本发明涉及一种L-α-甘油磷酰胆碱的结晶分离纯化技术领域，具体涉及一种L-α-甘油磷酰胆碱的纯化方法。
背景技术：
L-α-甘油磷酰胆碱(GPC，Glycerphosphatidyl-choline)，分子结构为由于L-α-甘油磷酰胆碱对脑血管以及老年性脑退缩器质性病变综合征有较好的治疗效果，所以L-α-甘油磷酰胆碱被广泛地应用于老年性痴呆的临床治疗，L-α-甘油磷酰胆碱也被报道应用于治疗糖尿病、抑郁症、高血压以及慢性阻塞性肺部疾病，骨质疏松等疾病；同时，也可以作为美白剂，应用于化妆领域。
目前，L-α-甘油磷酰胆碱的制备方法大致可分两大类：第一就是半合成法，即通过生物发酵，提取技术，将L-α-甘油磷酰胆碱从动物或者植物组织中制备，该方法目前处于探索阶段，不适用工业化生产；第二就是化学合成方法，对于L-α-甘油磷酰胆碱制备过程基本可以分为两种，一种通过柱层析技术，即使用离子树脂制备L-α-甘油磷酰胆碱，该方法先使用硅胶柱、再通过离子树脂。另一种是结晶技术，即使用乙醇蒸发浓缩的方式。总之，有关柱层析技术报道的较多，而对于结晶技术制备L-α-甘油磷酰胆碱报道比较少。
其中，有报道公开了使用Form I和Form II晶种在酒精溶液、乙醇、异丙醇中结晶析出L-α-甘油磷酰胆碱晶型I和II。该专利虽然提到了制备晶型I和II的方法，但是通过该专利无法制备出高纯度的L-α-甘油磷酰胆碱，同时该方法收率较低，且有较大的吸湿性。另外有报道公开了在C2～C4醇溶液中析出固体，可制备出纯度为99.5％的L-α-甘油磷酰胆碱，并未指出单一杂质范围，且收率在80％～87％范围内。
根据ICH对药物纯度的规定，未知单杂要低于0.1％。目前，虽然柱层析技术可以获得高纯度的L-α-甘油磷酰胆碱，但是效率较低；虽然报道的结晶技术具有较高的生产效率，但是无法获得高纯度的L-α甘油磷酰胆碱产品。
技术实现要素：
本发明提供一种L-α-甘油磷酰胆碱的纯化方法，能够解决现有技术存在的难以同时实现高效率制备L-α-甘油磷酰胆碱和制备高纯度的L-α-甘油磷酰胆碱的问题。
为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种一种L-α-甘油磷酰胆碱的纯化方法，该方法包括以下步骤：将L-α-甘油磷酰胆碱粗品溶于第一溶剂或者第二溶剂中以获得L-α-甘油磷酰胆碱溶液，其中，所述第一溶剂为醇类、酯类、酮类或者乙腈的单一溶剂，所述第二溶剂为醇类与酯类、酮类或者乙腈中的一种或者多种组成的混合溶剂；将所述L-α-甘油磷酰胆碱溶液进行加热至溶清；将溶清后的所述L-α-甘油磷酰胆碱溶液进行降温，使温度降至-30～10℃；将降温后的L-α-甘油磷酰胆碱溶液进行保温，保温时间为至少2小时；将保温后的所述L-α-甘油磷酰胆碱溶液进行过滤并干燥以获得粉末状的L-α-甘油磷酰胆碱。
其中，所述第一溶剂选自甲醇、正戊醇、异戊醇、2-甲基-2-丁醇、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、丙酮或者乙腈中的一种，所述第二溶剂为醇类与乙酸乙酯、乙酸异丙酯、丙酮或者乙腈中的一种组成的混合溶剂。
其中，所述第二溶剂为甲醇与乙酸乙酯、乙酸异丙酯、丙酮或者乙腈中的一种组成的混合溶剂。
其中，所述第二溶剂中，甲醇与乙酸乙酯、甲醇与乙酸异丙酯、甲醇与丙酮或者甲醇与乙腈的质量比为1:10～10:1。
其中，所述第二溶剂中，甲醇与乙酸乙酯、甲醇与乙酸异丙酯、甲醇与丙酮或者甲醇与乙腈的质量比为1:5～1:1。
其中，当使用第一溶剂时，所述第一溶剂与所述L-α-甘油磷酰胆碱粗品的质量比为1:2～10:1；当使用第二溶剂时，所述第二溶剂与所述L-α-甘油磷酰胆碱粗品的质量比为1:2～10:1。
