一类诺蒎酮缩氨基硫脲衍生物及其制备方法和应用与流程

本发明属于有机化合物技术领域，具体涉及一类诺蒎酮缩氨基硫脲衍生物及其制备方法和应用。

背景技术：

松节油是我国主要森林资源化学品之一，也是产量最大的精油，其资源丰富。β-蒎烯是松节油的主要成分之一，它是一种重要的单萜类化合物。β-蒎烯广泛的用于香精香料中，并且具有许多药理活性。β-蒎烯很容易被氧化成诺蒎酮。诺蒎酮是重要的药物中间体，天然诺蒎酮存在于一些植物的次生代谢中，由于天然诺蒎酮来源少，因此诺蒎酮的主要来源于β-蒎烯的氧化合成。根据研究报道，诺蒎酮的衍生物具有抗炎、抗病毒、抗菌、抗增殖、杀虫等活性。缩氨基硫脲是重要的金属离子螯合剂，并且它们的衍生物具有许多生物活性，尤其在抗肿瘤活性中表现出显著的生物活性。由于癌变细胞对铁离子与铜离子需求增加，缩氨基硫脲衍生物通常是与肿瘤细胞中的金属离子螯合而达到抗肿瘤效果。因此，作为诺蒎酮的缩氨基硫脲类衍生物，其在抗肿瘤活性方面的研究同样具有非常大的潜力。

技术实现要素：

发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的在于提供一类诺蒎酮缩氨基硫脲衍生物，满足抗肿瘤药物的使用需求。本发明的另一目的是提供一种制备诺蒎酮缩氨基硫脲衍生物的方法。本发明还有一目的是提供上述诺蒎酮缩氨基硫脲衍生物的应用。

技术方案：为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：

一类诺蒎酮缩氨基硫脲衍生物，结构通式如下：

式中，r1为h、ch3、och3、cl、f、no2；r2为h，ch3，c6h5。

所述的一类诺蒎酮缩氨基硫脲衍生物的制备方法，步骤如下：

1)室温下，向三口烧瓶中加入无水乙醇，在搅拌条件下，依次加入诺蒎酮、乙醇钠和取代苯甲醛，升温回流，采用gc跟踪检测反应，待反应结束后，旋蒸除去溶剂，用有机溶剂萃取至中性，旋干溶剂后重结晶，得到的固体的α,β-不饱和烯酮；

2)将α,β-不饱和烯酮与n-取代氨基硫脲混合，加入有机溶剂，升温至回流反应，经tcl跟踪反应，待反应结束后，旋蒸除去溶剂，经硅胶柱色谱分离提纯得到诺蒎酮缩氨基硫脲类衍生物。具体反应式如下：

步骤1)中，诺蒎酮、取代苯甲醛和乙醇钠的摩尔比为1:1.2:1。

步骤1)中，采用gc跟踪检测反应，显示至少一种原料消失，为反应结束。

步骤2)中，以tlc跟踪反应，显示至少一种原料消失，为所述反应结束。

所述的诺蒎酮缩氨基硫脲衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。

有益效果：与现有技术相比，本发明提供的诺蒎酮缩氨基硫脲衍生物，制备方法简单，步骤少。经mtt法结果证实，化合物(1-6，8，9)对mda-mb-231，smmc-7721和hela细胞表现出显著的抗肿瘤活性，其中化合物9的活性最强，其对mda-mb-231细胞ic50值为2.79μm，对smmc-7721细胞的ic50值为2.65μm和对hela细胞的ic50值为3.64μm。化合物13，14和17对smmc-7721和hela细胞表现出良好的抗肿瘤活性，化合物(7，10-12，15，18)hela细胞有活性。在制备抗癌药物中将具有广泛的应用。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步的说明。

实施例1：2-(3-亚苄基-6,6-二甲基双环[3.1.1]庚-2-亚基)肼-1-硫代甲酰胺(化合物1)

