进一步，步骤（1）中，所述水的用量为枳实重量的3～6倍；果胶酶的用量枳实重量的0.1%～0.5%；酶解的时间为12～24小时。
进一步，步骤（2）中，所述水的用量为枳实重量的20～30倍；提取温度为50～80℃；提取时间为2～3小时。
进一步，步骤（3）中，所述纳滤膜的截留分子量500～800。
进一步，步骤（4）中，所述氨水的浓度为0.1%～2%；氨水的用量为2～3bv；用于重结晶精制的有机溶剂为石油醚、丙酮、正己烷、环己烷、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、甲醇、乙醇和异丙醇。
进一步，步骤（5）中，所述的浓缩液体积为枳实原料重量的1/2～5倍（v/m）；酸为盐酸、硫酸、柠檬酸；调酸的PH值为2～6，用于重结晶精制的有机溶剂为石油醚、丙酮、正己烷、环己烷、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、甲醇、乙醇和异丙醇。
进一步，步骤（6）中，所述的用于重结晶精制的有机溶剂为石油醚、丙酮、正己烷、环己烷、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、甲醇、乙醇和异丙醇。
进一步，步骤（7）中，所述的碱为氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙或碳酸钠；碱的浓度为0.5%～5%；稀碱的用量为枳实重量的10～20倍；提取温度为25～60℃；提取时间为2～3小时；酸为盐酸、硫酸、柠檬酸；调酸的PH值为2～7。
本发明的有益效果是：本发明克服了现有技术的不足，提供了一种全新的、有效的、易于产业化生产的能够联合提取、分离枳实中多种有效成分的方法，该方法操作简便，提取率高，提取的有效成分纯度高，且各有效成分均分离开来，使用方便。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例1。
本实施例包括以下步骤：
（1）酶解：将100kg枳实（橙皮苷含量10.50%、新橙皮苷含量8.31%、柚皮苷含量6.23%、辛弗林含量1.55%）破碎，用350kg水浸润，加入0.35kg果胶酶，酶解24小时；（2）提取：往酶解后的原料加入2800kg水，80℃提取2.5小时，过滤，冷却，得水提液，水提渣待用；（3）膜分离：将水提液用截留分子量为800的纳滤膜过滤，得透过液和截留液；（4）辛弗林的分离：将纳滤膜透过液用阴离子树脂吸附，用2.5bv浓度为1%的氨水解吸，浓缩，二氯甲烷重结晶精制，得辛弗林1.39kg，纯度98.77wt%，收率89.68%；（5）柚皮苷的分离：将纳滤膜截留液浓缩至400升，用盐酸调节浓缩液的PH值等于2.5，冷却析晶，过滤，丙酮重结晶精制，得柚皮苷5.65kg，纯度99.29wt%，收率90.61%；（6）新橙皮苷的分离：将柚皮苷酸性结晶母液浓干，用乙醇重结晶精制，得新橙皮苷7.73kg，纯度99.78wt%，收率93.02%；（7）橙皮苷的分离：往枳实水提渣中加入1500kg浓度为0.5%的氢氧化钠，30℃提取时间为2小时，过滤，用盐酸酸中和至PH等于6，将析出的晶体过滤，干燥，得橙皮苷9.46kg，纯度99.31wt%，收率90.10%。
实施例2。
本实施例包括以下步骤：
（1）酶解：将100kg枳实（橙皮苷含量10.50%、新橙皮苷含量8.31%、柚皮苷含量6.23%、辛弗林含量1.55%）破碎，用400kg水浸润，加入0.2kg果胶酶，酶解20小时；（2）提取：往酶解后的原料加入2500kg水，70℃提取2小时，过滤，冷却，得水提液，水提渣待用；（3）膜分离：将水提液用截留分子量为600的纳滤膜过滤，得透过液和截留液；（4）辛弗林的分离：将纳滤膜透过液用阴离子树脂吸附，用2bv浓度为1.5%的氨水解吸，浓缩，石油醚重结晶精制，得辛弗林1.3kg，纯度98.65wt%，收率83.87%；（5）柚皮苷的分离：将纳滤膜截留液浓缩至350升，用盐酸调节浓缩液的PH值等于2，冷却析晶，过滤，乙醇重结晶精制，得柚皮苷5.78kg，纯度99.35wt%，收率92.78%；（6）新橙皮苷的分离：将柚皮苷酸性结晶母液浓干，用甲醇重结晶精制，得新橙皮苷7.87kg，纯度99.67wt%，收率94.71%；（7）橙皮苷的分离：往枳实水提渣中加入1800kg浓度为1%的氢氧化钙，40℃提取时间为3小时，过滤，用盐酸酸中和至PH等于5，将析出的晶体过滤，干燥，得橙皮苷9.75kg，纯度99.56wt%，收率92.86%。