其中，当使用第一溶剂时，所述第一溶剂与所述L-α-甘油磷酰胆碱粗品的质量比为1:1～2:1；当使用第二溶剂时，所述第二溶剂与所述L-α-甘油磷酰胆碱粗品的质量比为1:2～2:1。
其中，将溶清后的所述L-α-甘油磷酰胆碱溶液进行降温的步骤中，使温度降至为-5～5℃。
其中，将降温后的L-α-甘油磷酰胆碱溶液进行保温的步骤中，所述保温时间为2～12小时。
其中，所述保温时间为4～8小时。
本发明的有益效果是：区别于现有技术的情况，本发明通过采用醇类、酯类、酮类或者乙腈的单一溶剂，或者采用醇类与酯类、酮类或者乙腈中的一种或者多种组成的混合溶剂对L-α-甘油磷酰胆碱进行溶解，由于第一溶剂和第二溶剂在温度较低时，产品的溶解度大大减小，并且此时杂质的溶解度相对较好，使得结晶过程收率高，纯度好。在加热、降温结晶等过程中，加热温度和降温后的温度以及时间的控制，均为L-α-甘油磷酰胆碱粗品在该类溶剂中结晶的较佳温度和时间，最后过滤、干燥得到粉末状的L-α-甘油磷酰胆碱，该L-α-甘油磷酰胆碱吸湿性较低。因此，本发明可制备出高纯度的L-α-甘油磷酰胆碱产品，实验数据表明，本发明的方法获得的L-α-甘油磷酰胆碱的纯度不低于99.80％，单一杂质不高于0.10％，满足了ICH对原料药中杂质限度控制要求；本发明的方法获得的L-α-甘油磷酰胆碱的收率在85％～95％范围内，且吸湿性有很大改善；并且，本发明还具备兼顾效率高，易于工业化放大生产等特点。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明L-α-甘油磷酰胆碱的纯化方法实施例的流程图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图1，图1是本发明L-α-甘油磷酰胆碱的纯化方法实施例的流程图。
本发明提供了一种L-α-甘油磷酰胆碱的纯化方法，该方法包括以下步骤：
S101、将L-α-甘油磷酰胆碱粗品溶于第一溶剂或者第二溶剂中以获得L-α-甘油磷酰胆碱溶液，其中，第一溶剂为醇类、酯类、酮类或者乙腈的单一溶剂，第二溶剂为醇类与酯类、酮类或者乙腈中的一种或者多种组成的混合溶剂。
具体而言，在一个实施例中，醇类溶剂选自甲醇、正戊醇、异戊醇或2-甲基-2-丁醇中的一种，酯类溶剂选自乙酸乙酯或者乙酸异丙酯，酮类溶剂为丙酮。第二溶剂则为醇类与乙酸乙酯、乙酸异丙酯、丙酮或者乙腈中的一种组成的混合溶剂。
具体地，在一个实施例中，第二溶剂为甲醇与乙酸乙酯、乙酸异丙酯、丙酮或者乙腈中的一种组成的混合溶剂。
第一溶剂和第二溶剂在较低温度时，对L-α-甘油磷酰胆碱粗品的溶解能力大大减小，同时对某些杂质的溶解度较好，因而使得结晶效率高，结晶所得的L-α-甘油磷酰胆碱纯度高。
S102、将L-α-甘油磷酰胆碱溶液进行加热至溶清。
具体地，加热的温度可以为50-60℃，例如53℃、55℃或者58℃，直至L-α-甘油磷酰胆碱完全溶解澄清。
S103、将溶清后的L-α-甘油磷酰胆碱溶液进行降温，使温度降至-30～10℃。
例如，在一个实施例中，降温后的温度为-25℃，-15℃，-9℃或者8℃。举例而言，降温后的温度为-5～5℃，例如-3℃，0℃或者2℃。
S104、将降温后的L-α-甘油磷酰胆碱溶液进行保温，保温时间为至少2小时。
将降温后的L-α-甘油磷酰胆碱溶液进行保温的步骤中，保温时间为2～12小时。保温时间为4～8小时。
S105、将保温后的L-α-甘油磷酰胆碱溶液进行过滤并干燥以获得粉末状的L-α-甘油磷酰胆碱。