室温条件下，100ml三口烧瓶中加入40ml的无水乙醇，将15mmol诺蒎酮、15.1mmol苯甲醛、1g乙醇钠依次加入到上述三口烧瓶中，搅拌均匀，回流反应8小时，反应结束后，旋蒸除去溶剂，用饱和食盐水水洗至中性，甲醇重结晶。取上述重结晶的固体1g加入到50ml三口烧瓶中，加入25ml乙醇溶解，再加入0.4g氨基硫脲，滴加0.3ml盐酸做催化剂，搅拌回流反应，tcl跟踪监测反应，约4小时反应结束，减压蒸干溶剂，经柱层析分离纯化，得淡黄色固体目标化合物。产率80％；m.p.194.2-197℃；¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.88(s,1h),7.49(d,j＝7.6hz,3h),7.40(t,j＝7.7hz,3h),7.31(t,j＝7.4hz,1h),6.57(s,1h),3.14(t,j＝5.5hz,1h),2.96(d,j＝2.8hz,2h),2.60–2.53(m,1h),2.24(s,1h),1.43(s,3h),1.35(d,j＝10.4hz,1h),0.91(s,3h)；¹³c-nmr(100mhz,cdcl3)δ:178.36,157.41,136.46,131.18,129.93,129.22,128.43,127.81,41.75,39.39,31.73,27.81,26.10,21.52；hr-ms(esi+):m/zcalculatedforc17h21n3s[m+h]⁺300.1521,found300.1534。

实施例2：2-(6,6-二甲基-3-(4-甲基亚苄基)双环[3.1.1]庚烷-2-亚基)肼-1-硫代甲酰胺(化合物2)

制备方法同实施例1。以对甲基苯甲醛替代苯甲醛，得到黄色粉末状化合物。产率67％；m.p.183-185℃；¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.83(s,1h),7.45(s,1h),7.39(d,j＝8.1hz,3h),7.21(d,j＝8.0hz,2h),6.48(s,1h),3.12(t,j＝4.7hz,1h),2.95(s,2h),2.56(dt,j＝10.7,5.7hz,1h),2.39(s,3h),2.25(s,1h),1.43(s,3h),1.34(d,j＝10.4hz,1h),0.91(s,3h)；¹³c-nmr(100mhz,cdcl3)δ:178.45,157.56,137.88,133.70,130.21,129.93,129.17,41.74,41.65,39.45,31.82,27.87,26.12,21.49,21.30；hr-ms(esi+):m/zcalculatedforc18h23n3s[m+h]⁺314.1695,found314.1691。

实施例3：2-(3-(4-甲氧基亚苄基)-6,6-二甲基双环[3.1.1]庚-2-亚基)肼-1-硫代甲酰胺(化合物3)

制备方法同实施例1。以对甲氧基苯甲醛替代苯甲醛，得到黄色粉末状化合物。产率79％；m.p.193-197℃；¹h-nmr(600mhz,cdcl3)δ:8.83(s,1h),7.45–7.41(m,3h),7.35(s,1h),6.92(d,j＝8.7hz,2h),6.51(s,1h),3.84(s,3h),3.11(t,j＝5.4hz,1h),2.91(s,2h),2.55(dt,j＝10.6,5.7hz,1h),2.23(s,1h),1.41(s,3h),1.33(d,j＝10.3hz,1h),0.89(s,3h)；¹³c-nmr(150mhz,cdcl3)δ:178.35,159.25,157.77,131.48,129.30,128.89,128.80,113.93,55.32,41.73,41.61,39.48,31.85,27.90,26.12,21.49；hr-ms(esi+):m/zcalculatedforc18h23n3os[m+h]⁺330.1651,found330.1640。

实施例4：2-(3-(4-氯亚苄基)-6,6-二甲基双环[3.1.1]庚-2-亚基)肼-1-硫代酰胺(化合物4)

制备方法同实施例1。以对氯苯甲醛替代苯甲醛，得到黄色粉末状固体。产率78.7％；m.p.184-186℃；¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.74(s,1h),7.42(d,j＝8.6hz,3h),7.37(d,j＝8.8hz,2h),6.31(s,1h),3.11(t,j＝5.5hz,1h),2.90(d,j＝20.2hz,2h),2.62–2.56(m,1h),2.26(s,1h),1.61(s,1h),1.44(s,3h),1.35(d,j＝10.3hz,1h),0.91(s,3h)；¹³c-nmr(100mhz,cdcl3)δ178.55,134.87,133.63,131.77,131.08,128.65,127.94,41.77,41.61,39.34,31.69,27.78,26.08,22.65,21.49,14.12；hr-ms(esi+):m/zcalculatedforc17h20cln3s[m+h]⁺334.1135,found334.1145。

