1.96孔板固相萃取南极磷虾中磷脂酰胆碱的方法,其特征是包括以下步骤:
1)、原料预处理:
取南极磷虾肌肉组织,洗净后研磨成糜,再真空干燥后粉碎成粉末,得南极磷虾粉;
2)、粗提液制备:
在南极磷虾粉中加入有机溶剂Ⅰ后混合均匀,冰浴超声提取,然后加入水震荡离心,待溶液分层后移取下清液;先将下清液减压干燥,然后用有机溶剂Ⅱ复溶后,得到南极磷虾磷脂粗提液;
所述有机溶剂Ⅰ为甲醇:氯仿=1:0.5~2体积比的混合液,南极磷虾粉与有机溶剂Ⅰ的料液比为1g/25~35ml;所述水的用量为有机溶剂Ⅰ的0.5~1体积倍;所述有机溶剂Ⅱ为甲醇,南极磷虾粉与有机溶剂Ⅱ的料液比为1g/8~12ml;
3)、96孔板固相萃取:
使用有机溶剂Ⅲ水溶液活化96孔板固相萃取板,经南极磷虾磷脂粗提液上样、有机溶剂Ⅲ水溶液淋洗、有机溶剂Ⅳ或有机溶剂Ⅳ水溶液洗脱后,得到纯化后的磷脂酰胆碱提取物;
有机溶剂Ⅲ水溶液中有机溶剂Ⅲ的体积浓度≤10%,有机溶剂Ⅲ为甲醇或乙腈;
有机溶剂Ⅳ水溶液中有机溶剂Ⅳ的体积浓度为≥75%,有机溶剂Ⅲ为甲醇或乙腈。
2.根据权利要求1所述的96孔板固相萃取南极磷虾中磷脂酰胆碱的方法,其特征是:该方法还包括下述步骤4);
4)、浓缩干燥:
将步骤3)所得的纯化后的磷脂酰胆碱提取物低温减压浓缩,得到南极磷虾磷脂酰胆碱浓缩液。
3.根据权利要求1或2所述的96孔板固相萃取南极磷虾中磷脂酰胆碱的方法,其特征是:96孔板固相萃取板的每个孔中的填料为25±5mg的二氧化锆。
4.根据权利要求3所述的96孔板固相萃取南极磷虾中磷脂酰胆碱的方法,其特征是:
所述步骤1)中:
真空干燥至含水率≤5%;
粉碎至粉末能过80~100目筛。
5.根据权利要求3所述的96孔板固相萃取南极磷虾中磷脂酰胆碱的方法,其特征是:
所述步骤2)中,以移取下清液后的残渣替代南极磷虾粉,以机溶剂Ⅰ中的氯仿替代机溶剂Ⅰ;再重复提取1~3次;
合并所有提取步骤所得的下清液再减压干燥,然后用有机溶剂Ⅱ复溶后,得到南极磷虾磷脂粗提液。
6.根据权利要求3所述的96孔板固相萃取南极磷虾中磷脂酰胆碱的方法,其特征是:
所述步骤2)中,
震荡离心为于12,000±1000rpm/min的速度、4±0.5℃的温度下高速冷冻离心5±1分钟。
7.根据权利要求3所述的96孔板固相萃取南极磷虾中磷脂酰胆碱的方法,其特征是:
所述步骤2)中,
每0.1~1g的南极磷虾粉,对应的超声功率为200W,冰浴超声提取30±5min。
8.根据权利要求3所述的96孔板固相萃取南极磷虾中磷脂酰胆碱的方法,其特征是:
所述步骤2)中,用有机溶剂Ⅱ复溶后过0.22μm有机膜,得到南极磷虾磷脂粗提液。
9.根据权利要求3所述的96孔板固相萃取南极磷虾中磷脂酰胆碱的方法,其特征是:
所述步骤3)中,上样、淋洗和洗脱的流速均为0.4~1mL/min。
10.根据权利要求3所述的利用96孔板固相萃取南极磷虾中磷脂酰胆碱的方法,其特征是:
所述步骤4)中于10~25℃、0.7~0.1Mpa下进行低温减压浓缩。