1.一种淡水中毒力基因为Stx1的大肠杆菌的快速筛选方法,其特征在于它的步骤包括样品收集、预过滤、富集游离DNA、清洗和环介导等温基因扩增鉴定五个步骤。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于所述的样品收集步骤,指原位收集不少于1.0L的待测定淡水。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于所述的预过滤步骤,采用水系微孔滤膜过滤所收集的淡水样品,除去不溶性物质。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于所述的水系微孔滤膜孔径为0.45μm。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于所述的富集游离DNA步骤,首先向过滤后的样品中加入HCl或H2SO4,调节pH至4.9~5.8,再采用硅胶膜过滤,富集游离DNA到膜上。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于所述的清洗步骤是在样品完全过滤后,再加上纯水,洗去干扰小分子和离子。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于所述的环介导等温基因扩增步骤,首先将硅胶膜平均分成4份,每份装入一个反应管,然后加入包括引物、酶在内的扩增反应试剂和指示剂,封闭反应管,放入61-65℃温度下反应;同时做阳性和阴性对照,指示剂颜色变化指示环介导等温基因扩增结果,阳性结果说明所测定淡水样品中有目标基因,即表明毒力基因为Stx1的大肠杆菌具有存在可能性。
8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于所述的反应管是透明的玻璃管、有机玻璃管或塑料管。
9.根据权利要求7所述的方法,其特征在于所述的指示剂为钙黄绿素或羟基萘酚蓝。
10.根据权利要求1所述的方法,其特征在于所述的各步骤,均采用无菌、无DNA污染的洁净器具。