采用超高压辅助生物酶解提取蕨麻多糖的方法与流程

本发明涉及一种生物物质的提取方法，具体涉及一种采用超高压辅助生物酶解提取蕨麻多糖的方法，属于生物技术领域。

背景技术：

蕨麻为蔷薇科委陵菜属Potentilla anserine L.的膨大块根，为藏医常用药，又名戳玛、卓老沙曾、延寿草、人参果、延寿草、莲菜花，藏语中称“卓老沙僧”、“戳玛”。是一种常见的藏药。蕨麻具有显著的护肝、抗缺氧和增强免疫功能作用，是一种我国特有的、具有良好的药用价值的植物。在对蕨麻的研究中发现，蕨麻中富含蕨麻多糖，而蕨麻多糖能够提高人体免疫功能、抗疲劳、耐缺氧和止泻抑菌等作用。

目前的蕨麻多糖提取方法，常规的有热水浸提法和微波法。热水浸提法的提取条件为:温度100℃,料液比20倍,时间1h,提取次数3次；采用微波法提取的条件为:功率450W,料液比15倍,时间15min,提取次数1次。目前的提取方法，普遍存在提取率低的问题，一般提取率在10-15％之间。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种提取效率高、提取的蕨麻多糖抗氧化能力强的采用超高压辅助生物酶解提取蕨麻多糖的方法。

本发明是这样实现的：

一种采用超高压辅助生物酶解提取蕨麻多糖的方法，包括如下步骤：

(1)称取一定重量的野生蕨麻干粉，置于容器中，加入15-30倍重量的纯净水在90-95℃浸提3.0-3.5h，冷却至室温，过滤，得1#上清液和1#粉渣；

(2)将1#粉渣加入5-10倍1#粉渣重量的纯净水和0.3-0.5‰的复合酶(重量比纤维素酶：果胶酶＝2:1)，在200-300Mpa酶解1.5-2h后，60-70℃条件下灭酶40min，过滤，得2#上清液和2#粉渣；

(3)合并1#上清液和2#上清液，浓缩合并上清液至原体积的1/5-1/3，得浓缩液；

(4)向浓缩液中加入2-3倍浓缩液重量的无水乙醇在4℃冰箱中静置36-48h，醇沉得多糖悬浮液；

(5)于4℃，5000-6000r/min离心多糖悬浮液5-6min，保留沉淀，得粗多糖；

(6)粗多糖用乙醇洗涤3-5次后将乙醇挥发完全，将其完全溶解于30-40℃水中，冷冻干燥后得蕨麻多糖提取物。

本发明具有如下优点：

1、本发明采用了两步提取法，尤其是第二步，是对1#粉渣进行进一步的提取，因此能够显著提高蕨麻多糖的提取率；

2、本发明中，采用了200-300Mpa的高压酶解，这种方式能够提高提取率，同时辅助酶解，提高酶解效率，另外，通过对本发明制备的蕨麻多糖的抗氧化性能研究发现，本发明制备的蕨麻多糖具有很强的抗氧化性能，比用常规方法制备的蕨麻多糖的抗氧化性能提高了15-20％，通过分析我们认为可能是由于采用了高压酶解的方法，在制备过程中提高了蕨麻多糖还原性基团的数量和活性。具体机理有待进一步分析研究。

附图说明

图1为不同处理方式的蕨麻多糖对DPPH自由基的清除率；

图2不同处理方式的蕨麻多糖还原力试验结果

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明做进一步的说明。

一种采用超高压辅助生物酶解提取蕨麻多糖的方法，包括如下步骤：

(1)称取一定重量的野生蕨麻干粉，置于容器中，加入15-30倍重量的纯净水在90-95℃浸提3.0-3.5h，冷却至室温，过滤，得1#上清液和1#粉渣；

(2)将1#粉渣加入5-10倍1#粉渣重量的纯净水和0.3-0.5‰的复合酶(重量比纤维素酶：果胶酶＝2:1)，在200-300Mpa酶解1.5-2h后，60-70℃条件下灭酶40min，过滤，得2#上清液和2#粉渣；

(3)合并1#上清液和2#上清液，浓缩合并上清液至原体积的1/5-1/3，得浓缩液；

(4)向浓缩液中加入2-3倍浓缩液重量的无水乙醇在4℃冰箱中静置36-48h，醇沉得多糖悬浮液；

(5)于4℃，5000-6000r/min离心多糖悬浮液5-6min，保留沉淀，得粗多糖；

(6)粗多糖用乙醇洗涤3-5次后将乙醇挥发完全，将其完全溶解于30-40℃水中，冷冻干燥后得蕨麻多糖提取物。

利用本发明制备的蕨麻多糖分别进行如下试验。

蕨麻多糖抗氧化试验：

(1)DPPH清除率

精确吸取DPPH溶液3.0mL，与样液混合，测定溶液在517nm处的吸光度值(Ai),以甲醇为对照，测定混合液在517nm处的吸光度值(Ac)，测定样液在517nm处的吸光度值(Aj)。

DPPH自由基是少数稳定的有机氮自由基其中之一，呈现深紫色，于515nm的波长下有最大的光吸收值。由图1可以看出，蕨麻多糖对DPPH自由基的清除率随着浓度的增大有明显的增长趋势。蕨麻多糖JMPS1+2(含1#提取多糖和2#提取多糖)比蕨麻多糖JMPS1(含1#提取多糖)对DPPH自由基的清除率效果明显。当JMPS1+2在浓度为8mg/mL的时候DPPH的清除率为97.14％与Vc的清除率(97.62％)十分接近，而JMPS1的清除率为80.0％左右。说明超高压辅助酶解对多糖提高抗氧化性能方面效果显著。

(2)还原力的测定

移取不同浓度样液0.4mL，与磷酸盐缓冲溶液(0.5mL，0.2mol/L，pH6.6)和0.5mL六氰合铁酸钾[K3Fe(CN)6](1.0％)溶液迅速混合。反应混合物在50℃水浴保温反应20min后，快速冷却，在反应混合物中加入0.5mL三氯乙酸(10％)，2min之后再加入0.5mL的蒸馏水和0.5mL FeCl3(0.1％)。室温静置5min后，在700nm处测量吸光度(A)。利用蒸馏水代替0.1％FeCl3作为空白对照。

本实验中对还原力的评价是通过样品对铁氰化钾体系中的三价铁离子还原为二价铁离子的能力。由图2中可以看出当JMPS和Vc浓度逐渐增大时，它们两者的还原力都在逐渐的增加，当浓度达到8mg/Ml的时候JMPS的吸光值仍然在增加，浓度和还原力呈呈明显的线性关系。蕨麻多糖JMPS1+2(含1#提取多糖和2#提取多糖)比蕨麻多糖JMPS1(含1#提取多糖)的还原力效果很明显。