一株谷氨酸棒杆菌及其合成色氨酸的关键基因的制作方法

技术特征：

1.一株发酵生产色氨酸的谷氨酸棒杆菌高产菌株，是在谷氨酸棒杆菌CGMCC No.12302的基础上通过基因工程手段对色氨酸操纵子上的trpD、trpC、trpB中至少一个进行改造获得，其特征在于，所述菌株含有序列表SEQ ID No.4-6中的至少一个。

2.权利要求1所述的一株发酵生产色氨酸的谷氨酸棒杆菌高产菌株，其特征在于，所述菌株含有序列表SEQ ID No.4-6的三个序列。

3.权利要求1所述的一株发酵生产色氨酸的谷氨酸棒杆菌高产菌株，其特征在于，所述SEQ ID No.4-6对应的氨基酸序列如SEQ ID No.10-12所示。

4.权利要求1所述的一株发酵生产色氨酸的谷氨酸棒杆菌高产菌株，其特征在于，所述高产菌株的构建方法如下：

(1)设计引物，通过重叠PCR获得内含trpD、trpC、trpB突变位点的3个重叠片段trp1，trp2和trp3；

(2)将重叠片段trp1，trp2和trp3分别与载体pK18mobsacB连接；

(3)将所得质粒依次电转化入CGMCC No.12302电转感受态中得高产菌株。

5.权利要求1所述菌株在发酵生产色氨酸中的应用。

6.权利要求5所述的菌株在发酵生产色氨酸中的应用，其特征在于，具体如下：

(1)种子培养

种子培养：使用500mL三角瓶培养种子，装液量为30mL，接种两环斜面菌种，培养温度32℃，pH 7.0±0.2，转速200rpm，培养时间12h，菌体生物量OD600达到10±2；

种子培养基以g/L计：葡萄糖35，酵母粉5，玉米浆60mL/L，豆粕水解液20mL/L，KH₂PO₄1.5，MgSO₄0.5，FeSO₄·7H₂O 0.01，MnSO₄·H₂O 0.01，VB₁ 0.001，pH7.0-7.2，灭菌条件：121℃、20min；

(2)发酵培养

发酵培养：接种量为10％，培养温度32℃，转速200rpm，pH 7.0±0.2，发酵周期为36小时；

发酵培养基以g/L计：葡萄糖100，玉米浆25mL/L，豆粕水解液25mL/L，(NH₄)₂SO₄ 3，KH₂PO₄ 2.2，MgSO₄ 0.7，FeSO₄·7H₂O 0.01，MnSO₄·H₂O 0.01，VB₁ 0.001，pH 7.0-7.2，灭菌条件：121℃，20min。