实施例5：2-(3-(4-氟亚苄基)-6,6-二甲基双环[3.1.1]庚-2-亚基)肼-1-硫代甲酰胺(化合物5)

制备方法同实施例1。以对氟苯甲醛替代苯甲醛，得到黄色粉末状化合物。产率82％；m.p.180-183℃；¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.85(s,1h),7.48–7.42(m,3h),7.37(s,1h),7.09(t,j＝8.6hz,2h),3.13(s,1h),2.93(d,j＝21.1hz,2h),2.57(dt,j＝11.6,5.9hz,1h),2.24(s,1h),1.43(s,3h),1.34(d,j＝10.3hz,1h),1.28(s,1h),0.91(s,3h)；¹³c-nmr(100mhz,cdcl3)δ:178.48,163.32,160.84,157.20,132.65,132.62,131.66,131.58,130.82,130.79,128.02,115.56,115.34,41.72,41.70,39.36,31.64,27.80,26.09,21.49；hr-ms(esi+):m/zcalculatedforc17h20fn3s[m+h]⁺318.1431,found318.1440。

实施例6：2-(6,6-二甲基-3-(4-硝基亚苄基)双环[3.1.1]庚-2-亚基)肼-1-硫代甲酰胺(化合物6)

制备方法同实施例1。以对硝基苯甲醛替代苯甲醛，得到黄色粉末状化合物。产率81％；m.p.218-220℃；¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.85(s,1h),8.25(d,j＝8.9hz,2h),7.62(d,j＝8.8hz,2h),7.51(s,1h),7.36(s,1h),6.53(s,1h),3.16(t,j＝5.5hz,1h),3.06–2.88(m,2h),2.68–2.57(m,1h),2.29(s,1h),1.45(s,3h),1.36(d,j＝10.4hz,1h),0.92(s,3h)；¹³c-nmr(100mhz,cdcl3)δ178.82,156.04,146.56,142.89,135.56,130.33,126.74,123.70,41.78,41.67,39.22,31.92,27.85,26.02,21.52；hrms(esi+):m/zcalculatedforc17h20n4o2s[m+h]⁺344.1800,found345.1385。

实施例7：2-(3-亚苄基-6,6-二甲基双环[3.1.1]庚-2-亚基)-n-苯基肼-1-硫代甲酰胺(化合物7)

制备方法同实施例1。以4-苯基氨基硫脲替代氨基硫脲，得到黄色粉末状化合物。产率72％；m.p.222-226℃；¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ:9.43(s,1h),8.79(s,1h),7.73(d,j＝7.5hz,2h),7.52(d,j＝7.7hz,3h),7.42(td,j＝7.8,2.0hz,4h),7.33(t,j＝7.3hz,1h),7.26(d,j＝14.9hz,1h),3.16(t,j＝5.5hz,1h),2.66–2.56(m,1h),1.46(s,3h),1.39(d,j＝10.2hz,1h),0.97(s,3h)；¹³c-nmr(100mhz,cdcl3)δ:138.07,136.45,131.29,129.95,129.18,128.75,128.46,127.88,125.94,124.17,41.84,39.45,31.76,27.86,26.15,21.57；hr-ms(esi+):m/zcalculatedforc23h25n3s[m+h]⁺376.1865,found376.1847。

实施例8：(6,6-二甲基-3-(4-甲基亚苄基)双环[3.1.1]庚-2-亚基)-n-苯肼-1-硫代酰胺(化合物8)

