一种调控植物淀粉合成相关蛋白OsFSE及其编码基因与应用的制作方法

本发明属于基因工程领域，涉及一种调控植物淀粉合成蛋白OsFSE及其编码基因与应用。
背景技术：
：水稻(OryzasativaL.)是世界上最重要的粮食作物之一，全球超过50％人口以稻米为主要口粮。淀粉是水稻种子中储藏量最大的物质，超过种子重量的70％，水稻种子中淀粉积累的多少往往与产量直接相关，同时淀粉的组成变化影响稻米的外观品质和食味品质。因此对其合成调控的深入研究，将有助于我们通过基因工程的手段来对稻米进行改良。水稻胚乳水不溶的淀粉主要由直链淀粉和支链淀粉组成。支链淀粉占75％以上，它由分支的α-1,6糖苷键连接，而占少量的直链淀粉由线性的α-1,4糖苷键连接。植物中大量参与淀粉合成的关键酶已经被研究。直链淀粉由颗粒结合型淀粉合酶I(GBSSI)合成，它由Waxy基因编码。支链淀粉的合成由淀粉合酶(SSs)，淀粉分支酶(BEs)和淀粉去分支酶(DBEs)催化。植物中SSs，BEs，DBEs存在多种异构体SSI-IV，BEI-II，DBE1-3和DBE。在水稻中这些基因的突变，都会使胚乳淀粉表现异常特征。BEIIb突变表现心白胚乳，支链淀粉结构，淀粉颗粒的糊化特性都发生改变。ALK编码一个预测为可溶淀粉合酶IIa的基因，SSIIa关键氨基酸的改变导致籼稻和粳稻支链淀粉结构和淀粉特性的差异。除了合成酶之外，水稻中一些其它因子间接地参与淀粉的合成。参与内质网中蛋白成熟的类二硫键异构酶(PDIL-1)基因功能丧失同样影响淀粉的合成，突变体表现粉质胚乳和淀粉颗粒变小。MADS29是水稻MADS-BOX家族的成员，参与降解珠心和珠心突起。抑制MADS29的表达，将减少淀粉的合成和形成异常的胚乳。因此发现并克隆淀粉合成和调控相关基因，将有助于我们通过基因工程的手段来对稻米进行改良。技术实现要素：本发明的目的是提供一个调控植物淀粉合成相关蛋白及其编码基因与应用。本发明提供的调控植物淀粉合成相关蛋白(OsFSE)，来源于稻属水稻(Oryzasativavar.滇粳优(DJY))，是如下(a)或(b)的蛋白质：(a)由序列表中SEQIDNO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将SEQIDNO.1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与调控淀粉合成相关的由SEQIDNO.1衍生的蛋白质。SEQIDNO.1由937个氨基酸组成，为OsFSE蛋白的氨基酸序列。为了观察(a)中的OsFSE在水稻中正确的亚细胞定位，可在由SEQIDNO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质的羧基末端连接上如(表1)所示的GFP标签氨基酸序列。表1GFP标签氨基酸序列上述(b)中的OsFSE的编码基因可通过将序列表中SEQIDNO.2所示的DNA序列中缺失一个或几个核苷酸的密码子和/或进行一个或几个碱基对的错义突变和/或在其5′端和/或3′端连上GFP标签的编码序列得到。编码上述调控淀粉合成相关蛋白的基因(OsFSE)也属于本发明的保护范围。所述基因OSFSE可为如下1)或2)或3)或4)的DNA分子：1)序列表中SEQIDNO.2所示的DNA分子；2)序列表中SEQIDNO.3所示的DNA分子；3)在严格条件下与1)或2)限定的DNA序列杂交且编码所述蛋白的DNA分子；4)与1)或2)或3)限定的DNA序列具有90％以上同源性，且编码调控淀粉合成相关蛋白的DNA分子。所述严格条件可为在0.1×SSPE(或0.1×SSC)，0.1％SDS的溶液中，在65℃下杂交并洗膜。SEQIDNO.2由2811个核苷酸组成，为OsFSE的CDS。SEQIDNO.3由10331个核苷酸组成，为OsFSE的DNA序列。含有以上任一所述基因的重组表达载体也属于本发明的保护范围。可用现有的植物表达载体构建含有所述基因的重组表达载体。所述植物表达载体包括双元农杆菌载体和可用于植物微弹轰击的载体等。所述植物表达载体还可包含外源基因的3’端非翻译区域，即包含聚腺苷酸信号和任何其它参与mRNA加工或基因表达的DNA片段。所述聚腺苷酸信号可引导聚腺苷酸加入到mRNA前体的3’端，如农杆菌冠瘿瘤诱导(Ti)质粒基因(如胭脂合成酶Nos基因)、植物基因(如大豆贮存蛋白基因)3’端转录的非翻译区均具有类似功能。使用所述基因构建重组植物表达载体时，在其转录起始核苷酸前可加上任何一种增强型启动子或组成型启动子，如花椰菜花叶病毒(CAMV)35S启动子、玉米的泛素启动子(Ubiquitin)，它们可单独使用或与其它的植物启动子结合使用；此外，使用本发明的基因构建植物表达载体时，还可使用增强子，包括翻译增强子或转录增强子，这些增强子区域可以是ATG起始密码子或邻接区域起始密码子等，但必需与编码序列的阅读框相同，以保证整个序列的正确翻译。所述翻译控制信号和起始密码子的来源是广泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻译起始区域可以来自转录起始区域或结构基因。为了便于对转基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选，可对所用植物表达载体进行加工，如加入可在植物中表达的编码可产生颜色变化的酶或发光化合物的基因(GUS基因、萤光素酶基因等)、具有抗性的抗生素标记物(庆大霉素标记物、卡那霉素标记物等)或是抗化学试剂标记基因(如抗除莠剂基因)等。从转基因植物的安全性考虑，可不加任何选择性标记基因，直接以逆境筛选转化植株。所述重组表达载体优选为在pCAMBIA1305.-GFP载体的酶切位点SpeI和XbaI之间插入所述基因OsFSE得到的重组质粒，命名为pCAMBIA1305.1-OsFSE。含有以上任一所述基因(OsFSE)的表达盒、转基因细胞系及重组菌。扩增所述基因(OsFSE)全长或任一片段的引物对也属于本发明的保护范围。