靶向基于甘露聚糖的肺炎克雷伯氏菌的O-抗原的抗体的制作方法

文档序号:15733751发布日期:2018-10-23 21:07阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种分离的抗体,其特异性识别肺炎克雷伯氏菌的脂多糖(LPS)O3b-抗原结构的表位,该表位为并入包含式(I)结构的O3b-抗原中的O3b-表位,包括一种或多种O3b-抗原甘露糖均聚物重复单元,其中式(I)为:

MeP→3)-α-D-Manp-(1→2)-α-D-Manp-(1→3)-α-D-Manp-(1→[3)-α-D-Manp-(1→2)-α-D-Manp-(1→3)-α-D-Manp-(1→]n

其中

MeP是磷酸甲酯;和

n为0-50。

2.权利要求1所述的抗体,其与O3a-表位和/或O3-表位交叉反应,其中:

a)O3a-表位并入包含式(II)结构的肺炎克雷伯氏菌的LPS O3a-抗原中,包括一种或多种O3a-抗原甘露糖均聚物重复单元,其中式(II)为:

MeP→3)-α-D-Manp-(1→2)-α-D-Manp-(1→2)-α-D-Manp-(1→3)-α-D-Manp-(1→[3)-α-D-Manp-(1→2)-α-D-Manp-(1→2)-α-D-Manp-(1→3)-α-D-Manp-(1→]m

其中m为0-50;

b)O3-表位并入包含式(III)结构的肺炎克雷伯氏菌的LPS O3-抗原中,包括一种或多种O3-抗原甘露糖均聚物重复单元,其中式(III)为:

MeP→3)-α-D-Manp-(1→2)-α-D-Manp-(1→2)-α-D-Manp-(1→2)-α-D-Manp-(1→3)-α-D-Manp-(1→[3)-α-D-Manp-(1→2)-α-D-Manp-(1→2)-α-D-Manp-(1→2)-α-D-Manp-(1→3)-α-D-Manp-(1→]m

其中m为0-50。

3.权利要求2所述的抗体,其为泛O3特异性抗体,其特异性结合O3b-表位并与O3a-表位和O3-表位交叉反应。

4.权利要求3所述的抗体,其为2F8-G6抗体,或其竞争性结合它的特异性表位,其中2F8-G6抗体的特征在于:

a)并入保藏材料DSM 32059中的VH;和

b)并入保藏材料DSM 32060中的轻VL,

所述保藏材料于2015年6月4日保藏于DSMZ;

优选其中竞争结合通过竞争性ELISA分析或ForteBio分析确定。

5.权利要求3所述的抗体,其为4D3-A4抗体,或其竞争性结合它的特异性表位,其中所述4D3-A4抗体的特征在于以下任意:

a)6个CDR序列CDR1、2、3、4、5和6分别由SEQ ID 1、2、3、4、5和6鉴定,其中编号是根据Kabat;或CDR1、2、3、4、5和6分别由SEQ ID 7、8、9、10、11和12鉴定,其中编号是根据IMGT;和/或

b)VH和VL序列,其是由SEQ ID 15所鉴定的VH序列和由SEQ ID 16鉴定的VL序列;和/或

c)HC和LC序列,其是由SEQ ID 13鉴定的HC序列和由SEQ ID 14鉴定的LC序列。

6.权利要求1所述的抗体,其相对于O3a-表位优先结合至O3b-表位,或者其不与O3a-表位交叉反应,其中O3a-表位并入肺炎克雷伯氏菌的LPS O3a-抗原结构的O3a-抗原重复单元中,其中O3a-抗原重复单元是式(II)的甘露糖均聚物。

7.权利要求1所述的抗体,其相对于O3-表位优先结合至O3b-表位,或者其不与O3-表位交叉反应,其中O3-表位并入肺炎克雷伯氏菌的LPS O3-抗原结构的O3-抗原重复单元中,其中O3-抗原重复单元是式(III)的甘露糖均聚物。

