本发明涉及一种海产品中小分子多肽的提取方法，具体是一种小分子星虫多肽的提取方法。
背景技术：
随着科技的飞速发展和营养知识的普及，以及人均收入水平的增加和消费水平的提高，人类对于食品的要求已经从温饱过渡到了营养水平，天然、健康、营养、安全已经成为21世纪食品工业发展的主要议题。胶原蛋白作为一种重要的生物体组织结构蛋白多肽，越来越引起人们的关注和兴趣，市场潜力巨大，经济价值较高。与大分子蛋白质相比，胶原蛋白小分子活性多肽不仅具有合成成本低、利用率高、毒性和免疫原性低等特点，还具有高效的抗氧化、抗菌和抗癌等药理作用，被广泛应用于医药、美容保健和食品行业。
海洋中的生物种类繁多，资源极其丰富，而且生物链基本健全，再生能力强。海洋生物含有丰富的有益于人类健康的蛋白质、不饱和脂肪酸、牛磺酸，其微量元素谱系也大大优于陆地生物，是人类健康食品极好的来源。海洋环境与陆地环境有很大的不同，如高压、低温、高温(海底火山口及附近)和高盐等。为了适用海洋环境，海洋生物蛋白质无论氨基酸的组成还是氨基酸的序列都与陆地生物蛋白质有很大的区别。同时，海洋生物蛋白资源无论在种类还是数量上都远远大于陆地蛋白质资源。种类繁多的蛋白氨基酸序列，用特异的蛋白酶水解，可释放出具有生理功能的功能肽。因此，采用现代分离技术对这些资源进行开发利用，将是当今科学研究最具发展前景的领域之一。
从不同原料中提取多肽的传统工艺主要可分为五类，即酸法、碱法、酶法、盐法以及热水浸提法，其基本原理都是根据多肽的特性，改变蛋白质的外界环境，把多肽从其他蛋白质中分离出来。酸法和碱法是分别将多肽在酸性和碱性环境下提取出来的方法，酸法在多肽的提取工艺中应用比较广泛，而碱法报道很少；盐法是将原料在一定浓度的盐溶液中提取出来，主要使用的盐有氯化钠、氯化钾和乙酸钠。以上三种方法虽然工艺简单，成本也较低，但是由于提取过程中需要使用大量的淡水和酸碱盐，属于高能耗的提取方法，排放的酸碱盐会对周围生态环境产生不利影响，不符合绿色经济和可持续性发展理念。而热水浸提法需要使用大量的淡水和能源，不符合国家及世界经济发展的主流。生物酶法是利用酶反应的温和高效性在一定的环境条件下将多肽从不同的原料中提起出来的方法，可克服上述其他工艺的不足，是一种升级的工艺。
星虫动物门(Sipuncula)是所有蠕虫状海洋无脊椎动物的通称。星虫亦称沙虫、土笋、泥丁。星虫化石发现于中寒武纪。星虫动物门已知约320种，分为：2纲4目6科17属：革囊星虫纲(Phascolosomida)，包括盾管星虫目(Aspidosi-phoniformes)、革囊星虫目(Phascolosomaformes)；方格星虫纲(Sipunculida)，包括戈芬星虫目(Golfingiaformes)、方格星虫(Sipunculiformes)。星虫滋味鲜美，风味独特，且在南方沿海产量较大，自古以来就被沿海居民所食用，其性凉味寒，具有滋阴、补肾、去火、清肺热、祛痰咳的食疗作用，被称为“动物人参”，民间用作冬虫夏草的代用品。可口革囊星虫(又称方格星虫、海定星虫)含有22种以上的脂肪酸，其中高度不饱和脂肪酸含量占总脂肪酸45.11％，花生四烯酸(AA)含量最高达20.11％，DHA和EPA含量比较丰富；富含18种氨基酸，包含人类所有的必需氨基酸，其中精氨酸含量最高。
目前对于星虫的食用，以直接食用为主，而以星虫为原料的高附加值产品较少，业内尚未开发出针对小分子星虫多肽提取的行之有效的方法，工业化提取小分子星虫多肽，在技术和应用上还是空白。而对于小分子星虫多肽的提取开发对我国沿海丰富海洋生物的开发利用具有重要意义。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是：提供一种小分子星虫多肽的提取方法，该提取方法可操作性强，其对小分子星虫多肽的提取率为0.5～3.9％，制备得到的小分子星虫多肽的纯度高，可有效保证小分子星虫多肽的生物活性。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种小分子星虫多肽的提取方法，包括以下步骤：
(1)粗洗：以新鲜的星虫为原料，用清水洗尽表面泥沙；
(2)去内脏：将洗尽表面泥沙的星虫放在平整的水泥地上，用宽度20厘米、直径60厘米的圆石磨反复压制星虫，直至星虫内脏及泥沙出尽；
(3)清洗：用自来水将去内脏后的星虫洗净；
(4)去皮：用长10厘米、宽5厘米的刮刀，刮去星虫表皮；
(5)表皮清除：用自来水洗净刮下的星虫表皮；
(6)酶解：将洗净表皮后的星虫和自来水或纯净水以1:3～10的重量比加至生物酶解罐中，并向生物酶解罐中加入碱性蛋白酶，碱性蛋白酶的加入量为洗净表皮后的星虫重量的0.5～5％，以40～60℃的温度酶解3～10小时，得到酶解产物；
(7)分离：将酶解产物用孔径5000～100000道尔顿的超滤膜分离，取下清液；
(8)浓缩：对步骤(7)中得到的下清液用孔径小于80道尔顿的纳滤膜浓缩，取上清液；
