本发明涉及一种中药提取工艺，具体涉及一种亚临界水提取华蟾素的方法。
背景技术：
：华蟾素来源于中华大蟾蜍(BufobufogargarizansCantor)或黑眶蟾蜍(BufomelanostictusSchneider)的皮经过提取分离得到，是我国自行研制的二类新药和国家中药保护品种，具有调节免疫、抑制肿瘤细胞增殖、抗乙肝病毒的药理作用，在抗肿瘤、治疗慢性乙型肝炎以及其他疾病的临床治疗上已经得到广泛的应用。华蟾素注射液、口服液、片剂均为国家中药保护品种，其主要有效成分为吲哚类生物碱、蟾蜍色胺、蟾蜍季胺、蟾蜍噻咛和脱氢蟾蜍色胺等，其中国家药品标准中将吲哚类生物碱(以5-羟色胺计)含量作为华蟾素的质量指标。亚临界水(SubcriticalWater，SW)，也称之为高温水、超加热水、高压热水或热液态水，是指在适度的压力下，通过加热使水的温度高于100℃以上、低于临界温度374℃，水体仍然保持在液体状态。亚临界水与常温常压下的水在性质上有较大差别，在亚临界状态下，流体水微观结构的变化引起其物理、化学特性的改变。在常温常压下，水的极性很强，但是随着温度的升高，水的极性会逐渐降低，其性质更类似于有机溶剂，对中极性或低极性的物质也有较好的溶解能力，使得亚临界水对活性成分的溶解能力很大的提高，从而提高其提取效率。亚临界水提取技术是利用亚临界水作为提取溶剂，该技术具有提取时间短、萃取率高、环境友好等技术优势，已经被视为一项绿色环保、前景广阔、易于实现工业化生产的绿色提取技术，已成为当前萃取分离领域的研究热点。技术实现要素：针对现有技术的不足之处，本发明的目的在于提供一种亚临界水提取华蟾素的方法，以达到提高提取率、缩短提取时间、提高生产效率的目的。本发明的技术方案概述如下：一种亚临界水提取华蟾素的方法，其包括以下步骤：S1：将蟾皮剪碎，装入亚临界萃取釜，通入高纯氮气；S2：以脱氧蒸馏水为萃取剂，将脱氧蒸馏水泵入所述亚临界萃取釜中，其中，水和蟾皮的重量比为1∶2-1∶8；S3：将所述亚临界萃取釜内温度升至100-200℃，调节萃取压力为2-8MPa，萃取时间为20-80min，提取液经冷却器冷却后得到华蟾素提取液。优选的是，所述的亚临界水提取华蟾素的方法，其中，所述脱氧蒸馏水是通过将高纯氮气鼓入蒸馏水中以去除残留的氧气而获得。优选的是，所述的亚临界水提取华蟾素的方法，其中，S2中，所述萃取剂中还包括有乙醇。优选的是，所述的亚临界水提取华蟾素的方法，其中，所述乙醇与脱氧蒸馏水的重量比为2-5∶100。本发明的有益效果是：本案采用亚临界水提取技术进行提取，提高了有效物质的转移率和蟾皮药材的利用率，降低了生产成本，提高了生产效率；此外，采用高纯氮气保护整个提取过程，避免了高温引起的有效物质的氧化及分解。具体实施方式下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。实施例1取蟾皮100g，剪碎，加入亚临界萃取釜，并通入高纯度氮气进行保护；用高纯度氮气去除蒸馏水中残留的氧气，形成脱氧蒸馏水；向亚临界萃取釜中加入300g的脱氧蒸馏水；将萃取釜内温度升温至160℃，调节萃取压力为5MPa，萃取时间为30min，冷却器冷却得到提取液，提取2次，合并提取液，得华蟾素提取液；取不同批次的蟾皮重复5次实验，按照1.2测定提取液中吲哚类生物碱的含量。同时按照1.3测定蟾皮药材中吲哚类生物碱的含量。对比例1传统水煎提取方法：取蟾皮1000g，剪碎，加入5倍的水，煎煮45min后，过滤，取药渣加入6000g的水，煎煮30min，合并两次煎煮的滤液，得华蟾素提取液。取不同批次的蟾皮重复5次实验，按照1.2测定提取液中吲哚类生物碱的含量。同时按照1.3测定蟾皮药材中吲哚类生物碱的含量。