本申请涉及多糖制备方法，更具体地说，涉及一种有机黑木耳多糖及其颗粒制备方法。
背景技术：
有机黑木耳子实体胶质，成圆盘形，耳形不规则形，直径3－12厘米。新鲜时软，干后成角质。口感细嫩，风味特殊，是一种营养丰富的著名食用菌。
有机黑木耳子实体胶质，成圆盘形，耳形不规则形，直径3－12厘米。新鲜时软，干后成角质。口感细嫩，风味特殊，是一种营养丰富的著名食用菌。干黑木耳含糖类、蛋白质10.6克、脂肪0.2克、热量306焦、氨基酸、维生素和矿物质。水发木耳蛋白质极低，百克含1.5克。有益气、充饥、轻身强智、止血止痛、补血活血等功效。富含多糖胶体，有良好的清滑作用，是矿山工人、纺织工人的重要保健食品。还具有一定的抗癌和治疗心血管疾病功能。
营养价值：1、木耳中铁的含量极为丰富；2、木耳含有维生素K，能减少血液凝块，预防血栓症的发生，有防治动脉粥样硬化和冠心病的作用；3、木耳中的胶质可把残留在人体消化系统内的灰尘、杂质吸附集中起来排出体外，从而起到清胃涤肠的作用；4、它还有帮助消化纤维类物质功能。5、它对胆结石、肾结石等内源性异物也有比较显著的化解功能；6、木耳含有抗肿瘤活性物质，能增强机体免疫力，经常食用可防癌抗癌。
作用功效：1.木耳中铁的含量极为丰富，故常吃木耳能养血驻颜，令人肌肤红润，容光焕发，并可防治缺铁性贫血。
2.木耳含有维生素K，能维持体内凝血因子的正常水平，防止出血。
3.木耳中的胶质可把残留在人体消化系统内的灰尘、杂质吸附集中起来排出体外，从而起到清胃涤肠的作用
4.它对胆结石、肾结石等内源性异物也有比较显著的化解功能。
5.它还有帮助消化纤维类物质功能，对无意中吃下的难以消化的头发、谷壳、木渣、沙子、金属屑等异物有溶解与烊化作用，因此，它是矿山、化工和纺织工人不可缺少的保健食品。
6.木耳含有抗肿瘤活性物质，能增强机体免疫力，经常食用可防癌抗癌。
适用人群：一般人群均可食用。
1.适合心脑血管疾病、结石症患者食用，特别适合缺铁的人士、矿工、冶金工人、纺织工、理发师食用。
2.有出血性疾病、腹泻者的人应不食或少食。
3.孕妇不宜多吃。
4.食用鲜木耳可中毒，新鲜木耳中含有一种化学名称为“卟啉”的特殊物质，因为这种物质的存在，人吃了新鲜木耳后，经阳光照射会发生植物日光性皮炎，引起皮肤瘙痒，使皮肤暴露部分出现红肿、痒痛，产生皮疹、水泡，水肿。相比起来，干木耳更安全。因为干木耳是新鲜木耳经过曝晒处理的，在曝晒过程中大部分卟啉会被分解掉。食用前干木耳又要用水浸泡，这会将剩余的毒素溶于水，使干木耳最终无毒，但要注意的是，浸泡干木耳时最好换两到三遍水，才能最大程度析走有害物质。
目前市场上大多数黑木耳多糖制备方法具有以下几种缺点和隐患：
1、采用方法单一，提取率低；
2、使用大量有机溶剂，有残留；
3、提取周期长，成本高；
技术实现要素：
有鉴于此，本申请要解决的技术问题在于客服现有技术的缺陷，采用多种提取方法相结合的思路，利用微波提取法、超声提取法、水提醇沉法、高速逆流色谱发等多种方法相结合的方法，一定程度上提高提取率、减少流程耗费时间、降低成本。
为解决上述问题，本申请的技术方案为：
提供一种有机黑木耳多糖制备方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：
步骤1：取有机黑木耳子实体，干燥后粉碎，得有机黑木耳干粉；
步骤2：将有机黑木耳干粉与水混合，浸润，得提取液；
步骤3：将步骤2中的提取液进行微波和超声提取，取上清液待用；
步骤4：取步骤3中上清液，除蛋白并进行脱色；