(9)干燥：对步骤(8)中得到的上清液采用喷雾干燥机或冻干机进行干燥，即得到小分子星虫多肽成品。
作为优选，所述的新鲜的星虫为方格星虫。
作为优选，所述的喷雾干燥机干燥的进风温度为125～148℃，所述的冻干机干燥的温度为零下60℃。
与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明提供的一种小分子星虫多肽的提取方法，将生物酶解技术和膜技术进行科学合理的整合，通过碱性蛋白酶对原料进行生物酶解，再先后经过特定截留分子量的超滤膜和纳滤膜分离浓缩提纯，得到含有小分子星虫多肽的浓缩液，最后对该浓缩液进行喷雾干燥，即得到小分子星虫多肽成品。本发明提取方法可操作性强，其对小分子星虫多肽的提取率为0.5～3.9％，制备得到的小分子星虫多肽的纯度高，可有效保证小分子星虫多肽的生物活性，后续可作为各种高附加值产品的原料，具有广阔的市场空间和经济价值。
附图说明
图1为实施例1的小分子星虫多肽的色谱图。
具体实施方式
以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
实施例1的小分子星虫多肽的提取方法，包括以下步骤：
(1)粗洗：以新鲜的方格星虫为原料，用清水洗尽表面泥沙；
(2)去内脏：将洗尽表面泥沙的星虫放在平整的水泥地上，用宽度20厘米、直径60厘米的圆石磨反复压制星虫，直至星虫内脏及泥沙出尽；
(3)清洗：用自来水将去内脏后的星虫洗净；
(4)去皮：用长10厘米、宽5厘米的刮刀，刮去星虫表皮；
(5)表皮清除：用自来水洗净刮下的星虫表皮；
(6)酶解：将洗净表皮后的星虫和自来水或纯净水以1:4的重量比加至生物酶解罐中，并向生物酶解罐中加入碱性蛋白酶，碱性蛋白酶的加入量为洗净表皮后的星虫重量的0.5％，以60℃的温度酶解8小时，得到酶解产物；
(7)分离：将酶解产物用孔径5000～100000道尔顿的超滤膜分离，取下清液；
(8)浓缩：对步骤(7)中得到的下清液用孔径小于80道尔顿的纳滤膜浓缩，取上清液；
(9)干燥：对步骤(8)中得到的上清液采用喷雾干燥机进行干燥，即得到实施例1的小分子星虫多肽成品。经检测，实施例1的小分子星虫多肽的提取率为3.9％。
实施例2的小分子星虫多肽的提取方法，包括以下步骤：
(1)粗洗：以新鲜的方格星虫为原料，用清水洗尽表面泥沙；
(2)去内脏：将洗尽表面泥沙的星虫放在平整的水泥地上，用宽度20厘米、直径60厘米的圆石磨反复压制星虫，直至星虫内脏及泥沙出尽；
(3)清洗：用自来水将去内脏后的星虫洗净；
(4)去皮：用长10厘米、宽5厘米的刮刀，刮去星虫表皮；
(5)表皮清除：用自来水洗净刮下的星虫表皮；
(6)酶解：将洗净表皮后的星虫和自来水或纯净水以1:9的重量比加至生物酶解罐中，并向生物酶解罐中加入碱性蛋白酶，碱性蛋白酶的加入量为洗净表皮后的星虫重量的0.2％，以50℃的温度酶解4小时，得到酶解产物；
(7)分离：将酶解产物用孔径5000～100000道尔顿的超滤膜分离，取下清液；
(8)浓缩：对步骤(7)中得到的下清液用孔径小于80道尔顿的纳滤膜浓缩，取上清液；
(9)干燥：对步骤(8)中得到的上清液采用冻干机进行干燥，即得到实施例2的小分子星虫多肽成品。经检测，实施例1的小分子星虫多肽的提取率为3.8％。
实施例3的小分子星虫多肽的提取方法，包括以下步骤：
(1)粗洗：以新鲜的方格星虫为原料，用清水洗尽表面泥沙；
(2)去内脏：将洗尽表面泥沙的星虫放在平整的水泥地上，用宽度20厘米、直径60厘米的圆石磨反复压制星虫，直至星虫内脏及泥沙出尽；
(3)清洗：用自来水将去内脏后的星虫洗净；
(4)去皮：用长10厘米、宽5厘米的刮刀，刮去星虫表皮；
(5)表皮清除：用自来水洗净刮下的星虫表皮；
(6)酶解：将洗净表皮后的星虫和自来水或纯净水以1:6的重量比加至生物酶解罐中，并向生物酶解罐中加入碱性蛋白酶，碱性蛋白酶的加入量为洗净表皮后的星虫重量的1.5％，以48℃的温度酶解10小时，得到酶解产物；
(7)分离：将酶解产物用孔径5000～100000道尔顿的超滤膜分离，取下清液；
(8)浓缩：对步骤(7)中得到的下清液用孔径小于80道尔顿的纳滤膜浓缩，取上清液；
(9)干燥：对步骤(8)中得到的上清液采用喷雾干燥机进行干燥，即得到实施例3的小分子星虫多肽成品。经检测，实施例1的小分子星虫多肽的提取率为3.4％。
以上具体实施例中，采用喷雾干燥机或冻干机干燥，喷雾干燥机干燥的进风温度为125～148℃，冻干机干燥的温度为零下60℃。
对于实施例1的小分子星虫多肽成品，通过高效液相色谱仪并依据GB/T 22729-2008《海洋鱼低聚肽粉》检测肽分子量分布，得到的色谱图见图1，分子量检测结果见表1。
表1实施例1的小分子星虫多肽成品的分子量检测结果
从表1可见，实施例1的小分子星虫多肽成品中，分子量小于2000道尔顿的多肽的重量比为99.35％。