实施例2取蟾皮100g，剪碎，加入亚临界萃取釜，并通入高纯度氮气进行保护；用高纯度氮气去除蒸馏水中残留的氧气，形成脱氧蒸馏水；向亚临界萃取釜中加入300g的脱氧蒸馏水和6g的乙醇；将萃取釜内温度升温至160℃，调节萃取压力为5MPa，萃取时间为30min，冷却器冷却得到提取液，提取2次，合并提取液，得华蟾素提取液；取不同批次的蟾皮重复5次实验，按照1.2测定提取液中吲哚类生物碱的含量。同时按照1.3测定蟾皮药材中吲哚类生物碱的含量。对比例2取蟾皮100g，剪碎，加入亚临界萃取釜，并通入高纯度氮气进行保护；用高纯度氮气去除蒸馏水中残留的氧气，形成脱氧蒸馏水；向亚临界萃取釜中加入300g的脱氧蒸馏水和6g的甲醇；将萃取釜内温度升温至160℃，调节萃取压力为5MPa，萃取时间为30min，冷却器冷却得到提取液，提取2次，合并提取液，得华蟾素提取液；取不同批次的蟾皮重复5次实验，按照1.2测定提取液中吲哚类生物碱的含量。同时按照1.3测定蟾皮药材中吲哚类生物碱的含量。检测方法1.1、标准曲线：取5-羟色胺盐酸盐对照品15.03mg，置100ml量瓶中，用纯化水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置50ml量瓶中，加纯化水至刻度，摇匀，得对照品溶液。精密量取对照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml，分别置10ml量瓶中，加15％对二甲氨基苯甲醛盐酸(2→3)溶液5ml，摇匀，加纯化水至刻度，摇匀，室温放置35min，照分光光度法(《中国药典》2010版，附录VB)，以纯化水为空白，在555nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，对应浓度为横坐标，绘制标准曲线图。所得曲线的回归方程为Y＝0.0389X+0.0276，R＝0.9994，表明吲哚类生物碱在0.139～0.608μg·ml-1浓度范围内线性关系良好。1.2、提取液中吲哚类生物碱含量测定：精密量取华蟾素提取液适量，离心，稀释至合适倍数，然后按3.1项下规定的方法，自“加15％对二甲氨基苯甲醛盐酸(2→3)溶液”起，依法测定吸收度，由标准曲线回归方程计算得出供试品溶液吲哚类生物碱的含量。1.3、蟾皮药材中吲哚类生物碱含量测定：取蟾皮药材干燥后粉碎，过20目筛，称取蟾皮干粉4g，加氯仿30ml，超声提取15min，滤过。滤渣加甲醇50ml，超声提取15min，滤过，滤液蒸干，滤渣加水溶解稀释至适当浓度，然后按3.1项下规定的方法，自“加15％对二甲氨基苯甲醛盐酸(2→3)溶液”起，依法测定吸收度，由标准曲线回归方程计算得出蟾皮药材中吲哚类生物碱的含量。提取方法比较表1：实施例1序号1000g原料提取液中吲哚类生物碱的含量(mg)转移率(％)1403.942.52406.645.23374.740.94380.244.45363.941.3平均值385.8642.8表2：对比例1表3：实施例2序号1000g原料提取液中吲哚类生物碱的含量(mg)转移率(％)1409.842.52411.345.93396.741.44399.245.25393.942.8平均值402.243.6表4：对比例2序号1000g原料提取液中吲哚类生物碱的含量(mg)转移率(％)1390.340.82391.141.13366.239.34374.238.55359.937.9平均值376.339.5由表1和表2可见，本案方法可显著提高提取液中的吲哚类生物碱的含量，显著提高有效物质吲哚类生物碱的转移率。由表3和表4可见，一定量的乙醇可以提高萃取效率和转移率，但并非所有的醇都能与水配合产生夹带功能，因此乙醇的引入及其用量应受到限制。尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。当前第1页1 2 3