步骤5：将步骤4中产品加入乙醇进行醇沉，过滤洗涤得多糖粗品；
步骤6：将步骤5中多糖粗品利用高速逆流色谱进行纯化，得有机黑木耳多糖。
所述步骤1，所述有机黑木耳粉碎后，过40－100目筛，得到有机黑木耳干粉。
所述步骤2，所述有机黑木耳干粉与水质量比为1：10￣50。
所述步骤3，微波提取功率为功率500－800W，时间为2－5min；超声提取功率为700－1500W功率，2－5min。
所述步骤4，除蛋白方法为加入sevage试剂；脱色方法为加入活性炭，加热放冷，取上清液。
所述步骤5，醇沉时间为5－24小时。
所述步骤6中，所述高速逆流色谱的色谱方法为：
采用高速逆流色谱仪进行分离纯化，流动相固定相混合液包括PEG1000、K2HPO4、KH2PO4和H2O，混合溶剂分层后，上层为固定相，下层为流动相；将固定相注入高速逆流色谱仪，将流动相与所述步骤5中多糖粗品溶解后并注入高速逆流色谱仪，收集有机黑木耳多糖。
提供一种有机黑木耳多糖颗粒制备方法，包括如下步骤：
步骤1：将所述有机黑木耳多糖进行干燥，得有机黑木耳多糖干粉；
步骤2：加入辅料混合；
步骤3：干法制粒得有机黑木耳多糖颗粒。
所述步骤1中，所述干燥为冷冻干燥。
所述步骤2中，所述辅料为糊精、麦芽糊精、乳糖和蔗糖中的一种或几种。
本发明提供的有机黑木耳多糖及其颗粒的制备方法相对于现有技术的有益效果是：
1、超声提取法、微波提取法、水提醇沉法和高速逆流色谱法等多种方法相结合的方法对黑木耳的多糖成分进行提取，多糖纯度高、提取率高；
2、流程中使用有机溶剂少，无残留，无隐患，食用安全；
3、流程时间短、成本低廉；
具体实施方式
下面结合具体实施例的方式对本申请的权利要求做进一步的详细说明，在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本申请。
但是本申请能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本申请内涵的情况下做类似改进，因此本申请不受下面公开的具体实施的限制。
提供一种有机黑木耳多糖制备方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：
步骤1：取有机黑木耳子实体，干燥后粉碎，得有机黑木耳干粉；
步骤2：将有机黑木耳干粉与水混合，浸润，得提取液；
步骤3：将步骤2中的提取液进行微波和超声提取，取上清液待用；
步骤4：取步骤3中上清液，除蛋白并进行脱色；
步骤5：将步骤4中产品加入乙醇进行醇沉，过滤洗涤得多糖粗品；
步骤6：将步骤5中多糖粗品利用高速逆流色谱进行纯化，得有机黑木耳多糖。
上述，有机黑木耳为一种有机食品；有机食品(Organic Food)也叫生态或生物食品等。有机食品是国际上对无污染天然食品比较统一的提法。有机食品通常来自于有机农业生产体系，根据国际有机农业生产要求和相应的标准生产加工的。除有机食品外，国际上还把一些派生的产品如有机化妆品、纺织品、林产品或有机食品生产而提供的生产资料，包括生物农药、有机肥料等，经认证后统称有机产品。
需要理解的是，有机食品主要包括一般的有机农产品(例如有机杂粮、有机水果、有机蔬菜等)、有机茶产品、有机食用菌产品、有机畜禽产品、有机水产品、有机蜂产品、有机奶粉、采集的野生产品以及用上述产品为原料的加工产品。国内市场销售的有机食品主要是蔬菜、大米、茶叶、蜂蜜、羊奶粉、有机杂粮、有机水果、有机蔬菜等。
判断标准：
1、原料来自于有机农业生产体系或野生天然产品。