区别于现有技术，本发明通过采用醇类、酯类、酮类或者乙腈的单一溶剂，或者采用醇类与酯类、酮类或者乙腈中的一种或者多种组成的混合溶剂对L-α-甘油磷酰胆碱进行溶解，由于第一溶剂和第二溶剂在温度较低时，产品的溶解度大大减小，并且此时杂质的溶解度相对较好，使得结晶过程收率高，纯度好。在加热、降温结晶等过程中，加热温度和降温后的温度以及时间的控制，均为L-α-甘油磷酰胆碱粗品在该类溶剂中结晶的较佳温度和时间，最后过滤、干燥得到粉末状的L-α-甘油磷酰胆碱，该L-α-甘油磷酰胆碱吸湿性较低。因此，本发明可制备出高纯度的L-α-甘油磷酰胆碱产品，实验数据表明，本发明的方法获得的L-α-甘油磷酰胆碱的纯度不低于99.80％，单一杂质不高于0.10％，满足了ICH对原料药中杂质限度控制要求；本发明的方法获得的L-α-甘油磷酰胆碱的收率在85％～95％范围内，且吸湿性有很大改善；并且，本发明还具备兼顾效率高，易于工业化放大生产等特点。
具体地，一些实施例中，所述第二溶剂中，甲醇与乙酸乙酯、甲醇与乙酸异丙酯、甲醇与丙酮或者甲醇与乙腈的质量比为1:10～10:1。另一些实施例中，所述第二溶剂中，甲醇与乙酸乙酯、甲醇与乙酸异丙酯、甲醇与丙酮或者甲醇与乙腈的质量比为1:5～1:1。例如，甲醇与乙酸乙酯、甲醇与乙酸异丙酯、甲醇与丙酮或者甲醇与乙腈的质量比为1:8，1:2，3:1，5:1或者8:1等。
举例而言，当使用第一溶剂溶解L-α-甘油磷酰胆碱粗品时，所述第一溶剂与所述L-α-甘油磷酰胆碱粗品的质量比为1:2～10:1。在另一个实施例中，所述第一溶剂与所述L-α-甘油磷酰胆碱粗品的质量比为1:1～2:1。例如，第一溶剂与所述L-α-甘油磷酰胆碱粗品的质量比为3:1，5:1，7:1或者9:1。
在一个实施例中，当使用第二溶剂溶解L-α-甘油磷酰胆碱粗品时，所述第二溶剂与所述L-α-甘油磷酰胆碱粗品的质量比为1:2～10:1。在另一个实施例中，当使用第二溶剂时，所述第二溶剂与所述L-α-甘油磷酰胆碱粗品的质量比为1:2～2:1。例如，第二溶剂与所述L-α-甘油磷酰胆碱粗品的质量比为1:1，3:1，6:1或者8:1。
其中，第一溶剂或者第二溶剂的使用量超过所述范围，则结晶化效率下降而降低收率及纯度。
以下是通过本发明的方法纯化L-α-甘油磷酰胆碱的具体实施例：
实施例一
将20.00gL-α-甘油磷酰胆碱粗品溶解在21.50g甲醇中，开始搅拌，升温至50～60℃,回流溶解，降低至-10℃，在此温度下保温搅拌2小时，过滤，真空干燥箱，55℃，干燥8小时，得白色固体16.52g，其纯度为99.85％，最大单一杂质为0.05％。
实施例二
将30.00gL-α-甘油磷酰胆碱粗品溶解在15.05g甲醇中，开始搅拌，升温至50～60℃,回流溶解，降低至-10℃，在此温度下保温搅拌4小时，过滤，鼓风烘箱，75～85℃，干燥8～10小时，得白色固体25.52g，其纯度为99.82％，最大单一杂质为0.05％。
实施例三
将25.01gL-α-甘油磷酰胆碱粗品溶解在50.07g甲醇和49.93g叔戊醇中，开始搅拌，升温至50～60℃,回流溶解，降低至5℃，在此温度下保温搅拌4小时，过滤，干燥8～10小时，得白色固体23.20g，其纯度为99.81％，最大单一杂质为0.09％。
实施例四
将25.00gL-α-甘油磷酰胆碱粗品溶解在45.01g甲醇和80.10g叔戊醇中，开始搅拌，升温至50～60℃,回流溶解，降低至0℃，在此温度下保温搅拌8小时，过滤，干燥8～10小时，得白色固体23.20g，其纯度为99.81％，最大单一杂质为0.09％。
实施例五
将25.00gL-α-甘油磷酰胆碱粗品溶解在25.01g甲醇和24.98g丙酮中，开始搅拌，升温至50～60℃,回流溶解，降低至0℃，在此温度下保温搅拌8小时，过滤，干燥8～10小时，得白色固体21.36g，其纯度为99.82％，最大单一杂质为0.08％。
实施例六