一种植物调控淀粉正常合成的方法。本发明提供一种植物调控淀粉正常合成的方法，是将所述基因导入淀粉合成受阻，种子表现粉质皱缩的植物中，得到的种子正常透明的转基因植物。具体来说，所述基因通过所述重组表达载体导入种子粉质皱缩的植物中；所述种子粉质皱缩的植物可为突变体fse。所述蛋白、所述基因、所述重组表达载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌或所述方法均可应用于水稻育种。利用任何一种可以引导外源基因在植物中表达的载体，将编码所述蛋白的基因导入植物细胞，可获转基因细胞系及转基因植株。携带有所述基因的表达载体可通过使用Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、显微注射、电导、农杆菌介导等常规生物学方法转化植物细胞或组织，并将转化的植物组织培育成植株。被转化的植物宿主既可以是单子叶植物，也可以是双子叶植物，如：烟草、百脉根、拟南芥、水稻、小麦、玉米、黄瓜、番茄、杨树、草坪草、苜宿等。有益效果：本发明首次发现、定位并克隆得到一个新的植物调控淀粉合成相关的基因OsFSE。抑制该基因的表达可导致植物种子中淀粉合成受阻，淀粉粒形态变小，不规则，总淀粉和直链淀粉含量显著减少，支链淀粉链长分布改变，从而可以培育出淀粉合成受阻，种子粉质皱缩的转基因植物。将所述基因导入种子粉质皱缩的植物中，可以培育出种子表型正常透明的植物。所述蛋白和其编码基因可以用于植物遗传改良。附图说明图1野生型DJY(a图)和突变体fse(b图)成熟种子外观比较。Bars＝5mm图2野生型DJY和突变体fse成熟种子横切面扫描电镜观察比较。图3野生型DJY和突变体fse灌浆种子半薄切片观察比较。图4野生型DJY和突变体fse成熟种子总淀粉和直链淀粉含量比较。图5野生型DJY和突变体fse成熟种子直链淀粉链长分布比较。图6野生型DJY和突变体fse发育种子中淀粉合成相关基因表达量比较。图7突变基因在第8染色体上的精细定位。图8突变基因osfse的测序结果和OsFSE基因结构。图9转pCAMBIA1305.1-OsFSE的T2代籽粒表型。Bar＝2mm图10转pCAMBIA1305.1-OSFSE的T2代发育种子荧光定量PCR鉴定。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。实施例1、调控植物淀粉合成相关蛋白及其编码基因的发现一、水稻粉质皱缩种子突变体fse表型分析粳稻品种滇粳优1号(DJY)经MNU诱变突变体库中筛选出种子粉质皱缩突变体fse。与野生型DJY相比，突变体fse的主要特征是：成熟种子表现粉质不透明和皱缩表型(图1)，成熟种子横切面扫描电镜观察，野生型DJY淀粉颗粒规则，排列紧密，而突变体fse中粉质不透明部分淀粉颗粒不规则，排列疏松(图2)。对发育中的种子进行半薄切片观察发现突变体fse中有大量发育受阻，形态较小的淀粉颗粒(图3)，这说明突变体中淀粉颗粒发育受阻，不能形成规则的淀粉颗粒，从而导致淀粉颗粒排列不紧密，留有大量空隙，形成不透明的胚乳。对发育中的种子进行淀粉合成途径关键基因的表达量分析发现，种子发育早期(10DAF之前)突变体fse中淀粉合成途径关键基因的表达量较野生型DJY显著降低(图6)。对成熟种子中淀粉含量和组分分析发现，与野生型DJY比较，突变体fse种子中总淀粉含量和直链淀粉含量极显著下降(图4)。支链淀粉链长分析发现，与野生型比较，突变体fse中支链淀粉链长在聚合度为9-15时增加，链长在6-8和16以上时减少(图5)。综上所诉，突变体fse种子发育过程中淀粉合成途径关键基因表达量显著下调，导致淀粉颗粒发育受阻，不能形成规则的淀粉颗粒，导致淀粉粒排列疏松，淀粉含量下降，形成种子粉质皱缩表型。二、突变体基因定位1、突变基因初步定位用突变体fse与广亲和品种N22(来自南京农业大学水稻所种质资源库)杂交，在fse/N22的F2种子中挑选出10粒粉质皱缩表型的种子，提取基因组DNA，利用覆盖水稻全基因组的565对SSR引物对10个极端个体进行连锁分析，将调控淀粉合成相关基因fse定位在第8染色体上标记RM408和WH-1之间。上述SSR标记分析的方法如下所述：(1)提取上述选取单粒种子的总DNA作为模板，具体方法如下：①取1粒粉质皱缩的种子置于Eppendorf管中，管中放置一粒钢珠，把装好样品的Eppendorf置于2000型GENO/GRINDER仪器上粉碎样品20S。②加入660μL提取液(含100mMTris-HCl(pH8.0)，20mMEDTA(pH8.0)，1.4MNaCl,0.2g/mLCTAB的溶液)，漩涡器上剧烈涡旋混匀，冰浴30min。③加入40μL20％SDS，65℃温浴10min，每隔两分钟轻轻上下颠倒混匀。④加入100μL5MNaCl，温和混匀。⑤加入100μL10×CTAB，65℃温浴10min，间断轻轻上下颠倒混匀。⑥加入900μL氯仿，充分混匀，12000rpm离心3min。⑦转移上清液至1.5mLEppendorf管中，加入600μL异丙醇，混匀，12000rpm离心5min。⑧弃上清液，沉淀用70％(体积百分含量)乙醇漂洗一次，室温凉干。⑨加入100μL1×TE(121gTris溶于1升水中，用盐酸调pH值至8.0得到的溶液)溶解DNA。⑩取2μL电泳检测DNA质量，并用DU800分光光度仪测定浓度(BeckmanInstrumentInc.U.S.A)。(2)将上述提取的DNA稀释成约20ng/μL，作为模板进行PCR扩增；PCR反应体系(10μL)：DNA(20ng/μL)1μL，上游引物(2pmol/μL)1μL，下游引物(2pmol/μL)1μL，10×Buffer(MgCl2free)1μL，dNTP(10mM)0.2μL，MgCl2(25mM)0.6μL，rTaq(5U/μL)0.1μL，ddH2O5.1μL，共10μL。