2、有机食品在生产和加工过程中必须严格遵循有机食品生产、采集、加工、包装、贮藏、运输标准。
3、有机食品生产和加工过程中必须建立严格的质量管理体系、生产过程控制体系和追踪体系，因此一般需要有转换期；这个转换过程一般需要2－3年时间，才能够被批准为有机食品。
4、有机食品必须通过合法的有机食品认证机构的认证。
所述步骤1，所述有机黑木耳粉碎后，过40－100目筛，得到有机黑木耳干粉。
上述，有机黑木耳粉碎、过筛步骤可大幅度提高有机黑木耳中多糖成分的提取率，有机黑木耳粉碎后粉末粒径一般为50－300目，过筛后粒径比较均匀，较易提取。
所述步骤2，所述有机黑木耳干粉与水质量比为1：10～50。
上述，有机黑木耳干粉与水混合，比例可依据粉末颗粒的湿度、蓬松状态、所占体积选择所加入水的量；如湿度较大，则粉末颗粒所占空间较小，可选择有机黑木耳干粉与水质量比为1：10；如粉末颗粒蓬松，则需增加加水量。
所述步骤3，微波提取功率为功率500－800W，时间为2－5min；超声提取功率为700－1500W功率，2－5min。
上述，需要理解的是，微波提取(萃取)是利用电磁场的作用使固体或半固体物质中的某些有机物成分与基体有效的分离，并能保持分析对象的原本化合物状态的一种分离方法。微波是指频率在300兆赫至300千兆赫的电磁波。
需要理解的是，微波提取的机理可从以下3个方面来分析：
1、微波辐射过程是高频电磁波穿透萃取介质到达物料内部的微管束和腺胞系统的过程。由于吸收了微波能，细胞内部的温度将迅速上升，从而使细胞内部的压力超过细胞壁膨胀所能承受的能力，结果细胞破裂，其内的有效成分自由流出，并在较低的温度下溶解于萃取介质中。通过进一步的过滤和分离，即可获得所需的萃取物。
2、微波所产生的电磁场可加速被萃取组分的分子由固体内部向固液界面扩散的速率。例如，以水作溶剂时，在微波场的作用下，水分子由高速转动状态转变为激发态，这是一种高能量的不稳定状态。此时水分子或者汽化以加强萃取组分的驱动力，或者释放出自身多余的能量回到基态，所释放出的能量将传递给其他物质的分子，以加速其热运动，从而缩短萃取组分的分子由固体内部扩散至固液界面的时间，结果使萃取速率提高数倍，并能降低萃取温度，最大限度地保证萃取物的质量。
3、由于微波的频率与分子转动的频率相关连，因此微波能是一种由离子迁移和偶极子转动而引起分子运动的非离子化辐射能，当它作用于分子时，可促进分子的转动运动，若分子具有一定的极性，即可在微波场的作用下产生瞬时极化，并以24.5亿次/s的速度作极性变换运动，从而产生键的振动、撕裂和粒子间的摩擦和碰撞，并迅速生成大量的热能，促使细胞破裂，使细胞液溢出并扩散至溶剂中。在微波萃取中，吸收微波能力的差异可使基体物质的某些区域或萃取体系中的某些组分被选择性加热，从而使被萃取物质从基体或体系中分离，进入到具有较小介电常数、微波吸收能力相对较差的萃取溶剂中。
需要理解的是，微波提取的特点为：
微波具有波动性、高频性、热特性和非热特性四大特点，这决定了微波萃取具有以下特点：
1试剂用量少，节能，污染小。
2加热均匀，且热效率较高。传统热萃取是以热传导、热辐射等方式自外向内传递热量，而微波萃取是一种“体加热”过程，即内外同时加热，因而加热均匀，热效率较高。微波萃取时没有高温热源，因而可消除温度梯度，且加热速度快，物料的受热时间短，因而有利于热敏性物质的萃取。
3微波萃取不存在热惯性，因而过程易于控制。
4微波萃取无需干燥等预处理，简化了工艺，减少了投资。
5微波萃取的处理批量较大，萃取效率高，省时。与传统的溶剂提取法相比，可节省50％￣90％的时间。