制备方法同实施例1。以对甲基苯甲醛替代苯甲醛，4-苯基氨基硫脲替代氨基硫脲，得到黄色粉末状化合物。产率74％；m.p.216-219℃；¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ:9.43(s,1h),8.77(s,1h),7.73(d,j＝7.4hz,2h),7.50(s,1h),7.43(d,j＝7.2hz,3h),7.28–7.23(m,2h),7.22(s,1h),3.15(s,1h),2.99(s,2h),2.66–2.56(m,1h),2.41(s,3h),2.28(s,1h),1.45(s,3h),1.39(d,j＝10.1hz,1h),0.96(s,3h)；¹³c-nmr(100mhz,cdcl3)δ:175.71,156.62,138.09,137.97,133.65,130.31,129.97,129.20,129.13,128.74,125.93,124.20,41.81,39.47,31.85,27.90,26.17,21.56,21.34；hr-ms(esi+):m/zcalculatedforc24h27n3s[m+h]⁺390.1995,found390.2004。

实施例9：2-(3-(4-甲氧基亚苄基)-6,6-二甲基双环[3.1.1]庚-2-亚基)-n-二苯基肼基-1-硫代甲酰胺(化合物9)

制备方法同实施例1。以对甲氧基苯甲醛替代苯甲醛，4-苯基氨基硫脲替代氨基硫脲，得到黄色粉末状目标化合物。产率74％；m.p.203-208℃；¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ:9.43(s,1h),8.77(s,1h),7.72(d,j＝7.2hz,2h),7.49(d,j＝8.7hz,3h),7.42(t,j＝7.8hz,2h),7.24(d,j＝7.3hz,1h),6.96(d,j＝8.8hz,2h),3.87(s,3h),3.15(t,j＝5.5hz,1h),2.98(s,2h),2.60(dt,j＝10.9,5.9hz,1h),2.28(s,1h),1.45(s,3h),1.39(d,j＝9.9hz,1h),0.96(s,3h)；¹³c-nmr(100mhz,cdcl3)δ:175.67,159.29,138.11,131.50,129.23,128.96,128.74,125.92,124.20,113.94,55.33,41.79,39.50,31.86,26.18,21.54；hr-ms(esi+):m/zcalculatedforc24h27n3os[m+h]⁺406.1953,found406.1953。

实施例10：2-(3-(4-氯亚苄基)-6,6-二甲基双环[3.1.1]庚-2-亚基)-n-苯肼-1-硫代甲酰胺(化合物10)

制备方法同实施例1。以对氯苯甲醛替代苯甲醛，4-苯基氨基硫脲替代氨基硫脲，得到黄色粉末状化合物。产率84％；m.p.180-183℃；¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ:9.39(s,1h),8.77(s,1h),7.71(d,j＝7.8hz,2h),7.48–7.36(m,7h),7.28–7.23(m,1h),3.16(s,1h),3.03–2.88(m,2h),2.62(dt,j＝11.4,5.9hz,1h),2.28(s,1h),1.46(s,3h),1.38(d,j＝10.3hz,1h),0.95(s,3h)；¹³c-nmr(100mhz,cdcl3)δ:175.82,156.07,138.00,134.89,133.63,131.93,131.13,128.77,128.66,127.82,126.04,124.26,41.85,41.79,39.37,31.76,27.87,26.12,21.56；hr-ms(esi+):m/zcalculatedforc23h24cln3s[m+h]⁺410.1450,found410.1457。

实施例11：2-(3-(4-氟亚苄基)-6,6-二甲基双环[3.1.1]庚-2-亚基)-n-苯肼-1-硫代酰胺(化合物11)

制备方法同实施例1。以对氟苯甲醛替代苯甲醛，4-苯基氨基硫脲替代氨基硫脲，得到黄色粉末状化合物。产率76％；m.p.172-173℃；¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ:9.40(s,1h),8.77(s,1h),7.72(d,j＝7.0hz,2h),7.50(dd,j＝8.7,5.4hz,3h),7.42(t,j＝7.9hz,2h),7.26(t,j＝7.3hz,1h),7.11(t,j＝8.7hz,2h),3.16(t,j＝5.0hz,1h),3.03–2.87(m,2h),2.61(p,j＝5.9hz,1h),2.28(s,1h),1.46(s,3h),1.38(d,j＝10.2hz,1h),0.96(s,3h)；¹³c-nmr(100mhz,cdcl3)δ:175.78,163.35,160.88,156.32,138.04,132.65,131.71,131.63,130.94,128.75,127.97,125.99,124.23,115.60,115.38,41.86,41.82,39.40,31.68,27.85,26.13,21.55；hr-ms(esi+):m/zcalculatedforc23h24fn3s[m+h]⁺394.1748,found394.1753。