PCR反应程序：94.0℃变性5min；94.0℃变性30s、55℃退火30s、72℃延伸1min，共循环35次；72℃延伸7min；10℃保存。PCR反应在Biometro热循环仪中进行。(3)SSR标记的PCR产物检测扩增产物用8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。以50bp的DNALadder为对照比较扩增产物的分子量大小，银染显色。2、突变基因精细定位根据初定位的结果，在突变基因所在区域附近寻找公共图谱上的分子标记，并自行开发SSR标记，以便在该染色体的相关区段筛选更多标记进一步定位突变位点。从fse/N22杂交组合获得的F2分离群体中挑选出155粒粉质皱缩种子用于突变基因精细定位。利用公共图谱上的分子标记和基于水稻基因组序列数据自行开发的SSR、dCAPS分子标记对突变基因进行精细定位，并根据定位结果确定候选基因。具体方法如下：将公共图谱的SSR标记与水稻基因组序列进行整合，下载突变位点附近的BAC/PAC克隆序列。用SSRHunter(李强等，遗传，2005，27(5):808-810)或SSRIT软件搜索克隆中潜在的SSR序列(重复次数≥6)；将这些SSR及其邻近400～500bp的序列在NCBI通过BLAST程序在线与相应的籼稻序列进行比较，如果两者的SSR重复次数有差异，初步推断该SSR引物的PCR产物在籼、粳间存在多态性；再利用PrimerPremier5.0软件设计SSR引物,并由上海英俊生物技术有限公司合成。将自行设计的SSR成对引物等比例混合，检测其在fse和N22之间的多态性，表现多态者用作精细定位fse基因的分子标记。用于精细定位的分子标记见表2。表2用于精细定位的分子标记引物前引物后引物染色体位置WH-1TTCAGAAACGGCATCAATCAGCATATAAGCCTCAGCATGGOJ1349_D05WH-2GGCAAGATTGGATTGAGGAGTCGCCAAACGAAAAGAAAATP0007D08WH-3CCTGGGGTTTGGAGTTCGCACCCTTAGTCCTCATGGATCP0498H04WH-4ACGAAACAACACGGCGTCACCGTCCAGGTATCCACCATCTCAP0470F10WH-5GCGCTTATGTGGCAGTAGAAACCGCTTCGGGTCTCACCP0470F10最终把fse基因精细定位在标记WH-2和WH-4之间，这两个标记物理距离约为190kb(图7)。3、突变基因的确定经过对区间内的基因测序发现LOC_Os08g01920基因存在一个单碱基的突变(图8)，根据网上公布的序列设计引物，序列如下所述：Primer1：5'CACATTCCCTTCCCTTCC3'(SEQIDNO.4)Primer2：5'CTCCGATTCTGTGGTCAAGTA3'(SEQIDNO.5)以primer1和primer2为引物，以滇粳优1号的发育中胚乳cDNA为模板，进行PCR扩增获得目的基因。扩增反应在PTC-200(MJResearchInc.)PCR仪上进行：94℃3min；94℃30sec，60℃45sec，72℃10min，35个循环；72℃5min。将PCR产物回收纯化后连接到pMD18-T(日本Takara公司上)，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞(北京Tiangen公司CB101)，挑选阳性克隆后，进行测序。序列测定结果表明，PCR反应获得的片段具有SEQIDNO.2所示的核苷酸序列，编码937个氨基酸残基组成的蛋白质(见序列表的SEQIDNO.1)。将SEQIDNO.1所示的蛋白命名为OsFSE，将SEQIDNO.1所示的蛋白的编码基因命名OsFSE。实施例2、转基因植物的获得和鉴定一、重组表达载体构建以滇粳优1号(来自南京农业大学水稻所种质资源库)的cDNA为模板，进行PCR扩增获得OsFSE的CDS，PCR引物序列如下：Primer3：5’GGACTAGTATGGAGTCCCCCGCGGCGCG3’(SEQIDNO.6)Primer4：5’GCTCTAGAGGAAGATTCACAGCTTGAAT3’(SEQIDNO.7)上述引物包含SEQIDNO.2所示基因CDS起始和末尾各20个碱基，对扩增PCR产物回收纯化。采用INFUSION重组试剂盒(Clontech)将PCR产物克隆到pCAMBIA1305.1-GFP中。INFUSION重组反应体系(10μL)：PCR产物1.0μL，pCAMBIA1305.1-GFP6.0μL，5×Infusionbuffer2.0μL，Infusionenzymemix1μL。短暂离心后将混合体系37℃水浴15min，而后50℃水浴15min，取2.5μL反应体系用热激法转化大肠杆菌DH5α感受态细胞(北京Tiangen公司；CB101)。将全部转化细胞均匀涂布在含50mg/L卡那霉素的LB固体培养基上。37℃培养16h后，挑取克隆阳性克隆、测序，结果表明，得到了含有SEQIDNO.2所示基因的重组表达载体，将含有OsFSE的pCAMBIA1305.1-GFP命名pCAMBIA1305.1-OsFSE,OsFSE基因片段利用Infusion重组试剂盒(日本Clontech公司)插入到该载体的SpeI和XbaI酶切位点之间。二、重组农杆菌的获得用冻融法将pCAMBIA1305.1-OsFSE转化农杆菌EHA105菌株(购自美国英俊公司)，获得重组菌株，提取质粒进行PCR及酶切鉴定。将PCR及酶切鉴定正确的重组菌株命名为EH-PCAMBIA1305.1-OsFSE。