技术总结
本发明公开了一种EYFP基因标记根瘤菌的方法，所述方法包括以下步骤：一、将EYFP‑pUC19载体酶切纯化后获得EYFP产物；二、将EYFP产物与载体pBBR1MCS‑2相连，酶切验证，将构建的EYFP‑pBBR1MCS‑2转入E.coli DH5α中；三、将供体菌EYFP‑pBBR1MCS‑2、辅助菌pRK2013、受体菌慢生型大豆根瘤菌三亲本杂交；四、同源重组：通过在KmR的平板上生长，筛选重组子；五、PCR验证，确定筛选的重组子已经插入到慢生型大豆根瘤菌的基因组中，而基因组中不含有野生株；六、显微镜下观察EYFP蛋白基因表达。本发明采用同源重组的方法，将EYFP与载体pBBR1MCS‑2连接，通过KmR抗性筛选重组子后，采用PCR法筛选突变株，确保插入染色中，使其稳定表达。
技术研发人员：于徳水;甄涛;张先成;于盛竹;曲娟娟
受保护的技术使用者：黑龙江省科学院微生物研究所
文档号码：201610847787
技术研发日：2016.09.23
技术公布日：2017.02.22