实施例12：2-(6,6-二甲基-3-(4-硝基亚苄基)双环[3.1.1]庚-2-亚基)-n-苯肼-1-硫代酰胺(化合物12)

制备方法同实施例1。以对硝基苯甲醛替代苯甲醛，4-苯基氨基硫脲替代氨基硫脲，得到黄色粉末状化合物。产率72％；m.p.220-221℃；¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ:9.36(s,1h),8.82(s,1h),8.27(d,j＝8.8hz,3h),7.70(d,j＝7.5hz,2h),7.65(d,j＝8.8hz,2h),7.55(s,1h),7.43(t,j＝7.9hz,2h),7.27(t,j＝7.4hz,1h),3.19(t,j＝5.5hz,1h),3.08–2.93(m,3h),2.65(dt,j＝10.3,5.0hz,1h),2.32(s,1h),1.47(s,3h),1.39(d,j＝10.5hz,1h),0.97(s,3h)；¹³c-nmr(100mhz,cdcl3)δ:175.99,155.18,146.57,142.89,137.87,135.69,130.52,130.37,128.82,126.66,126.22,124.34,123.72,41.89,41.80,39.26,31.96,27.90,26.06,21.58；hr-ms(esi+):m/zcalculatedforc23h24n4o2s[m+h]⁺421.1688,found420.1698。

实施例13：2-(3-亚苄基-6,6-二甲基双环[3.1.1]庚-2-亚基)-n-甲基肼-1-硫代甲酰胺(化合物13)

制备方法同实施例1。以4-甲基氨基硫脲替代氨基硫脲，得到黄色粉末状化合物。产率72％；m.p.196-201℃；¹h-nmr(600mhz,cdcl3)δ:8.66(s,1h),7.61(s,1h),7.48(d,j＝7.6hz,2h),7.43(s,1h),7.38(t,j＝7.7hz,2h),7.30–7.27(m,1h),3.26(d,j＝4.9hz,3h),3.08(t,j＝5.5hz,1h),2.99–2.88(m,2h),2.54(dt,j＝11.7,5.9hz,1h),2.21(s,1h),1.40(s,3h),1.32(d,j＝10.3hz,1h),0.88(s,3h)；¹³c-nmr(150mhz,cdcl3)δ:178.54,155.92,136.60,131.51,129.85,128.68,128.41,127.70,41.70,41.60,39.46,31.73,31.18,27.80,26.11,21.45；hr-ms(esi+):m/zcalculatedforc18h23n3s[m+h]⁺314.1693,found314.1692。

实施例14：2-(6,6-二甲基-3-(4-甲基亚苄基)双环[3.1.1]庚-2-亚基)-n-甲基肼-1-硫代甲酰胺(化合物14)

制备方法同实施例1。以对甲基苯甲醛替代苯甲醛，4-甲基氨基硫脲替代氨基硫脲，得到黄色粉末状化合物。产率68％；m.p.188-190℃；¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.62(s,1h),7.63(s,1h),7.40(d,j＝8.2hz,2h),7.23–7.18(m,3h),3.29(d,j＝4.8hz,3h),3.14(d,j＝4.8hz,1h),3.08(t,j＝5.4hz,1h),2.94(s,1h),2.56(dtd,j＝10.2,5.9,1.5hz,1h),2.39(s,3h),2.35(s,1h),2.24(s,1h),1.41(d,j＝5.3hz,3h),1.37–1.28(m,3h),0.90(s,3h),0.79(s,1h)；¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ176.67,161.69,136.81,134.72,129.34,129.26,126.51,126.21,50.19,31.19,28.38,28.15,21.16,20.43,20.35.hrms(esi+):m/zcalculatedforc19h25n3s[m+h]⁺328.1853,found328.1857。

实施例15：2-(3-(4-甲氧基亚苄基)-6,6-二甲基双环[3.1.1]庚-2-亚基)-n-甲基肼-1-硫代甲酰胺(化合物15)