三、转基因植物的获得分别将EH-pCAMBIA1305.1-OsFSE和转空载体对照菌株转化水稻种子粉质皱缩突变体fse，具体方法为：(1)28℃培养EH-pCAMBIA1305.1-OsFSE(或转空载体对照菌株)16小时，收集菌体，并稀释到N6液体培养基(Sigma公司，C1416)中至浓度为OD600≈0.5，获得菌液；(2)将培养至一个月的突变体fse水稻成熟胚愈伤组织与步骤(1)的菌液混合侵染30min，滤纸吸干菌液后转入共培养培养基(N6固体共培养培养基，Sigma公司)中，24℃共培养3天；(3)将步骤(2)的愈伤接种在含有100mg/L潮霉素的N6固体筛选培养基上第一次筛选(16天)；(4)挑取健康愈伤转入含有100mg/L潮霉素的N6固体筛选培养基上第二次筛选，每15天继代一次；(5)挑取健康愈伤转入含有50mg/L潮霉素的N6固体筛选培养基上第三次筛选，每15天继代一次；(6)挑取抗性愈伤转入分化培养基上分化；得到分化成苗的T0代阳性植株。四、转基因植株的鉴定1、潮霉素抗性鉴定本研究中利用1‰浓度的潮霉素溶液鉴定转基因植株。具体方法：将新鲜的转基因植株叶片(没有转基因植株叶片做阴性对照)放在培养皿中，用新配的1‰的潮霉素溶液浸泡，放在28℃培养箱中暗培养48小时，与对照比较，叶片坏死的表明不抗，没有坏死的表明抗，将抗潮霉素的三个家系命名为CL-1，CL-2和CL-3。2、荧光定量PCR鉴定根据1中潮霉素鉴定的结果，设计荧光定量引物，鉴定转基因阳性植株的表达量。定量引物设计：根据滇粳优在SEQIDNO.2中的序列运用Premier5.0软件设计引物。引物序列如下：Primer5：5’ATGGAAAGGCTGACAGGTTC3’(SEQIDNO.8)Primer6：5’GAGATCCCAGGGCAGATAAG3’(SEQIDNO.9)荧光定量PCR反应：使用SYBRpremixExTaqTM(TaKaRa)试剂盒，在ABIPRISM7500HT上扩增。反应体系：0.4μLcDNA模板，10μL2×SYBRpremixExTaqII，0.8μL10μMPrimer5，0.8μL10μMPrimer6，用ddH2O补足20μL。反应程序采用两步法：95℃预变性30s，95℃5s，60℃30s，40个循环；95℃15s，60℃1min，95℃15s。用2-△△CT法对Real-timePCR实验的结果进行分析，以水稻actin基因作为内参。控制淀粉合成相关酶类基因的定量引物引用于(Sheetal.,2010)。结果表明潮霉素鉴定出来的阳性植株CL-1，CL-2和CL-3表达量较野生型和突变体极显著上调，说明为转基因阳性植株(图10)。3、表型鉴定分别将T0代转pCAMBIA1305.1-OsFSE植株、突变体fse和滇粳优种植在南京农业大学牌楼种植基地网室内，种子成熟后，收取各材料种子，观察到转pCAMBIA1305.1-OSFSE阳性植株CL-1、CL-2和CL-3出现正常透明种子，突变体种子粉质皱缩，滇粳优种子透明(图9)。因此证明fse中的粉质皱缩表型是由fse突变造成的，pCAMBIA1305.1-OsFSE可以使突变体fse种子粉质皱缩表型恢复野生型正常表型。<110>南京农业大学<120>一种植物调控淀粉合成相关蛋白OsFSE及其编码基因与应用<160>9<210>1<211>937<212>PRT<213>稻属水稻（Oryzasativavar.滇粳优（DJY））<220><223>调控淀粉合成相关蛋白OsFSE氨基酸序列<400>1MetGluSerProAlaAlaArgGlyAlaLeuGlyAsnAsnAlaSerGlyAlaSerThrSer15101520GlnAlaAlaProGlyAlaValAsnGlyGlyAlaSerProAsnSerLeuArgAsnThrPro25303540SerAsnIleAlaArgLeuGluAsnAlaIleGluHisCysAlaAlaArgArgLysTyrLeu45505560AlaArgThrLysSerProSerAsnGlyGluAsnValArgTrpTyrPheCysLysLeuPro65707580LeuAlaAsnLysAlaLeuSerAlaSerValProArgThrGluIleValGlyLysGlyAsn859095100TyrPheArgPheSerMetArgAsnSerLeuAlaLeuGluAlaSerPheLeuGluArgGlu105110115120GluAlaLeuLeuAlaTyrTrpTrpArgGluTyrAlaGluCysSerGluGlyProLysGly125130135140SerLeuValAlaAlaAsnAlaSerAsnSerLysSerLeuTyrLysValGluGluGluArg145150155160ValGlyValProValLysGlyGlyLeuTyrGluValAsnLeuMetArgArgHisCysPhe165170175180ProValTyrTrpAsnGlyGluAsnArgArgValLeuArgGlyHisTrpPheAlaArgLys185190195200GlyGlyLeuAsnTrpIleProLeuArgGluAsnValSerGluGlnLeuGluLeuAlaTyr205210215220AsnCysGlnValTrpHisArgArgLysPheGlnProSerGlyLeuPheAlaAlaArgVal225230235240AsnLeuGlnGlySerThrProAsnLeuHisAlaLeuPheThrGlyGluAsnAsnThrTrp245250255260GluAlaTrpLeuValPheAsnThrGlyProLysLeuGlyGlyAsnThrIleLysLeuArg265270275280ArgGlyPheSerSerSerGlySerAlaLysPheThrGlnAsnGluLeuArgGlnGlnLys285290295300GluGluGluMetAsnAsnTyrCysSerGlnValProValGlyHisLeuValPheMetVal305310315320HisGlyIleGlyGlnArgLeuGluLysAlaAsnLeuValAsnAsnValValAsnPheArg325330335340ArgValThrAlaAsnLeuAlaGluArgTyrLeuThrPheTyrGlnArgSerThrGlnArg345350355360ValLeuPheIleProCysGlnTrpArgLysSerLeuLysLeuSerGlyGluGlnSerVal365370375380GluLysIleThrLeuAsnGlyValLysGlyLeuArgValAlaLeuGlyAlaThrValHis385390395400AsnValLeuTyrTyrMetSerProIleTyrCysGlnHisIleIleAsnSerValSerAsn405410415420GlnLeuAsnGlnLeuTyrThrLysPheIleLysArgAsnPheGlyTyrSerGlyLysVal425430435440SerIleTyrGlyHisSerLeuGlySerValLeuSerTyrAsnIleLeuCysHisGlnGlu445450455460SerSerSerAlaProPheProValAsnTyrMetAsnMetGluValSerSerAsnGluGly465470475480HisIleAlaLysSerProAsnThrValThrAlaHisGluSerValMetLysGluGlnAsn485490495500ThrSerSerIleSerGlyHisSerCysAlaAsnAsnValAsnAsnValValAsnGluGly505510515520SerThrArgThrGlyThrSerCysThrGluAsnThrThrLeuProThrCysAlaLeuGlu525530535540AsnSerProLysLeuThrThrAsnAlaLeuProThrAlaValAsnGlyGluGlnIleGlu545550555560ValGluLysGlnValAsnAsnHisLysIleAlaCysSerGluGluGlyAsnAsnSerSer565570575580ValArgAlaLysAsnIleAsnSerCysIleIleSerArgSerAlaGluGlyValHisAla585590595600AsnValProAsnLysAsnThrLeuIleSerSerLeuLysGluGluValGluArgLeuLys605610615620AlaArgLeuAlaGlnLeuGluGlnHisAsnAsnLeuValThrGluSerSerAlaGluSer625630635640HisGlnGlyLysSerAlaThrHisAlaValAsnLeuSerSerGlyLysAsnArgIleGly645650655660GlnGlySerThrSerGluSerTyrThrProHisIleArgTyrThrLysLeuAsnPheLys665670675680ValAsnThrPheTyrAlaValGlySerProLeuGlyValPheLeuSerLeuArgAsnVal685690695700ArgIleGlyIleGlyArgGlyGlnAsnTyrTrpGlnAsnGluAsnIleValGluGluMet705710715720ProCysCysArgGlnMetPheAsnIlePheHisProPheAsnProValAlaTyrArgIle725730735740GluProLeuValCysGluAsnTyrIleSerLysArgProValIleValProTyrHisArg745750755760GlyGlyLysArgIleHisValGlyValGlnGluPheThrGluAsnIleAlaAlaArgSer765770775780GlnAlaValAlaArgGlnPheLysSerLeuLysValLysAlaValAlaAlaLeuLeuSer785790795800LeuSerArgAsnAsnThrAsnGluAsnValAsnSerAsnAsnGluLysGluLysSerTyr805810815820GlyTyrMetMetMetGluArgLeuThrGlySerProAsnGlyArgIleAsnHisValLeu825830835840GlnGluLysThrPheGlnHisProTyrLeuSerAlaLeuGlySerHisThrAsnTyrTrp845850855860ArgAsnHisAsnThrAlaLeuPheIleLeuLysHisLeuTyrArgAsnIleProGluGlu865870875880ProProThrAsnAsnProGluArgMetProIleArgLeuPheTyrValArgAsnProIle885890895900AlaGluGluThrProLeuThrPheSerAsnAsnSerLeuValLysGluPheSerArgLys905910915920ValArgThrTyrSerArgLysSerGluAsnAsnSerSerCysGluSerSercccccccccc925930935<210>2<211>2811<212>DNA<213>稻属水稻（Oryzasativavar.