6微波萃取的选择性较好。由于微波可对萃取物质中的不同组分进行选择性加热，因而可使目标组分与基体直接分离开来，从而可提高萃取效率和产品纯度。
7微波萃取的结果不受物质含水量的影响，回收率较高。
基于以上特点，微波萃取常被誉为“绿色提取工艺”。
需要理解的是，超声提取也称为超声波提取；主要是依据物质中有效成分和有效成分群体的存在状态、极性、溶解性等设计的一项学科。合理利用超声波振动的方法进行提取的新工艺，使溶剂快速地进入固体物质中，将其物质所含的有机成分尽可能完全地溶于溶剂之中，得到多成分混合提取液。利用超声波技术来强化提取分离过程，可有效提高提取分离率，缩短提取时间、节约成本、甚至还可以提高产品的质量和产量。超声波提取(也称为超声波萃取)以其提取温度低、提取率高、提取时间短的独特优势被具有创新意识者应用于中药材和各种动、植物有效含量的提取，是替代传统剪切工艺方法实现高效、节能、环保式提取的现代高新技术手段。超声波提取有两层含义：超声技术的应用和药物中化学成分的提取。即利用超声波所产生的的空化等特殊作用，将药物中所含化学成分快速高效地提取出来的一项新的提取技术。
超声波提取是利用超声波具有的机械效应，空化效应和热效应，通过增大介质分子的运动速度、增大介质的穿透力以提取生物有效成分。
1、机械效应：超声波在介质中的传播可以使介质质点在其传播空间内产生振动，从而强化介质的扩散、传播，这就是超声波的机械效应。超声波在传播过程中产生一种辐射压强，沿声波方向传播，对物料有很强的破坏作用，可使细胞组织变形，植物蛋白质变性；同时，它还可以给予介质和悬浮体以不同的加速度，且介质分子的运动速度远大于悬浮体分子的运动速度。从而在两者间产生摩擦，这种摩擦力可使生物分子解聚，使细胞壁上的有效成分更快地溶解于溶剂之中。
2、空化效应：通常情况下，介质内部或多或少地溶解了一些微气泡，这些气泡在超声波的作用下产生振动，当声压达到一定值时，气泡由于定向扩散而增大，形成共振腔，然后突然闭合，这就是超声波的空化效应。这种气泡在闭合时会在其周围产生几千个大气压的压力，形成微激波，它可造成植物细胞壁及整个生物体破裂，而且整个破裂过程在瞬间完成，有利于有效成分的溶出。
3热效应：和其它物理波一样，超声波在介质中的传播过程也是一个能量的传播和扩散过程，即超声波在介质的传播过程中，其声能不断被介质的质点吸收，介质将所吸收的能量全部或大部分转变成热能，从而导致介质本身和药材组织温度的升高，增大了药物有效成分的溶解速度。由于这种吸收声能引起的药物组织内部温度的升高是瞬间的，因此可以使被提取的成分的生物活性保持不变。
需要理解的是，超声波提取具有如下特点：
1.提取效率高：超声波独具的物理特性能促使植物细胞组织破壁或变形，使中药有效成分提取更充分，提取率比传统工艺显著提高达50～500％；
2.提取时间短：超声波强化中药提取通常在24～40分钟即可获得最佳提取率，提取时间较传统方法大大缩短2/3以上，药材原材料处理量大；
3.提取温度低：超声提取中药材的最佳温度在40～60℃，对遇热不稳定、易水解或氧化的药材中有效成分具有保护作用，同时大大节能能耗；
4.适应性广：超声提取中药材不受成分极性、分子量大小的限制，适用于绝大多数种类中药材和各类成分的提取；
5.提取药液杂质少，有效成分易于分离、纯化；
6.提取工艺运行成本低，综合经济效益显著；
7.操作简单易行，设备维护、保养方便。
上述，本申请中有机黑木耳多糖制备方法中采用超声波微波协同提取设备，大大缩短了整体提取的时间，提高了提取率的同时大幅降低了时间上的浪费。
