一种环介导等温扩增快速检测金藻的方法及试剂盒与流程

文档序号:12056574阅读:来源:国知局

技术特征:

1.金藻CoI基因在环介导等温扩增技术快速检测金藻方法中的应用。

2.一种用于环介导等温扩增的DNA分子标记,其序列如SEQ ID No.7所示。

3.一组环介导等温扩增引物,其可特异性环介导等温扩增权利要求2所述的分子标记。

4.根据权利要求3所述的引物组,包括一对外引物,一对内引物和一对环状引物;所述外引物为F3和B3,其核苷酸序列如SEQ ID No.1-2所示;所述内引物为FIP和BIP,其核苷酸序列如SEQ ID No.3-4所示;所述环状引物为LF和LB,其核苷酸序列如SEQ ID No.5-6所示。

5.权利要求2所述分子标记或权利要求3或4所述引物组在环介导等温扩增技术快速检测金藻方法中的应用。

6.一种环介导等温扩增技术快速检测金藻的方法,其特征在于,以待测样品质粒和基因组DNA为模板,利用权利要求3或4所述的特异性引物组进行环介导等温扩增反应。

7.根据权利要求6所述的环介导等温扩增技术快速检测金藻的方法,其特征在于,还包括步骤:将扩增产物进行凝胶电泳,如果出现特异性阶梯状条带,则判定样品中含有金藻,即为金藻阳性。

8.根据权利要求6所述的环介导等温扩增技术快速检测金藻的方法,其特征在于,所述环介导等温扩增反应的反应体系包括:8U/μL的Bst DNA聚合酶:1μL;10×的Bst DNA聚合酶缓冲液:2.5μL;25mmol/μL的MgSO4:1.5μL;10mM的dNTPs:2.5μL;5mol/L的Betain:4μL;10mM的F3/B3引物:0.5μL;20mM的FIP/BIP引物:1.5μL;10mM的LF/LB引物:1μL;模板:1μL;H2O:6.5μL。

9.根据权利要求6或8所述的环介导等温扩增技术快速检测金藻的方法,其特征在于,所述环介导等温扩增反应的反应条件如下:65℃反应60min,80℃反应7min。

10.根据权利要求7所述的环介导等温扩增技术快速检测金藻的方法,其特征在于,所述凝胶电泳是使用质量体积比为2%的琼脂糖凝胶,恒压120V电泳30min。

11.权利要求2所述分子标记或权利要求3或4所述引物组在环介导等温扩增技术快速检测金藻试剂盒中的应用。

12.一种环介导等温扩增技术快速检测金藻试剂盒,其包括权利要求3或4所述特异性引物组。

13.根据权利要求12所述的试剂盒,其特征在于:包括检测试剂和基因组DNA提取试剂。

14.根据权利要求13所述的试剂盒,其特征在于:所述检测试剂包括:权利要求3或4所述的特异性引物组、阳性标准品。

15.根据权利要求13所述的试剂盒,其特征在于:所述基因组DNA提取试剂包括Roche的High Pure Template Preparation Kit试剂盒和Qiagen的DNeasy Plant Mini Kit试剂盒中的一种。

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