滇粳优（DJY））<220><223>调控淀粉合成相关基因OsFSE的CDS序列<400>2atggagtcccccgcggcgcgtggcgccctcggggacgacgcgtcgggggcgtccacgagc60caggcggcccccggggccgtggatggcggcgcgtcgccggactcgctgcggaacacgccc120tccaacatcgcgaggctggaggacgccatcgagcactgcgccgctcgccgcaagtacctc180gcccgcaccaagagcccctccgacggcgaggatgtccgctggtacttctgcaagctgccc240ctcgccgacaaagcgctctctgcttcagttccacggacagagatagtgggaaaaggggac300tacttccggttcagcatgagagactctcttgcattggaggcgtccttcttggagagggag360gaagctctgcttgcatactggtggagagagtacgccgagtgcagcgaagggccaaaaggt420tccttagttgcagctgatgcttcggattctaaaagtctgtataaggtggaggaagaacgg480gttggggttcctgtgaaaggcggactttatgaggtcgatttaatgagacgtcattgcttc540cctgtgtactggaatggggagaacaggcgtgtcttgaggggccactggtttgctcgcaaa600ggagggcttgattggatccccttgcgtgaagatgtttctgaacaacttgagctagcatat660aattgtcaggtatggcatcgccgtaaatttcaaccttcaggcttatttgcagcacgtgtt720gatctccaaggaagcaccccggacttgcatgctctttttactggagaggatgatacctgg780gaagcttggctggtctttgatactggtcctaagctaggtggcaacacaatcaaattaagg840cgtgggttttcatcttctggatcagcgaagcctacacaggatgagttgcgtcagcaaaaa900gaagaggaaatggatgattactgttctcaggttccagttggtcatctagtatttatggtt960catggcattggccagaggttggagaaagctaatcttgttgatgatgttgttgatttccgc1020cgtgtaactgctaatttagctgaaagatacttaactccttatcaaagaagtacccagagg1080gttctgtttattccttgtcagtggagaaagagcctaaagctcagtggtgaacaatcggtt1140gagaaaatcactttggatggagttaaaggtcttcgtgtagcattaggtgccacagttcat1200gatgttctgtattacatgagtcctatatactgtcagcacataattgactcggtctcaaac1260cagttgaaccagttgtacacaaagtttatcaagagaaatcctggttatagtggaaaggtt1320tcaatatatgggcactcgttaggaagtgttctatcttatgacatactttgccaccaagaa1380tcttcttctgcaccatttccagtagattatatgaatatggaagtttcttctgatgaaggt1440cacatagcaaaatcgcctgacacagttactgcacatgaatcagtcatgaaggagcaagat1500acatcttccatttctgggcattcttgtgctgataatgtaaatgatgtagttgatgaaggg1560agcaccagaactggcacttcatgtacagaggacaccaccctcccaacatgtgcacttgaa1620aattcaccgaaacttaccacagatgcactacctacagcagtagatggagaacaaattgaa1680gtcgaaaaacaggtcgacaatcataaaattgcatgcagtgaagaaggggacaattcatct1740gtaagagcaaaagacattgacagttgtatcatttcaagatctgctgagggagtccatgcg1800gatgtccctgacaaagatacattgatatcatcattgaaagaagaggtggaacgccttaaa1860gctagattagcacaacttgaacaacataatgatttggtgactgaaagcagtgctgagtct1920catcaaggtaaaagtgccactcatgcagtgaacctatcatcaggcaaaaaccgcataggg1980caaggaagcacgagtgagtcctacacaccacacatcagatacactaaactaaattttaag2040gttgacacattctatgctgttggatcccccttaggagttttcttgtccctgcggaatgtt2100cgcattggtattggcagggggcaagattattggcaaaatgagaacatagttgaagagatg2160ccatgctgccgtcagatgttcaacatttttcatccctttgatcctgtagcatacaggatt2220gaaccacttgtatgtgaagattacataagcaagcgccctgtaattgtaccctaccataga2280gggggaaagaggatacatgtaggagtgcaggaattcactgaagatattgctgcaaggtct2340caagctgttgctcgccagttcaagtcactgaaggttaaagcagtagctgctttgctatca2400ctgagcagaaatgacacggacgaggacgttgacagcaataatgagaaagagaagtcatat2460ggttacatgatgatggaaaggctgacaggttcaccagatggtcggattgaccatgtactt2520caggagaaaacatttcaacacccatacttatctgccctgggatctcataccaattattgg2580cgagatcatgatactgctcttttcattctcaaacatctgtaccgtgatatacctgaagaa2640cctccaactgatgatcctgaaaggatgcctattcgactgttttatgtgagggatccaatt2700gctgaagagactcccttgacgttttcagataattcattagttaaggaattctcaagaaaa2760gtgagaacttattcaagaaaatctgagaacgattcaagctgtgaatcttcc2811<210>3<211>10313<212>DNA<213>稻属水稻（Oryzasativavar.