所述步骤4，除蛋白方法为加入sevage试剂；脱色方法为加入活性炭，加热放冷，取上清液。
上述，常用的去除多糖中蛋白质的方法有：Sevag法、三氟三氯乙烷法、三氯醋酸法，这些方法的原理是使多糖不沉淀而使蛋白质沉淀。sevage试剂为利用蛋白质在三氯乙烷等有机溶剂中变性的特点进行蛋白质的分离，sevage试剂一般采用三氯甲烷和戊醇或丁醇混合溶剂，本申请中加入提取液加入三氯甲烷：正丁醇＝5：1(V/V)，充分搅拌、混匀，去除下层沉淀后余下上层上清液即为去除蛋白的有机黑木耳多糖提取液。
上述，活性炭是一种黑色粉状，粒状或丸状的无定形具有多孔的碳，主要成分为碳，还含少量氧、氢、硫、氮、氯。也具有石墨那样的精细结构，只是晶粒较小，层层间不规则堆积。具有较大的表面积(500～1000米2/克)，有很强的吸附性能，能在它的表面上吸附气体、液体或胶态固体；对于气体、液体，吸附物质的质量可接近于活性炭本身的质量。其吸附作用具有选择性，非极性物质比极性物质更易于吸附。在同一系列物质中，沸点越高的物质越容易被吸附，压强越大温度越低浓度越大，吸附量越大。本申请中脱色方法为加入活性炭颗粒，充分搅拌后煮沸，放冷后过滤，即完成有机黑木耳多糖的脱色步骤。
所述步骤5，醇沉时间为5－24小时。
需要理解的是，中药水提浓缩液经过加乙醇使达到不同含醇量，低分子有效成分仍溶于稀醇溶液中，而高分子杂质析出沉淀固液分离后，使水提液得以精制，此操作法为水提醇沉法。
所述步骤6中，所述高速逆流色谱的色谱方法为：
采用高速逆流色谱仪进行分离纯化，流动相固定相混合液包括PEG1000、K2HPO4、KH2PO4和H2O，混合溶剂分层后，上层为固定相，下层为流动相；将固定相注入高速逆流色谱仪，将流动相与所述步骤5中多糖粗品溶解后并注入高速逆流色谱仪，收集有机黑木耳多糖。
上述，高速逆流色谱法中流动相固定相混合液的比例为：PEG1000：K2HPO4：KH2PO4：H2O＝6：13：13：70，不同多糖含量、不同批次、不同基源的有机黑木耳多糖的指标性成分的不同而对于比例进行调整。
提供一种有机黑木耳多糖颗粒制备方法，包括如下步骤：
步骤1：将所述有机黑木耳多糖进行干燥，得有机黑木耳多糖干粉；
步骤2：加入辅料混合；
步骤3：干法制粒得有机黑木耳多糖颗粒。
所述步骤1中，所述干燥为冷冻干燥。
所述步骤2中，所述辅料为糊精、麦芽糊精、乳糖和蔗糖中的一种或几种。
需要理解的是干法制粒或直接压片，应选择粘合性和可压性较好的辅料。这样有利于生产操作和成品的质量稳定。不论干法制粒还是湿法制粒，辅料有很多选择，包括上述糊精、麦芽糊精、乳糖、蔗糖、MCC、聚维酮、羟丙甲纤维素、糖浆、淀粉浆、胶浆等等，可依据物料的可压性进行自由选择。
上述，本申请中使用的是干法制粒法对有机黑木耳多糖进行制粒，步骤为将有机黑木耳多糖干粉与辅料混合后通过干法制粒机进行制粒。本步骤也可采用湿法制粒的方法，即将有机黑木耳多糖干燥前的流膏与辅料混合，通过高速搅拌机进行搅拌，加入湿法制粒机中进行制粒、过筛、干燥、整粒的步骤，即完成湿法制粒。
为了便于理解本申请，下面结合实施例来进一步说明本申请的技术方案。申请人声明，本申请通过上述实施例来说明本申请的详细工艺设备和工艺流程，但本申请并不局限于上述详细工艺设备和工艺流程，即不意味着本申请应依赖上述详细工艺设备和工艺流程才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本申请的任何改进，对本申请产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本申请的保护范围和公开范围之内。
