1.一种遗传性耳聋基因检测试剂盒,其特征在于,包括PCR反应液,所述PCR反应液包括PCR反应液A、PCR反应液B、PCR反应液C、PCR反应液D和PCR反应液E;
所述PCR反应液A包括如下引物和探针:
引物G2F1:5'-TAGTGATTCCTGTGTTGTGTG-3';
引物G2R1:5'-AGCCTTCGATGCGGACCTTCTG-3';
内参引物GF1:5'-CTATGACTTAGTTGCGTTAC-3';
内参引物GR1:5'-GAGAAGTGGGGTGGCTTTTAGGATGG-3';
探针P1:5'-GTTTGTTCACACCCCCCAGGA-Z4-BHQ1
探针P2:5'-CAGCCACAATGAGGATC-3';
探针P3:5'-TGCAGACAAAGTCGGCCT-3';
探针P4:5'-TAGCACACGTTCTTGCAGCCTGGCTGCAG-3';
探针P5:5'-CAGCTGCAGGGCCCATAG-3';
探针P6:5'-CTTCTCGTCTCCGGTAGGC-Z4-3';
探针P25:5'-CGCTCCAACCGACTGCTGTCACCTTCAC-3';
所述PCR反应液B包括如下引物和探针:
引物G2F2:5'-GACCTACACAAGCAGCATC-3';
引物G2R2:5'-TTCAGCAGGATGCAAATTCCAGACAC-3';
引物G3F1:5'-AGTTCCTCTTCCTCTACCTG-3';
引物G3R1:5'-CACAGATGGTGAGTACGATGCAGACG-3';
引物SF1:5'-AAATACCGAGTCAAGGAATG-3';
引物SR1:5'-GCCTTGAAGGGTAAGCAACCATCTGTC-3';
引物SF2:5'-GAACACTTTCTCGTATCCAGCAGC-3';
引物SR2:5'-TCCATCTATATTTTACTTGTAAGTTC-3';
引物SF3:5'-CACAGCTAAAGATTGTCCTC-3';
引物SR3:5'-CCATCCCTGGAGCAAGAAGCAACAC-3';
内参引物GF1:5'-CTATGACTTAGTTGCGTTAC-3';
内参引物GR1:5'-GAGAAGTGGGGTGGCTTTTAGGATGG-3';
探针P7:5'-AGGCGTTCGTTGCACTTCACCA-3';
探针P8:5'-CTTCTTGGTAGGTCGGGCAAT-3';
探针P9:5'-TAGCCCAATACTAACTCCCG-3';
探针P10:5'-CCTGACTCTGCTGGTTGGAAT-Z4-3';
探针P11:5'-GATAATAGGGAGAACTCCATTGT-3';
探针P25:5'-CGCTCCAACCGACTGCTGTCACCTTCAC-3';
所述PCR反应液C包括如下引物和探针:
引物SF4:5'-CTGGATTGCTCACCATTGTCGTCTG-3';
引物SR4:5'-GTACTAAGAGGAACACCACAC-3';
引物SF5:5'-TCATCCAGTCTCTTCCTTAG-3';
引物SR5:5'-AGCCTTCCTCTGTTGCCATTCCTC-3';
引物SF6:5'-GAGCAATGCGGGTTCTTTGACGAC-3';
引物SR6:5'-TCTTGAGATTTCACTTGGTTC-3';
内参引物GF1:5'-CTATGACTTAGTTGCGTTAC-3';
内参引物GR1:5'-GAGAAGTGGGGTGGCTTTTAGGATGG-3';
探针P12:5'-TTTGTTTTATTTCAGACGAT-3';
探针P13:5'-CCTGAGAAGATGTTGCTGAT-3';
探针P14:5'-GCCGTGCGGGAAAGAGCAGTG-3';
探针P15:5'-TTTGATGGTCCATGATGC-Z4-3';
探针P25:5'-CGCTCCAACCGACTGCTGTCACCTTCAC-3';
所述PCR反应液D包括如下引物和探针:
引物SF7:5'-AGATTCTTAGATTTTCCAGTCC-3';
引物SR7:5'-AGAGGGTCTAGGGCCTATTCCTGATTG-3';
引物SF8:5'-GTGAACGTTCCCAAAGTGCCAATCC-3';
引物SR8:5'-ATACTGGACAACCCACATC-3';
引物MF1:5'-CGCGGTCACACGATTAACCCAAGTC-3';
引物MR1:5'-TGTTAAGCTACACTCTGGTTC-3';
内参引物GF1:5'-CTATGACTTAGTTGCGTTAC-3';
内参引物GR1:5'-GAGAAGTGGGGTGGCTTTTAGGATGG-3';
探针P16:5'-ATAAAATACTTACTGTGGACTT-3';
探针P17:5'-TCCATAGCCTTCTGCTTGACTGTG-Z4-3';
探针P18:5'-GAGATCACAGCGGGTGGTAAG-3';
探针P19:5'-ATCACCCCCTCCCCAATA-3';
探针P20:5'-CCACTATGCTTAGCCCTA-3';
探针P25:5'-CGCTCCAACCGACTGCTGTCACCTTCAC-3';
所述PCR反应液E包括如下引物和探针:
引物MF1:5'-CGCGGTCACACGATTAACCCAAGTC-3';
引物MR1:5'-TGTTAAGCTACACTCTGGTTC-3';
引物MF2:5'-AGGCTCATTCATTTCTCTAAC-3';
引物MR2:5'-CATGGGGTTGGCTTGAAACCAGC-3';
引物MF3:5'-CCACAACACAATGGGGCTCACTCAC-3';
引物MR3:5'-AGGGTGGTTATAGTAGTGTG-3';
内参引物GF1:5'-CTATGACTTAGTTGCGTTAC-3';
内参引物GR1:5'-GAGAAGTGGGGTGGCTTTTAGGATGG-3';
探针P21:5'-ACCGCCCGTCACCCTCCTCAA-3';
探针P22:5'-TAGAGGAGACAAGTCGTAACAT-3';
探针P23:5'-TTTGCCTAGATTTTATGTATACG-3';
探针P24:5'-CGACCCCTTATTTACCGA-Z4-3';
探针P25:5'-CGCTCCAACCGACTGCTGTCACCTTCAC-3';
其中,探针序列中包含Z4的探针代表此探针为ZNATM探针,碱基下方设有下划线的为锁核酸修饰的碱基。
2.根据权利要求1所述的遗传性耳聋基因检测试剂盒,其特征在于,所述探针的5’设有荧光基团,3’设有淬灭基团,所述的荧光基团为FAM、TET、CY5、HEX或ROX中的一种;所述的淬灭基团为能与荧光基团配套的BHQ1、BHQ2或BHQ3基团中的一种。
3.根据权利要求1所述的遗传性耳聋基因检测试剂盒,其特征在于,所述PCR反应液包括:MgCl2、PCR Buffer、dNTP混合物、Taq酶和UNG酶。