制备方法同实施例1。以对甲氧基苯甲醛替代苯甲醛，4-甲基氨基硫脲替代氨基硫脲，得到白色粉末状化合物。产率78％；m.p.207-212℃；¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ:7.01(d,j＝8.3hz,2h),6.87(d,j＝8.7hz,2h),6.15(d,j＝11.4hz,1h),3.80(s,4h),3.20(d,j＝4.8hz,3h),2.79(t,j＝5.0hz,1h),2.54(dt,j＝10.7,5.4hz,1h),2.11–1.96(m,2h),1.75(d,j＝10.5hz,1h),1.58(s,2h),1.34(dd,j＝13.2,8.9hz,1h),1.29(s,3h),0.42(s,3h)；¹³c-nmr(100mhz,cdcl3)δ176.39,168.95,158.70,128.78,127.67,113.78,65.38,55.19,45.01,44.83,44.02,41.06,31.24,26.48,26.38,23.21,21.57.hr-ms(esi+):m/zcalculatedforc19h25n3os[m+h]⁺344.1800；found344.1797。

实施例16：2-(3,4-氯亚苄基-6,6-二甲基双环[3.1.1]庚-2-亚基)-n-甲基肼-1-硫代甲酰胺(化合物16)

制备方法同实施例1。以对氯苯甲醛替代苯甲醛，4-甲基氨基硫脲替代氨基硫脲，得到黄色粉末状目标化合物。产率85％；m.p.199-201℃；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ:8.65(s,1h),7.60(s,1h),7.42(d,j＝8.6hz,2h),7.37(s,2h),7.35(s,1h),3.28(d,j＝4.9hz,3h),3.08(t,j＝5.5hz,1h),2.90(d,j＝6.3hz,2h),2.56(dd,j＝10.2,5.7hz,1h),2.23(s,1h),1.42(s,3h),1.34(d,j＝10.1hz,1h),0.89(s,3h)；¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ:178.48,155.52,133.44,132.12,131.03,128.60,127.34,41.71,41.51,39.36,31.73,31.22,27.78,26.08,21.44；hr-ms(esi+):m/zcalculatedforc18h22cln3s[m+h]⁺348.1311,found348.1301。

实施例17：2-(3-(4-氟亚苄基)-6,6-二甲基双环[3.1.1]庚-2-亚基)-n-甲基肼-1-硫代甲酰胺(化合物17)

制备方法同实施例1。以对氟苯甲醛替代苯甲醛，4-甲基氨基硫脲替代氨基硫脲，得到黄色粉末状化合物。产率75％；m.p.190-192℃；¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ:7.48(s,1h),7.27(dd,j＝8.3,4.9hz,2h),7.05(t,j＝8.7hz,2h),5.21(d,j＝10.8hz,1h),3.35–3.23(m,1h),3.14(d,j＝4.8hz,3h),2.84(t,j＝5.0hz,1h),2.56(dt,j＝11.0,5.6hz,1h),2.27(ddd,j＝12.9,10.3,4.9hz,1h),2.20(q,j＝5.2hz,1h),1.87(dd,j＝13.0,7.9hz,1h),1.65(d,j＝10.7hz,1h),1.41(s,3h),0.79(s,3h)；¹³c-nmr(100mhz,cdcl3)δ:180.29,165.93,162.89,160.45,139.67,127.07,115.71,115.50,70.50,51.77,45.27,44.89,41.21,31.29,27.48,26.06,25.50,22.27；hr-ms(esi+)：m/zcalculatedforc18h22fn3s[m+h]⁺332.1607,found332.1597。

实施例18：2-(6,6-二甲基-3-(4-硝基亚苄基)双环[3.1.1]庚-2-亚基)-n-甲基肼-1-硫代甲酰胺(化合物18)

