一种EYFP基因标记根瘤菌的方法与流程

技术特征：

1.一种EYFP基因标记根瘤菌的方法，其特征在于所述方法步骤如下：

一、将EYFP-pUC19载体酶切纯化后获得EYFP产物；

二、将EYFP产物与载体pBBR1MCS-2相连，酶切验证，将构建的EYFP-pBBR1MCS-2转入E.coli DH5α中；

三、将供体菌EYFP-pBBR1MCS-2、辅助菌pRK2013、受体菌慢生型大豆根瘤菌三亲本杂交；

四、同源重组：通过在Km^R的平板上生长，筛选重组子；

五、PCR验证，确定筛选的重组子已经插入到慢生型大豆根瘤菌的基因组中，而基因组中不含有野生株；

六、显微镜下观察EYFP蛋白基因表达。

2.根据权利要求1所述的EYFP基因标记根瘤菌的方法，其特征在于所述步骤一和二中，酶切体系如下：

3.根据权利要求1所述的EYFP基因标记根瘤菌的方法，其特征在于所述步骤二中，EYFP产物与载体pBBR1MCS-2相连的反应体系如下：

4.根据权利要求1所述的EYFP基因标记根瘤菌的方法，其特征在于所述步骤五中，PCR体系如下：

5.根据权利要求1所述的EYFP基因标记根瘤菌的方法，其特征在于所述步骤五中，PCR反应参数如下：