8.权利要求6或7所述的抗体,其不与O3a-表位和O3-表位中的任一个交叉反应。

9.权利要求1-8中任一项所述的抗体,其不与肺炎克雷伯氏菌的非O3LPS分子的表位交叉反应。

10.权利要求1-9中任一项所述的抗体,其具有结合O3b-表位的亲和力,其Kd小于10-7M,优选小于10-8M,甚至更优选小于10-9M。

11.权利要求1-10中任一项所述的抗体,其中和表达O3b LPS分子的肺炎克雷伯氏菌菌株的内毒素。

12.权利要求1-11中任一项所述的抗体,其是全长单克隆抗体、其抗体片段或融合蛋白,所述抗体片段包含至少一个含有结合位点的抗体结构域,所述融合蛋白包含至少一个含有结合位点的抗体结构域,特别地其中所述抗体是包含随机化或人工氨基酸序列的非天然存在的抗体。

13.权利要求1-12中任一项所述的抗体,其是单克隆抗体,优选是人、人源化、嵌合或鼠来源的单克隆抗体。

14.权利要求1-13中任一项所述的抗体,用于治疗处于有风险患有或患有肺炎克雷伯氏菌感染或定植的主体,包括向主体施用有效量的抗体以限制主体的感染或改善所述感染引起的病情,优选用于治疗或预防任何原发性和继发性菌血症、肺炎、尿路感染、肝脓肿、腹膜炎或脑膜炎。

15.一种包含权利要求1-13中任一项所述抗体的药物制剂,优选包含肠胃外或粘膜制剂,任选含有药学上可接受的载体或赋形剂。

16.权利要求1-13中任一项所述抗体的用途,用于诊断主体中的肺炎克雷伯氏菌感染或定植,或相关疾病比如原发性和继发性菌血症、肺炎、尿路感染、肝脓肿、腹膜炎或脑膜炎。

17.根据权利要求16所述的用途,其中所述主体是免疫功能低下或免疫抑制患者,或其接触者。

18.一种权利要求1-13中任一项所述抗体的诊断制剂,其在组合物或成套试剂盒中包含所述抗体和另外的诊断试剂,包含以下组分:

a)权利要求1-13中任一项所述的抗体;和

b)另外的诊断试剂;

c)和任选的固相,以固定所述抗体和诊断试剂中的至少一种。

19.权利要求18所述的诊断制剂,其中所述另外的诊断试剂是诊断标记或与所述抗体和/或抗体与其抗原结合的反应产物特异性反应的试剂。

20.一种诊断由肺炎克雷伯氏菌菌株在主体中引起的肺炎克雷伯氏菌感染或定植的方法,包括:

a)提供权利要求1-13中任一项所述的抗体;和

b)检测所述抗体是否与待测试的主体的生物样品中的O3b-表位特异性免疫反应,从而诊断肺炎克雷伯氏菌感染或定植。

21.权利要求20所述的方法,其中所述生物样品是体液或组织样品,优选的样品选自由以下组成的组:血液样品、粪便样品、皮肤样品、尿液样品、脑脊髓液和呼吸道样本,比如气管内抽吸物、胸膜液、肺液、鼻拭子或痰,或源自前述任一种样品的肺炎克雷伯氏菌分离物。

22.一种编码权利要求1-13中任一项所述的抗体的分离的核酸。

23.一种表达盒或质粒,其包含编码序列以表达蛋白质构建体,该蛋白质构建体包含权利要求1-13中任一项所述的抗体的VH和/或VL。

24.一种包含权利要求23的表达盒或质粒的宿主细胞。

25.一种产生权利要求1-13中任一项所述的抗体的方法,其中权利要求24的宿主细胞在产生所述抗体的条件下培养或维持。

26.一种鉴定候选抗体的方法,包括:

a)提供含有抗体或抗体产生细胞的样品;和

b)评估所述样品中或由所述样品产生的抗体与权利要求1中所定义的O3b-表位的结合,其中所述抗体与所述表位之间的阳性反应将所述抗体鉴定为候选抗体。

27.一种鉴定候选抗体的方法,包括:

a)提供含有抗体或抗体产生细胞的样品;和

b)评估所述样品中或由所述样品产生的抗体与权利要求1中所定义的O3b-表位的结合,其中相对于权利要求2中所定义的O3a-表位和/或O3-表位,或相对于肺炎克雷伯氏菌的任何非O3LPS分子,所述抗体和O3b-表位之间的特异性阳性反应将所述抗体鉴定为候选抗体。

28.一种产生权利要求1-13中任一项所述的抗体的方法,包括:

a)提供根据权利要求26或27鉴定的所述候选抗体;和

b)产生单克隆抗体,或候选抗体的人源化或人形式,或其与所述候选抗体具有相同表位结合特异性的衍生物。

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