实施例1
1、取有机黑木耳子实体，干燥后粉碎，过80目筛，得有机黑木耳干粉；
2、将有机黑木耳干粉与质量比为1：10的蒸馏水混合，得提取液；
3、将步骤2中的提取液进行微波和超声提取协同提取，微波功率为500W，时间为2分钟，超声功率为700W，时间为5分钟，滤布过滤，取上清液待用；
4、取步骤3中上清液，加入三氯甲烷：正丁醇＝5：1(V/V)，充分搅拌、混匀，离心后取上清液；加入活性炭，煮沸后过滤，取上清液即得；
5、将步骤4中产品加入乙醇进行醇沉，醇沉时间为5小时，过滤，用乙醇洗涤，得多糖粗品；
6、采用高速逆流色谱仪进行分离纯化，配制混合液K2HPO4：KH2PO4：H2O＝6：13：13：70，分层后，上层为固定相，下层为流动相；将固定相注入高速逆流色谱仪，将流动相与所述步骤5中多糖粗品溶解后注入高速逆流色谱仪，收集有机黑木耳多糖。
7、取步骤6中有机黑木耳多糖，浓缩至密度为1.1。将辅料蔗糖加入有机黑木耳多糖的提取物中，通过高速搅拌机进行搅拌，然后利用湿法制粒机进行制粒、过筛、干燥、整粒，即得有机黑木耳多糖颗粒。
实施例2
1、取有机黑木耳子实体，干燥后粉碎，过50目筛，得有机黑木耳干粉；
2、将有机黑木耳干粉与质量比为1：20的蒸馏水混合，得提取液；
3、将步骤2中的提取液进行微波和超声提取协同提取，微波功率为650W，时间为3分钟，超声功率为900W，时间为2分钟，滤布过滤，取上清液待用；
4、取步骤3中上清液，加入三氯甲烷：正丁醇＝5：1(V/V)，充分搅拌、混匀，离心后取上清液；加入活性炭，煮沸后过滤，取上清液即得；
5、将步骤4中产品加入乙醇进行醇沉，醇沉时间为8小时，过滤，用乙醇洗涤，得多糖粗品；
6、采用高速逆流色谱仪进行分离纯化，配制混合液K2HPO4：KH2PO4：H2O＝4：12.5：12.5：71，分层后，上层为固定相，下层为流动相；将固定相注入高速逆流色谱仪，将流动相与所述步骤5中多糖粗品溶解后注入高速逆流色谱仪，收集有机黑木耳多糖。
7、取步骤6中有机黑木耳多糖，冷冻干燥成有机黑木耳多糖干膏粉。将辅料麦芽糊精加入有机黑木耳多糖干膏粉中，通过三维混合搅拌机进行充分混匀30分钟，然后利用干法制粒机进行制粒，即得有机黑木耳多糖颗粒。
实施例3
1、取有机黑木耳子实体，干燥后粉碎，过100目筛，得有机黑木耳干粉；
2、将有机黑木耳干粉与质量比为1：50的蒸馏水混合，得提取液；
3、将步骤2中的提取液进行微波和超声提取协同提取，微波功率为800W，时间为5分钟，超声功率为1500W，时间为3分钟，离心，取上清液待用；
4、取步骤3中上清液，加入三氯甲烷：正丁醇＝5：1(V/V)，充分搅拌、混匀，离心后取上清液；加入活性炭，煮沸后过滤，取上清液即得；
5、将步骤4中产品加入乙醇进行醇沉，醇沉时间为20小时，过滤，用乙醇洗涤，得多糖粗品；
6、采用高速逆流色谱仪进行分离纯化，配制混合液K2HPO4：KH2PO4：H2O＝7：13.5：13.5：66，分层后，上层为固定相，下层为流动相；将固定相注入高速逆流色谱仪，将流动相与所述步骤5中多糖粗品溶解后注入高速逆流色谱仪，收集有机黑木耳多糖。
7、取步骤6中有机黑木耳多糖，利用带式干燥机干燥成有机黑木耳多糖干膏粉。将辅料糊精加入有机黑木耳多糖干膏粉中，通过三维混合搅拌机进行充分混匀30分钟，然后利用干法制粒机进行制粒，即得有机黑木耳多糖颗粒。