青蒿转运蛋白AaPDR3及其应用的制作方法

文档序号:12742675阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种青蒿转运蛋白AaPDR3,其特征在于,其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示;该青蒿转运蛋白AaPDR3在青蒿非分泌型腺毛中影响倍半萜石柱烯合成。

2.根据权利要求1所述的青蒿转运蛋白AaPDR3,其特征是,所述的转运蛋白由如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列编码。

3.根据权利要求1或2所述的青蒿转运蛋白AaPDR3,其特征是,含青蒿AaPDR3转运蛋白编码序列的植物RNAi干扰表达载体能够抑制倍半萜石柱烯合成且提高青蒿素合成,植物RNAi过量表达载体能够提高倍半萜石柱烯合成。

4.一种多肽,其特征在于,氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。

5.一种具有青蒿转运蛋白AaPDR3的转基因青蒿苗实现方法,其特征在于,包括如下步骤:

步骤一,将青蒿转运蛋白AaPDR3的蛋白编码序列分别连于植物RNAi干扰和过量表达载体上,构建得到含青蒿AaPDR3转运蛋白编码序列的植物RNAi干扰和过量表达载体;

步骤二,将植物RNAi干扰表达载体和过量表达载体转入农杆菌,再将农杆菌转入青蒿;

步骤三,通过抗生素筛选得到青蒿抗性苗,再经PCR检测为阳性的植株即为转基因青蒿苗。

6.根据权利要求5所述的方法,其特征是,所述的植物RNAi干扰表达载体为:pHELLSGATE1.2‐AaPDR3,通过以下方式得到:

步骤1.中间载体pTOPO‐AaPDR3的构建:在AaPDR3基因的非保守区域设计上游引物和下游引物,用以构建干扰载体,在上游引物前添加CACC四个碱基以构建Gateway入门载体,先用平端酶扩增得到AaPDR3的片段,回收纯化后通过Gateway克隆技术连接到pENTR/D‐TOPO载体;

步骤2.植物表达干扰载体pHELLSGATE1.2‐AaPDR3的构建:将pTOPO‐AaPDR3载体中的AaPDR3的干扰片段重组到RNA干扰载体pHELLSGATE1.2的两个可以形成发夹结构的重组位点中,得到能够抑制倍半萜石柱烯合成且提高青蒿素合成的AaPDR3的RNA干扰载体pHELLSGATE1.2‐AaPDR3。

7.根据权利要求5所述的方法,其特征是,所述的过量表达载体为:pHB‐AaPDR3,通过将AaPDR3基因构建在过量表达载体上,为了方便表达载体的构建,正向引物BamHI‐AaPDR3‐FP中引入了BamHI的酶切位点,反向引物AaPDR3‐XbaI‐RP中引入了XbaI的酶切位点,经过双酶切之后连接,得到能够提高倍半萜石柱烯合成的重组质粒pHB‐AaPDR3。

8.根据权利要求5所述的方法,其特征是,所述转入具体为:采用冻融法进行转入。

9.根据权利要求5所述的方法,其特征是,所述的PCR检测是指,分别设计合成AaPDR3基因的检测引物,进行DNA扩增,紫外线下观察到目的条带的阳性株系即为转基因青蒿植株。

10.一种基于权利要求5‐9中任一所述方法实现的转基因青蒿苗的应用,其特征在于,将其用于提高青蒿萜类物质含量;

所述的青蒿萜类物质,通过对所述转基因青蒿苗进行GC‐MS测定分析,进而获得倍半萜石柱烯、β‐法尼烯和吉马烯D。

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