滇粳优（DJY））<220><223>调控淀粉合成相关基因OsFSE的DNA序列<400>3acgaagcagagttgagttttggagaagaaggaaccatctggattcccctcgcgaacggca60cattcccttcccttcccacccacggcgaggcgcgggccccacctcgccgcctcctccgtt120gccggcgatcccggcacatggagtcccccgcggcgcgtggcgccctcggggacgacgcgt180cgggggcgtccacgagccaggcggcccccggggccgtggatggcggcgcgtcgccggact240cgctgcggaacacgccctccaacatcgcgaggctggaggacgccatcgagcactgcgccg300ctcgccgcaagtacctcgcccgcaccaagagcccctccgacggcgaggatgtccgctggt360acttctgcaagctgcccctcgccgacaaaggtgcgtgcatccgctcacctctcagactcg420tctgcttcggaatgctacacccagtgccaccaatttaaccgtccgattcagtcactcgtg480gttaatcagcggtagctagaatgtaggtttgatgtgtgagactgttgctgatttgaatct540actaattgatagggtagtgtggtttagacaagtgttcacatgcatgcgctattgaattcg600ctgattgaactcgccattcgaagcaatgctcatttacattagattcatatttgaccgtgg660catgtcttcatacttcagaactgctgtgctcaattaaattgatcatcggtttggacttta720aacttatgaagcgtgtgataaatgtcttactgatcttatgttttgtgcaattcgctgttg780atgcagcgctctctgcttcagttccacggacagagatagtgggaaaaggggactacttcc840ggttcagcatgagagactctcttgcattggaggcgtccttcttggaggttctctctttaa900caccattgtcaattgcttagtgtttactcattttagtcatttatatggtaagactggact960gtagtaacagtaatagaaacaatccgcttgaaaagcgatattactagacaatctagttcc1020aagagagctgtactagtccctctacaatataagggggattatatcctctctcactctttt1080taaaccacttaacttcaggatcacaatactggtttactggtttgtagagggaggaagctc1140tgcttgcatactggtggagagagtacgccgagtgcagcgaagggccaaaaggttccttag1200ttgcagctgatgcttcggattctaaaagtctgtataaggtggaggaagaacgggttgggg1260ttcctgtgaaaggcggactttatgaggtttgtattttttgtcttgtagtttgttcacaac1320tggattcacgacgcatgagttttgttagttattcgccgaagcaaagctatttatacatat1380ttacattcttcttgttattttttagtggacactgtacttgttattgttgatctagtagaa1440gtaagattgtggactaagtgaatttttttagctctgtcacacacctgtaatactgtataa1500cttttctgttcttttttactactagcatgctagatattgaatatgtctttgttataagaa1560catacactgttgcaggtcgatttaatgagacgtcattgcttccctgtgtactggaatggg1620gagaacaggcgtgtcttgaggggccactggtttgctcgcaaaggagggcttgattggatc1680cccttgcgtgaagatgtttctgaacaacttgagctagcatataattgtcaggtaaaaaga1740tgccatgagaatattattcgctatcatctttcttgtactattagaaagccatttcatgga1800atgccaatttgctatcactacaaatacacttgttctagaaaaagataccacactttcttc1860tccagtcgaatactgtaaatgcattcaatgagatgaagataatcatcacttgaatttagc1920tatgtatgccatggtatgatctgcggtgtggatataccatcttttgcttttatcatgttc1980ttgagttagttttggttcctatcatactcccctctttgatttccatgcccataaagcagt2040tgaacatcctgttttgttgtaaaaaaaaataggtatggcatcgccgtaaatttcaacctt2100caggcttatttgcagcacgtgttgatctccaaggaagcaccccggtatgtgatatactgt2160tgtaacagcatgacttgctcagaaaagagagaatggcaacttaggacaaggctgaataat2220ctgtgcaggacttgcatgctctttttactggagaggatgatacctgggaagcttggctgg2280tctttgatactggtcctaagctaggtggcaacacaatcaaattaaggcgtgggttttcat2340cttctggatcagcgaagcctacacaggtcagctgccctgttgaatgttgatgcttttgcc2400atgtttcagtattttattttttgtacctactattttcatctgttgtgcatgaatgactga2460gagaatgtacaaattgaggttggatcttgattcttttacaaacactaaatgggaacttct2520gtgtggactgcaatagagctatagaggcatgattgaaaactaattgcagccatatcctat2580tgagaatttaatctgatagtgctatcttgctactcctgaggtaaactgtacaaagtcaat2640atgtaacatcattttttacaaccagctgaaggccaacaatgtgacaaactattctagcac2700gttattgcattatttttttgcatttaaaaaaaaaatcaaatggtaccctcgtgctgtttt2760ttttgtgagaaacatttggtaaataattgaattagttaggagttgaacttgcttggtact2820caatagtttttgcttctaattttgaagtgcaatatagagtggcggagccatgtacaaaac2880tgtgggatcagcttgaccccacagcttttttgcaaacacccttgtgagtctctcttttta2940catgtaagtccattgaaatttataaaaatgaccccactattatatgatgcaacggtattt3000gaccccacagggtaaaagttctggctccgccagctattacgagtctagattgagaacttg3060taaacttttatgttctttctgctgtctgcctttaaccatgttattctacattcacttttt3120gcttggtacaaattgttgtctgatttttttttgtcaggatgagttgcgtcagcaaaaaga3180agaggaaatggatgattactgttctcaggtatttgttgttttaggcattatggcatttgc3240tctcttcctcggtggctagaaatgggactgaaatcattgagatacttcgaaagctatagt3300ctttgcattattatgtttccagcaaaagatccagataaacatgtctattaaaggaaagca3360ttcctggtattttgttccagttatatgaatttcacattgcatttgttggcgcccttcatg3420ttaccaaagttccagttaaatatacaatcaagaatgttaacaggtggttgaagtacatgc3480atggcaaacaaaagggatgcaaacattatgcactggacatgatgcatacacagctgtaca3540gaactgtgcttgaatagagtactatattctgattatttgaattgcctggccttatcaacc3600catcttacatctatgaatatgattttaacatttgcatcaatgcaacaaaaccaatgaacc3660caaacacacacacctcatccccacacacaaaataaacatttatgtacataaaagttctca3720tccataatctacaaggttggcaaattgattatttgttgtggttgtctcttggtaggttcc3780agttggtcatctagtatttatggttcatggcattggccagaggttggagaaagctaatct3840tgttgatgatgttgttgatttccgccgtgtaactgctaatttagctgaaagatacttaac3900tccttatcaaagaagtacccagagggttctgtttattccttgtcaggtaagaactcaaag3960ttactcatgccatagactcattttggttgaaatgtatgtcattcttgtgcctcatttcag4020ataagaaaaatacttgttcttgctttagcatgataaagcaagcctttaactccatattca4080ggcatgctgagttgacatatgcttggtcttgttttgaactactttaccatacgttacaac4140cacattaacttgacagtctttacttttgaatggtgaccattgagcaaaagcgagagatgc4200aaatggtagttttgaattttggccattgatcaggaaagtgagatatatttattactatca4260gaaaagtgagttgacatatgcttggtctcgttttgaactactttaccatacgctataacc4320acaataacttgacagtctttattttgaatggtggccattgaacaaaagcgagagatgcaa4380attgtagttttgaattttggtcattgatcagaaaagtgagatatattttactatcaaatg4440ctcacgggcaccacaatttatttgtacacttgtgcacacatgtcatgatctttattgcat4500ctgaactcagttgttaagttagccagaaatttcttttatgtatc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