制备方法同实施例1。以对硝基苯甲醛替代苯甲醛，4-甲基氨基硫脲替代氨基硫脲，得到黄色粉末状目标化合物。产率87％；m.p.230-234℃；¹h-nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.71(d,j＝24.4hz,1h),8.31–8.19(m,2h),7.62(d,j＝5.8hz,3h),7.47(s,1h),3.29(t,j＝5.4hz,3h),3.12(t,j＝5.6hz,1h),2.96(q,j＝16.9,15.9hz,2h),2.61(s,1h),2.27(s,1h),1.44(d,j＝3.0hz,3h),1.33(dd,j＝10.4,3.9hz,1h),0.90(d,j＝3.6hz,3h)；¹³c-nmr(100mhz,cdcl3)δ:178.60,154.63,146.45,143.06,135.92,130.28,126.20,123.67,41.74,41.53,39.25,31.96,31.29,27.84,26.01,21.47；hr-ms(esi+):m/zcalculatedforc18h22n4o2s[m+h]⁺359.1540,found359.1542。

实施例19：诺蒎酮缩氨基硫脲类化合物对肿瘤抑制活性的研究

采用mtt[3-(4,5)-双甲基-2-噻唑-(2,5)-苯基溴化四氮唑蓝]法测定缩氨基硫脲类化合物对人源宫颈癌细胞hela、人源乳腺癌细胞mda-mb-231、人源肺癌细胞smmc-7721半数抑制浓度(ic50)。具体如下：

1)培养液的配制：①传代培养液：高糖的dmem培养基900ml，新生胎牛血清100ml，青霉素-链霉素溶液(100×，双抗)1ml，混匀无菌保存。②实验培养液：高糖的dmem培养基1000ml，青霉素-链霉素溶液(100×，双抗)1ml，混匀无菌保存。

2)实验药液的配制：将测试样品用dmso溶液配置成10mmol/l的母液。再根据所需加药浓度用实验培养液稀释成所需终浓度。

3)细胞增殖实验：人源宫颈癌细胞hela、人源乳腺癌细胞mda-mb-231、人源肺癌细胞smmc-7721以1×10⁴个/孔的密度培养在96孔板中，用含不同浓度的化合物培养液刺激，持续72h。培养结束，每孔加入10μlmtt，在培养箱中培养4h。结束后，除去培养液，加入100μldmso溶解甲瓒结晶。用酶联免疫吸附实验仪测试540nm下的吸光度。

4)细胞毒性试验：将人胚肺成纤维细胞hlf-1以1×10⁴个/孔的密度加入96孔板中，在37℃培养箱中培养24h，然后加入不同梯度浓度的含化合物培养液培养72小时。培养结束，每孔加入10μlmtt，继续培养4h。然后吸去培养液，加入100μldmso溶解甲瓒结晶。最后测540nm的吸光度值。

5)统计分析：所有实验都重复3次，均得到类似结果。

抑制率的计算：细胞生长的抑制率按照下列公式计算：

生长抑制率＝(1-存活率)×100％＝[1-(od实验-od空白)/(od对照-od空白)]×100％(od实验表示测试药物组的平均光密度，od对照表示对照组的平均光密度，od空白表示对照组的平均光密度)。

半数抑制浓度(ic50)定义为当50％的细胞存活时的药物浓度。根据测定的光密度(od值)，制作细胞生长抑制率的标准曲线，在标准曲线上求得其对应的药物浓度。

本发明的诺蒎酮缩氨基硫脲类化合物对细胞的抑制ic50值见表1。

表1诺蒎酮缩氨基硫脲类化合物(1-18)的抗肿瘤活性

阳性对照：依托泊苷。

由表1可知，8种化合物(1-6，8，9)对体外三种的癌细胞系(mda-mb-231，smmc-7721和hela细胞)表现出显著的抗肿瘤活性，其中化合物9的活性最强，其对mda-mb-231细胞ic50值为2.79μm，对smmc-7721细胞的ic50值为2.65μm和对hela细胞的ic50值为3.64μm，并且对三株肿瘤细胞的抗增殖效果均优于阳性对照(依托泊苷对mda-mb-231、smmc-7721、hela细胞的ic50分别为29.27、40.44、7.89μm)。此外，化合物13，14和17对两种癌细胞系(smmc-7721和hela细胞)表现出良好的抗肿瘤活性，化合物(7，10-12，15，18)仅对一种肿瘤细胞(hela细胞)有活性。而化合物16对所有三种肿瘤细胞系没有显着的抗癌活性。这类化合物对人胚胎肺成纤维细胞(hlf-1)没有显示显着的细胞毒性，其ic50值高于40μm。