将25.00gL-α-甘油磷酰胆碱粗品溶解在25.01g甲醇和24.98g丙酮中，开始搅拌，升温至50～60℃,回流溶解，降低至0℃，在此温度下保温搅拌4小时，过滤，干燥8～10小时，得白色固体22.20g，其纯度为99.80％，最大单一杂质为0.10％。
实施例七
将25.00gL-α-甘油磷酰胆碱粗品溶解在28.04g甲醇和50.02g乙腈中，开始搅拌，升温至50～60℃,回流溶解，降低至-2℃，在此温度下保温搅拌8小时，过滤，干燥8～10小时，得白色固体22.60g，其纯度为99.80％，最大单一杂质为0.10％。
实施例八
将25.57gL-α-甘油磷酰胆碱粗品溶解在25.09g甲醇和50.01g乙腈中，开始搅拌，升温至50～60℃,回流溶解，降低至0℃，在此温度下保温搅拌8小时，过滤，干燥(8～10)小时，得白色固体21.06g，其纯度为99.80％，最大单一杂质为0.10％。
实施例九
将25.15gL-α-甘油磷酰胆碱粗品溶解在25.06g甲醇和49.78g乙腈中，开始搅拌，升温至50～60℃,回流溶解，降低至5℃，在此温度下保温搅拌4小时，过滤，干燥8～10小时，得白色固体21.06g，其纯度为99.82％，最大单一杂质为0.08％。
实施例十
将25.03gL-α-甘油磷酰胆碱粗品溶解在25.06g甲醇和24.97g乙腈中，开始搅拌，升温至50～60℃，回流溶解，降低至-5℃，在此温度下保温搅拌8小时，过滤，干燥8～10小时，得白色固体21.89g，其纯度为99.83％，最大单一杂质为0.07％。
实施例十一
将30.03gL-α-甘油磷酰胆碱粗品溶解在15.06g甲醇中，开始搅拌，升温至50～60℃，回流溶解，降低至-30℃，在此温度下保温搅拌12小时，过滤，干燥8～10小时，得白色固体25.62g，其纯度为99.83％，最大单一杂质为0.07％。
实施例十二
将5.05gL-α-甘油磷酰胆碱粗品溶解在50.06g甲醇中，开始搅拌，升温至50～60℃，回流溶解，降低至10℃，在此温度下保温搅拌4小时，过滤，干燥8小时，得白色固体4.72g，其纯度为99.83％，最大单一杂质为0.07％。
实施例十三
将25.03gL-α-甘油磷酰胆碱粗品溶解在50.06g甲醇中，开始搅拌，升温至50～60℃，回流溶解，降低至-5℃，在此温度下保温搅拌8小时，过滤，干燥10小时，得白色固体23.10g，其纯度为99.83％，最大单一杂质为0.07％。
实施例十四
将60.06gL-α-甘油磷酰胆碱粗品溶解在27.25g甲醇和2.72g乙酸乙酯中，开始搅拌，升温至50～60℃，回流溶解，降低至-5℃，在此温度下保温搅拌2小时，过滤，干燥10小时，得白色固体51.71g，其纯度为99.83％，最大单一杂质为0.07％。
实施例十五
将5.03gL-α-甘油磷酰胆碱粗品溶解在4.55g甲醇和45.45g乙酸异丙酯中，开始搅拌，升温至50～60℃，回流溶解，降低至-5℃，在此温度下保温搅拌12小时，过滤，干燥10小时，得白色固体4.81g，其纯度为99.83％，最大单一杂质为0.07％。
实施例十六
将25.06gL-α-甘油磷酰胆碱粗品溶解在8.33g甲醇和41.66g乙腈中，开始搅拌，升温至50～60℃，回流溶解，降低至-5℃，在此温度下保温搅拌12小时，过滤，干燥10小时，得白色固体23.11g，其纯度为99.83％，最大单一杂质为0.07％。
综上所述，本发明能高效地制备L-α-甘油磷酰胆碱，并且，获得的L-α-甘油磷酰胆碱纯度高，吸湿性较低，本发明还具备兼顾效率高，易于工业化放大生产等特点。
以上所述仅为本发明的实施方式，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。